专利名称：一种藻类细胞中的生物油脂及其制备方法和应用的制作方法
技术领域：
本发明涉及一种藻类细胞中的生物油脂及其在制备生物柴油方面的应用。
背景技术：
随着世界范围内化石燃料和石油能源的加速消耗以及由此带来的各种污染和环境问题，可再生的生物能源日益得到人们的重视。在各项政策的鼓励和支持下，全世界生物燃料(包括生物柴油和生物乙醇等)的年产量已经达到了约350亿升。生物柴油是以生物油脂(通常包括植物脂肪，动物脂肪等)与醇类物质(通常为甲醇、乙醇)为原料，通过酯交换反应得到的长链脂肪酸甲酯。甲醇在一定温度下，与生物油脂中的甘油三酯发生酯交换反应，产生甘油和脂肪酸甲酯，甘油被分离后，得到的脂肪酸甲酯就是生物柴油。酯交换反应中甘油三酯与甲醇的理论摩尔比例是1:3，但在工业生产时，通常加入过量的甲醇以确保反应向生成甲酯的方向进行。在酯交换反应中，可以用酸、碱或酶做催化剂进行催化。生物柴油可取代传统的由石油提取的柴油应用于现有的柴油机中，其结构稳定，使用安全，在燃烧过程中要比传统的柴油排放出更少的有害大气污染物如硫氧化物，芳香烃化合物，碳氧化物，颗粒物等，并且由于其具备无毒无害，可生物降解性等优点，因此显示出非常有潜力的应用前景。相关研究表明，等量的生物柴油在燃烧过程中平均要比传统柴油少释放53%-69%的颗粒物，79%-83%的飞灰，45%_67%的碳氢化合物以及4%-16%的一氧化碳。在自然环境之中，绝大部分生物柴油可在21-28天之内降解，其降解速度为传统柴油的4倍。此外，生物柴油还具有良好的润滑性能和更好的燃烧性能。以油料作物榨取的植物油脂，废弃的烹饪用油和动物油脂为原料制取生物柴油的实践已经有超过50年的历史。在美国，生物柴油的主要原料是大豆油脂，但其生产规模和产量已经难以满足巨大的需求。以微生物油脂为原料制取生物柴油的研究也有着近30年的历史，然而直到近几年才受到了越来越多的瞩目。其中，藻类为微生物油脂的主要来源。藻类是一类低等的放氧自养型生物，其种类繁多、在地球上的分布极其广泛，地球上的生物每年通过光合作用生产的生物质中的40%都应归功于藻类的光合作用。微藻是指一些微观的单细胞、群体或藻体呈丝状的藻类，绝大部分微藻生长繁殖在水环境中，不会与农业用 地和牧业用地相竞争。微生物油脂是微生物如微藻类等利用碳水化合物合成的甘油酯，其脂肪酸组成与植物油相近，主要为甘油三酸酯。微生物细胞体内的油脂含量一般大于40%至50%，一些经过基因工程改良的微藻类细胞中油脂含量甚至可以达到80%以上。以微生物油脂为原料，经过精炼，酯交换，分离纯化等过程，可生产出优质的生物柴油。从藻类中提取生物油脂须经历一个对藻类细胞进行预处理的过程，该过程的目的为破坏其细胞壁和细胞膜，使细胞内的脂类流出并加以提取。预处理过程一般包括干燥，藻类细胞破碎和微生物油脂的提取等几个步骤。藻类细胞的破碎方法主要有匀浆器破碎，玻珠研磨机研磨，超声波破碎，微波破碎，高压釜加温加压破碎，反复冻融法破碎，有机溶剂裂解，渗透压冲击破碎，酶裂解等。
目前全世界范围内，能源紧缺，石化燃料即将耗尽，新能源的开发迫在眉睫。生物柴油是指以油料作物、野生油料植物和工程微藻等水生植物油脂以及动物油脂、餐饮垃圾油等为原料油，通过酯交换工艺制成的可代替石化柴油的再生性燃料。生物柴油具有优良的环保特性、低温启动性能、润滑性能、良好的安全性能和燃烧性能等。藻类细胞体内提取出的生物油脂，将是一种优良的生物柴油原料。
发明内容
本发明的目的之一在于提供一种藻类细胞中的生物油脂的制备方法，该制备方法可快速破碎藻类细胞，以提取藻类细胞中的生物油脂。
本发明的目的之二在于提供上述的一种藻类细胞中的生物油脂在制备生物柴油中的应用。本发明的技术方案
一种藻类细胞中的生物油脂的制备方法，即首先将藻类细胞破碎，然后收集破碎的藻类细胞混合液并离心，取上清液用正己烷/乙酸乙酯混合溶剂进行第一次液液萃取，收集水相和有机相；
将第一次液液萃取得到的水相用正己烷/乙酸乙酯混合有机溶剂进行第二次液液萃取，收集水相和有机相；
将第二次萃取所得的水相用正己烷/乙酸乙酯混合有机溶剂进行第三次液液萃取，收集水相和有机相；
合并三次萃取所得的有机相真空蒸发去除正己烷/乙酸乙酯混合有机溶剂后所得的产物即为藻类细胞中的生物油脂。上述的一种藻类细胞中的生物油脂的制备方法，具体包括如下步骤
(1)、将藻液于密闭的不锈钢反应釜中，匀速搅拌，保持小球藻悬浮于溶液中；
(2)、利用臭氧发生器和空压机将臭氧和空气按体积比计算，即臭氧空气为I:150的比例将臭氧和空气组成的混合气体通入密闭的反应釜中，直至反应釜中压力达到O. 4 O. 8 Mpa，然后迅速打开反应釜的放气阀，释放压力至大气压，这一过程称为一个加压-减压循环；
(3)、多次重复步骤(2)的加压-减压循环40 80次，最终得到破碎的藻类细胞混合
液；
(4)、取出密闭反应釜中的破碎的藻类细胞混合液，离心后取上清液，按体积比计算，SP上清液正己烷/乙酸乙酯混合有机溶剂为I :0. 3，在上清液中加入正己烷/乙酸乙酯混合有机溶剂，进行第一次液液萃取，分层后分别收集水相I和有机相I ;
所述的正己烷/乙酸乙酯混合有机溶剂，即由正己烷和乙酸乙酯按体积比计算，即正己烷乙酸乙酯为I :1的比例混合而成；
(5)、在步骤(4)收集的水相I中按体积比计算，即水相I:正己烷/乙酸乙酯混合有机溶剂为I :0. 2的比例加入正己烷/乙酸乙酯混合有机溶剂，进行第二次液液萃取，分层后分别收集水相2和有机相2 ；
所述的正己烷/乙酸乙酯混合有机溶剂，即由正己烷和乙酸乙酯按体积比计算，即正己烷乙酸乙酯为I :1的比例混合而成；(6)、在步骤(5)收集的水相2中按体积比计算，即水相2:正己烷/乙酸乙酯混合有机溶剂为I :0. I的比例加入正己烷/乙酸乙酯混合有机溶剂，进行第三次液液萃取，分层后分别收集水相3和有机相3 ；
所述的正己烷/乙酸乙酯混合有机溶剂，即由正己烷和乙酸乙酯按体积比计算，即正己烷乙酸乙酯为I :1的比例混合而成；
(7)、合并步骤(4)、(5)和(6)三次萃取收集的有机相I、有机相2和有机相3后置入真空旋转蒸发仪中，常温下蒸发至正己烷和乙酸乙酯混合有机溶液蒸发完全，得到藻类细胞中的生物油脂。上述的一种藻类细胞中的生物油脂在制备生物柴油中的应用，即在藻类细胞中的生物油脂中加入浓度为2 mol/L的KOH的甲醇溶液，剧烈搅拌进行酯化反应，反应过程中搅拌转速为2800 rpm，时间为2 min，酯化反应将脂肪酸转化为脂肪酸甲酯，静置分层，上层所得产物即为生物柴油； 所述的浓度为2 mol/L的KOH的甲醇溶液的加入量按其占藻类细胞中的生物油脂质量比计算，即藻类细胞中的生物油脂浓度为2 mol/L的KOH的甲醇溶液为I : 10-20。本发明的有益效果
本发明的一种藻类细胞中的生物油脂的制备方法，其制备过程中利用压力辅助臭氧法对藻类细胞破壁，即以臭氧为媒介，通过气-液反应，作用于藻液，在搅拌器作用下使臭氧与藻液混合均匀进而破碎藻类细胞，因此具有设备流程简单，破壁效果好，易于实现自动化控制等优势，是一种有效的藻类细胞破碎方法。进一步，本发明的一种藻类细胞中的生物油脂的制备方法，由于利用臭氧的氧化性能氧化藻类的细胞壁与细胞膜，辅助以压力来破坏藻类的细胞，使得藻类细胞中的脂肪酸等成分外流，并使用有机溶剂以液液萃取的方式获得脂肪酸和烷烃。实验证明，在系统压力为O. 8 MPa,加压-减压循环数为80的条件下，小球藻的生物油脂萃取率可达16. 7-26.7%，并且产物的饱和程度有所提高。所以，本发明提供的以藻类细胞内的生物油脂制备生物柴油的流程，具备操作简单、原料来源广泛、产量高、价格便宜、易于规模化等优势，是一种有效的生物柴油制备新方法。最终所得的生物柴油，其主要成分为C16:0与C18 O分别为27. 8%-45. 9%及34. 7%_48. 6%，符合国家GB/T 20828-2007《柴油机燃料调和用生物柴油(BD100)》标准。
图I、是本发明的一种藻类细胞中的生物油脂的制备方法的工艺流程图。
具体实施例方式下面通过具体的实施例并结合附图和对本发明进一步详细描述，但并不限制本发明。一种藻类细胞中的生物油脂，通过包括如下步骤的制备方法进行制备，其制备过程的工艺流程示意图如图I所示，即首先是藻种培养与藻液获取，然后将收获的藻液放入高压反应釜中搅拌均匀，通入按体积比即臭氧空气为I : 150的臭氧和空气的混合气体并搅拌均匀，加压至O. 4 O. 8 Mpa，维持I 2 s时间，打开反应釜排气阀释放压力至常压，这时过饱和的气体从藻液中释放出来；
重复上述的搅拌均匀，通入臭氧和空气的混合气体、加压，释压，过饱和的气体从藻液中释放的过程40 80个循环，即完成了藻类细胞的破碎；
收集破碎的藻类细胞混合液，离心后取上清液，用正己烷/乙酸乙酯混合有机溶剂进行第一次液液萃取，分层后分别收集水相和有机相；
将第一次液液萃取得到的水相再用正己烷/乙酸乙酯混合有机溶剂进行第二次液液萃取，分层后分别收集水相和有机相；
将第二次萃取所得的水相再次用正己烷/乙酸乙酯混合有机溶剂进行第三次液液萃·取，分层后分别收集水相和有机相；
合并三次萃取所得的有机相置入真空旋转蒸发仪中，常温下蒸发至正己烷/乙酸乙酯混合有机溶剂蒸发完全，即得到藻类细胞中的生物油脂。在藻类细胞中的生物油脂中加入KOH的甲醇溶液，剧烈搅拌进行酯化反应，所得产物即为生物柴油。实施例I
一种藻类细胞中的生物油脂，通过包括如下步骤的方法制备
(1)、量取200ml收获的藻液于I L的高压反应爸中,在120 r/min条件下搅拌5 min ；
(2)、打开臭氧发生器和空压机，按体积比即臭氧空气为I:150的比例控制臭氧和空气的总流量为2 L/min，将臭氧和空气组成的混合气体通入到高压反应釜中，继续以120r/min勻速搅动藻液,使通入的臭氧、空气和藻液均勻混合；
(3)、控制高压反应釜压力为0.6MPa，当达到O. 6 Mpa时，打开高压反应釜的排气阀使压力降至常压，然后再升压至O. 6 10^，当达到0.6 Mpa时，再次打开高压反应釜的排气阀使压力降至常压，循环升压、降压过程40次即得到破碎的藻类细胞；
(4)、打开反应釜，取出藻液，离心后取上清液，利用25mL体积比为I :1的由正己烷与乙酸乙酯组成的混合有机溶剂进行第一次液液萃取、分液，分别收集水相I与有机相I ;
(5)、取出步骤(4)得到的水相1，利用15mL体积比为I :1的由正己烷与乙酸乙酯组成的混合有机溶剂进行第二次液液萃取、分液，分别收集水相2与有机相3。(6)、取出步骤(5)得到的水相2，利用10 ml体积比为I :1的由正己烷与乙酸乙酯组成的混合有机溶剂进行第三次液液萃取、分液，收集有机相3 ；。(7)、合并步骤(4)、(5)、(6)三步所得的有机相I、有机相2和有机相3并置入真空旋转蒸发仪器中，旋转蒸发30 min,即得藻类细胞中的生物油脂，其产率为17.6g/100g干藻。向上述所得的藻液所提取的生物油脂中加入浓度为2 mol/L的KOH的甲醇溶液，其加入量按其占藻类细胞中的生物油脂的质量比计算，即藻类细胞中的生物油脂浓度为2mol/L的KOH的甲醇溶液约为1:17，剧烈搅拌进行酯化反应，酯化反应过程中控制搅拌转速为2800 rpm，时间为2 min，反应完成后即得生物柴油。上述所得的生物柴油，溶于I mL正己烷溶液后进行气相色谱-质谱检测发现，其主要成分为C16:0与C18 :0，按照国家标准分析方法(GB/T 22223-2008)确定其相对百分含量分别为27. 8%与34. 7%，符合国家GB/T 20828-2007《柴油机燃料调和用生物柴油(BD100)》标准。
实施例2
一种藻类细胞中的生物油脂，通过包括如下步骤的方法制备
(1)、量取200mL收获的藻液于I L的高压反应釜中，在120 r/min条件下搅拌5 min ；
(2)、打开臭氧发生器和空压机，按体积比即臭氧空气为I:150的比例控制臭氧和空气的总流量为2 L/min，将臭氧和空气组成的混合气体通入到高压反应釜中，继续以120r/min勻速搅动藻液,使通入的臭氧、空气和藻液均勻混合；
(3)、控制高压反应釜压力为0.6MPa，当达到O. 6 Mpa时，打开高压反应釜的排气阀使压力降至常压，然后再升压至O. 6 10^，当达到0.6 Mpa时，再次打开高压反应釜的排气阀使压力降至常压，循环升压、降压过程80次即得到破碎的藻类细胞；
(4)、打开反应釜，取出藻液，离心后取上清液，利用25mL体积比为I :1的由正己烷与乙酸乙酯组成的混合有机溶剂进行第一次液液萃取、分液，分别收集水相I与有机相I ;
(5)、取出步骤(4)得到的水相1，利用15mL体积比为I :1的由正己烷与乙酸乙酯组成的混合有机溶剂进行第二次液液萃取、分液，分别收集水相2与有机相3。(6)、取出步骤(5)得到的水相2，利用10 ml体积比为I :1的由正己烷与乙酸乙酯组成的混合有机溶剂进行第三次液液萃取、分液，收集有机相3 ；。(7)、合并步骤(4)、(5)、(6)三步所得的有机相I、有机相2和有机相3并置入真空旋转蒸发仪器中，旋转蒸发30 min,即得藻类细胞中的生物油脂，其产率为26. 7g/100g干藻。将上述所得的藻液所提取的生物油脂中加入浓度为2 mol/L的KOH的甲醇溶液，其加入量按其占藻类细胞中的生物油脂质量比计算，即藻类细胞中的生物油脂浓度为2mol/L的KOH的甲醇溶液约为1:10，剧烈搅拌进行酯化反应，酯化反应过程中控制搅拌转速为2800 rpm，时间为2 min，反应完成后即得生物柴油。上述所得的生物柴油，溶于I mL正己烷溶液后进行气相色谱-质谱检测发现，其主要成分为C16:0与C18 :0，按照国家标准分析方法(GB/T 22223-2008)确定其相对百分含量分别为45. 9%与46. 3%，符合国家GB/T 20828-2007《柴油机燃料调和用生物柴油(BD100)》标准。实施例3
一种藻类细胞中的生物油脂，通过包括如下步骤的方法制备
(1)、量取200mL收获的藻液于I L的高压反应釜中，在120 r/min条件下搅拌5 min ；
(2)、打开臭氧发生器和空压机，按体积比即臭氧空气为I:150的比例控制臭氧和空气的总流量为2 L/min，将臭氧和空气组成的混合气体通入到高压反应釜中，继续以120r/min勻速搅动藻液,使通入的臭氧、空气和藻液均勻混合；
(3)、控制高压反应釜压力为0.8MPa，当达到O. 8 Mpa时，打开高压反应釜的排气阀使压力降至常压，然后再升压至O. 8吧&，当达到0.8 Mpa时，再次打开高压反应釜的排气阀使压力降至常压，循环升压、降压过程80次即得到破碎的藻类细胞；
(4)、打开反应釜，取出藻液，离心后取上清液，利用25mL体积比为I :1的由正己烷与乙酸乙酯组成的混合有机溶剂进行第一次液液萃取、分液，分别收集水相I与有机相I ;
(5)、取出步骤(4)得到的水相1，利用15mL体积比为I :1的由正己烷与乙酸乙酯组成的混合有机溶剂进行第二次液液萃取、分液，分别收集水相2与有机相3。
(6)、取出步骤(5)得到的水相2，利用10 ml体积比为I :1的由正己烷与乙酸乙酯组成的混合有机溶剂进行第三次液液萃取、分液，收集有机相3 ；。(7)、合并步骤(4)、(5)、(6)三步所得的有机相I、有机相2和有机相3并置入真空旋转蒸发仪器中，旋转蒸发30 min,即得藻类细胞中的生物油脂，其产率为24.3g/100g干藻。向上述所得的藻液所提取的生物油脂中加入浓度为2 mo I/L的KOH的甲醇溶液，其加入量按其占藻类细胞中的生物油脂的质量比计算，即藻类细胞中的生物油脂浓度为2mol/L的KOH的甲醇溶液约为1:13，剧烈搅拌进行酯化反应，酯化反应过程中控制搅拌转速为2800 rpm，时间为2 min，反应完成后即得生物柴油。上述所得的生物柴油，溶于I mL正己烷溶液后进行气相色谱-质谱检测发现，其主要成分为C16:0与C18 :0，按照国家标准分析方法(GB/T 22223-2008)确定其相对百分含量分别为40. 4%与48. 6%，符合国家GB/T 20828-2007《柴油机燃料调和用生物柴油 (BD100)》标准。实施例4
一种藻类细胞中的生物油脂，通过包括如下步骤的方法制备
(1)、量取200ml收获的藻液于I L的高压反应爸中,在120 r/min条件下搅拌5 min ；
(2)、打开臭氧发生器和空压机，按体积比即臭氧空气为I:150的比例控制臭氧和空气的总流量为2 L/min，将臭氧和空气组成的混合气体通入到高压反应釜中，继续以120r/min勻速搅动藻液,使通入的臭氧、空气和藻液均勻混合；
(3)、控制高压反应釜压力为O.4 MPa，当达到O. 4 Mpa时，打开高压反应釜的排气阀使压力降至常压，然后再升压至O. 4 10^，当达到0.4 Mpa时，再次打开高压反应釜的排气阀使压力降至常压，循环升压、降压过程80次即得到破碎的藻类细胞；
(4)、打开反应釜，取出藻液，离心后取上清液，利用25mL体积比为I :1的由正己烷与乙酸乙酯组成的混合有机溶剂进行第一次液液萃取、分液，分别收集水相I与有机相I ;
(5)、取出步骤(4)得到的水相1，利用15mL体积比为I :1的由正己烷与乙酸乙酯组成的混合有机溶剂进行第二次液液萃取、分液，分别收集水相2与有机相3。(6)、取出步骤(5)得到的水相2，利用10 ml体积比为I :1的由正己烷与乙酸乙酯组成的混合有机溶剂进行第三次液液萃取、分液，收集有机相3 ；。(7)、合并步骤(4)、(5)、(6)三步所得的有机相I、有机相2和有机相3并置入真空旋转蒸发仪器中，旋转蒸发30 min,即得藻类细胞中的生物油脂，其产率为22. 5 g/100g干藻。向上述所得的生物油脂中加入浓度为2 mol/L的KOH的甲醇溶液，其加入量按其占藻类细胞中的生物油脂的质量比计算，即藻类细胞中的生物油脂浓度为2 mol/L的KOH的甲醇溶液约为1:20，剧烈搅拌进行酯化反应，酯化反应过程中控制搅拌转速为2800 rpm,时间为2 min，反应完成后即得生物柴油。上述所得的生物柴油，溶于I mL正己烷溶液后进行气相色谱-质谱检测(生产厂家美国Agilent公司，型号7890)发现，其主要成分为C16:0与C18 :0，按照国家标准分析方法(GB/T 22223-2008)确定其相对百分含量分别为40. 8%与39. 2%，符合国家GB/T20828-2007《柴油机燃料调和用生物柴油(BD100)》标准。
以上所述仅是本发明的实施方式的举例，应当指出，对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明技术原理的前提下，还可以做出若干改进和变型，这些改进和变型也应视为本发明的保护范围。·
权利要求
1.一种藻类细胞中的生物油脂的制备方法，其特征在于首先将藻类细胞破碎，然后收集破碎的藻类细胞混合液并离心，取上清液用正己烷/乙酸乙酯混合有机溶剂进行第一次液液萃取，收集水相和有机相； 将第一次液液萃取得到的水相用正己烷/乙酸乙酯混合有机溶剂进行第二次液液萃取，收集水相和有机相； 将第二次萃取所得的水相用正己烷/乙酸乙酯混合有机溶剂进行第三次液液萃取，收集水相和有机相； 合并三次萃取所得的有机相真空蒸发去除正己烷/乙酸乙酯混合有机溶剂后所得的产物即为藻类细胞中的生物油脂。
2.如权利要求I所述的一种藻类细胞中的生物油脂的制备方法，其特征在于所述的藻类细胞破碎即首先是藻种培养与藻液获取，然后将收获的藻液放入高压反应釜中搅拌均勻，通入臭氧和空气的混合气体并搅拌均勻，加压至O. 4 O. 8Mpa,维持I 2s时间，打开反应釜排气阀释放压力至常压，这时过饱和的气体从藻液中释放出来； 重复上述的搅拌均匀，通入臭氧和空气的混合气体、加压，释压，过饱和的气体从藻液中释放的过程40 80个循环，即得到破碎的藻类细胞。
3.如权利要求2所述的一种藻类细胞中的生物油脂的制备方法，其特征在于所述的臭氧和空气混合气体按体积比即臭氧空气为I :150，总流量为2 L/min。
4.如权利要求3所述的一种藻类细胞中的生物油脂的制备方法，其特征在于第一次液液萃取时，按体积比计算，即上清液正己烷/乙酸乙酯混合有机溶剂为I :0. 3 ; 所述的正己烷/乙酸乙酯混合有机溶剂，即由正己烷和乙酸乙酯按体积比计算，即正己烷乙酸乙酯为I :1的比例混合而成。
5.如权利要求4所述的一种藻类细胞中的生物油脂的制备方法，其特征在于第二次液液萃取时，按体积比计算，即第一次液液萃取所得的水相正己烷/乙酸乙酯混合有机溶剂为 I :0· 2 ; 所述的正己烷/乙酸乙酯混合有机溶剂，即由正己烷和乙酸乙酯按体积比计算，即正己烷乙酸乙酯为I :1的比例混合而成。
6.如权利要求5所述的一种藻类细胞中的生物油脂的制备方法，其特征在于第三次液液萃取时，按体积比计算，即第二次液液萃取所得的水相正己烷/乙酸乙酯混合有机溶剂为 I :0· I ; 所述的正己烷/乙酸乙酯混合有机溶剂，即由正己烷和乙酸乙酯按体积比计算，即正己烷乙酸乙酯为I :1的比例混合而成。
7.如权利要求1、2、3、4、5或6所述的一种藻类细胞中的生物油脂的制备方法所得的藻类细胞中的生物油脂。
8.如权利要求7所述的藻类细胞中的生物油脂在制备生物柴油中的应用，其特征在于步骤如下 在藻类细胞中的生物油脂中加入浓度为2 mo I/L的KOH的甲醇溶液，剧烈搅拌进行酯化反应，反应过程中搅拌转速为2800 rpm，时间为2 min，酯化反应完成后，静置分层，上层所得产物即为生物柴油； 所述的浓度为2mol/L的KOH的甲醇溶液的加入量按其占藻类细胞中的生物油脂质量比 计算，即藻类细胞中的生物油脂浓度为2mol/L的KOH的甲醇溶液约为I : 10-20。
全文摘要
本发明公开了一种藻类细胞中的生物油脂的制备方法，即首先将藻类细胞破碎，收集破碎的藻类细胞混合液离心，取上清液用正己烷/乙酸乙酯混合有机溶剂进行第一次液液萃取，收集水相和有机相；将第一次液液萃取得到的水相用正己烷/乙酸乙酯混合有机溶剂进行第二次液液萃取，收集水相和有机相；将第二次萃取所得的水相用正己烷/乙酸乙酯混合有机溶剂进行第三次液液萃取，收集水相和有机相；合并三次萃取所得的有机相真空蒸发即得到藻类细胞中的生物油脂，在藻类细胞中的生物油脂中加入KOH的甲醇溶液，剧烈搅拌进行酯化反应，即得符合国家GB/T20828-2007《柴油机燃料调和用生物柴油(BD100)》标准的生物柴油。
文档编号C11B3/12GK102899166SQ201210431210
公开日2013年1月30日 申请日期2012年11月2日 优先权日2012年11月2日
发明者李亮, 黄远星, 许智华, 金小颖, 李洋洋, 方学友, 宋翠红, 崔晨晨 申请人:上海理工大学