每次1小时，提取2次，合并提取液，过滤，离屯、，35(K)r/min，lOmin，取上清液，10°C W下低溫静置12h，过滤，得到；
[0039] 4)调配，灭菌：取海狗肾酶解液10%，中药组合物提取液30%，复合调味剂（葡萄 糖：低聚果糖=3:1)3%，加适量水，混合均匀，灭菌即可。 W40] 实施例3
[0041] 海狗肾的精制方法，包括如下步骤：
[00创1)海狗肾前处理：称取海狗肾适量，清洗，渐水，去其阴茎骨，切化干燥，粉碎；
[0043] 2)酶解：选择渡萝蛋白酶，加纯净水9倍，加酶量为1. 5%，溫度50°C，调节抑7. 5， 在此条件下酶解化，加热灭酶活； 柳44]扣脱腥去异味：加入1倍量0. 5%崎0)3溶液，静置20min，待分层后，舍弃下层浑 浊化2〇)3溶液层，加入2倍量水，静置，分层，舍弃下层浑浊溶液，重复此过程2次，得到澄明 度好，腥味小的海狗肾酶解液；
[0045] 中药提取液通过W下步骤得到：将W下重量份的构杞子20份、淫羊蕾15份、熟地 10份、川号12份、牛膝10份、覆盘子12份、寃丝子8份、泽泻8份、牡丹皮10份、黄柏10份、 肉桂10份、白巧8份、山药8份、杜仲5份、当归5份、巧等4份、己戟天5份、肉巧蓉5份、陈 橘皮3份、高良姜3份，按上述重量比例称取各药材，混合均匀，加10倍量水，浸泡30min，回 流提取，每次1小时，提取2次，合并提取液，过滤，离屯、，35(K)r/min，lOmin，取上清液，10°C W下低溫静置12h，过滤，得到；
[0046] 4)调配，灭菌：取海狗肾酶解液10%，中药组合物提取液40%，复合调味剂（葡萄 糖：低聚果糖=3:1)2%，加适量水，混合均匀，灭菌即可。
[0047] 实验例：药效学实验 W48] 药效实验1 :海狗肾活性提取组合物对小鼠生精助阳的影响 W例 1、试验药品
[0050]实施例3制成的海狗肾活性提取组合物。 阳〇5U 2、动物 阳05引昆明种小鼠，雄性，SPF级，体重（20±^g
[0053] 3、方法
[0054] 取昆明种小鼠50只，雄性，每组10只，分别为正常组、肾阳虚模型组、海狗肾活性 提取组合物高、中、低剂量组，除了正常组外，其它4组造去势模型，5%的水合氯醒麻醉下 行双侧睾丸切除术，术后肌肉注射青霉素2万U，连续注射3dW防感染，连续给药20天，第 21天，处死动物，剖出精液囊和前列腺，除净周围脂肪，立即称其湿重（mg)，计算其脏器指 数。
[0055] 脏器指数=脏器重（mg) /体重（g)
[0056] 4、数据处理
[0057] 实验数据W狂±s)表示，数据统计用SPSS11. 0软件进行，组间对照采用one way 曰nov曰进行。
[0058]
W60] 注：与空白组比较：#胖<0. 05与模型对照组比较：冲<0. 05, *冲<0. 01 阳06U 5、分析
[0062] 从实验结果分析，模型组与正常对照组对比，模型组小鼠精液囊、前列腺重量显著 减少，说明试验造模成功，海狗肾活性提取组合物能显著增加去势雄性小鼠精液囊和前列 腺的重量，提高脏器指数，表明海狗肾活性提取物具有雄性激素样作用，具有很好的生精助 阳，补充肾气不足保健功效。
[0063] 药效实验2 :海狗肾活性提取组合物对Wistar大鼠补肾壮阳的影响 W64] 1、试验药品 W65] 实施例3制成的海狗肾活性提取组合物。
[0066] 2、动物
[0067]Wistar大鼠，SPF级，雄性，体重 200±20邑。
[0068] 3、方法： W例将Wistar雄性大鼠40只，随机分为5组，每组8只，分别为正常组、肾阳虚模型组、 海狗肾活性提取组合物高、中、低剂量组，除了正常组外，其它4组造去势模型，5%的水合 氯醒（0.5mL/100g)麻醉下行双侧睾丸切除术，术后肌肉注射青霉素4万U，连续注射3d W 防感染。高、中、低剂量分别按照海狗肾活性提取组合物（l〇.〇、5.0、2g/kg)灌胃，正常组、 肾阳虚模型组仅灌服同体积的蒸馈水（0.ImL/Kg)。 阳070] 3. 1血清睾酬水平的测定 阳〇7U 大鼠称量后，腹腔注射5 %水合氯醒（0. 5血/lOOg)，麻醉大鼠，断尾取血1. 5血左 右，待血液凝固后离屯、（200化ap/min，15min)，分离血清，采用全自动化学发光免疫分析仪 值XI-800)检测大鼠血清睾酬水平。 阳072] 3. 2勃起潜伏期的测定
[0073]于最后1次给药后比，将电刺激仪的刺激电极置于大鼠阴茎部位（一电极放于尿 道外口，另一电极置于阴茎根部），用棉签薩生理盐水湿润大鼠阴茎根部，W增强其导电性。 给予局部电刺激，电压6V，频率20化，波宽5ms，W秒表记录从刺激开始至阴茎勃起时间（勃 起潜伏期）。
[0074] 4、数据处理
[0075] 实验数据W狂+S)表示，数据统计用SPSS11. 0软件进行，组间对照采用oneway 曰nov曰进行。
[0076] 海狗肾活性提取组合物对去势大鼠血清睾丸水平及阴茎勃起肝脏脂质的影响
[0077]
阳07引注：与空白组比较：#胖<0. 05与模型对照组比较：冲<0. 05, *冲<0. 01
[0079] 5、分析
[0080] 从实验结果分析，模型组与正常对照组对比，模型组大鼠阴茎勃起潜伏期显著延 长，说明试验造模成功，而海狗肾活性提取组合物各剂量组均能不同程度地提高去势大鼠 血清睾酬水平，与模型组比较能显著缩短去势大鼠阴茎勃起潜伏期，提高去势大鼠阴茎对 外部刺激的兴奋性，且呈现一定的量效关系，表明本发明海狗肾活性提取组合物具有较好 的补肾壮阳保健功效。 阳0川药效试验3:毒性试验阳0間 1试验样品
[0083] 实施例3制成的海狗肾活性提取组合物。
[0084] 2 动物 阳0财 昆明种小鼠，SPF级，雌雄各半，体重（20±2)邑。
[0086] 3实验方法
[0087] 取昆明种小鼠40只，雌雄各半，随机分组并保证各组雌雄数相同，每组20只，分别 为正常组、海狗肾活性提取组合物组，正常组给予基础饲料外给予生理盐水，海狗肾活性提 取组合物除给予基础饲料外，按1.OmL/lOOg体重灌胃海狗肾活性提取物，每天2次，观察连 续给药15周，停药3周后观察小鼠毛发、行为、大小便、体重、脏器重量、血象、肝肾功能、血 糖、血脂等指标。
[0088] 4、结果与分析
[0089] 实验结束观察到本发明海狗肾活性提取组合物各剂量组与正常组相比，小鼠的毛 发、行为、大小便、体重、脏器重量、血象、肝肾功能、血糖、血脂等指标均无明显影响，脏器肉 眼没有发现异样变化和组织学检查结果表明，连续给药15周，停药3周后，小鼠各脏器均无 明显改变。表明本发明海狗肾活性提取组合物对小鼠长期用药后毒性小，停药后没有异样 反应，安全，副作用小。
【主权项】
1. 海狗肾的精制方法，其特征在于，包括如下步骤： 1) 海狗肾前处理：清洗、沥水，去其阴茎骨，切片，干燥，粉碎； 2) 酶解：向步骤1)得到的物料加入纯净水，加入菠萝蛋白酶进行酶解，结束后加热灭 酶活； 3) 脱腥去异味：向步骤2)得到的酶解液，加入碳酸钠溶液，静置，待分层后，舍弃下层 浑浊碳酸钠溶液层；加入纯净水，静置，分层，舍弃下层浑浊溶液，重复此过程2次，得到澄 明度好、腥味小的海狗肾酶解液； 4) 调配：将步骤3)得到的海狗肾酶解液与中药提取液按比例混合，搅拌均勾，添加复 合调味剂，混合调配、过滤、分装、灭菌得到海狗肾活性提取组合物； 所述的中药提取液通过以下步骤得到：将以下重量份的枸杞子15-30份、淫羊藿8-20 份、熟地6-15份、川芎6-15份、牛膝5-15份、覆盘子10-15份、菟丝子5-10份、泽泻5-10 份、牡丹皮5-12份、黄柏5-12份、肉桂5-12份、白芍3-10份、山药3-10份、杜仲2-7份、当 归2-7份、茯苓2-6份、巴戟天1-8份、肉苁蓉1-8份、陈橘皮1-5份、高良姜1-5份，按上述 重量比例称取各药材，混合均匀，加8-10倍量水，浸泡30min，回流提取，每次1小时，提取2 次，合并提取液，过滤，离心，3500r/min，lOmin，取上清液，10°C以下低温静置12h，过滤，得 到； 所述的复合调味剂为葡萄糖：低聚果糖按照3:1重量比混合得到。2. 根据权利要求1所述的海狗肾的精制方法，其特征在于：步骤2)所述的酶解，是指 加入7-9倍量纯净水、加酶量为1. 0-2. 0 %重量比、温度40-50 °C、pH7. 0-8. 0,酶解4-8h。3. 根据权利要求1所述的海狗肾的精制方法，其特征在于：步骤3)所述的脱腥去异 味，是指加入1-1. 5倍量0. 5%碳酸钠溶液，静置15-20min，待分层后，舍弃下层浑浊碳酸钠 溶液层，加入2-3倍量纯净水，静置，分层，舍弃下层浑浊溶液，重复此过程2次，得到澄明度 好，腥味小的海狗肾酶解液。4. 根据权利要求1所述的海狗肾的精制方法，其特征在于：步骤4)所述的海狗肾酶解 液与中药提取液按比例混合，按照1:2-4的重量比混合，所述的复合调味剂按照2-5%的重 量比添加。5. 权利要求1-4中任一所述方法得到的海狗肾活性提取组合物。6. 权利要求5所述的海狗肾活性提取组合物在生精益髓、补肾壮阳保健中的应用。
【专利摘要】本发明公开了海狗肾的精制方法，提取出的低分子多肽及氨基酸、微量元素等含量较高，克服了传统炮制法、煎煮法、回流提取法等存在的费工费时，药材浪费、质量不一致，提取率低、营养成分受破坏等缺点，并采用特殊的脱腥去苦方法，得到色、味较好的海狗肾提取物，合理配以枸杞子、淫羊藿、熟地、川芎、牛膝、覆盘子、菟丝子、泽泻、牡丹皮、黄柏、肉桂、白芍、山药、杜仲、当归、茯苓、巴戟天、肉苁蓉、陈橘皮、高良姜使用，填精益髓，补肾壮阳，可用于肾阳亏虚、阳痿、早泄、肾精亏损、腰膝酸软等，保健效果理想。
【IPC分类】A61P15/10, A61K35/48, A61P1/14, A61P19/00, A61P15/00
【公开号】CN105147730
【申请号】CN201510522222
【发明人】谭高琼, 黎冠宇
【申请人】广西北部湾海皇生物科技有限公司
【公开日】2015年12月16日
【申请日】2015年8月24日