复上述常压煮沸和低温保温操作4次， 室温下边搅拌边依次加入天然抗氧化剂、角质酶和角蛋白酶，搅拌转速120r/min，均匀混 合，于功率400W，频率45KHz条件下进行超声波处理30min，同时在电场强度45kV/cm，脉冲时 间800ys，脉冲频率600Hz条件下进行高压脉冲电场处理，最后于0.4μπι微孔膜过滤，除去絮 凝物，滤液无菌灌装即得可防止各种蹄病的奶牛护蹄液。
[0080] 经上述方法制备的护蹄液保质期为48个月。
[0081 ] 实施例5
[0082] -种可防止各种蹄病的奶牛护蹄液，主要由以下重量份数的原料制备：
[0083]中草药提取液60份，芦荟提取物40份，植物提取物20份，改性膳食纤维6份，单宁6 份，水溶性壳聚糖6份，卡拉胶1份，葡萄籽原花青素1份，角蛋白酶0.5份，角质酶0.1份；
[0084]制备方法，包括如下步骤:按照配方，首先将中草药提取液、芦荟提取物和植物提 取物均匀混合，放入胶体磨中，调节定子和转子之间的间隙，使出口混合物粒径达到100μπι， 然后通过高压均质机于温度75°C，压力lOOMPa条件下循环4次，使得均质机出口物料粒径为 lOOnm，得到纳米粒子混合液;升温至75°C，保温，边搅拌边依次加入卡拉胶、单宁、水溶性壳 聚糖、改性膳食纤维，搅拌转速130r/min，充分溶解30min，停止搅拌，升温，常压煮沸5min， 自然降至室温，继续降温至_〇.5°C，保温lh，重复上述常压煮沸和低温保温操作4次，室温下 边搅拌边依次加入天然抗氧化剂、角质酶和角蛋白酶，搅拌转速l〇〇r/min，均勾混合，于功 率400W，频率35KHz条件下进行超声波处理30min，同时在电场强度35kV/cm，脉冲时间800μ s，脉冲频率400Hz条件下进行高压脉冲电场处理，最后于0.4μπι微孔膜过滤，除去絮凝物，滤 液无菌灌装即得可防止各种蹄病的奶牛护蹄液。
[0085]经上述方法制备的护蹄液保质期为45个月。
[0086] 实施例6
[0087] -种可防止各种蹄病的奶牛护蹄液，主要由以下重量份数的原料制备：
[0088]中草药提取液80份，芦荟提取物60份，植物提取物40份，改性膳食纤维12份，单宁 10份，水溶性壳聚糖10份，卡拉胶4份，甘草提取物4份，角蛋白酶1.5份，角质酶1份；
[0089] 制备方法，包括如下步骤:按照配方，首先将中草药提取液、芦荟提取物和植物提 取物均匀混合，放入胶体磨中，调节定子和转子之间的间隙，使出口混合物粒径达到200μπι， 然后通过高压均质机于温度55°C，压力120MPa条件下循环2次，使得均质机出口物料粒径为 150nm，得到纳米粒子混合液;升温至65°C，保温，边搅拌边依次加入卡拉胶、单宁、水溶性壳 聚糖、改性膳食纤维，搅拌转速150r/min，充分溶解20min，停止搅拌，升温，常压煮沸lOmin， 自然降至室温，继续降温至_1.5°C，保温3h，重复上述常压煮沸和低温保温操作2次，室温下 边搅拌边依次加入天然抗氧化剂、角质酶和角蛋白酶，搅拌转速120r/min，均匀混合，于功 率200W，频率45KHz条件下进行超声波处理lOmin,同时在电场强度45kV/cm，脉冲时间600μ s，脉冲频率600Hz条件下进行高压脉冲电场处理，最后于0.2μπι微孔膜过滤，除去絮凝物，滤 液无菌灌装即得可防止各种蹄病的奶牛护蹄液。
[0090] 经上述方法制备的护蹄液保质期为42个月。
[0091]实施例7本发明护蹄液储藏稳定性试验
[0092]护蹄液作为一种主要由中草药提取液制备的液体制剂，参照中药液体制剂的稳定 性标准，将澄明度确定为护蹄液的质量稳定性指标，它不仅直接反映了产品的外观质量，亦 反映了产品内在质量及稳定性，是护蹄液最重要质控指标。
[0093] 澄明度表征方法：澄清透明90-100分；微浊80-89分；浑浊70-79分；较混浊60-69 分;严重浑浊50-59分;沉淀49分以下(沉淀颗粒越大、数量越多，分数越低）。
[0094] 将本发明实施例2制备的护蹄液和市售同类型、同规格、同生产日期的护蹄液于室 温、通风、避光条件储藏，观察护蹄液澄明度，每6个月观察记录结果一次，结果见表1:
[0095] 表1:储藏期护蹄液澄明度检测结果
[0097]以上结果表明：本发明护蹄液和市售护蹄液相比外观质量较好，利于喷雾，不会发 生堵塞喷嘴、粘结喷雾器内壁等现象，随着时间的延长，护蹄液液相相对不稳定，按照护蹄 液的使用及药效标准，本发明护蹄液保质期可达42-52个月，比市售(24个月）延长18-28个 月，同时也说明本发明内在质量较好，药效安全、稳定。
[0098] 需要说明的是:本发明实施例3-6制备的护蹄液同样具有上述实验效果，各实施例 之间及与上述实验效果差异性不大。
[0099] 实施例8本发明护蹄液预防奶牛蹄病防疫试验
[0100] 1材料与方法
[0101] 1.1、试验材料
[0102] 1.1.1、本发明实施例2制备的护蹄液和市售护蹄液
[0103] 1.1.2、试验奶牛:试验在北京密云某一奶牛场进行，品种为中国荷斯坦奶牛2胎以 上围产期奶牛，共46头，均无蹄病，其中2胎16头，3胎12头，4胎10头，5胎8头。试验牛按胎次、 前期产奶量相同或相近的配对原则，分为实验组与对照组，每组23头。
[0104] 1.2、试验日粮组成：试验组和对照组采用同样的饲养管理方法。日粮组成为精料 (玉米52.7%、麸皮8%、豆柏7%、棉柏9%、花生柏9%、玉米0063 8%、预混料7115八6%)， 粗料为玉米青贮、羊草、豆穰、苜蓿等。
[0105] 1.3、试验方法:试验组和对照组分别喷雾防疫蹄病，试验组使用本发明实施例2制 备的护蹄液，对照组使用市售护蹄液，使用方法：1)将牛固定在颈夹;2)用清水冲洗蹄子，包 括趾间隙；3)将护蹄液与无菌水按体积比1:1配比，使其浓度为50% ;4)用喷雾器将护蹄液 喷于蹄背部、趾间隙、蹄底部;5)每周1次，连续喷雾3次为一个预防性防疫周期，每季度一个 防疫周期;6)试验期间观察、记录试验组和对照组奶牛各种蹄病发生情况，年底统计蹄病发 生率，结果如表2;所有供试奶牛饲喂场内自配的产奶精料4-8kg，根据饲养阶段和产奶量进 行调整，玉米青贮定量饲喂20kg/天，粗饲料(羊草、豆穰、苜蓿）自由采食。
[0106] 1 · 4、试验时间：试验期从2014年4月10日一2015年4月10日结束，历时一年。
[0107]表2:奶牛蹄病防疫结果
[0108]
[0109]以上结果表明：本发明护蹄液可有效防止奶牛各种体病的发生，尤其对腐蹄病、蹄 底溃疡、疣性皮炎及其它蹄病具有较好的防疫效果，与市售护蹄液相比，其蹄病发生率降低 34.78%。同时也说明本发明护蹄液具有较好的渗透性、粘结性、高效性。
[0110]需要说明的是:本发明实施例3-6制备的护蹄液同样具有上述实验效果，各实施例 之间及与上述实验效果差异性不大。
[0111]实施例9本发明护蹄液在治疗奶牛蹄病时的效果试验
[0112]为验证本发明护蹄液的临床疗效，于2014年6月-2015年10月在河北省和内蒙古自 治区的三个奶牛养殖场，共选择320例奶牛蹄病，其中疣性皮炎100例，趾间增生60例，蹄底 溃疡70例，腐蹄病50例，其它类型蹄病40例，按照蹄病类型随机分为两组:试验组和对照组， 经养殖场兽医和修蹄工分别使用本发明实施例2制备的护蹄液和市购护蹄液进行治疗，试 验组和对照组除用药(护蹄液)不同外，其它饲养和管理方式、日粮、治疗方法、饲喂环境、疗 效评定等均相同。
[0113]病例选择标准:有明显跛行症状，喜趴卧，站立困难或站立时间较短；患肢负重不 实或各肢蹄交替负重;触诊患肢蹄温升高，叩诊时疼痛敏感。病牛表现精神沉郁，食欲不振， 产奶量下降，有时体温升高，可达40°C以上。如病情加重，个别患病奶牛表现出一些全身症 状，重者患部红肿，卧地不起。
[0114] 护蹄液使用方法：1)将牛固定在颈夹;2)用清水冲洗蹄子，包括趾间隙；3)将护蹄 液与无菌水按体积比1:1配比，使其浓度为50% ;4)用喷雾器将护蹄液喷于蹄背部、趾间隙、 蹄底部的创伤处或病灶;5)每周2次，连续喷雾4次为一个治疗周期，康复后连续喷雾3次即 可。护蹄液前三次的使用浓度为50 %，之后每次的使用浓度为20 %。试验组和对照组各进行 一个治疗周期。
[0115] 疗效判定标准:于用药后第7天、14天观察病牛症状，根据判定标准确定疗效。患牛 跛行消失，疼痛消失，肿胀消退，创面愈合为治愈;疼痛明显减轻，肿胀范围缩小，跛行减轻 或不明显为有效;疼痛不消失，肿胀无消退，跛行无消退，有运动障碍的为无效。总有效头数 等于痊愈和有效的头数总和。
[0116] 对治疗的结果进行统计和分析，具体如表3、4所示：
[0117] 表3:用药7天治疗结果
[0118]
[0120]表4:用药14天治疗结果
[0121]
[0122] 以上结果表明：本发明护蹄液可快速、有效治疗各种奶牛蹄病，对牛蹄病具有抑菌 抗感染、解毒收敛、去腐生肌和促进伤口愈合的作用，与市购护蹄液相比渗透性强、药效高、 粘结性强。在用药7天时，其治愈率已达65.7-80%、总有效率达88.6-94% ;分别比对照组 (13.3-16%)高49.7-66.7%和（55-80%)和8.6-39% ;在用药14天时，其治愈率已达90-96%、总有效率达 93 · 3-100% ;分别比对照组(60-76%)高14-36% 和（70-86% )7.3-30 %; 达到同样的治疗效率，治疗时间至少缩短7天，特别是对疣性皮炎、腐蹄病和其它类型的蹄 病治疗效果最好，同时说明，治疗过程在不使用抗生素类药物辅助治疗时，本发明护蹄液治 疗时间短、效率高，不仅降低了奶牛养殖成本、增加了养殖经济效益，而且提高了奶牛深加 工产品的食品安全性，同时还保护了养殖环境，杜绝了因使用抗生素、化学及有毒物质产生 的安全隐患，为应用护蹄液治疗奶牛蹄病开辟了一条新的绿色捷径。
[0123] 需要说明的是:本发明实施例3-6制备的护蹄液同样具有上述实验效果，各实施例 之间及与上述实验效果差异性不大。
[0124] 实施例10本发明护蹄液对奶牛生产性能、繁殖性能和防疾病的影响
[0125] 1材料与方法
[0126] 1.1、试验材料
[0127] 1.1.1、本发明产品
[0128] 1.1.2、试验奶牛:实施例9实验组和对照组经治疗蹄病的奶牛。
[0129] 1.2、试验日粮组成：试验组和对照组采用同样的饲养管理方法。日粮组成为精料 (玉米52.7%、麸皮8%、豆柏7%、棉柏9%、花生柏9%、玉米0063 8%、预混料7115八6%)， 粗料为玉米青贮、羊草、豆穰、苜蓿等。
[0130] 1.3、试验方法:根据奶牛配种记录，试验组除与对照组采取同样的方法饲喂，所有 供试奶牛饲喂场内自配的产奶精料4_8kg，根据饲养阶段和产奶量进行调整，玉米青贮定量 饲喂20kg/天，粗饲料(羊草、豆穰、苜蓿）自由采食。
[0131] 1.4、生产、代谢、繁殖性能记录:在产后120天期间内测定和记录每头奶牛的产奶 量;观察、评价奶牛体况;检测繁殖性能;在产后120天期间内观察记录参试奶牛的发情配种 情况，妊娠与否以配种后60天直肠检查为准。
[0132] 1.5、疾病监测与记录:对奶牛发病情况(乳房炎、子宫内膜炎、酮病、瘤胃变位、顽 固性厌食症、产褥热和胎衣不下等疾病