柴胡在制备抑制IL-6、G-CSF、或IL1-β以治疗或减缓克罗恩病之药物的用图
【专利摘要】一种治疗或减缓发炎性肠病(IBD)的医药组合物，包括柴胡(Bupleurum)作为有效成分。
【专利说明】柴胡在制备抑制丨L-6、G-CSF、或IL1 -β以治疗或减缓克罗恩病 之药物的用途
[00011 本申请是申请日为2010年12月29日，申请号为201010612036.7,发明名称为"治疗 或减缓发炎性肠病的医药组合物"的分案申请。
技术领域
[0002]本发明关于一种治疗或减缓发炎性肠病（IBD)的医药组合物，特别是关于以柴胡 (Bupleurum)作为有效成分治疗或减缓发炎性肠病（IBD)的医药组合物。
【背景技术】
[0003] 目前医界对于发炎性肠病（inflammatory bowel disease;IBD)的治疗药物可分 为四大类：（1)免疫抑制剂，例如azathioprine、cyclosporine、类固醇等；（2)疾病治疗药 物，例如sulfsalazine及5-氨基水杨酸（5-aminosalicylic acid;5-ASA); (3)生物制剂 (biological agent)，以抑制体内特异性的发炎反应物质而达到治疗效果，例如 infliximab及remicade;及(4)抗腹泻用药。然而，这些药物对于发炎性肠病的治疗效果皆 不优良，而且有产生其他副作用的风险。
[0004] 目前亦有抑制肿瘤坏死因子(TNF-α)的新一代类风湿性关节炎药物，用于治疗发 炎性肠病，例如etanercept、adalimumab等。新一代的类风湿性关节炎药物虽具有药效快、 疗效显著、免疫耐受性佳的优点，但是价格昂贵、需要静脉注射、可能引起免疫反应、及有效 病人的比例低等的因素，在临床使用上受相当限制。
[0005] 本发明人基于上述课题，从常用的中草药中，积极寻求副作用小、可治疗或减缓发 炎性肠病的药物。
[0006] 柴胡(Bupleurum)自古即列为「神农本草经」上品药用植物，为「伤寒论」少阳病之 主药，能解热、镇痛、解毒、消炎，主治胸胁苦满、口苦咽干、往来寒热、黄疸、与肝炎等。已知 柴胡的利用主要在根部，可分离出含有阜苷（saikosaponin)、龙吉戒元 (Iongispinogenin)、固醇、脂肪油、类黄醇及糖类，其中以阜苷为主要成份。
[0007] 柴胡目前是肝炎治疗生药中积极开发的对象，然而，尚未有柴胡应用于治疗发炎 性肠病的研究或文献问世。本发明人等研究特定的柴胡萃取方式，进一步确认柴胡萃取物 与发炎性肠病的关系，研发出新颖治疗或减缓发炎性肠病的医药组合物及方法。
【发明内容】
[0008] 本发明提供一种治疗或减缓发炎性肠病（IBD)的医药组合物，包括一柴胡 (Bupleurum)作为有效成分。
[0009] 本发明还提供柴胡在制备治疗或减缓发炎性肠病之药物的用途。
【附图说明】
[0010] 图1显示小鼠肠浸出液中TNF-α的含量，（A)显示以不含TNBS的50 %乙醇水溶液注 射小鼠大肠的控制组；（B)显示以TNBS诱发小鼠肠炎的载体处理组；（C)显示经诱发为肠炎 的小鼠，口服l〇〇mg/kg实施例1萃取的阿尔泰柴胡萃取物之实验组;及(D)显示经诱发为肠 炎的小鼠，口服200mg/kg的5-ASA之正对照组。
[0011 ]图2显示小鼠肠浸出液中IL-6的含量，（A)显示以不含TNBS的50 %乙醇水溶液注射 小鼠大肠的控制组；（B)显示溶于50%乙醇的TNBS诱发小鼠肠炎的载体处理组；（C)显示经 诱发为肠炎的小鼠，口服l〇〇mg/kg实施例1萃取的阿尔泰柴胡萃取物之实验组;及(D)显示 经诱发为肠炎的小鼠，口服200mg/kg的5-ASA之正对照组。
[0012]图3显示小鼠肠浸出液中G-CSF的含量，（A)显示以不含TNBS的50%乙醇水溶液注 射小鼠大肠的控制组；（B)显示溶于50%乙醇的TNBS诱发小鼠肠炎的载体处理组；（C)显示 经诱发为肠炎的小鼠，口服l〇〇mg/kg实施例1萃取的阿尔泰柴胡萃取物之实验组;及(D)显 示经诱发为肠炎的小鼠，口服200mg/kg的5-ASA之正对照组。
[0013]图4显示小鼠肠浸出液中IL卜β的含量，（A)显示以不含TNBS的50%乙醇水溶液注 射BABL/c小鼠大肠的控制组；（B)显示溶于50%乙醇的TNBS诱发小鼠肠炎的载体处理组； (C)显示经诱发为肠炎的小鼠，口服100mg/kg实施例1萃取的阿尔泰柴胡萃取物之实验组； 及(D)显示经诱发为肠炎的小鼠，口服200mg/kg的5-ASA之正对照组。
[0014]图5显示以不含TNBS的50 %乙醇水溶液注射小鼠大肠的大肠型态，大肠直径约 1mm，粪便呈颗粒状。
[0015] 图6显示以TNBS刺激小鼠大肠形成肠炎，但不施用任何柴胡萃取物的大肠型态，大 肠肿大直径达约3-5mm，粪便呈水糜状。
[0016] 图7显示以TNBS刺激小鼠大肠形成肠炎，口服施用100mg/kg阿尔泰柴胡萃取物之 大肠型态。
[0017]图8显示以TNBS刺激小鼠大肠形成肠炎，口服施用1000mg/kg阿尔泰柴胡萃取物之 大肠型态。
[0018] 图9显示以TNBS刺激小鼠大肠形成肠炎，口服施用100mg/kg北柴胡萃取物之大肠 型态。
[0019] 图10显示以TNBS刺激小鼠大肠形成肠炎，口服施用100mg/kg黄花鸭跖柴胡萃取物 之大肠型态。
[0020] 图11显示以TNBS刺激小鼠大肠形成肠炎，口服施用100mg/kg狭叶柴胡萃取物之大 肠型态。
[0021] 图12显示以TNBS刺激小鼠大肠形成肠炎，口服施用100mg/kg三辐柴胡萃取物之大 肠型态。
[0022]图13显示以TNBS刺激小鼠大肠形成肠炎，口服施用100mg/kg三岛柴胡萃取物之大 肠型态。
[0023]图14显示以TNBS刺激小鼠大肠形成肠炎，口服施用100mg/kg高氏柴胡萃取物之大 肠型态。
[0024]图15显示以TNBS刺激小鼠大肠形成肠炎，口服施用200mg/kg的5-ASA之大肠型态。
【具体实施方式】
[0025]本发明之柴胡可选用具有苦平、微寒之性味的柴胡品种。具体而言，可选自下列所 构成的群组：阿尔泰柴胡（Bupleurum krylovianum)、北柴胡（Bupleurum chinense)、黄花 甲鸟妬柴古月（Bupleurum commelynoideum)、狭叶柴古月（Bupleurum scorzonerifolium)、三福 柴胡（Bupleurum triradiatum)、三岛柴胡（Bupleurum falcatum)、及高氏柴胡（Bupleurum kaoi)〇
[0026] 上述柴胡可选取整棵植株，或较佳采用根部。
[0027] 本发明之柴胡可进一步经由溶剂萃取。例如将柴胡植株研磨成粉末后，室温下浸 泡于乙醇溶液中，经过一段时间，在室温下干燥、浓缩，获得柴胡萃取物。本发明之较佳实施 例中，乙醇溶液较佳为乙醇水溶液，而且，乙醇的浓度可为20%~95%体积百分比，较佳为 50~95 %体积百分比。
[0028] 萃取的时间通常为2小时以上，较佳为2小时~24小时，更佳为4~5小时。
[0029] 萃取的温度通常为室温，较佳为室温至乙醇水溶液沸腾回流的温度。
[0030] 上述萃取方法可再包括一浓缩干燥过程，将上述经过加热回流后的萃取液浓缩、 干燥成固体或结晶体。上述萃取方法可反复操作数次，以获得纯度较高的萃取物。
[0031] 在肠炎的动物模式中，肠型态呈现肿胀、粪便型态不能呈正常颗粒形，甚至呈糜状 到水样的型态。本发明一实施例中，肠炎的动物模式经施用柴胡之后，肠肿胀的现象明显受 到抑制，而且肠炎部位形成软便的现象，显示柴胡具有抑制及减缓发炎性肠病的效果。在一 实施例中，肠炎的动物模式经施用柴胡之后，亦明显降低发炎部位的肠浸出液中TNF-CUlL- 6、G-CSF、及ILl-β的表现量，推测这些因子与发炎性肠病有关。
[0032] 根据本发明，柴胡可用以治疗或抑制个体的发炎性肠病，包括克罗恩病(Crohn's disease)、肠炎、或具有类似发炎症状的肠疾病。
[0033] 上述个体包括哺乳类动物，例如鼠、狗、猫、马、羊、猪、猴、猿，特别是人。
[0034]柴胡的有效使用量可由熟知此技术领域之人士，依个体的年龄、生理状况、发炎程 度等条件予以判断，没有特别限制，但较佳可为50~1000mg/kg的剂量，更佳为100mg/kg的 剂量。
[0035] 本发明之医药组合物可进一步包括此技术领域中熟知的药学上可接受载剂及/或 添加剂，根据剂型、保存方式、施用方式等因素，以适当比例添加。
[0036] 本发明之医药组合物可经由例如静脉内、肌肉内、口服或皮下施用，较佳为口服施 用。本发明之医药组合物也可在适当期间内对患者进行多重剂量给药，该给药疗程依据药 学上例行方法加以测定。
[0037] 本发明之具体实施详细说明如下，然而以下的实施例仅用于进一步揭露本发明之 技术内容，不应藉以限制本案的发明范畴。
[0038][实施例1]柴胡萃取物的制造
[0039] 分别选取阿尔泰柴胡（Bupleurum krylovianum)、北柴胡（Bupleurum chinense)、 黄花甲鸟妬柴古月（Bupleurum commelynoideum)、狭叶柴古月（Bupleurum scorzonerifolium)、 三福柴胡（Bupleurum triradiatum)、三岛柴胡（Bupleurum falcatum)、高氏柴胡 (Bup I eurum kao i)的植物根部，研磨成植物粉末。
[0040] 分别取上述植物粉末0.5g，各自以25ml浓度为25%、50%、75%及95 %体积百分比 的乙醇水溶液在室温下振荡过夜后，经过干燥浓缩后，获得各柴胡萃取物。
[0041 ][实施例2 ]柴胡萃取物对肠炎的肠浸出液中TNF-α、IL-6、G-CSF及IL1 -β含量的抑 制作用
[0042] 本发明之柴胡萃取物对肠炎的肠浸出液中TNF-α、IL-6、G-CSF及IL1 -β含量的抑制 作用可以参考下列文献进行实验探讨：
[0043] I.Current Protocols in Immunology(2001)15.19.1-15.19.14.
[0044] 2.Lahat G,Halperin D1Fabian I,et al. Immunomodulatory Effects of Ciprofloxacin in TNBS-Induced Colitis in Mice .Inflamm Bowel Dis2007；13:557-565.
[0045] 3.ten Hove T,van den Blink B1Pronk I,et al.Dichotomal role of inhibition of p38MAPK with SB 203580in experimental colitis.Gut2002；50:507-512.
[0046] 4 . Bouma G, Strober ff. The Immunological and Genetic Basis of Inflammatory Bowel Disease.Nature Review Immunology 2003；3:521-533.
[0047] 取6只小鼠为一组、共四组小鼠，其中三组从每只BABL/c小鼠肛门深入大肠内4公 分注射1 · 75mg三硝基苯横酸（trinitrobenzene sulfonic acid;TNBS) (Sigma)，经过48小 时后，该部位诱发形成肠炎。另外一组以不含TNBS的50%乙醇水溶液注射BABL/c小鼠肛门 深入大肠内4公分处，作为控制组(A)。经50%乙醇水溶液注射的部位维持正常的肠型态，未 诱发成肠炎。
[0048]上述诱发为肠炎的部位，取自肛门起6公分大肠，浸泡于PBS2小时，为(B)载体处理 组。
[0049]另外，上述诱发为肠炎的小鼠组，分别以（C) 口服实施例1以50%乙醇水溶液萃取 的阿尔泰柴胡萃取物l〇〇mg/kg，作为实验组；以及(D) 口服200mg/kg的5-氨基水杨酸（5-aminosalicylic acid;5_ASA) (Sigma)，作为正对照组。分别取自肛门起6公分大肠，浸泡于 PBS 2小时。
[0050]上述(A)、（B)、（C)、（D)组的小鼠肠浸出液分别以酵素免疫分析法（ELISA) (R&D Sy StemS?)，定量分析TNF-α、IL-6、G-CSF及ILl-β的含量，结果分别如图1~4所示。
[0051][实施例3]柴胡萃取物改善肠炎的肠肿大及粪便水糜样现象 [0052]如实施例2,诱发小鼠形成肠炎。分别对形成肠炎的小鼠，口服施用实施例1中以 50%乙醇水溶液萃取的：阿尔泰柴胡萃取物100mg/kg及1000mg/kg、北柴胡萃取物IOOmg/ kg、黄花鸭妬柴胡萃取物100mg/kg、狭叶柴胡萃取物100mg/kg、三福柴胡萃取物100mg/kg、 三岛柴胡萃取物l〇〇mg/kg、及高氏柴胡萃取物100mg/kg。之后，分别取小鼠肛门起6公分大 肠，观察肠肿大及粪便型态(如图7~14)。
[0053]另一方面，将上述施用各柴胡萃取物的肠型态，与上述实施例2之（1)以不含有 TNBS的50 %乙醇水溶液注射小鼠大肠之肠型态（控制组）（如图5);(2)以溶于50 %乙醇的 TNBS刺激小鼠大肠形成肠炎、但不施用柴胡萃取物之肠型态(载体处理组）（如图6);以及 (3)对于诱发肠炎的小鼠口服施用200mg/kg的5-ASA(Sigma)之肠型态（正对照组）（如图 15)，相互比较。
[0054]未施用柴胡萃取物之肠炎模式，肠型态呈现肿大及粪便水糜样的现象(如图6)。然 而，在施用上述柴胡萃取物的肠型态中，肠肿胀的现象减少，而且出现软便甚至正常颗粒状 的状态，显示发炎的肠部位出现好转的现象（图7~HhS-ASA为目前治疗发炎性肠病的常 用药物，然而在施用肠炎模式中，肠肿状的现象并未减缓或消失(如图15)。
[0055]虽然本发明已以较佳实施例揭露如上，然其并非用以限定本发明，任何熟悉此项 技艺者，在不脱离本发明之精神和范围内，当可做些许更动与润饰，因此本发明之保护范围 当视后附之申请专利范围所界定者为准。
【主权项】
1. 一种柴胡乙醇萃取物在制备抑制IL-6、G-CSF、或ILl-β以治疗或减缓克罗恩病 (Crohn's disease)之药物的用途，其中该柴胡系选自由下列所构成的群组:阿尔泰柴胡 (Bupleurum krylovianum)、北柴古月（Bupleurum chinense)、黄花甲鸟妬柴古月（Bupleurum commelynoideum)、狭叶柴古月（Buplcurum scorzonerifolium)、三福柴古月（Bupleurum triradiatum)、三岛柴胡（Bupleurum falcatum)、及高氏柴胡（Bupleurum kaoi)或其组合， 该柴胡来自柴胡根部，其中所述柴胡乙醇萃取物是经乙醇萃取后直接干燥浓缩即获得的。2. 根据权利要求1所述之用途，其中该柴胡乙醇萃取物系以浓度20%~95%体积百分 比之乙醇水溶液萃取。3. 根据权利要求1-2中任一项所述之用途，其中该药物为口服施用。4. 一种柴胡乙醇萃取物在制备抑制ILl-β之药物的用途，其中该柴胡系选自由下列所 构成的群组：阿尔泰柴胡（Bupleurum krylovianum)、北柴胡（Bupleurum chinense)、黄花 甲鸟妬柴古月（Bupleurum commelynoideum)、狭叶柴古月（Buplcurum scorzonerifolium)、三福 柴胡（Bupleurum triradiatum)、三岛柴胡（Bupleurum falcatum)、及高氏柴胡（Bupleurum kaoi)或其组合，该柴胡来自柴胡根部，其中所述柴胡乙醇萃取物是经乙醇萃取后直接干燥 浓缩即获得的。5. 根据权利要求4所述之用途，其中该柴胡乙醇萃取物系以浓度20%~95%体积百分 比之乙醇水溶液萃取。6. 根据权利要求4-5中任一项所述之用途，其中该药物为口服施用。
【文档编号】A61P29/00GK105963331SQ201610395416
【公开日】2016年9月28日
【申请日】2010年12月29日
【发明人】石英珠, 李连滋, 胡乃韻, 童天送
【申请人】财团法人工业技术研究院