专利名称：多功能激光扫描共聚焦显微镜用培养观察池的制作方法
技术领域：
本发明涉及一种培养观察池。
背景技术：
目前，医学界普遍采用的激光扫描共聚焦显微镜专用培养皿是在底板1
上开一个直径为10mm左右的圆孔1-1，再用胶粘上一个0.13mm 0.17mm厚 的盖玻片2，圆孔1-1的壁与盖玻片2之间形成圆柱形空池用于培养细胞， 荧光探针标记也在圆柱形空池中进行(如图1所示)。上述培养皿存在如下缺 点 一、由于盖玻片2很薄且易碎，因此给加工带来难度，成品率低；二、 培养皿的深度较浅，定量加入的培养液极易流出来，而后向培养液中加入药 物，因培养液流出使预先计算好的药物浓度发生改变，从而降低了实验精度； 三、培养皿的深度较浅还会在灌流时产生虹吸现象。
发明内容
本发明的目的是为了解决现有的激光扫描共聚焦显微镜专用培养皿存在 的加工难度大、成品率低、实验精度低和易产生虹吸现象的问题，进而提供 一种多功能激光扫描共聚焦显微镜用培养观察池。
本发明的技术方案是多功能激光扫描共聚焦显挺镜用培养观察池包括 池体，所述池体由池壁板和池底板组成，所述池壁板和池底板由上至下制成 一体，所述池底板的上端面上沿池体的轴向开有培养观察池，所述池底板的 上端面上沿池体的轴向还开有两个灌流池，所述两个灌流池沿培养观察池的 轴线对称设置，所述两个灌流池均与培养观察池连通，且两个灌流池的深度
h均小于培养观察池的深度H，所述培养观察池的底面到池底板的下端面的 距离S为0.1mm lmm。
本发明与现有技术相比具有以下有益效果本发明通过模具浇铸一次成 型，易于加工，成品率达到99.8%以上；本发明的培养观察池与两个灌流池 连通，可定时或随时对培养观察池进行灌流更换培养液，控制培养液量，避 免了培养液的流失，给细胞生长提供一个良好环境，从而保证了预先计算好的药物浓度恒定，提高了实验精度；另外本发明的培养观察池与两个灌流池连通还有效避免了虹吸现象的发生。
图l是现有的激光扫描共聚焦显微镜专用培养皿的结构示意图，图2是本发明的主视剖视图，图3是图2的俯视图，图4是现有的激光扫描共聚焦显微镜专用培养皿培养的急性早幼粒细胞白血病NB4细胞在激光扫描共聚焦显微镜下的观察图，图5是与图4相隔2分钟的观察图，图6是本发明培养的急性早幼粒细胞白血病NB4细胞在激光扫描共聚焦显微镜下的观察图，图7是与图6相隔2分钟的观察图。
具体实施例方式
具体实施方式
一(参见图2和图3)本实施方式的多功能激光扫描共聚
焦显微镜用培养观察池包括池体3，所述池体3由池壁板4和池底板5组成，所述池壁板4和池底板5由上至下制成一体，所述池底板5的上端面上沿池体3的轴向开有培养观察池5-1，所述池底板5的上端面上沿池体3的轴向还开有两个灌流池5-2，所述两个灌流池5-2沿培养观察池5-1的轴线对称设置，所述两个灌流池5-2均与培养观察池5-1连通，且两个灌流池5-2的深度h均小于培养观察池5-1的深度H，所述培养观察池5-1的底面到池底板5的下端面的距离S为0.1mm lmm。
具体实施方式
二(参见图2)本实施方式的培养观察池5-1的底面到池底板5的下端面的距离S为0.13mm。如此设置，实验精度更高，激光扫描共聚焦显微镜下的观察图清晰。其它组成和连接关系与具体实施方式
一相同。
具体实施方式
三(参见图2)本实施方式的培养观察池5-1的底面到池底板5的下端面的距离S为0.17mm。如此设置，实验精度更高，激光扫描共聚焦显微镜下的观察图清晰。其它组成和连接关系与具体实施方式
一相同。
具体实施方式
四(参见图2)本实施方式的培养观察池5-1的底面上涂有细胞生长基质涂层7。如此设置，縮短了细胞贴壁所需的时间，促使血液原代细胞和悬浮细胞完全贴壁。其它组成和连接关系与具体实施方式
一、二或三相同。
具体实施方式
五(参见图2)本实施方式的培养观察池5-l的底面上的
4细胞生长基质涂层7为多聚赖氨酸涂层。分子量为7 30 ku多聚赖氨酸(poly-lysine)可以使细胞贴壁时间縮短至1小时，急性分离细胞贴壁时间縮短至30分钟；并促使血液原代细胞、悬浮细胞完全贴壁，血液原代细胞及悬浮细胞的贴壁时间在10小时以内。其它组成和连接关系与具体实施方式
四相同。
具体实施方式
六(参见图2)本实施方式的培养观察池5-l的底面上的细胞生长基质涂层7为纤维连接蛋白涂层。纤维连接蛋白(fibronectin)可以使贴壁细胞贴壁时间縮短至4小时，急性分离细胞贴壁时间縮短至30分钟；并促使血液原代细胞、悬浮细胞完全贴壁，悬浮细胞的贴壁时间在12小时以内，血液原代细胞贴壁时间在11小时以内。其它组成和连接关系与具体实施方式
四相同。
具体实施方式
七(参见图2)本实施方式的培养观察池5-l的底面上的细胞生长基质涂层7为层黏蛋白涂层。层黏蛋白(laminin)可以使贴壁细胞贴壁时间縮短至3.5小时，急性分离细胞贴壁时间縮短至1小时；并促使血液原代细胞、悬浮细胞完全贴壁，悬浮细胞的贴壁时间在7小时以内，血液原代细胞贴壁时间在8小时以内。其它组成和连接关系与具体实施方式
四相同。
具体实施方式
八(参见图2)本实施方式的培养观察池5-1的底面上的细胞生长基质涂层7为胶原涂层。胶原可以使贴壁细胞贴壁时间縮短至3.5小时，急性分离细胞贴壁时间縮短至25分钟；并促使血液原代细胞、悬浮细胞完全贴壁，悬浮细胞的贴壁时间在8小时以内，血液原代细胞贴壁时间在9小时以内。其它组成和连接关系与具体实施方式
四相同。
具体实施方式
九(参见图2)本实施方式的培养观察池5-l的底面上的细胞生长基质涂层7为韧黏素涂层。韧黏素(tenascins)可以使贴壁细胞贴壁时间縮短至5小时，急性分离细胞贴壁时间縮短至30分钟；并促使血液原代细胞、悬浮细胞完全贴壁，悬浮细胞的贴壁时间在9小时以内，血液原代细胞贴壁时间在12小时以内。其它组成和连接关系与具体实施方式
四相同。
具体实施方式
十(参见图2)本实施方式的培养观察池5-1的底面上的细胞生长基质涂层7为层粘蛋白涂层。层粘蛋白(vitronectin)可以使贴壁细胞贴壁时间縮短至4.5小时，急性分离细胞贴壁时间縮短至30分钟；并促使血液原代细胞、悬浮细胞完全贴壁，悬浮细胞的贴壁时间在8小时以内，血液原代细胞贴壁时间在9小时以内。其它组成和连接关系与具体实施方式
四相同。
具体实施方式
十一(参见图2)本实施方式的多功能激光扫描共聚焦显微镜用培养观察池还增加有池盖6，所述池盖6盖装在池体3的上端面上。如此设置，有效的防止了药物的挥发，避免了预先计算好的药物浓度因药物因挥发而发生改变，使得实验精度更精准。其它组成和连接关系与具体实施方式
四相同。
采用现有的培养皿及本发明在相同的条件下对急性早幼粒细胞白血病NB4细胞，用台氏液洗涤两次，然后用5nmol/L的Fluo-3/AM染色，再加入0.03%PluronicF-127在37。C恒温水培养中孵育45min，然后用台氏液再洗涤两次去除细胞外残留的Fluo-3/AM，最后在激光扫描共聚焦显微镜下观察，其观察图如图4和图5所示。所述激光扫描共聚焦显微镜由日本奥林巴斯株会社(Olympus)生产，其型号为Fluoview-FV300。由图4和图5可知，采用现有的培养皿得到的图像模糊，而且其中的细胞移动明显；由图6和图7可知，采用本发明得到的图像清晰，细胞移动不明显，可见细胞已经完全贴在培养观察池壁上。
权利要求
1、一种多功能激光扫描共聚焦显微镜用培养观察池，它包括池体(3)，其特征在于所述池体(3)由池壁板(4)和池底板(5)组成，所述池壁板(4)和池底板(5)由上至下制成一体，所述池底板(5)的上端面上沿池体(3)的轴向开有培养观察池(5-1)，所述池底板(5)的上端面上沿池体(3)的轴向还开有两个灌流池(5-2)，所述两个灌流池(5-2)沿培养观察池(5-1)的轴线对称设置，所述两个灌流池(5-2)均与培养观察池(5-1)连通，且两个灌流池(5-2)的深度h均小于培养观察池(5-1)的深度H，所述培养观察池(5-1)的底面到池底板(5)的下端面的距离δ为0.1mm～1mm。
2、 根据权利要求1所述多功能激光扫描共聚焦显微镜用培养观察池，其特征在于所述培养观察池(5-1)的底面到池底板(5)的下端面的距离S为0.13mm。
3、 根据权利要求1所述多功能激光扫描共聚焦显微镜用培养观察池，其特征在于所述培养观察池(5-1)的底面到池底板(5)的下端面的距离S为0.17mm。
4、 根据权利要求l、 2或3所述多功能激光扫描共聚焦显微镜用培养观察池，其特征在于所述培养观察池(5-1)的底面上涂有细胞生长基质涂层(7)。
5、 根据权利要求4所述多功能激光扫描共聚焦显微镜用培养观察池，其特征在于所述培养观察池(5-1)的底面上的细胞生长基质涂层(7)为多聚赖氨酸涂层、纤维连接蛋白涂层、层黏蛋白涂层、胶原涂层、韧黏素涂层或层粘蛋白涂层。
6、 根据权利要求4所述多功能激光扫描共聚焦显微镜用培养观察池，其特征在于所述培养池还包括池盖(6)，所述池盖(6)盖装在池体(3)的上端面上。
全文摘要
一种多功能激光扫描共聚焦显微镜用培养观察池，它涉及一种培养观察池。本发明的目的是为了解决现有的激光扫描共聚焦显微镜专用培养皿存在的加工难度大、成品率低、实验精度低和易产生虹吸现象的问题。本发明的池壁板和池底板制成一体，池底板的上端面上开有培养观察池，池底板的上端面上还开有两个灌流池，两个灌流池沿培养观察池的轴线对称设置，两个灌流池均与培养观察池连通，且两个灌流池的深度h均小于培养观察池的深度H，培养观察池的底面到池底板的下端面的距离为0.1mm～1mm。本发明易于加工，成品率达到99.8％以上；本发明避免了细胞培养液的流失，从而保证了预先计算好的药物浓度恒定，提高了实验精度；另外本发明还有效避免了虹吸现象的发生。
文档编号G02B21/00GK101498832SQ200910071528
公开日2009年8月5日 申请日期2009年3月12日 优先权日2009年3月12日
发明者晋 周, 巍 王, 肖建民 申请人:周 晋;王 巍