金芪降糖片治疗糖尿病心血管并发症的制作方法
【技术领域】
[0001] 本发明设及中医药领域，设及金巧降糖片治疗糖尿病屯、血管并发症。
【背景技术】
[0002] 糖尿病是一种由于膜岛素分泌缺陷及(或）其生物学作用障碍引起的W高血糖为 特征的代谢疾病，是在遗传基础上，有环境因素参与的遗传易感性疾病，是一种慢性全身性 代谢疾病，严重危害人类健康，积极开展糖尿病的防治工作已成为主要的社会公共卫生问 题。
[0003] I型糖尿病的发病原因主要是由于膜岛素分泌绝对缺少，II型糖尿病是从膜岛素 抵抗为主伴膜岛素相对不足到膜岛素分泌不足为主伴膜岛素抵抗的病理过程。目前公认II 型糖尿病是一种在环境因素、生活方式的改变的作用下由多个基因分别或相互作用所导致 的复杂遗传病，但是II型糖尿病的病因尚未完全阐明。
[0004] 目前糖尿病是严重威胁人类生命及生活质量的一类疾病，其中II型糖尿病（type 2 diabetes melli化s，T2DM)患者约占90%，而II型糖尿最主要致死原因为屯、血管并发症。
[0005] 西医目前常采用饮食、运动疗法横酷脈类、双脈类、嚷挫烧二酬类、α-葡萄糖巧酶 抑制剂、瑞格列奈、膜岛素等来治疗II型糖尿病，仅嚷挫烧二酬类可改善膜岛素抵抗。病人 在用西药治疗的同时，又不断地出现动脉硬化、冠屯、病和高血压等并发症，Π 型糖尿病的复 杂机制及其导致的全身病变是西药治疗的薄弱环节。不论是横脉类的促泌剂还是嚷挫烧二 酬类的增敏剂在实验和临床研究中都不具备明显的减肥功效，而肥胖是2型糖尿病乃至代 谢综合征的重要病理基础。
[0006] 流行病学研究表明肥胖、高热量饮食等是2型糖尿病最主要的环境因素。2型糖尿 病是由于膜岛素的生物调节发生障碍，膜岛素信号转导通路的失活引起膜岛素抵抗，导致 膜岛素分泌相对不足，病人常伴有糖脂代谢素乱，出现代谢异常变现为高血糖、高甘油Ξ醋 血症和高胆固醇血症等。糖尿病控制较差会引发各种并发症，其中屯、血管病变为糖尿病患 者最严重而突出的问题，基本病理为动脉硬化及微血管病变导致屯、血管等部位的衰竭病 变，而且病情较重是糖尿病患者致死的主要原因之一。
[0007] 金巧降糖片是W金银花、黄巧为主要成分的一种比较成熟的中药降血糖复方制 剂，一直具有良好的降血糖、降血脂等作用，在临床应用中收到较好的效果。然而目前很少 有研究金巧降糖片对糖尿病屯、血管并发症的治疗，本实验通过高脂诱导建立动物模型，观 察金巧降糖片对高脂诱导的果蛹代谢素乱的调节及屯、血管疾病的治疗作用，为临床用药提 供实验依据。
[000引金巧降糖片作为比较成熟的中药降血糖复方制剂，一直具有良好的降血糖、降血 脂作用，在糖尿病治疗中具有良好的改善膜岛素抵抗和纠正脂质代谢作用。目前已有研究 提示金巧降糖片可W保护血管内皮，金巧降糖片还可W减轻糖尿病慢性肾损伤，其程度可 能与降脂作用程度相关;但是目前还未有研究金巧降糖片对糖尿病屯、血管并发症的作用， 本实验首次研究发现金巧降糖片对屯、功能具有较好的保护作用。
【发明内容】
[0009] 金巧降糖片在制备治疗糖尿病屯、血管并发症的组合物的应用，金巧降糖片由黄连 10.3重量份黄巧15.4重量份金银花61.8重量份制成。
[0010] 金巧降糖片在制备治疗糖尿病屯、血管并发症的组合物的应用，用于治疗糖尿病并 发屯、衰。
[0011] 金巧降糖片在制备治疗糖尿病屯、血管并发症的组合物的应用，用于治疗高脂饮食 引起的糖脂代谢素乱。
[0012] 金巧降糖片在制备治疗糖尿病屯、血管并发症的组合物的应用，用于治疗屯、功能损 伤。
[001引金巧降糖片由黄连10.3重量份黄巧15.4重量份金银花61.8重量份制成，其具体 方法如下：
[0014] 黄连加70%乙醇回流提取二次，每次2小时，滤过，合并滤液，减压浓缩至相对密度 为1.15~1.20(60°C )的浸膏，用盐酸调节PH值至1~2，加氯化钢适量，静置12小时，滤过，沉 淀加水适量，用20 %氨氧化钢调节PH值至6~7，揽拌使溶解，滤过，取沉淀减压干燥粉碎备 用；
[0015] 黄巧加80%乙醇回流提取Ξ次，每次2小时，滤过，合并滤液，减压浓缩至相对密度 为1.25~1.30(60°C)的浸膏，减压干燥粉碎备用；
[0016] 金银花加水溫浸二次，每次1小时，合并提取液，滤过，减压浓缩至相对密度为1.17 ~1.22(60°C)的浸膏，待溫度降至40°C时，揽拌下缓慢加入乙醇，使含醇量达70%，静置24 小时，滤过，减压浓缩至相对密度为1.22~1.28(60°C)的浸膏，减压干燥粉碎备用。
[0017] 取上述Ξ种粉末，加入辅料适量，制成颗粒，压制成1000片，包薄膜衣，即得金巧降 糖片
[001引药效试验过程：
[0019] 本研究通过高脂食物饲养果蛹造模诱导果蛹发生糖脂代谢素乱，继而研究发现高 脂饮食引起糖尿病相关糖脂代谢素乱可引起屯、管结构和功能的改变，引起提前发生的屯、 衰。本次研究还发现金巧降糖片可明显改善高脂饮食引起的糖脂代谢素乱及保护代谢素乱 引起的屯、功能损伤。
【附图说明】
[0020] 图1:金巧降糖片对高脂饮食果蛹甘油Ξ醋及海藻糖含量的影响
[0021] 图2:金巧降糖片对高脂饮食果蛹屯、功能的影响
[0022] 图3:金巧降糖片对高脂饮食果蛹屯、管4ebp、pepck mRNA表达量的影响
[0023] 图4:金巧降糖片对高脂饮食果蛹4EBP蛋白憐酸化的影响
[0024] 1 材料
[0025] 1.1药品与试剂
[0026] 金巧降糖片（天津中新药业集团股份有限公司隆顺格制药厂），BCA蛋白浓度测定 试剂盒（Thermo)，憐酸化4EBPl(Thr37/46)兔抗（CST#2855s)，SYBR巧光定量试剂盒 (Roche)，逆转录聚合酶链反应试剂盒（Vazyme)，Fly化p(Ca;rolina Biological S叫ply Co.) iTRIzoKinvitrogen)，葡萄糖测试试剂盒(Sigma)、甘油Ξ醋试剂盒(上海科华生物工 程股份有限公司），脂肪酶(Sigma)，海藻糖酶(Sigma)。
[0027]引物序列：
[002引1.2仪器
[0029] 人工气候培养箱(南京恒裕仪器设备制造有限公司RP-300A)，酶标仪(BioTeK基因 有限公司），匀浆机（IKA T10B)，相差显微镜（OLYMPUS BX53F)，EM-CCD (AND0R)，电泳仪 (BI〇-RAD)，PCR仪(Peltier Thermal Cycler PTC-200)。
[0030] 1.4动物:野生型（Oregon-R strain)健康果蛹。
[誦]巧法
[0032] 2.1果蛹甘油Ξ醋及海藻糖含量测定
[0033] 随机每组6只果蛹，加入50化1 PBST后高速30s匀浆3次后离屯、取上清.取测试蛋白 浓度，70°C五分钟变性后用葡萄糖试剂盒测试上清葡萄糖含量，加入海藻糖酶37°C解育1小 时后将海藻糖分解为葡萄糖后再次测试葡萄糖含量，计算差值即为海藻糖含量;上清加入 脂肪酶37°C解育过夜将甘油Ξ醋分解为甘油，甘油Ξ脂试剂盒测试甘油Ξ醋含量。
[0034] 2.2蛋白免疫印迹分析检测口-468口蛋白表达
[00巧]随机每组五只果蛹，用蛋白裂解液提取果蛹组织蛋白，5%SDS-PAGE浓缩胶+12% SDS-PAGE分离胶电泳，转移蛋白至硝酸纤维膜上，W5%脱脂奶封闭，加入憐酸化4EBP( 1; 1000,4°C解育过夜KPBST洗膜，加入相应二抗（1:1000)解育化，PBST洗膜，化学发光法显 影，W化bul in作为内参，进行半定量分析。
[0036] 2.3果蛹屯、功能分析
[0037] 2.3.1.果蛹人造缓冲液的配置
[003 引 母液：NaCl:6.31gA;KCl:0.37gA;CaC12:0.22gA;MgC12:0.76g/X;Hepes (pH7.1):3.57g/l;Na肥P04:0.084g/l;Na肥03:0.48g/l; 1M NaOH调节抑为7.1。
[0039] 糖溶液:薦糖:17. Ig/l;海藻糖:1.89g/L
[0040] 配制1M的薦糖