盐酸氨溴索联合氟康唑的抗真菌产品及其应用
【技术领域】
[0001] 本发明设及医药技术领域，具体设及盐酸氨漠索联合氣康挫的抗真菌产品及其应 用。
【背景技术】
[0002] 近年来，随着获得性免疫缺陷综合征(AIDS)患者的增多W及广谱抗菌药物的广泛 应用，器官移植技术和导管技术等医疗技术的开展，侵袭性真菌感染的发病率和病死率逐 年上升，特别是曲霉属和念珠菌属引起的感染，患者的生存率分别不足30%和70%。念珠菌 感染对临床的威胁虽然没有曲霉菌感染所造成的威胁大，但由于运类真菌容易出现药物外 排增强与基因祀位改变(如ERG11)等，使得对挫类抗真菌药物敏感的念珠菌不断出现耐药 性，运给临床抗真菌感染带来极大的挑战。数据表明，AIDS患者晚期感染真菌后，超过=分 之一耐药，对挫类药物耐药率更是高达65 %。其中念珠菌尤其是白色念珠菌（Candida a化icans，CA)，是呼吸系统、血流感染、消化系统、泌尿系统真菌感染的常见分离菌。根据美 国院内感染控制组织的资料显示，CA是第4位引起院内血流感染的病原微生物，是死亡率最 高的致病菌，死亡率可高达40% dCA血流感染的高死亡率也与其耐药现象的不断出现有关。 新药研究与联合用药研究均是解决真菌耐药的途径。由于联合用药前期投入少、效果显著， 受到国内外研究者的广泛关注。联合用药研究包括两种抗真菌药联合及非抗真菌药与抗真 菌药联合，由于目前临床可用的抗真菌药物品种有限，且大多价格昂贵、毒副作用明显，使 得非抗真菌药物与抗真菌药物的联合应用研究备受关注。近年来挫类药物，尤其是氣康挫， 的广泛应用虽然取得了良好的临床效果，但随之而来的耐药株的出现使临床治疗变得棘 手，运使得克服白色念珠菌对氣康挫的耐药问题成为研究热点。
[0003] 盐酸氨漠索(Ambroxol hy化ochloride，ABH)是一种治疗呼吸系统疾病的安全、有 效药物，在常见呼吸道疾病的化疲、排疲治疗中应用广泛。近年来有临床用药报道发现，盐 酸氨漠索可与抗生素发挥协同抗细菌作用，可缩短呼吸系统感染的治疗时间，降低并发症 发生率和病死率，适用年龄宽广，可广泛用于各种急慢性肺部疾病、呼吸窘迫综合征，具有 降低疲液黏度、改善患者排疲功能及肺功能的作用，疗效确切，患者通常能很好耐受。目前， ABH在临床上有与抗真菌药物联合应用的机会(孙红爽，包春城，马红芳，陈赫军，种宝贵.1 例老年肺部细菌合并真菌感染患者的药学监护[J]. 2015,12(3) :182-185.),另外，临床治 疗中发现氨漠索注射液与抗菌药物合用可使抗菌药物在肺组织的分布浓度升高，增强抗菌 药物的作用(王永莉，曹永宁.氨漠索注射液治疗小儿支原体肺炎56例[J].中国药业，2014， 23(19) :97-98.)。对于A册和化C的联用抗白色念珠菌的作用研究，目前尚无研究报道，具有 广阔的研究前景。
【发明内容】
[0004] 本发明的目的是为了克服目前真菌耐药问题，提供一种盐酸氨漠索联合氣康挫的 抗真菌产品及其应用。
[0005] 为了实现上述目的，本发明采用如下技术方案：
[0006] -种盐酸氨漠索联合氣康挫在制备抗真菌产品中的应用。
[0007] 优选:所述产品为药物。
[000引优选:所述真菌为白色念珠菌。
[0009] 优选:所述盐酸氨漠索与氣康挫联合应用时的有效浓度配比:氣康挫:盐酸氨漠索 = 1:64。
[0010] 所述应用时盐酸氨漠索的最低抑菌浓度为:12祉g/mL。
[0011] 所述应用时氣康挫的最低抑菌浓度为:2iig/mL。
[0012] -种抗真菌产品，W盐酸氨漠索和氣康挫为主要活性成分。
[0013] 优选:所述盐酸氨漠索与氣康挫的有效浓度配比为氣康挫:盐酸氨漠索= 1:64。
[0014] 所述盐酸氨漠索的最低浓度为:12祉g/mL。
[0015] 所述氣康挫的最低浓度为:2iig/mL结果表明，大于12祉g/血的盐酸氨漠索与大于2 yg/mL的氣康挫联合应用具有协同抗耐药白色念珠菌作用。
[0016] -种抗真菌的制剂，由盐酸氨漠索和氣康挫W及药学上可接受的辅料组成。在本 发明提供的制剂中，药学上可接受的辅料为药物制剂中的常规辅料，为本领域技术人员认 为可行的常规辅料均在本发明的保护范围之内，本发明在此不做限定。
[0017] 本发明发现，ABH在体外可与抗真菌药物发挥联合抗真菌作用，由此可见，两者协 同抗真菌作用并不仅仅局限于ABH使抗菌药物在肺组织的分布浓度升高运一作用机制。
[0018] 本发明采用耐药白色念珠菌细胞进行研究，利用棋盘肉汤微量稀释法，分别评价 不同联合用药组合的联合抗真菌作用。具体内容如下：
[0019] A:ABH与化C联合抗耐药CA作用:采用棋盘肉汤微量稀释法测定联合用药时最低有 效浓度，WFICI法选择最佳药物组合浓度及评价药物联合用药的作用。此外，为更直观地表 现联合用药对耐药CA作用的程度，将联合药敏测定数据用生长百分数差值模型（AE)进行 了进一步分析。
[0020] B:ABH在临床使用中用量大、安全、有效，如果能在抗真菌方面发挥作用，特别是对 耐药真菌感染的治疗，意义重大。本研究表明，ABH联合应用化C可产生协同抗耐药CA作用， 可扩大其应用范围，具有良好的应用前景。
[0021] 总之，本发明包含ABH与化C联合应用产生协同抗耐药CA的作用。上述发现为临床 联合用药作为治疗耐药真菌感染的方案提供了思路。
[0022] 盐酸氨漠索除了单用具有抗白色念珠菌浮游细胞及生物膜的活性外，发明人在研 究中还偶然发现它能与氣康挫联用产生明显的协同抗真菌作用。ABH与化邱关合应用在体外 具有协同抗耐药CA作用，且效果明显。低剂量的ABH可使FLC对耐药CA的MIC值从512iig/mL W 上降至aig/mL。
[0023] 本发明与现有技术相比，具有W下优点与效果：
[0024] 1.本发明表明，ABH与FLC联合应用时，可W增强FLC对耐药CA的抗菌活性，可W产 生协同抗真菌作用，并能够逆转耐药CA对S挫类抗真菌药物的耐药性，为新药的开发及老 药新用提供了研究方向。对化C耐药的CA,联合用药可使其最低抑菌浓度明显降低，12祉g/ mL的ABH与化g/mL的化C合用可W杀灭80% W上的真菌，浓度再增大，效果更强。
[0025] 2.ABH在临床上应用量大、安全，其对化讨亢真菌的增效作用，可扩大其应用范围， 并且降低化C的最低有效抑菌浓度，降低抗真菌药物的用药量，从而降低药物的不良反应的 发生，克服临床上真菌耐药问题。
[0026] 3.真菌耐药机制及其复杂，尚有许多机制仍不是很清楚，如能将ABH对氣康挫的抗 真菌增敏机制研究透彻，必定能为克服真菌耐药问题提供新的思路。
【附图说明】
[0027] 图1.盐酸氨漠索与氣康挫联用对抗耐药白色念珠菌CAlO作用结果；
[00%]图2.盐酸氨漠索与氣康挫联用对抗耐药白色念珠菌CA16作用结果；
[0029] 其中：X轴代表氣康挫的浓度，Y轴代表盐酸氨漠索的浓度，Z轴代表的是各个药物 组合下的AE值，高于或低于平面（AE = O)的值分别表示协同或括抗作用，平面周围的值表 示无关作用，图右侧的色彩编码条中，越靠近上端说明协同作用越强。
【具体实施方式】
[0030] 下面结合附图与实施例对本发明作进一步说明。
[0031 ]实施例盐酸氨漠索与氣康挫联合抗真菌作用测定 [003^ 1.材料
[0033] 1.1药品与试剂
[0034] 氣康挫(Fluconazole，FLC)，大连美仑生物技术有限公司；
[00巧]盐酸氨漠索(Ambroxol hy化ochlo;ride，ABH)，大连美仑生物技术有限公司；
[0036] 科玛嘉念珠菌显色培养基，郑州博赛生物工程有限公司；
[0037] TTC-沙保罗培养基，青岛高科技园海博生物技术有限公司；
[0038] 酵母膏，北京奥博星生物技术有限责任公司；
[0039] 蛋白腺，北京奥博星生物技术有限责任公司；
[0040] 葡萄糖，国药集团化学试剂有限公司；
[0041] 琼脂粉，北京鼎国昌盛生物技术有限责任公司；
[0042] PB誦溝酸盐缓冲剂，北京鼎国昌盛生物技术有限责任公司；
[0043] 氨氧化钢，国营山东单县有机化工厂，批号940420;
[0044] 憐酸二氨钟，上海新宝精细化工厂，批号200602132。
[0045] RPMI 1640原料药粉，美国GIBCO公司；
[0046] 3-(N-吗嘟代)丙横酸(MOPS),北京鼎国昌盛生物技术有限责任公司；
[0047] 甲糞酿(Menadione )，美国 Sigma 公司；
[004引XTT(二甲氧挫黄），南京旋光科技有限公司；
[0049]乳酸林格氏液(复方氯化钢溶液），山东鲁抗辰欣药业有限公司；
[(K)加]丙酬，上海振兴化工一厂，批号200209510;
[0051 ] XTT-甲糞酿溶液的配制：取XlT粉末0.0500g，溶解于IOOmL已高压灭菌的林格氏液 配成0.5mg/mL的溶液，用0.22皿滤膜滤过灭;加入10化的lOmmol/L的甲糞酿丙酬溶液(取甲 糞酿0.0860g溶解于5mL丙酬），使其终浓度为1皿ol/L，摇匀，4°C避光保存。
[0052]药物溶液:氣康挫用无菌蒸馈水溶解，配成2560iig/mL的储备液，过滤分装;盐酸氨 漠索用无菌蒸馈水溶解，配成5120yg/mL的储备液，过滤分装。所有药液于-20°C冰箱保存， 备用。
[0053] PBS缓冲液：称取12gPBS憐酸盐缓冲剂至IL容量瓶，加入蒸馈水揽拌使其完全溶 解，再加蒸溜水至