基衍生物（IV)的合成
[0026] 将化合物II(209mg，0. 5mmol)溶于20mL乙腈当中，向其中加入无水碳酸钾 (345mg，2. 5mmol)，鹏化钾（84mg，0. 5mmol)和哌啶（852mg，lOmmol)，混合物加热回流 10h。 反应结束后将反应液倒入25mL冰水中，用等量二氯甲烷萃取2次，合并有机相。依次用水 和饱和食盐水洗涤合并之后的有机相，再用无水硫酸钠干燥，减压浓缩去除溶剂得到产物 粗品。产物粗品用硅胶柱层析纯化（流动相为：石油醚/丙酮=100:0. 5,v/v)，收集黄色 集中洗脱带并挥去溶剂即得到化合物IV的黄色粉末（116. 3mg，55% )。
[0027] NMR(500MHz,Chloroform-dl)δ6. 44(d,J= 95. 3Hz, 1H),6. 31(s, 1H), 5. 73 (s, 1H), 4. 20 (s, 2H), 3. 74 (s, 1H), 3. 01 (s, 2H), 2. 39 (s, 4H), 2. 07 (s, 1H),L96 (s, 1H), 1. 86 (s, 1H),1. 60 (s, 1H),1. 44 (s, 4H),1. 33 (d,J= 15. 0Hz, 5H),1. 00 (s, 6H),0. 91 (s, 6H).
[0028] 13C匪R(125MHz,DMS0-d6)δ188. 16(s), 183. 79(s), 154. 48(s), 147. 63(s), 140. 27 (s), 136. 51 (s), 134. 79 (s), 131. 33 (s), 128. 47 (s), 118. 88(s), 69. 31 (s), 54. 6 9(d,J= 16.2Hz) ,45.56 (s), 37.61 (s), 33.62 (s), 26.21 (s), 25.21 (s), 24.65 (d,J= 19. 1Hz),23. 50 (d,J= 17. 2Hz),23. 23 (s),22. 68 (s).
[0029] HRMS(ESI) :m/z[M+H]+calcdforC27H3SN03:424. 28 5 2;found:424. 2856。
[0030]
[0031] 实施例5组合物对单侧输尿管结扎大鼠肾间质纤维化的影响
[0032] 1. 1 材料
[0033] 贝那普利，北京诺华制药有限公司生产；羟脯氨酸（HYP)试剂盒，南京建成生物公 司；纤维连结蛋白（FN)试剂盒购自上海生物制品所。
[0034] 组合物的制备：将研磨之后过200目网的85mg化合物III的粉末和研磨之后过 200目网的15mg化合物IV的粉末装入带盖的小管中并用涡轮搅拌仪混合即得到100mg组 合物，使用时用水溶解这l〇〇mg的组合物即得到组合物的溶液。
[0035] 实验动物：普通级Wistar大鼠，雄性，体重150-200g，SD大鼠。
[0036] 1. 2试验方法与结果
[0037] 大鼠60只，随机分6组，即假手术组、模型组、苯那普利灌胃10mg/kg组、组合物 灌胃lOmg/kg组、化合物III灌胃10mg/kg组、化合物IV灌胃10mg/kg组，动物喂养1周， 各大鼠以10%水合氯醛3.OmL/kg腹腔注射麻醉后，将大鼠右侧卧位固定与手术台上，剪毛 后用碘酒、75%酒精消毒手术区，行左侧腹切口，逐层切开皮肤、肌肉及腹壁各层，暴露并分 离左侧输尿管，假手术组仅切开腹腔并游离左侧输尿管，但不结扎和剪断，其他各组大鼠用 4-0丝线结扎两道，上一道结扎点位于左肾下极水平，然后在两道结扎点剪断输尿管，逐层 缝合，术后10天10%水合氯醛麻醉后处死各组动物，取血，按纤维连结蛋白测定说明测定 说明纤维联接蛋白（FN)。生理盐水反复灌洗后留取左侧肾脏，肾组织经4%的多聚甲醛缓 冲液固定。切取适量肾组织，按羟脯氨酸试剂盒测定说明测定羟脯氨酸。
[0038] 常规病理学检①肉眼观察：假手术组肾脏颜色鲜红，表明光滑，包膜光泽，无粘连。 模型对照组肾脏体积增大，颜色苍白，表明呈颗粒状，类似人体大白肾，少数区域肾包膜粘 连。②光镜检查：假手术组肾单位结果清晰，肾小球囊无扩张或炎细胞浸润。模型对照组大 片肾小管坏死，肾间质纤维细胞增生，肾小管扩张，内有大量棕黄色遮光物质或坏死脱落的 上皮细胞，肾小球数目减少，部分肾小球纤维化并与包曼氏囊壁粘连，囊腔消失。组合物给 药组病变与模型对照组类似，但均有不同程度的形态学改善，与模型对照组比较有明显差 异。而化合物III给药组和化合物IV给药组与模型对照组无显著性差异。
[0039] 表1组合物对单侧输尿管结扎大鼠肾间质纤维化的影响
[0040]
[0041] *ρ〈0· 05,与模型组相比较
[0042] 对各组FN、HYP进行Τ检验。结果见表1，组合物灌胃10mg/kg显著降低FN、HYP 水平（与模型对照组比较，P〈〇.〇5);而化合物III和化合物IV灌胃10mg/kg未能显著降低 FN、HYP水平。
[0043] 结论：组合物能够显著降低肾间质纤维化FN、HYP水平的升高，抑制肾间质纤维 化，可以用来制备抗肾纤维化药物。化合物III和化合物IV不能够显著降低肾间质纤维化 FN、HYP水平的升高，不能抑制肾间质纤维化，不可以用来制备抗肾纤维化药物。
[0044] 实施例6本发明所涉及组合物片剂的制备
[0045] 取2克组合物，加入制备片剂的常规辅料18克，混匀，常规压片机制成100片。
[0046] 实施例7本发明所涉及组合物胶囊的制备
[0047] 取2克组合物，加入制备胶囊剂的常规辅料如淀粉18克，混匀，装胶囊制成100 粒。
【主权项】
1. 一种组合物，其特征为该组合物由化合物III和化合物IV组成，该组合物中化合物 III和化合物IV的质量百分数分别为85%和15%， IV'〇2. 如权利要求1所述的组合物的制备方法，其特征为：将化合物III的粉末和化合物 IV的粉末按照质量百分数分别为85%和15%充分混合。3. -种如权利要求1所述的组合物在治疗肾纤维化药物中的应用。4. 如权利要求3所述的组合物在治疗肾纤维化药物中的应用，其特征为：所述肾纤维 化为肾间质纤维化。5. 如权利要求4所述的组合物在治疗肾纤维化药物中的应用，其特征为：所述肾间质 纤维化为单侧输尿管阻塞形成的肾间质纤维化。6. 如权利要求3所述的组合物在治疗肾纤维化药物中的应用，其特征为：所述组合物
【专利摘要】本发明涉及有机合成和药物化学领域，具体涉及组合物、制备方法及其在制备预防或治疗肾纤维化药物上的用途。本发明公开了一种组合物及其制备方法。药理学实验表明，本发明的组合物具有预防或治疗肾纤维化的作用，具有开发预防或治疗肾纤维化药物的价值。
【IPC分类】A61K31/44, A61P13/12, A61K31/40
【公开号】CN105250284
【申请号】CN201510741116
【发明人】王卓婷
【申请人】南京赋海澳赛医药科技有限公司
【公开日】2016年1月20日
【申请日】2015年11月4日