猴耳环提取物在制备抗产超广谱β-内酰胺酶肺炎克雷伯菌药物中的应用
【专利摘要】本发明公开了猴耳环提取物在制备抗产超广谱β?内酰胺酶肺炎克雷伯菌药物中的应用。经实验证明，所述猴耳环提取物对产ESBL肺炎克雷伯菌具有较强的抗菌和杀菌作用。可作为天然的抗菌药物，应用于产ESBL肺炎克雷伯菌引起的疾病治疗。
【专利说明】
猴耳环提取物在制备抗产超广谱e-内醜胺酶肺炎克雷伯菌药 物中的应用
技术领域
[0001] 本发明设及猴耳环提取物的新用途，特别是其在制备抗耐药菌药物中的应用。
【背景技术】
[0002] 21世纪是多重耐药菌的时代，抗生素临床应用60年后，越来越多的院内感染和多 重耐药菌感染成为目前临床抗菌治疗的一大难题，1961年Jerons报告第1例临床耐甲氧西 林金黄色葡萄球菌(MRSA)感染患者，目前MRSA感染已逐渐遍及全球;2011年中国细菌耐药 性监测临床中主要耐药菌的分布，大肠杆菌、肺炎克雷伯菌产超广谱β-内酷胺酶化SBL)株 分别平均为50.7%、38.5%，其耐药性的变迁和现状备受关注。另外据我国卫生部耐药监测 协作组2010年度报告，鲍曼不动杆菌和铜绿假单胞菌在医院ICU分离的病原菌中居首位，鲍 曼不动杆菌对亚胺培南和美罗培南的耐药率分别高达60.4%和61.4%。综上所述，在MRSA、 产ES化的各类细菌、多重耐药的鲍曼不动杆菌和铜绿假单胞菌的临床占有率逐年攀升，耐 药率不断攀高的压力下，抗生素治疗面临着巨大的挑战。为避免细菌耐药现象的进一步恶 化，专家学者力图发现新的抑制细菌生长W及治疗细菌引起疾病的新方法。已有研究报道 证明中国传统中药如黄连、黄琴和连翅等对不同耐药细菌有一定的抑制效果，进一步研究 中药抑制耐药菌生长的重点在于发现新的抑菌能力更强、耐药抑菌谱更广的中药。
[0003] 猴耳环(Pithecellobium clypearia Benth)，学名围诞树，是含羞草科猴耳环属 植物猴耳环的干燥幼枝和叶，其性味苦涩寒，功效清热解毒、收湿敛疮，是治疗多种热毒症 候独特的南方药材。
[0004] 目前有文献公开猴耳环W及其提取物具有抗病毒作用。中国专利CN103385912A公 开了猴耳环的提取物具有抗MRSA作用及抗生素增敏作用，但该专利未提及该猴耳环提取物 对抗产超广谱β-内酷胺酶肺炎克雷伯菌(简称"产ES化肺炎克雷伯菌的抗菌"）的作用。
【发明内容】
[0005] 本发明公开了猴耳环提取物在制备抗产ES化肺炎克雷伯菌药物中的应用。包括人 用药物和其他动物用药物。
[0006] 所述的猴耳环提取物可W是猴耳环水提取物或猴耳环乙醇提取物。
[0007] 所述的猴耳环水提取物水或猴耳环乙醇提取物可W由W下方法制备:猴耳环粗粉 用水或乙醇水溶液提取，所得的提取液再用乙酸乙醋萃取，所得的萃取物即为目标产品。 [000引所述的乙醇水溶液是按体积比计浓度为10 % -95 %的乙醇水溶液。
[0009] 所述的乙醇水溶液是按体积比计浓度为60 %的乙醇水溶液。
[0010] 本发明的有益效果在于:本发明首次公开了猴耳环提取物对产ES化肺炎克雷伯菌 的抗菌作用，经本实验证明，所述猴耳环提取物对产ES化肺炎克雷伯菌具有较强的抗菌和 杀菌作用。可作为天然的抗菌药物，应用于产ES化肺炎克雷伯菌引起的疾病治疗。
【具体实施方式】
[0011] 为实现上述目的，本发明通过下列实施方案对猴耳环水或乙醇提取物的抗产ES化 肺炎克雷伯菌的药理作用进行筛选。
[0012] W微量肉汤稀释法测定猴耳环提取物对产ES化肺炎克雷伯菌的最低抑菌浓度 (MIC)和最低杀菌浓度(MBC)。
[0013] 菌株：产ES化肺炎克雷伯菌化PN，编号Κ1-Κ20)20株；大肠杆菌质控菌株化C0， ATCC25922)均由中山大学附属第一医院检验医学部临床微生物检验室提供，经中山大学附 属第一医院临床微生物检验室检测确认其耐药性。
[0014] ΜΗ肉汤培养基:ΜΗ肉汤干粉（英国0X0ID LTD.)2.1g，定容至100ml，NA0H调节抑至 7.0，高压灭菌，置4 °C冰箱备用。
[0015] 方法:参照美国国立临床试验标准化委员会(N(XLS)推荐的微量肉汤稀释法操作。
[0016] W下通过具体的实施例进一步说明本发明的技术方案。
[0017]实施例1
[0018] 猴耳环提取物的制备方法
[0019] 猴耳环(Pithecellobium clypearia Benth)由广州市花城制药厂提供。取适量猴 耳环药材打成粗粉，用水或乙醇回流2次，每次2小时，过滤;合并滤液，浓缩得浸膏（水或乙 醇提取物）。取浸膏用水混悬后，用乙酸乙醋萃取，每种溶剂萃取Ξ次，合并乙酸乙醋萃取 液，浓缩得乙酸乙醋萃取物。
[0020] 所述的乙醇提取物可由10-95 %乙醇回流制得。
[0021] 实施例2
[0022] 猴耳环水或乙醇提取物的乙酸乙醋萃取物抗产ES化肺炎克雷伯菌的抑菌杀菌试 验。
[0023] 1.实验方法
[0024] 1)最低抑菌浓度(MIC)的测定：
[0025] 将猴耳环水或乙醇提取物的乙酸乙醋萃取物在MH肉汤培养基中进行一系列倍比 稀释，每孔50μ1，调节接种菌为1.0 X 106C即/ml，每孔50μ1菌液。35 °C培养;24小时，无沉淀 出现的最低抗菌药物的浓度为其最低抑菌浓度(MIC)。
[0026] 2)最低杀菌浓度(MBC)的测定：
[0027] 采用平板涂布计数法，从1)项无菌生长的孔中吸取50ul菌悬液至血平板上，均匀 涂布，35Γ培养24小时，菌落计数，使最初的实验活菌数减少99.9%或W上所需要的最低抗 菌药物的浓度为其最低杀菌浓度(MBC)。
[0028] 通过测定药物的最低抑菌浓度(MIC)和最低杀菌浓度(MBC)，并对数据进行统计得 出MI巧0、MIC90、MB巧0、MBC90，来评价药物抗产ES化肺炎克雷伯菌的作用。
[0029] 2.实验结果
[0030] 猴耳环水提取物的乙酸乙醋萃取物对产ES化肺炎克雷伯菌的体外抑菌杀菌试验 结果见表1。经过统计分析，猴耳环水提取物的乙酸乙醋萃取物对产ES化S肺炎克雷伯菌的 体外抑菌和杀菌的MIC50、MIC90、MBC50、MBC90见表2、表3。
[0031] 猴耳环10%乙醇提取物的乙酸乙醋萃取物对产ES化肺炎克雷伯菌的体外抑菌杀 菌试验结果见表4。经过统计分析，猴耳环10%乙醇提取物的乙酸乙醋萃取物对产ES化s肺 炎克雷伯菌的体外抑菌和杀菌的]\〇(：50、]\0〔90、]\^(：50、]\^〔90见表5、表6。
[0032] 猴耳环60%乙醇提取物的乙酸乙醋萃取物对产ES化肺炎克雷伯菌的体外抑菌杀 菌试验结果见表7。经过统计分析，猴耳环60%乙醇提取物的乙酸乙醋萃取物对产ES化S肺 炎克雷伯菌的体外抑菌和杀菌的]\〇(：50、]\0〔90、]\^(：50、]\^〔90见表8、表9。
[0033] 猴耳环95%乙醇提取物的乙酸乙醋萃取物对产ES化肺炎克雷伯菌的体外抑菌杀 菌试验结果见表10。经过统计分析，猴耳环95%乙醇提取物的乙酸乙醋萃取物对产ES化S肺 炎克雷伯菌的体外抑菌和杀菌的MI巧0、MIC90、MB巧(KMBC90见表11、表12。
[0034] 表 1
[0035] 猴耳环水提取物对产ES化肺炎克雷伯菌的体外抑菌杀菌试验结果
[0036]
[0037] 表 2
[0038] 猴耳环水提取物对产ES化肺炎克雷伯菌的体外抑菌的MI巧(KMIC90 [00391
[0040]表 3
[0041 ] 猴耳环水提取物对产ES化肺炎克雷伯菌的体外抑菌的MB巧(KMBC90
[0042]
[0047]表 5
[004引猴耳环10%乙醇提取物对产ES化肺炎克雷伯菌的体外抑菌的MI巧(KMIC90 [0049]
[(K)加 ]表6
[0化1 ] 猴耳环10 %乙醇提取物对产ES化肺炎克雷伯菌的体外抑菌的MB巧(KMBC90
[0化2]
[0053] 表 7
[0054] 猴耳环60%乙醇提取物对产ES化肺炎克雷伯菌的体外抑菌杀菌试验结果
[0化7] 表8
[0化引猴耳环60%乙醇提取物对产65化肺炎克雷伯菌的体外抑菌的^巧0、1此90 [0化9]
[0060]表 9
[0061 ] 猴耳环60 %乙醇提取物对产ES化肺炎克雷伯菌的体外抑菌的MB巧(KMBC90
[0062]
[0063] 表 10
[0064] 猴耳环95%乙醇提取物对产ES化肺炎克雷伯菌的体外抑菌杀菌试验结果
[00 化]
[0066] 表11
[0067] 猴耳环95 %乙醇提取物对产ES化肺炎克雷伯菌的体外抑菌的MI巧(KMIC90 [006引
[0069] 表12
[0070] 猴耳环95 %乙醇提取物对产ES化肺炎克雷伯菌的体外抑菌的MB巧(KMBC90
[0071]
[0072] 猴耳环水提取物的乙酸乙醋萃取物单用对产ES化肺炎克雷伯菌的ΜΚ50 = 1600μ g/ml，MIC90 = 1600μg/ml，MBC50及MBC90均大于 1600μg/ml。
[0073] 猴耳环10%乙醇提取物的乙酸乙醋萃取物单用对产ES化肺炎克雷伯菌的MI巧0 = 1600μg/ml，MIC90 = 1600μg/ml，MBC50及MBC90均大于 1600μg/ml。
[0074] 猴耳环60%乙醇提取物的乙酸乙醋萃取物单用对产ES化肺炎克雷伯菌的MI巧0 = 800μg/ml，MIC90 = 1600μg/ml，MBC50及MBC90均大于 1600μg/ml。
[0075] 猴耳环95%乙醇提取物的乙酸乙醋萃取物单用对产ES化肺炎克雷伯菌的MI巧0 = 1600μg/ml，MIC90 = 1600μg/ml，MBC50及MBC90均大于 1600μg/ml。
【主权项】
1. 猴耳环提取物在制备抗产超广谱β-内酰胺酶肺炎克雷伯菌药物中的应用。2. 如权利要求1所述的应用，其特征在于，所述的猴耳环提取物是猴耳环水提取物或猴 耳环乙醇提取物。3. 如权利要求2所述的应用，其特征在于，所述的猴耳环水提取物水或猴耳环乙醇提取 物由以下方法制备:猴耳环粗粉用水或乙醇水溶液提取，所得的提取液再用乙酸乙酯萃取， 所得的萃取物即为目标产品。4. 如权利要求3所述的应用，其特征在于，所述的乙醇水溶液是按体积比计浓度为 10%-95%的乙醇水溶液。5. 如权利要求4所述的应用，其特征在于，所述的乙醇水溶液是按体积比计浓度为60 % 的乙醇水溶液。
【文档编号】A61K36/48GK105920082SQ201610308207
【公开日】2016年9月7日
【申请日】2016年5月10日
【发明人】苏薇薇, 周倩, 刘翀, 李沛波, 彭维, 王永刚
【申请人】中山大学