增强alk-tki疗效、延缓其耐药的复合物及其制剂的制作方法
【技术领域】
[0001] 本发明属于医药用途领域，特别涉及增强ALK-TKI疗效、延缓其耐药的复合物及 其制剂。
【背景技术】
[0002] 肺癌是目前人类因癌症死亡的主要原因，近年来其发病率和死亡率不断上升。非 小细胞肺癌（NonSmaLLCeLLLungCancer，NSCLC)占到了所有肺癌病例的80%-85%。 目前NSCLC的个体化治疗备受关注。研究表明，棘皮动物微管相关蛋白4/间变淋巴瘤激酶 (echinodermmicrotubule-associatedprotein-like4/anaplasticlymphomakinase， EML4/ALK)在NSCLC的发生发展过程中起着非常重要的作用，EML4/ALK融合基因阳性的患 者占所有NSCLC患者的3 % -7 %。对于EML4/ALK融合基因阳性的晚期NSCLC患者，2013 年上市的肺癌分子革E向药物间变淋巴瘤激酶/酪氨酸激酶抑制剂（anaplasticlymphoma kinase/tyrosinekinaseinhibitor,ALK-TKI)即克唑替尼，展现出了显著的治疗效果，一 线治疗与化疗相比PFS从7个月提高到10个月，它可以显著延长该类患者的生存期，使部 分晚期NSCLC患者的治疗获得了新的希望。AKK-TKI为代表的靶向药物对NSCLC患者的客 观有效率达60%，无进展生存达8-10月，总生存显著延长。尽管EML4/ALK融合基因阳性的 患者获益显著，但是这些患者往往在1-2年内出现对AKK-TKI的耐药，使得AKK-TKI的疗效 降低。目前临床上尚未出现有效的，能够增强ALK-TKI疗效、延缓其耐药的药物。因此，发 现有效的增强ALK-TKI疗效、延缓其耐药的药物具有非常重要的科学意义和临床价值。
[0003] 水飞蓟宾（siLybin)是从植物水飞蓟（SiLybumMarianimL.S.L)果实中提取的有 效成分，临床上主要用于治疗急慢性肝炎、肝硬变、脂肪肝、酒精引起的肝损伤、代谢中毒性 肝损伤、胆结石和脾脏病等。现有技术对水飞蓟宾有许多研究，包括其用于治疗肺癌等用途 的报道，但是对于其复合物的研究却较少；CN103933039公开了一种水飞蓟宾和索拉菲尼 的药物组合物，其用于治疗原发性肝癌、肺癌和乳腺癌。但是现有技术还未见有关于水飞蓟 宾或其盐与克唑替尼等ALK-TKI的复合物及其用于备增强ALK-TKI疗效、延缓其耐药的报 道。
【发明内容】
[0004] 本发明提供了一种增强ALK-TKI疗效、延缓其耐药的复合物及其制剂。
[0005] 本发明提供一种增强ALK-TKI疗效、延缓其耐药的复合物，该复合物包括重量份 数为12. 5-50份的ALK-TKI和重量份数为7-70份的水飞蓟宾或其盐。
[0006] 本发明所述的ALK-TKI优选克唑替尼或色瑞替尼，进一步优选ALK-TKI为克唑替 尼。
[0007] 克唑替尼对非小细胞肺癌的治疗有效率可达到60%，但是在服用克唑替尼1-2年 后，也会出现耐药性使得克唑替尼的疗效降低。但是目前还未发现有任何药物可克服克唑 替尼的耐药性，本发明经过大量的实验得出，水飞蓟宾或其盐与克唑替尼组成复合物后，可 有效地逆转克唑替尼的耐药性，从而使得克唑替尼的疗效增强。
[0008] 进一步改进的方案中，水飞蓟宾的盐优选水飞蓟宾葡甲胺、水飞蓟宾精氨酸或水 飞蓟宾组氨酸。更进一步的优选，所述盐选自水飞蓟宾葡甲胺。
[0009] 本发明所述的复合物中，克唑替尼的重量份数为17份，水飞蓟宾的重量份数为35 份。当克唑替尼和水飞蓟宾的重量份数比为 17:35时，对克唑替尼的增强效果最好，并且延 缓其耐药的效果也最优。
[0010] 本发明另一方面提供了由复合物和辅料制成的口服制剂，优选为片剂。该片剂为 由片芯和包裹片芯的速释层组成的双层片剂，所述片芯为由水飞蓟宾或其盐与赋形剂制成 的微囊；所述速释层由ALK-TKI和辅料制成。
[0011] 上述片剂中，赋形剂选自胆留醇棕榈酸酯、丙烯乙二醇、硬脂酸乳酸钠；辅料选自 单硬脂酸钙、麦芽糊精、单葵酰基丙三醇和微粉硅胶；该双层片剂各成分的重量份数为：
[0012] 片芯：
[0015] 本发明通过将复合物制成双层片剂之后，使该片剂进入体内后，克唑替尼等ALK-TKI先发挥作用，之后，水飞蓟宾或其盐慢慢发挥作用，两者起到治疗非小细胞肺癌的 作用，同时还能够增强ALK-TKI的疗效，延缓其耐药。将克唑替尼与单硬脂酸钙和麦芽糊精 混合后，可提高克唑替尼的溶解性，进而提高其生物利用度；同时将水飞蓟宾或其盐与胆甾 醇棕榈酸酯、丙烯乙二醇、硬脂酸乳酸钠制成微囊后，可慢慢发挥疗效，使片芯在1、2、6、12 和24小时的累积溶出百分率分别达到30-32 %、65-67 %、80-82 %、85-88 %和90 %以上，使 该双层片具有释药平稳、缓慢释药的效果，并且能够达到24h释药得目的。并且制成微囊后 还可提高是水飞蓟宾的水溶性及稳定性。
[0016] 本发明另一方面提供了该复合物在制备增强ALK-TKI疗效、延缓其耐药的药物中 的应用。
[0017] 此外，还提供了片剂在制备增强ALK-TKI疗效、延缓其耐药的药物中的应用。
[0018] 本发明另一方面提供了缓释片的制备方法，该方法包括如下步骤：a.将水飞蓟宾 或其盐加入胆留醇棕榈酸酯和丙烯乙二醇中，研磨至均匀，制得水飞蓟宾或其盐研磨物；将 硬脂酸乳酸钠按体积比为1:3加入水中，制得水溶液；将水飞蓟宾或其盐研磨物和水溶液 混合均匀，于高速剪切乳化，制得水飞蓟宾或其盐初乳；将水飞蓟宾或其盐初乳置于高压匀 质机中乳化，制得水飞蓟宾或其盐乳液；将水飞蓟宾或其盐乳液喷雾干燥，制得粒径范围为 15-25ym的水飞蓟宾或其盐微囊，即为片芯；
[0019] b.将克唑替尼与单硬脂酸钙和麦芽糊精混合均匀，制得混合粉；
[0020] c.将单葵酰基丙三醇溶于无水乙醇中，加入混合粉，混合均匀，制软材；
[0021] d.将软材均匀涂覆到片芯上，制湿颗粒，将湿颗粒喷雾干燥，进行整粒，与微粉硅 胶混合均匀，压片，制得。
[0022] 本发明另一方面还提供了所述缓释片在制备增强ALK-TKI疗效、延缓其耐药的药 物中的应用。
[0023] 本发明的有益效果在于，本发明提供一种水飞蓟宾或其盐和ALK-TKI的复合物及 其用途，该复合物可用于增强ALK-TKI疗效、延缓其耐药，有效地提高了ALK-TKI的治疗效 果此外，通过试验得出，水飞蓟宾与克唑替尼等ALK-TKI的复合物对非小细胞肺癌的治疗 效果明显优于克唑替尼的疗效；而水飞蓟宾与其他类型的抑制剂如索拉菲尼、厄洛替尼等 对非小细胞肺癌的治疗效果与单个抑制剂相比，并没有很大的提高；并且水飞蓟宾只会延 缓克唑替尼等ALK-TKI的耐药性，不会延缓其他类型的非小细胞肺癌抑制剂的耐药。
【附图说明】
[0024] 图1为EGFR-TKI敏感株H1650、EGFR-TKI耐药株H1650-M3对厄洛替尼的敏感性 实验结果；
[0025] 图2为ALK-TKI敏感株H2228对克唑替尼的敏感性实验结果；
[0026] 图3为ALK-TKI耐药株H2228-CR对克唑替尼的敏感性实验结果；
[0027] 图4为EGFR-TKI敏感株PC-9、EGFR-TKI耐药株PC-9GR对索拉菲尼的敏感性实验 结果；
[0028] 图5为ALK-TKI耐药株H2228-CR发生侵袭的侵袭性实验结果；
[0029] 图6为EGFR-TKI耐药株H1650-M3发生侵袭的侵袭性实验结果；
[0030] 图7为EGFR-TKI耐药株PC-9GR发生侵袭的侵袭性实验结果；
[0031] 图8为体内实验的各组裸鼠肿瘤变化情况示意图；
[0032] 图9肿瘤生长曲线图。
【具体实施方式】
[0033] 实施例1
[0034] 一种增强ALK-TKI疗效、延缓其耐药的复合物：
[0035] 该复合物包括重量份数为17份的克唑替尼和35份的水飞蓟宾。实施例2
[0036] 一种增强ALK-TKI疗效、延缓其耐药的复合物：
[0037] 该复合物包括重量份数为25份的克唑替尼和60份的水飞蓟宾葡甲胺。
[0038] 实施例3 -种水飞蓟宾片剂
[0039] 该双层片剂各成分的重量份数为：
[0040] 片芯：
[0043] 该双层片的制备方法为：
[0044] a.将水飞蓟宾或其盐加入胆甾醇棕榈酸酯和丙烯乙二醇中，研磨至均匀，制得水 飞蓟宾或其盐研磨物；将硬脂酸乳酸钠按体积比为1:3加入水中，制得水溶液；将水飞蓟宾 或其盐研磨物和水溶液混合均匀，
[0045] 于高速剪切乳化，制得水飞蓟宾或其盐初乳；将水飞蓟宾或其盐初乳置于高压匀 质机中乳化，制得水飞蓟宾或其盐乳液；将水飞蓟宾或其盐乳液喷雾干燥，制得粒径范围为 15-25ym的水飞蓟宾或其盐微囊，即为片芯；
[0046] b.将克唑替尼与单硬脂酸钙和麦芽糊精混合均匀，制得混合粉；
[0047] c.将单葵酰基丙三醇溶于无水乙醇中，加入混合粉，混合均匀，制软材；
[0048]d.将软材均匀涂覆到片芯上，制湿颗粒，将湿颗粒喷雾干燥，进行整粒，与微粉硅 胶混合均匀，压片，制得。
[0049] 实验例1体外实验
[0050] 1.实验目的：水飞蓟宾能否提高ALK-TKI细胞株及其耐药株对ALK-TKI的敏感 性；
[0051] 2.实验方法：采用MTT方法计算肺癌细胞的活性；
[0052] 3?实验步骤：
[0053] (1)对ALK-TKI敏感株H2228 细胞、EGFR-TKI敏感株H1650 细胞、ALK-TKI耐药株 H2228-CR细胞、EGFR-TKI耐药株H1650-M3 细胞、EGFR-TKI敏感株PC-9 细胞、EGFR-TKI耐 药株PC-9GR细胞分别进行扩增，分别收集对数期人肺癌细胞株，用胰蛋白酶消化细胞，离 心细胞悬液，使细胞沉积下来；用培养基重悬细胞，计数；
[0054] (2)计数后将细胞密度稀释至2X104/mL，用加样器在平底96孔板的各孔中加入 100yL细胞悬液，每孔含2000个细胞；将接种好细胞的96板放入5%C02,37°C细胞培养箱 中过夜培养；
[0055] (3)次日配置30yM水飞蓟宾（M表不moL/L，yM表不微摩尔ymoL/L，下同），加 入药物的浓度梯度，共设5个浓度，每个浓度设3个复孔；实验共12组，具体如下：
[0056] EGFR-TKI敏感株H1650 组：给予（20yM、15yM、10yM、5yM、2. 51yM、0yM)厄洛 替尼；
[0057] EGFR-TKI敏感株H1650+ 水飞蓟宾组：给予（20yM、15yM、10yM、5yM、2. 51yM、 0u