专利名称：牛膝用于预防和/或治疗胃癌前病变和胃癌的新制药用途的制作方法
技术领域：
本发明属于医药领域。
背景技术：
牛膝为苋科多年生草本植物牛膝(Achyranthes bidentata Bi)的干燥根，别名百 倍、牛茎、怀牛膝、脚斯蹬等，性平，味甘苦酸，归肝肾经。具有活血祛瘀、补肝肾、强筋骨、利 尿通淋、引血下行功效。牛膝为祛风除湿、活血化瘀及治疗妇科病症的常用中药，临床用于 瘀血阻滞的月经不调、痛经、闭经、产后瘀阻腹痛、跌打损伤及腰膝酸痛、下肢无力、尿血、小 便不利、尿道涩痛等症。近年来对其药理作用的研究取得了新的进展，认为其具有抗病毒、 免疫调节、镇痛抗炎、抗衰老、降血压等作用。在临床上，含牛膝的中药复方被制成外用或口 服剂应用。研究证明，牛膝用于治疗高血压和咽喉肿痛等症亦有较好的效果，七宝美髯颗 粒、八宝坤顺丸、三两半药酒、三妙丸、天麻丸、木瓜丸、艾附暖宫丸、平肝舒络丸、安坤赞育 丸、抗骨增生丸、龟龄集、补肾固齿丸、补肾益脑片、锁阳固精丸、舒筋丸、梳风定痛丸等著名 的中成药中牛膝的用量、用途不断加大拓宽。同时又是出口商品，具有较大的开发价值。胃癌是常见的恶性肿瘤之一，其发病率及死亡率在我国皆居于恶性肿瘤的前列。 胃粘膜上皮细胞的癌变是一个渐进过程，常经历多年的持续胃癌癌前病变阶段，有些病人 最终会演变为胃癌。因此预防或治疗胃癌前病变，阻止癌前病变转化为恶性胃癌是防治胃 癌的一个重要途径，对于降低我国癌症发病率和病人死亡率具有重要意义。1.牛膝被报道有多方面的药效作用，但未见有预防和/或治疗治疗胃癌前病变方 面的研究报道以往的研究证明牛膝有以下作用(1)镇痛抗炎作用能明显减轻二甲苯所致小 鼠耳肿胀、蛋清致大鼠足肿胀等急性炎性反应，能降低大鼠琼脂肉芽肿质量，延长热板上小 鼠舔足时间，有较强的阵痛抗炎作用(2)对心血管系统的作用具有扩张血管、降低血压和 抗动脉粥样硬化作用(3)对子宫的作用对不同生理状态下大鼠体外子宫均有明显兴奋作 用以及抗生育、抗早孕和抗着床作用。(4)增强免疫力提高免疫功能低下的小鼠脾脏与胸 腺指数，对抗小鼠的白细胞减少，提高T/B淋巴细胞转化率及巨噬细胞吞噬功能，促进溶血 空斑的形成。(5)利尿作用怀牛膝水煎液有轻度利尿作用。(6)抗肿瘤作用有个别文献 报道了川牛膝或牛膝多糖对S180肉瘤和H22肝癌和Lewis肺癌有一定抑制作用。但国内 外文献均未见有关怀牛膝用于预防和治疗胃黏膜癌前病变的文献记载或正式公开的研究 报道。2.怀牛膝临床应用广泛，但未见其在预防和/或治疗治疗胃癌前病变方面的应用
怀牛膝在临床应用广泛，既可单独使用，也可与其他药物组成复方应用，有口服、 外用制剂使用。其多用于瘀滞经闭、产后瘀痛、跌扑伤痛、腰膝酸痛、足膝萎软无力、吐血、衄 血、牙龈肿痛、头痛晕眩、小便不利、淋浙涩痛及尿血等症，近年也用于抗衰老、降血压及治 疗胃炎胃溃疡方面。迄今，未见牛膝单独或以牛膝为主要成分的复方以任何用药途径的相 关制剂用于的治疗胃癌前病变临床应用报道。
发明内容
为了充分利用怀牛膝资源，扩大怀牛膝的临床应用，本发明人采用化学致癌物诱 导大鼠胃粘膜良性增生/癌前病变/胃恶性癌症模型，研究了牛膝提取物抑制化学致癌物 诱导的大鼠胃粘膜良性增生一胃黏膜癌前病变一胃恶性肿瘤的发生发展过程、预防胃癌前 病变和恶性胃癌发生的作用，证明牛膝可以明显抑制胃粘膜的乳头状增生，减轻胃基底细 胞的不典型增生等癌前病变，减少胃肿瘤生长，减少恶性肿瘤发生率。证明了怀牛膝有防治 胃癌前病变，预防胃恶性癌症发生的新作用。因此，本发明的目的是提供怀牛膝在制备预防 和/或治疗胃癌前病变，防治胃癌药物中的新应用。技术解决方案本发明内容为提供怀牛膝在制备预防和/或治疗胃癌前病变、防治胃癌药物中 的新应用。所述的牛膝是怀牛膝干燥根的提取物，其制备可采取如下方法取怀牛膝饮片1000克加50%乙醇，回流提取四次，每次加乙醇量分别为4000、 3000,3000,3000ml回流1小时。第一次回流前浸泡8 12小时，合并四次回流液，过滤，去 不溶物，减压回收乙醇，并浓缩至无醇味，加水稀释至2500ml，冷藏24小时以上，滤过，澄明 液浓缩至1000ml。本发明的产品包括含有怀牛膝的涉及预防和/或治疗胃黏膜癌前病变、防治胃癌 相关应用的药品、保健品、食品和化妆品。本发明的产品包括涉及含有怀牛膝的涉及预防和/或治疗胃黏膜癌前病变、防治 胃癌相关应用的人用和兽用产品。本发明再一方面还涉及预防和/或治疗其他粘膜如膀胱、宫颈、子宫、小肠或大 肠、口腔、鼻咽、食管等的癌前病变和恶性肿瘤的相关应用的人用或兽用药品、保健品、食品 和化妆品。本发明再一方面还涉及以怀牛膝提取物为活性成分，以预防和/或治疗胃黏膜癌 前病变、防治胃癌为适应症的药物组合物。该药物组合物可将本发明技术方案中所述的方 法制备的提取物或进一步的精制物，与一种或多种药学上可接受的固体或液体赋型剂和/ 或辅料结合，制成适于人或动物使用的任何剂型。给药途径可为肠道或非肠道途径，如口 月艮、静脉注射、肌肉注射、皮下注射、鼻腔、口腔粘膜、眼、肺和呼吸道、皮肤、阴道、直肠等。给 药剂型可以是液体剂型、固体剂型或半固体剂型。液体剂型可以是溶液剂(包括真溶液和 胶体溶液)、乳剂、微乳、混悬剂、注射剂(包括水针剂、粉针剂和输液)、滴眼剂、滴鼻剂、洗剂、搽剂等；固体制剂可以是片剂(包括普通片、肠溶片、含片、分散片、咀嚼片、泡腾片、口 腔崩解片等)、胶囊剂(包括硬胶囊、软胶囊、肠溶胶囊)、颗粒剂、散剂、微丸、滴丸、栓剂、膜剂、贴片、气(粉)雾剂、喷雾剂等；半固体制剂可以是软膏剂、凝胶剂、糊剂等。制剂可以制 成普通制剂、也可以是缓释剂、控释剂、靶向制剂及各种微粒给药系统。本发明具有的优点和效果1.怀牛膝资源非常广泛，提取方法简单易行，可制成胶囊剂、浓缩丸、颗粒剂、片剂、散剂、口服液、膜剂、喷雾剂、凝胶剂、注射剂、混悬剂或外用制剂等药物制剂。2.经大鼠试验证明，怀牛膝能够明显抑制化学致癌物诱导的大鼠胃黏膜细胞增生，减少胃黏膜乳头状瘤生长，降低胃黏膜癌前病变不典型增生发生率，减少胃恶性肿瘤发 生率。牛膝用药10、15、20周时肿瘤抑制率分别为48 57%、15 45%、30 49%。服用 的大鼠的胃粘膜上，可见乳头状肿瘤较模型组在体积和数量上明显减少(小)，胃粘膜光滑 度增加，胃重量较模型组减小，并有统计学意义。试验10周时，模型组癌前病变(I III度 不典型增生)发生率为83.3%，恶性癌变发生率为16.7%。而牛膝lg/kg组仅有I II度 不典型增生，发生率明显降低，仅为40%，恶性癌变发生率为0%。试验20周时，模型组的 动物有80%发生恶性变成为胃癌，而牛膝lg/kg组仅有40%动物恶性变。结果表明，牛膝 具有预防和治疗胃癌前病变、防治恶性胃癌的作用。
四
附图为造模15周时各组的胃粘膜肿瘤生长情况。共有5组动物的胃照片，包括对照组、模型组、牛膝1. Og/kg、牛膝2. Og/ kg、牛膝 4. Og/kg从图中可见，对照组胃黏膜表面光滑，有正常的皱褶，但无突起的肿物生长。模型 组胃黏膜面有大量乳头状瘤生长，肿瘤向胃腔突起呈菜花状，有的动物肿瘤表面有局限性 出血、坏死；由于肿瘤生长，整个胃体积较对照组明显增大。牛膝1. Og/kg,2. 0g/kg、4. Og/ kg剂量组的胃体积均较模型组明显减小，胃黏膜表面的肿瘤数目以及大小均较模型组减 少，有较多的未长肿瘤的粘膜区，表面光滑的区域增多。
五具体实施例方式1.牛膝的制备方法取怀牛膝饮片1000克加50%乙醇，回流提取四次，每次加乙醇量分别为4000、 3000,3000,3000ml回流1小时。第一次回流前浸泡8 12小时，合并四次回流液，过滤，去 不溶物，减压回收乙醇，并浓缩至无醇味，加水稀释至2500ml，冷藏24小时以上，滤过，澄明 液浓缩至1000ml。2.动物实验方法将SD大鼠按随机分为4组，分别为①正常组；②模型组(马兜铃酸10mg/kg造 成胃粘膜良性增生一胃黏膜癌前病变一胃恶性肿瘤模型)；③牛膝lg/kg组；④牛膝2g/kg 组。⑤牛膝4g/kg组。除了对照组以外，② ⑤组均隔日灌胃一次含马兜铃酸10mg/kg的 造模药，直至20周。除了灌胃造模药物以外，模型组还每日灌胃给予蒸馏水5ml/kg。牛膝 各剂量组灌胃给予不同剂量的牛膝受试物5ml/kg。共给药20周。分别于给药后10、15、 20周取1/3动物处死，摘取每只动物的胃，用电子分析天平称量胃重量；按照每只动物的体 重，折算胃指数。计算各组肿瘤抑制率和肿瘤指数抑制率。胃指数(胃重量/IOOg体重)=胃重量g/体重gX 100各组肿瘤重量(g)=试验组胃重量_对照组胃重量肿瘤抑制率(％)=(用药组肿瘤重量-模型组肿瘤重量)/模型组肿瘤重 量 X100肿瘤指数抑制率(％ )=(用药组肿瘤指数_模型组肿瘤指数)/ (模型组肿瘤指 数-对照组肿瘤指数)X100
然后将胃用10%中性福尔马林固定，用石蜡包埋、切片。采用HE(HaematoxyIin & Eosin)染色，用显微镜进行组织形态学观察，记录各组发生胃粘膜乳头状增生、胃黏膜癌前 病变(I、IIJII度不典型增生)和恶性胃癌发生的动物数。3.试验结果3. 1牛膝对肿瘤生长的预防和治疗作用采用马兜铃酸10mg/kg造模10周，大鼠的胃黏膜即可见有多发性乳头状瘤生长， 肿瘤重量达到1. 08g，肿瘤指数为0. 28 ；造模15,20周后，肿瘤重量分别为1. 05、1. 59g，肿 瘤指数分别为0. 32,0. 29。牛膝1. 0,2. 0,4. Og/kg剂量组在用药10周时的肿瘤抑制率达到 48. 15 57. 4% ；20周时肿瘤抑制率为30. 8 49. .结果表明牛膝具有明显的预防肿 瘤生长的作用。结果见表1-3。表1给药后10周胃重量/系数比较) 注(1)肿瘤抑制率(％)=(模型组胃重量-牛膝组胃重量)/(模型组胃重量-对 照组胃重量)X100(2)肿瘤指数抑制率(％)=(模型组胃指数-牛膝组胃指数)/(模型组胃指 数-对照组胃指数)X100(3)与对照组比较，牛膝提取物各组与模型组比较，*P < 0. 05广P < 0.01 ；***P < 0. 001 (下表相同)表2给药后15周胃重量/系数比较) 注同表1表3给药后20周胃重量/系数比较G ±i5D ) 注同表12. 2牛膝预防胃癌前病变和防止癌前病变恶性变的预防和治疗作用采用病理组织形态学检查，结果显示，试验10周时，模型组癌前病变(I III度 不典型增生)发生率为83.3%，恶性癌变发生率为16.7%。而牛膝1.0、2. Og/kg组仅有 I II度不典型增生，癌前病变发生率明显降低，分别为40%、60%，癌前病变抑制率分别 为52.0%、28.0%。这两个剂量组的恶性癌变发生率为0%。试验20周时，模型组的动物 有80%发生恶性变成为胃癌，而牛膝1. 0,2. 0,4. Og/kg组仅有40 50%动物恶性变为胃 癌，抑制率分别37. 5 50%。结果表明，牛膝具有预防和治疗胃癌前病变、减少恶性胃癌发 生率的作用。结果见表4。表4牛膝预防/治疗胃癌前病变和预防胃癌发生的结果
权利要求
牛膝用于预防和/或治疗胃黏膜癌前病变和胃癌的药物中的应用。
2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于所述的牛膝是牛膝的根的水煎液、蒸馏液、 挥发油或有机溶剂提取物。
3.根据权利1所述的应用，其特征在于，所述的药物产品包括含有牛膝的药物组合物。
4.根据权利要求1、2、3，其特征在于，所述的药物产品包括药品、保健品、食品、化妆Pm o
5.根据权利要求1、2、3、4，其特征在于，所述的药物产品包括胶囊剂、浓缩丸、颗粒剂、 片剂、散剂、混悬剂、口服液、凝胶剂、喷雾剂、滴鼻剂、滴眼剂、膜剂、注射液。
6.根据权利要求1、2、3、4、5，其特征在于，所述的药物产品包括人用和兽用。
全文摘要
本发明属于医药领域，涉及牛膝用于预防和/或治疗胃癌前病变和胃癌的新制药用途，以提供怀牛膝在预防和/或治疗胃癌前病变，防治恶性胃肿瘤药物中的新的应用。采用有机溶剂提取方法制备牛膝活性部分。经过动物试验发现，牛膝可以明显抑制胃黏膜细胞不典型增生，抑制癌前病变，防止胃恶性肿瘤发生，这些作用在牛膝以往的研究和临床上未见报道和应用，故本发明具有独特性及新颖性。牛膝资源广泛，提取方法简便，可制成多种剂型；胃癌是我国常见的恶性肿瘤之一，在我国其发病率居各类肿瘤的首位，临床用药需求巨大。因此本发明具有很强的实用性，其在预防和/或治疗胃黏膜癌前病变、预防胃恶性肿瘤发生方面的应用前景十分广阔。
文档编号A61Q19/00GK101862360SQ20101018125
公开日2010年10月20日 申请日期2010年5月25日 优先权日2010年5月25日
发明者李春英, 梁爱华 申请人:中国中医科学院中药研究所