药物组合物及其在抑制骨肉瘤增殖方面的应用
【技术领域】
[0001] 本发明属于医药技术领域，涉及一种药物组合物及其应用，特别是一种药物组合 物及其在抑制骨肉瘤增殖方面的应用。
【背景技术】
[0002] 骨肉瘤好发于青少年，是起源于间叶组织的，以梭形肿瘤细胞为特点的恶性肿瘤， 主要发病部位位于股骨远端、胫骨近端的干骺端，主要临床表现为局部疼痛与肿胀，夜间痛 是其一大特点，偶有发生病理性骨折，X线表现为病变骨干骺端成骨与溶骨性损害并存。目 前常用的治疗方案为新辅助化疗结合手术切除肿瘤。目前骨肉瘤化疗中最常用的药物为表 阿霉素、大剂量甲氨蝶呤、顺钼和异环磷酰胺，国内应用的化疗方案多根据多家骨肉瘤治疗 中心联合推荐方案进行调整应用。而结合术前新辅助化疗，肌肉骨骼成像的进步、人工假体 设计和外科技术的发展，越来越多的患者具备了保肢手术的条件，肢体的保存率已达到了 80%以上。对于发生骨肉瘤肺转移的患者，预后则普遍不佳，目前这类患者的总体生存率约 为0%~50%不等。为提高这类患者的生存率，许多学者正对此领域进行各类研究及临床 观察，同时尝试予以这类患者使用个体化的化疗方案或及靶向治疗。
[0003] 培美曲塞是基于传统的抗代谢药物甲氨蝶呤和氟尿嘧啶基础上研制的新一代多 靶点的抗叶酸代谢类药物，有着与甲氨蝶呤类似的作用方式，且比甲氨蝶呤的作用范围更 广。目前培美曲塞已被批准用于恶性胸膜间皮瘤的一线治疗和非小细胞肺癌的二线治疗， 其对多种实体瘤有较为明确的抗瘤效果。洛钼（LBP)是新一代钼类抗肿瘤药，研究表明其 抗肿瘤效果与DDP相当甚至更好，但肾毒性、神经系统及消化道反应均小于DDP，并且无需 水化。
【发明内容】
[0004] 本发明所解决的技术问题在于提供一种药物组合物及其在抑制骨肉瘤增殖方面 的应用。
[0005] 实现本发明目的的技术解决方案为：一种药物组合物，所述组合物由培美曲塞和 洛钼组成。
[0006] 所述培美曲塞的给药量为5mg/kg，洛钼的给药量为3mg/kg。
[0007] 上述药物组合物在抑制骨肉瘤增殖方面的应用。
[0008] 所述的骨肉瘤是在裸鼠股骨的骨髓腔内注射红色荧光蛋白转染的人骨肉瘤细胞 系143-B-RFP所导致的。
[0009]所述药物组合物在抑制骨肉瘤增殖的应用，包括人在内的哺乳动物。
[0010] 本发明与现有技术相比，其显著优点为：
[0011] 1.本发明所述的药物组合物，现已应用于其他恶性肿瘤的的化疗，其药物的安全 性有临床保证。
[0012] 2.本发明所述的药物组合物可抑制骨肉瘤的增长，动物实验中，与使用生理盐水 组裸鼠相比，使用本组合物的实验组裸鼠肿瘤体积增长明显缓慢，并经统计学分析，有明显 统计学意义。
[0013] 3.本发明对两组裸鼠骨肉瘤肿瘤进行病理学检查，使用本组合物的实验组裸鼠肿 瘤细胞变性坏死明显，表面能促使肿瘤细胞的凋亡。
[0014] 4.本发明所述的药物组合物能够抑制骨肉瘤细胞的增殖，可作为对目前一线骨肉 瘤化疗药物耐药患者的选择，且具有比一线骨肉瘤化疗药物更轻度的毒性反应。
【附图说明】
[0015] 图1为本发明Gl组和G2组裸鼠肿瘤体积变化图。
[0016] 图2为本发明Gl组实验起点裸鼠荧光成像图。
[0017] 图3为本发明G2组实验起点裸鼠荧光成像图。
[0018] 图4为本发明Gl组实验终点裸鼠荧光成像图。
[0019] 图5为本发明G2组实验终点裸鼠荧光成像图。
[0020] 图6为本发明Gl组肿瘤细胞形态学。
[0021] 图7为本发明G2组肿瘤细胞形态学。
【具体实施方式】
[0022] 下面结合实施例对本发明作进一步详细说明。
[0023] 实施例1动物模型
[0024] 实验动物为4-6周的雄性裸鼠。在标准实验条件下饲养：12小时光照-12小时黑 暗循环，自由摄取水和食物。红色荧光蛋白转染的人骨肉瘤细胞系143-B-RFP在1640培养 液中37°C、5%CO2饱和湿度条件下培养。将肿瘤细胞注射到裸鼠股骨的骨髓腔内，每只接 种2xl06细胞。整个操作过程在超净工作台中完成。完成原位移植后对小鼠的健康状况和 肿瘤的生长情况进行监测。待全部小鼠肿瘤长出之后，根据动物的肿瘤体积将其随机分成 2组，第一组（Gl)为对照组（Saline)，在实验过程中给予对应药物介质（生理盐水）处理； 第二组（G2)为培美曲塞加洛钼组（培美曲塞加洛钼），腹腔注射给药培美曲塞加洛钼。
[0025] 实施例1 :联用培美曲塞加洛钼对裸鼠骨肉瘤的抑制作用研究
[0026]1.体重称量：每周给实验裸鼠称重1-2次并记录。
[0027] 2.肿瘤大小卡尺测量：每周1-2次；按照以下公式计算出肿瘤体积：肿瘤体积 (mm3) =l/2ab2,a为肿瘤长径，b为肿瘤短径。
[0028] 3.整体荧光影像观察：每周在荧光影像系统下测量1-2次小鼠的原位肿瘤大小， 测量肿瘤长径，短径和影像面积，用Image-Pro计算出肿瘤的体积，并于每周一次在荧光影 像系统下拍摄具有代表性的荧光影像照片；至实验第四周为实验终点。
[0029] 4.数据分析：多组之间的比较用ANOVA统计学方法进行统计分析，P< 0. 05被认 为有显著性区别。
[0030] 表1 :实验过程中各组平均肿瘤体积测量结果（体积单位_3)
[0031]
[0036] 实验过程中各组平均肿瘤体积测量结果见表1，终点时各组裸鼠肿瘤体积见表2， 实验终点两组肿瘤体积统计学分析见表3,Gl组和G2组裸鼠肿瘤体积变化见图1，实验起 点裸鼠荧光成像图分别见图2和3,实验终点裸鼠荧光成像图分别见图4和5,从表1-3和 图1-5可知，联用培美曲塞加洛钼（G2组）与生理盐水（Gl组）相比，能显著抑制裸鼠骨肉 瘤肿瘤体积的增长，包括从实验期间定期对两组裸鼠进行肿瘤荧光照相及测量肿瘤并计算 体积，以及实验终点所测的肿瘤体积。并对实验终点的两组肿瘤体积使用T检验进行统计 学分析，结论为与Gl组相比，G2组对抑制肿瘤体积增长有统计学意义。
[0037] 实施例2:培美曲塞加洛钼对裸鼠骨肉瘤抑制的细胞形态学研究
[0038] 实验终点时，处死裸鼠，将各组裸鼠肿瘤组织取出，制成病理切片并行HE染色，观 察各组肿瘤组织在显微镜下的形态学改变，见图6与图7。可见Gl组肿瘤组织弥漫分布，瘤 细胞类圆形、梭形，核类圆形，深染，有异型性，胞浆红染。局部区域可见坏死。G2组肿瘤组 织部分区域大片坏死，瘤细胞变性，核深染，胞浆红染，部分胞浆空泡变性。实验结论证明培 美曲塞加洛钼能明显抑制裸鼠骨肉瘤细胞增殖，并能使肿瘤细胞坏死。
【主权项】
1. 一种药物组合物，其特征在于，所述组合物包括培美曲塞和洛钼。2. 如权利要求1所述的药物组合物，其特征在于，所述培美曲塞的给药量为5mg/kg。3. 如权利要求1所述的药物组合物，其特征在于，洛钼的给药量为3mg/kg。4. 如权利要求1所述的药物组合物在抑制骨肉瘤增殖方面的应用。5. 如权利要求4所述的应用，其特征在于，所述的骨肉瘤是在裸鼠股骨的骨髓腔内注 射红色荧光蛋白转染的人骨肉瘤细胞系143-B-RFP所导致的。6. 如权利要求4所述的应用，其特征在于，所述应用包括人在内的哺乳动物。
【专利摘要】本发明公开了一种药物组合物及其在抑制骨肉瘤增殖方面的应用。所述组合物包括培美曲塞和洛铂。本发明所述的药物组合物可抑制骨肉瘤的增长，动物实验中，与使用生理盐水组裸鼠相比，使用本组合物的实验组裸鼠肿瘤体积增长明显缓慢，并经统计学分析，有明显统计学意义；对两组裸鼠骨肉瘤肿瘤进行病理学检查，使用本组合物的实验组裸鼠肿瘤细胞变性坏死明显，表面能促使肿瘤细胞的凋亡；所述的药物组合物能够抑制骨肉瘤细胞的增殖，可作为对目前一线骨肉瘤化疗药物耐药患者的选择，且具有比一线骨肉瘤化疗药物更轻度的毒性反应。
【IPC分类】A61P35/00, A61K31/282, A61K31/519
【公开号】CN105078996
【申请号】CN201410187199
【发明人】吴苏稼, 周光新, 流小舟, 胡斌
【申请人】中国人民解放军南京军区南京总医院
【公开日】2015年11月25日
【申请日】2014年5月5日