价的影响
[0079] 表1、预防给药对流感病毒感染MDCK细胞血凝效价的影响
[0080]
[0081]~注：红细胞全部凝集，沉于孔底，平铺呈网状，即为100%凝集（+++);沉于底部，周 围有凝集块（++);沉于底部，周围有少量凝集块（+);不凝集者红细胞沉于孔底呈点状（-)。
[0082] 表2、治疗给药对流感病毒感染MDCK细胞血凝效价的影响
[0083]
[0086] 由表1结果可知，病毒对照组细胞上清液血凝试验中流感病毒血凝效价为2 7,本 发明对照组的血凝试验中流感病毒血凝效价为2 1，中药物稀释浓度（1:2)为0. 02g生药/ mL时，血凝试验为阴性。用药后使流感病毒的血凝效价从2 7降为2 1，二组间流感病毒血凝 效价比较，具有显著性差异P<〇. 05。TI指数=TC5(VI巧0 = 0. 08/0. 04 = 2,该结果证明本 发明中药组合物低毒有效，能有效的抑制流感病毒。
[0087] 由表2结果可知，本发明中药组合物给药相对于预防给药效果较差；由表3结果可 知，本发明中药组合物体外对流感病毒几无直接杀伤作用，综合表1~3结果提示：本发明 中药组合物可能是通过抑制流感病毒对宿主细胞的吸附、释放而发挥作用。
[0088] 2. 4治疗给药对流感病毒感染MDCK细胞形态的影响
[0089] 由图1可知，MDCK细胞感染流感病毒后，出现明显的细胞病变，表现为细胞皱缩、 变圆、脱落。而给予病毒挫可改善病毒诱导的细胞病变，提示病毒挫可抑制呼吸道合胞病毒 的增殖。给予0. 01~0. 〇4mg/ml浓度的本发明中药组合物提取液可有效改善病毒诱导的 细胞病变，并呈一定的量效关系。该结果提示本发明中药组合物能够有效的改善流感病毒 诱导的细胞病变。
[0090] 实验例2、本发明中药组合物抗呼吸道合胞病毒的实验研究
[0091] 1. 1材料
[0092] 呼吸道合胞病毒、A549细胞，由浙江省医学科学院提供。
[0093] 1.2本发明中药组合物提取液的制备
[0094] 按比例称取黄琴30份、枯梗3份、芦根12份、白茅根12份、款冬9份、苍术20份、 杏仁9份、半枝莲9份，在蒸馈水中浸泡30min，并加入lOOmL蒸馈水（液面浸没中药饮片 2~3cm)武火煮沸，待其沸腾后文火慢煎30min，得滤液50血左右；再向生药中继续加入蒸 馈水至药材表面再次进行煮沸，得滤液50mL左右，将两次滤液合并后浓缩至50mL左右，并 将其放入4°C冰箱冷却，静置过夜，次日继续浓缩至25血，2000Xg离屯、，取上清液，用蒸馈 水定容至25血，最后浓度为2g生药/mU分装，消毒，低溫冷藏，备用。 阳0巧]1. 3药物的毒性测定
[0096] 用3血0. 25%的邸TA-膜酶将已长满单层的A549细胞消化并制成细胞悬液，将细 胞按lXl〇5个/孔加入到24孔板中，37°C、5%C〇2培养箱中培养1她。吸取原培养液，并 用D-Hanks液将细胞洗2遍，再用不含血清的培养液将0. 04g生药中药提取液对倍稀 释成不同的梯度1/2、1/4、1/8、1/16、1/32、1/64、1/128,分别加入24孔板，20μL/孔，再分 别加10%血清培养液至1血/孔，各组设5个复孔，37°C、5%C〇2培养箱内培养1她，观察细 胞病变情况。实验设立空白对照组。
[0097] 1. 4 合胞病毒TCID50
[0098] 将细胞分装培养后，吸取原培养液，用D-Hanks液清洗2遍，并用不含血清的培养 液将合胞病毒对倍稀释成不同的梯度1/2、1/4、1/8、1/16、1/32、1/64、1/128,分别加入24 孔板，20μL/孔，再分别加10%血清培养液至lmL/孔，每个浓度设5个复孔，37°C、5%C02 培养箱中培养1她，观察细胞病变情况。实验平行设空白对照组。
[0099] 1.5统计学处理
[0100] 利用SPSS18. 0软件对实验结果进行统计分析，P<0. 05表示差异有统计学意义。 阳101] 2结果
[0102] 2. 1药物对A549细胞的毒性
[0103] A549细胞没有被中药提取液破坏从而产生细胞病变（CP巧，运说明实验所用中药 提取物在实验浓度范围内对A549细胞无毒。 阳104] 2. 2药物对呼吸道合胞病毒的抑制作用
[0105] 由图2可知，A549细胞感染呼吸道合胞病毒后，细胞膨胀、变形、大量坏死。而给 予0. 065~Img/ml浓度的病毒挫可改善病毒诱导的细胞病变，并呈明显的量效关系，提示 病毒挫可抑制呼吸道合胞病毒的增殖。给予0. 5~2mg/ml浓度的本发明中药组合物提取 液可有效改善病毒诱导的细胞病变，但此后随着药物浓度的稀释，改善效果逐渐下降，并呈 一定的量效关系。该结果提示本发明中药组合物能够有效的抑制呼吸道合胞病毒增殖。 阳106] 实验例3、本发明中药组合物抗腺病毒的实验研究 阳107] 1. 1材料
[0108] 腺病毒、肥L细胞，由浙江省医学科学院提供。 阳109] 1.2本发明中药组合物提取液的制备
[0110] 按比例称取黄琴30份、枯梗3份、芦根12份、白茅根12份、款冬9份、苍术20份、 杏仁9份、半枝莲9份，在蒸馈水中浸泡30min，并加入lOOmL蒸馈水（液面浸没中药饮片 2~3cm)武火煮沸，待其沸腾后文火慢煎30min，得滤液50血左右；再向生药中继续加入蒸 馈水至药材表面再次进行煮沸，得滤液50mL左右，将两次滤液合并后浓缩至50mL左右，并 将其放入4°C冰箱冷却，静置过夜，次日继续浓缩至25血，2000Xg离屯、，取上清液，用蒸馈 水定容至25血，最后浓度为2g生药/mU分装，消毒，低溫冷藏，备用。
[0111] 1.3药物的毒性测定 阳11引用3血0. 25%的邸ΤΑ-膜酶将已长满单层的肥L细胞消化并制成细胞悬液，将细 胞按1Χ1〇5个/孔加入到24孔板中，37°C、5% C〇2培养箱中培养1她。吸取原培养液，并 用D-Hanks液将细胞洗2遍，再用不含血清的培养液将0. 04g生药/mL中药提取液对倍稀 释成不同的梯度1/2、1/4、1/8、1/16、1/32、1/64、1/128,分别加入24孔板，20 μ L/孔，再分 别加10%血清培养液至1血/孔，各组设5个复孔，37°C、5% C〇2培养箱内培养1她，观察细 胞病变情况。实验设立空白对照组。 阳113] 1.4腺病毒TCID50
[0114] 将细胞分装培养后，吸取原培养液，用D-Hanks液清洗2遍，并用不含血清的培养 液将腺病毒对倍稀释成不同的梯度1/2、1/4、1/8、1/16、1/32、1/64、1/128,分别加入24孔 板，20 μ L/孔，再分别加10%血清培养液至ImL/孔，每个浓度设5个复孔，37°C、5% C〇2培 养箱中培养1她，观察细胞病变情况。实验平行设空白对照组。
[0115] 1.5统计学处理
[0116] 利用SPSS 18. 0软件对实验结果进行统计分析，P<0. 05表示差异有统计学意义。
[0117] 2 结果
[0118] 2. 1药物对肥L细胞的毒性
[0119] 肥L细胞没有被中药提取液破坏从而产生细胞病变（CP巧，运说明实验所用中药 提取物在实验浓度范围内对肥L细胞无毒。 阳120] 2. 2药物对腺病毒的抑制作用 阳121 ] 表4、药物对腺病毒感染肥L细胞血凝效价的影响 阳1。]
阳12引注：红细胞全部凝集，沉于孔底，平铺呈网状，即为100%凝集（+++);沉于底部，周 围有凝集块（++);沉于底部，周围有少量凝集块（+);不凝集者红细胞沉于孔底呈点状（-)。
[0124] 由表4结果可知，病毒对照组细胞上清液血凝试验中腺病毒血凝效价为2 7,本发 明组的血凝试验中腺病毒血凝效价为2 2,中药物稀释浓度（1:2)为0. 02g生药时，血 凝试验为阴性。用药后使腺病毒的血凝效价从2 7降为2 2,二组间腺病毒血凝效价比较，具 有显著性差异P<〇.05。TI指数=TO50/IC50=0. 08/0. 01= 8,证明本发明中药组合物低 毒有效，能有效的抑制腺病毒。
[01巧]W下通过临床试验例对本发明的有益效果作进一步的阐述： 阳126] 临床试验例1、本发明中药组合物随机、双盲、双模拟、阳性药物平行对照的临床试 验 阳127] -、资料与方法 阳12引 1、临床资料
[0129] 1. 1、病例来源：所有患者来自上海浦东新区传染病医院和上海中医药大学附属曙 光医院。本研究共入组患者72例，根据随机数字表将患者按1:1:1比例分配至试验组、对照 组和安慰剂组，每组患者24例。其中试验组男13例、女11例，年龄38. 03 + 14. 65岁；对照 组男11例、女13例，年龄36. 79 + 13. 67岁读慰剂组男13例、女11例，年龄37. 21 + 15. 43 岁。各组患者一般资料具有可比性（P〉〇. 05)。 阳130]