含有肉毒杆菌神经毒素的药物组合物及其应用
【技术领域】
[0001] 本发明涉及药物，即，涉及在临床实践（优选地，在心脏内科中用于治疗心律失 常）中应用的含有肉毒杆菌神经毒素的药物组合物的制备。
【背景技术】
[0002] 目前，最常用的肉毒杆菌神经毒素为A型肉毒杆菌神经毒素（A型肉毒杆菌毒素）。 这种神经毒素是在肉毒梭菌（Clostridiumbotulinum)菌株存在下的发酵过程中产生的。
[0003] 在临床实践中，基于A型肉毒杆菌毒素的少量药物例如保妥适（Botox)、 丽舒妥（Dysport)、Kseomin(Xeomin)或Lantoks(Lantox)已被应用。这些药物在 许多国家有注册治疗应用，以及还有一些目前正在被开发并且还没有注册的治疗应 用(ShengChen, 2012,Toxins,ClinicalUsesofBotulinumNeurotoxins:Current Indications,LimitationsandFutureDevelopments, 4, 913-939)。由美国食品药品监督 管理局（FDA)提供的备有证明文件的应用包括：在眼科中：斜视的治疗；在神经科中：眼睑 痉挛、面肌痉挛、痉挛性斜颈（颈肌张力障碍）、慢性偏头痛（头痛）、逼尿肌过度活动、成人 和2岁以上儿童的局部肌肉痉挛（包括脑瘫和痉挛）、腋窝多汗、多涎的治疗；在美容医学 科中：面部皱纹的消除；在泌尿科中：下尿路疾病的治疗；在肠胃科中：胃肠道疾病的治疗； 在耳鼻咽喉科中：痉挛性发音困难的治疗。
[0004]目前，基于A型肉毒杆菌毒素的药物的以下应用正在被研究：在牙科中：颞下颂关 节功能紊乱的治疗；在神经科中：慢性肌肉骨骼疼痛和糖尿病神经病变的治疗；在妇产科 中：阴道痉挛的治疗；在创伤和一般的外科手术中：伤口愈合的改善；在心脏内科中：心律 失常的治疗。
[0005] 心律失常是一组广泛而复杂的心脏疾病。该疾病唯一有效的、合理的手术治疗 是射频消融治疗（使用高频电流灼烧心脏的心律失常性区域）。然而，这种方法并不是 足够有效的（低于60% )，而且具有很高的例如心包积血、经食道痿管（transesophageal fistula)、消融后遗症（post-ablation)、心房扑动、膈神经麻痹性痴呆和附壁血栓等并 发症的风险，该风险高于 30%(Cammetal.，2010,Guidelinesforthemanagementof atrialfibrillationEuropeanHeartJournal, 31，2369 - 2429)〇
[0006] 最近的公开出版物致力于使用肉毒杆菌神经毒素进行心律失常的治疗，但是针 对心房纤维性颤动的抑制效果的持续时间不会超过一周（〇hetal.，2011，Botulinum ToxinInjectioninEpicardialAutonomicGangliaTemporarilySuppressesVagally Mediated.AtrialFibrillation.CircArrhythm.Electrophysiol.，4, 560-565) 〇 这种效 果的持续时间在临床实践中是不可接受的。
[0007]目前，基于肉毒杆菌毒素的药物的制造商均在参与稳定性药剂的应用的开发以加 强毒素的货架期和其传递至靶向器官的有效性，该稳定性药剂为例如各种蛋白质、氨基酸、 多糖和其它成分。
[0008] 含有选自A、B、C、D、E、F或G和S不同血清型的肉毒杆菌的肉毒杆菌神经毒素以及 选自聚赖氨酸、聚精氨酸、聚组氨酸或聚鸟氨酸所组成的组中的聚胺酸（polyamineacid) 的药物组合物已经被开发（专利申请RU2011125775A;W02010/07842)。
[0009] 含有6pg至30ng的量的，具有大约50-250单位的LDm (致死剂量，50% )的生物 活性的A型肉毒杆菌毒素以及其它成分的其它药物组合物已经被开发（专利RU2453333C2， W02008/000490)，所述其它成分例如pH缓冲液、赋形剂、稀释剂、冷冻保护剂和/或稳定剂， 选自透明质酸、聚乙烯吡咯烷酮或聚乙二醇。
[0010] 然而，这些已知的组合物并不具有持续作用，也不增加肉毒杆菌毒素的治疗效果， 并且不旨在用于治疗心律失常。那些制剂在心脏的组织中不具有足够的接触（exposure) 以实现最佳效果，并且活性物质可能会快速消除而全身循环。
[0011] 含有：(a)浓度为每ImL溶液50-10000单位LD5。的肉毒杆菌神经毒素复合物（A、B、 C、D、E、F或G型）或高纯度肉毒杆菌神经毒素（A、B、C、D、E、F或G型），（b)含有0. 005-0. 02 体积％的量的表面活性剂（SAS)，优选聚山梨醇酯80的稳定性试剂，（c)浓度为0. 15-0. 3M 的作为结晶剂（crystallineagent)的氯化钠，（d)浓度为10_20mM的二糖，优选为鹿糖， (d)维持pH值为5. 5-7. 5的缓冲液，主要为组氨酸，以及水的液体药物组合物也已经被开发 (专利RU2407541C2,W02006/005910)。然而，这些已知的组合物不旨在用于治疗心律失常 疾病，而且据说诱导对肉毒杆菌毒素的稳定性效果，没有任何关于持续作用或者降低治疗 剂量和副作用的任何明示或建议或者。
[0012] 因此，对于治疗心律失常，特别是心房纤维性颤动的能够导致持续效果以及能够 限制潜在副作用的新策略具有重要的需求。
【发明内容】
[0013] 本发明涉及对治疗心律失常有效的肉毒杆菌神经毒素的药物组合物，特别是具有 高治疗效果、延长的持续效果和减少的副作用。
[0014] 发明人意外地发现，本发明的组合物实现了提高A型肉毒杆菌毒素的药理学活 性，已经通过单一剂量实现了期望的治疗效果，延长了肉毒杆菌毒素的效果，同时降低了肉 毒杆菌毒素的副作用。进一步地，当维持在溶液中以待使用时，本发明的组合物允许制备成 具有用于直接进入临床的个性化药物所需的性质并且呈现出延长活性的组合物。
[0015] 本发明的第一方面提供了一种含有肉毒杆菌毒素，特别是A型肉毒杆菌毒素和选 自由壳聚糖和那曲肝素所组成的组中的黏多糖，以及药学上可接受的赋形剂的组合物，所 述壳聚糖和那曲肝素采用1 : (IO3-IO9)，优选1 : (IO6-IOs)的重量比，该组合物具有以下成 分：
[0016] 肉毒杆菌毒素l-200U/mL
[0017] 黏多糖 0?l_5〇mg/mL
[0018] 盐水 0?l-50mL。
[0019] 本发明的第二方面涉及根据本发明的药物制剂用作药剂。
[0020] 本发明的第三方面涉及根据本发明的组合物在制备用于预防和/或治疗心律失 常特别是心房纤维性颤动和动脉性高血压的药物制剂中的应用。
[0021] 本发明的第四方面涉及在需要所述组合物的受试者中预防和/或治疗心律失常 特别是心房纤维性颤动或动脉性高血压的方法，该方法包括在所述受试者中给药根据本发 明的药物制剂。
[0022] 本发明的第五方面涉及药用试剂盒，该药用试剂盒包括隔室形式的第一室或一系 列室以及第二室或一系列室，其中，第一室或一系列室包括根据权利要求1-13中任意一项 所述的组合物，第二室或一系列室包括具有使用说明书的注射用注射器。
[0023] 本发明的第六方面涉及根据本发明的组合物的制备的药用试剂盒，该药用试剂盒 包括隔室形式的第一室或一系列室以及第二室或一系列室，其中，第一室或一系列室包括 肉毒杆菌毒素溶液，第二室或一系列室包括具有使用说明书的壳聚糖粉末和任选的用于制 剂制备的小瓶。
【附图说明】
[0024]图1示出了如实施例9中所描述的由大鼠股骨肌肉的电刺激阈值（以伏特为量 度）的变化表示的本发明的药物组合物相比于商业的制剂（Xeomin)以及相比于含有肉毒 杆菌毒素和另一种黏多糖的对比制剂的效果。A:制剂N2 2 (_壳聚糖）；B:制剂N2 6 (_那曲 肝素）；C:对比制剂N2 11 (-透明质酸钠）；D:对比制剂N2 4(_肝素）；(-----)Xeomin0
[0025]图2示出了如实施例11中所描述的由大鼠股骨肌肉的电刺激阈值（以伏特为量 度）的变化表示的本发明的药物组合物相比于根据专利RU2407541描述的含有二糖和A型 肉毒杆菌毒素的组合物的效果和其持续时间。
[0026]图3示出了如实施例13中所描述的由大鼠股骨肌肉的电刺激阈值（以伏特为 量度）的变化表示的在不同壳聚糖浓度下的本发明的两个药物组合物与商业的组合物 (Xeomin)的对比效果。（---Xeomin)，（--制剂Ns1)，（???.制剂Ns2) 〇
[0027] 图4示出了如实施例12中所描述的对比注射[Visipaque?(碘克沙醇）]至包括 前右（A)、右下（B)和左上GP(C)的心外膜脂肪垫的图。导管输出针进入心包腔空间（D)。
[0028]图5示出了如实施例11所描述的由大鼠股骨肌肉的电刺激阈值（以伏特为量度） 的变化检测的诱导AF的刺激阈值。（? ? ? ?基线），（Xeomin)，（-制剂Na2)
[0029]图6示出了将本发明的组合物给药至四个主要的心外膜脂肪垫的可视区域的例 子。A:第一心外膜左心房脂肪垫位于右上肺静脉（PV)的前方，并且与右前神经节丛（GP)相 对应；B:第二心外膜脂肪垫位于右下肺静脉的下后方，并且与右下GP相对应；C:第三脂肪 垫位于左上PV和左下PV的前方（在PVs与左心耳（LAA)之间），并且与马歇尔束（Marshall tract)GP和左上GP相对应；以及D:第四脂肪垫位于左下PV的下方并向后延伸，并且与左 下GP相对应。针尖在直接视觉控制下手工置于脂肪垫的心外膜表面的几处位置，以确保最 佳注射。
【具体实施方式】
[0030] 术语"肉毒杆菌毒素"指的是选自A、B、E、F和G型肉毒杆菌毒素的任意类型。肉 毒杆菌毒素（BTX)通过阻断来自神经肌肉接头的突触前末梢的乙酰胆碱的释放而起作用。 已经描述了由肉毒梭菌（Clostridiumbotulinum)的不同菌株产生的七种不同的抗原性 肉毒杆菌毒素（BTX-A、B、C、D、E、