专利名称：猴耳环hplc指纹图谱的构建方法及其标准指纹图谱的制作方法
技术领域：
本发明涉及猴耳环(Pithecellobium clypearia Benth.)HPLC指纹图谱的构建方法，以及由此方法得到的猴耳环标准指纹图谱。
背景技术：
中药色谱指纹图谱是指某种药材经过适当的处理后，采用一定的分析手段，得到的能够标志该药材特征的色谱图。指纹图谱能较好地反映中药的内在质量，是现阶段中药质量监控的有效手段。
猴耳环为含羞草科猴耳环属植物猴耳环Pithecellobium clypearia Benth.的幼枝，具有清热解毒、凉血消肿、收敛止泻的功效，可用于治疗上呼吸道感染、急性胃肠炎、急性咽喉炎、急性扁桃体炎，亦可用于细菌性痢疾。但目前尚无猴耳环药材的质量标准，因此建立猴耳环药材的质量控制方法很有必要。本发明用HPLC法构建了猴耳环的指纹图谱，利用HPLC指纹图谱可全面监控猴耳环的质量。
发明内容
本发明的目的是提供猴耳环Pithecellobium clypearia Benth.指纹图谱的构建方法，以及由此方法得到的猴耳环标准指纹图谱。
本发明的猴耳环HPLC指纹图谱的构建方法，包括如下步骤(1)供试品溶液的制备精密称取猴耳环药材粉末0.1g～5.0g，水浴回流提取1～3次，每次加水5～15倍量，每次水浴回流10min～60min，滤过，合并滤液，置旋转蒸发仪上浓缩至10ml～40ml，使用乙酸乙酯萃取1～6次，每次乙酸乙酯用量为10ml～30ml，合并乙酸乙酯层，置旋转蒸发仪上蒸去溶剂，残留物用10％～70％乙腈定容至10ml容量瓶中，用微孔滤膜(0.45μm)滤过，滤液作为供试品溶液。
(2)HPLC分析精密吸取供试品溶液20μl进样，色谱条件如下色谱柱为MerckLichrospher 100RP-18e(5μm，250×4.0mm)；流动相A为0.05mol/ml磷酸二氢钾溶液，B为乙腈；梯度洗脱0min→100min，A泵(％)95→75，B泵(％)5→25；流速1.2ml/ml；柱温28℃；DAD检测波长210nm；得到猴耳环HPLC指纹图谱。
按照上述本发明的方法，通过对22批猴耳环样品构建HPLC指纹图谱并进行分析比较，找出其共有特征峰(共16个峰)，得到猴耳环的标准指纹图谱。16个共有峰的保留时间(tR)分别为4.8min、9.9min、18.4min、20.1min、36.4min、41.6min、48.2min、50.6min、55.2min、57.3min、60.5min、67.2min、67.9min、70.7min、87.8min、90.9min。它们构成了猴耳环的指纹特征。
本发明具有如下优点和用途通过指纹图谱中共有峰的有无，能有效地监控猴耳环的质量，保证其质量的稳定、均一、可控。
下面结合实施例和附图对本发明做进一步的说明。
图1是本发明的猴耳环标准指纹图谱。图中标示了16个共有峰的峰号和保留时间(tR)。
具体实施例方式
本发明的优选实施例如下1仪器、样品、试药1.1仪器DIONEX高效液相色谱仪；色谱柱Merck Lichrospher 100RP-18e(5μm，250×4.0mm)。
1.2样品22批猴耳环样品，经鉴定均为含羞草科猴耳环属植物猴耳环Pithecellobiumclypearia Benth.的幼枝。
1.3试药液相色谱分析用试剂为色谱纯，其余试剂均为分析纯，水为超纯水。
2方法与结果2.1供试品溶液的制备精密称取猴耳环药材粉末0.3g，水浴回流提取2次，每次加水7倍量，每次水浴回流20min，滤过，合并两次滤液，置旋转蒸发仪上浓缩至约15ml，使用乙酸乙酯萃取4次，每次乙酸乙酯用量为20ml，合并乙酸乙酯层，置旋转蒸发仪上蒸去溶剂，残留物用30％乙腈定容至10ml容量瓶中，用微孔滤膜(0.45μm)滤过，滤液作为供试品溶液。
2.2HPLC分析精密吸取供试品溶液20μl进样，色谱条件如下色谱柱MerckLichrospher 100 RP-18e(5μm，250×4.0mm)；流动相A为0.05mol/ml磷酸二氢钾溶液，B为乙腈；梯度洗脱0min～100min，A泵(％)95～75，B泵(％)5～25；流速1.2ml/ml；柱温28℃；DAD检测波长210nm；得到猴耳环HPLC指纹图谱。
2.3共有峰的确定将上述得到的22批猴耳环样品HPLC指纹图谱进行分析比较，找出其共有特征峰(共16个峰)，得到猴耳环的标准指纹图谱。16个共有峰的保留时间(tR)分别为4.8min、9.9min、18.4min、20.1min、36.4min、41.6min、48.2min、50.6min、55.2min、57.3min、60.5min、67.2min、67.9min、70.7min、87.8min、90.9min。它们构成了猴耳环的指纹特征。
权利要求
1.一种猴耳环HPLC指纹图谱的构建方法，包括以下步骤(1)供试品溶液的制备精密称取猴耳环药材粉末0.1g～5.0g，水浴回流提取1～3次，每次加水5～15倍量，每次水浴回流10min～60min，滤过，合并滤液，置旋转蒸发仪上浓缩至10ml～40ml，使用乙酸乙酯萃取1～6次，每次乙酸乙酯用量为10ml～30ml，合并乙酸乙酯层，置旋转蒸发仪上蒸去溶剂，残留物用10％～70％乙腈定容至10ml容量瓶中，用微孔滤膜(0.45μm)滤过，滤液作为供试品溶液；(2)HPLC分析精密吸取供试品溶液20μl进样，色谱条件如下色谱柱为MerckLichrospher 100 RP-18e(5μm，250×4.0mm)；流动相A为0.05mol/ml磷酸二氢钾溶液，B为乙腈；梯度洗脱0min→100min，A泵(％)95→75，B泵(％)5→25；流速1.2ml/ml；柱温28℃；DAD检测波长210nm；得到猴耳环HPLC指纹图谱；(3)测定22批猴耳环药材的HPLC指纹图谱并进行比较，得到由其共有特征峰构成的猴耳环药材HPLC标准指纹图谱，该指纹图谱具有的16个共有特征峰的保留时间(tR)分别为4.8min、9.9min、18.4min、20.1min、36.4min、41.6min、48.2min、50.6min、55.2min、57.3min、60.5min、67.2min、67.9min、70.7min、87.8min、90.9min。
全文摘要
本发明涉及猴耳环(Pithecellobium clypeariaBenth.)HPLC指纹图谱的构建方法及其标准指纹图谱。首先，取猴耳环药材粉末，加水回流提取，提取液浓缩后用乙酸乙酯萃取，减压蒸去溶剂，残留物用乙腈定容作为供试品溶液。然后进行HPLC分析精密吸取供试品溶液进样，色谱柱为Merck Lichrospher 100 RP－18e(5μm，250×4.0mm)；流动相A为0.05mol/ml磷酸二氢钾溶液，B为乙腈；梯度洗脱0min→100min，A(％)95→75，B(％)5→25；检测波长210nm；得到猴耳环HPLC指纹图谱。通过对22批猴耳环药材HPLC指纹图谱进行比较，确定其共有指纹特征，得到猴耳环的标准指纹图谱。利用HPLC指纹特征可有效地监控猴耳环的质量，保证其质量的稳定、均一、可控。
文档编号G01N30/60GK1945311SQ20061012292
公开日2007年4月11日 申请日期2006年10月20日 优先权日2006年10月20日
发明者苏薇薇, 田珩, 王小锐, 王永刚, 彭维, 李沛波, 吴忠 申请人:中山大学