专利名称：用生物细胞制得含核酸的营养液和核酸原料的方法
技术领域：
本发明涉及一种制得核酸营养液、核酸原料的方法，特别是利用对撞式高压水刀切割法、化学方法从生物细胞中制得含核酸的营养液和核酸原料的方法。
中国发明专利公开了一种申请号为96115417.9，名称叫从天然食品中制取核酸原料的方法，它以天然食品包括小豆、绿豆、蚕豆、豌豆、高粮米、玉米、小米、大麦、小麦以及水果为原料。将其研磨成80目以上粉状物或糊状物，通过匀质、细胞裂解在物料中加入含有0.1-0.25M的氯化钠(Nacl)溶液稀释，再在稀释液中加入碱，调整PH值，然后在90℃-100℃的条件下匀质、裂解、再将裂解液加入酸，调PH值，然后离心获得含核酸的上清液。再经过纯化，干燥获得核酸原料，其不足是在细胞裂解过程中，需大量的氯化钠溶液、碱、酸，且细胞裂解时间长，通常需要40-60分钟，其生产成本高，有害液体的排放还会污染环境。
本发明的目的在于提供一种对撞式高压水刀切割法，从生物细胞中制得含核酸的营养液和核酸原料的方法，其工艺简单，生产周期短，原料来源广泛，生产成本低。
本发明的目的可以通过以下措施来实现一种以对撞式高压水刀切割的工艺，用生物细胞制得含核酸的营养液和核酸原料的方法，主要包括如下工艺步骤一.原料及初处理
取生物原料如植物的桔杆、叶、果实，含水果、黄豆、绿豆、黑豆、赤小豆、豇豆、小豆、蚕豆、豌豆、大米、豆粕、玉米、小米、大麦、小麦、高梁米、洋玉、洋葱；再如动物猪、牛、羊、鱼的肌肉组织；又如微生物类酵母菌；将其研磨成80-120目浆状液。
二.所得浆状液，输入高压水刀，经高压水刀的喷口喷出，与相对应的另一支高压水刀喷出的浆状液作直线对撞切割。浆液中的原料微粒以高压水刀内高压水流为载体，用两支高压水刀喷出的高压态的浆状液流的对撞切割而产生高能效应，通过高压水刀喷口喷出的浆状液流量和压力的调整得到最佳的对撞切割效应。直接对生物细胞作机械切割，使生物细胞膜、核裂解。
三.将含生物细胞膜、核裂解的浆状液，再输入对撞式高压水刀进行第二次、第三次机械切割，使生物细胞膜、核裂解后释放出的D.N.A(脱氧核糖核酸)，R.N.A(核糖核酸)的长链得到充分的切割，而获得含有核酸、核苷酸、核苷的浆状液。
四.含有核酸、核苷酸、核苷的浆状液通过静置、沉淀、离心后获得的上清液即是含核酸、核苷酸、核苷的营养液，再通过高温消毒，即可进入灌装线，灌装。实现纯天然无化学物质残留的核酸营养液，不需氯化钠(Nacl)、碱、酸等物质的消耗，实现污染零排放。
五.核酸提取液的纯化取含核酸的营养液以1∶7-15的比例用饱和硫酸胺混合稀释，离心10-20分钟，去除蛋白质，将氯化钠加入进已经去除蛋白质的含核酸的上清液中，使含核酸的上清液中氯化钠含量达到3M-6M，再离心10-20分钟，得到沉淀核酸，在已沉淀的核酸中加蒸馏水稀释、其两者的比例1∶1-2，然后用生物膜真空抽滤除去氯化钠，将去除氯化钠的核酸液进行干燥，制得核酸原料。
六.将含核酸的营养液用压滤法，收集核酸。把含核酸的营养液温度控制在55℃-90℃，用压迫过滤的方法，并在压滤过程中加入清水助滤，将液体核酸挤压出来，溶入等电点罐中沉淀，此时把温度控制在3℃-16℃之间，并加以搅拌，再加入3M-6M的硫酸，获得分离液，此时分离液的PH值应控制在2-3之间，当搅拌至出现絮状核酸时，停止搅拌，静止保温，再调等电点静置5小时以上，絮状固体与液体自然分离，去除上清液，而获得湿核酸，再把1-4倍于湿核酸体积的高浓度酒精，加入湿核酸中搅拌10-30分钟后静置，酒精与核酸分离后，放出酒精，将酒精清洗后的湿核酸干燥后获得纯核酸原料。
本发明与现有技术相比具有如下特点1.用研磨的物理方法将生物材料研磨成含微粒的浆液状，该浆液中的微粒以水作为载体，再输入对撞式高压水刀切割，经对撞式高压切割水刀喷口，高压喷出，并直线对撞于另一支高压切割水刀喷口喷出的含生物材料微粒的浆状液，从而对生物细胞进行高能的机械对撞切割，再通过第二次、第三次的高压对撞切割使生物细胞裂解后释放出的D.N.A、R.N.A长链得到进一步的高能机械切割，从而获得含核酸、核苷酸、核苷的营养液，其生产工艺简单、纯天然、无污染物残留，不需要氯化钠、碱、酸材料的消耗，生产成本显著下降，实现零排放污染。
2.在核酸原料纯化过程中，不添加有害的化学试剂，进行抽提、透析，因此不会污染环境。
3.原料来源广泛，其副产物分离渣可作为饲料利用，无丢弃物，利用率100％。
实施例含核酸、核苷酸、核苷营养液的制取取绿豆50Kg，将其洗净去杂，加清水550Kg浸泡，研磨成80-120目浆状液，把浆状液输入高压切割水刀喷出，与另一支高压切割水刀喷出的浆状液进行直线对撞切割，通过对高压切割水刀喷口喷出的浆液流量和压力的调整得到最佳切割效应，获得细胞膜、核已裂解的浆状液。再将浆状液做第二次、第三次高压对撞切割，使细胞释放出的D.N.A(脱氧核糖核酸)，R.N.A(核糖核酸)的长链得到进一步的高能机械切割，而获得含核酸、核苷酸、核苷的浆状液，再经静置、沉淀、分离后所得的上清液即为含核酸、核苷酸、核苷的营养液，经高温灭菌、分装。对其检测所得结果如下无化学成份核酸(含核苷酸、核苷) 2.86g/100mlD.N.A∶R.N.A 1∶10蛋白质 3.0％锌(Zn) 4.1mg/Kg锰(Mn) 1.31mg/Kg磷(P)3.34mg/Kg铁(Fe) 8.48mg/Kg镁(Mg) 24.65mg/Kg。
权利要求
1.以对撞式高压水刀切割法，用生物细胞制得含核酸的营养液和核酸原料的方法，其特征在于A.原料及初处理取天然植物如植物桔杆、植物叶片、植物果实，如水果、豆类、谷物类，蔬菜类如洋玉、洋葱，动物如猪、牛、羊、鱼的肌肉，微生物类如酵母菌。清洗去杂，研磨成80-120目的浆状液。B.将浆状液输入高压切割水刀，经高压水刀的喷口喷出与相对应的另一支高压切割水刀喷出的浆状液作直线对撞切割。通过对高压切割水刀喷口喷出的液体流量和压力的调整，得到最佳的对撞切割效应，浆液中的原料微粒以高压水刀内高压水流为载体，通过两支高压水刀喷出的高压态的浆状液流的直线对撞而产生高能效应，直接对生物细胞作机械切割，使生物细胞膜、核裂解。C.将含生物细胞膜、核裂解的浆状液再输入对撞式高压切割水刀进行第二次、第三次机械切割，使细胞膜、核裂解后释放出的D.N.A；R.N.A的长链得到充分的切割而获得含有核酸、核苷酸、核苷的浆状液。D.把所得的浆状液通过静置、沉淀、离心后所得的上清液即是含核酸、核苷酸、核苷的营养液，通过高温消毒，即可灌装，实现纯天然，无化学物质残留，不使用氯化钠、碱、酸。生产成本显著下降，实现零污染排放。
2.核酸提取液的纯化根据权利要求1所述制取核酸原料的方法取含核酸的营养液以1∶7-15的比例用饱和硫酸胺混合稀释，离心10-20分钟，去除蛋白质，将氯化钠加入进已经去除蛋白质的含核酸的上清液中，使含核酸的上清液中氯化钠含量达到3M-6M，再离心10-20分钟，得到沉淀核酸，在已沉淀的核酸中加蒸馏水稀释、其两者的比例1∶1-2，然后用生物膜真空抽滤除去氯化钠，将去除氯化钠的核酸液进行干燥，制得核酸原料。
3.根据权利要求1所述制取核酸原料的方法将含核酸的营养液用压滤法，收集核酸。把含核酸的营养液温度控制在55℃-90℃，用压迫过滤的方法，并在压滤过程中加入清水助滤，将液体核酸挤压出来，溶入等电点罐中沉淀，此时把温度控制在3℃-16℃之间，并加以搅拌，再加入3M-6M的硫酸，获得分离液，此时分离液的PH值应控制在2-3之间，当搅拌至出现絮状核酸时，停止搅拌，静止保温，再调等电点静置5小时以上，絮状固体与液体自然分离，去除上清液，而获得湿核酸，再把1-4倍于湿核酸体积的高浓度酒精，加入湿核酸中搅拌10-30分钟后静置，酒精与核酸分离后，放出酒精，将酒精清洗后的湿核酸干燥后获得纯核酸原料。
全文摘要
以对撞式高压水刀切割工艺，用生物细胞制取含核酸、核苷酸、核苷的营养液和核酸原料。用植物的秸秆、叶、果实，它包括水果、豆类、玉米、大米、洋玉、洋葱、大麦、小麦、豆粕，动物类如猪、牛、羊、鱼的肌肉组织，以及微生物如酵母菌研磨成浆状液，再输入高压水刀，经喷口喷出与另一支高压水刀喷出的浆状液作直线对撞切割。使生物细胞膜、核裂解，通过静置、分离而获得纯天然核酸营养液，经高温消毒后即可灌装。以上生产流程不需加入氯化钠、碱、酸，从而得到工艺简单，成本低，高效益，零排放污染，零残留污染的营养液。在核酸原料提纯中也不添加有害的化学试剂，因此不会污染环境。
文档编号C07H21/00GK1891238SQ20051002122
公开日2007年1月10日 申请日期2005年7月6日 优先权日2005年7月6日
发明者唐毓强 申请人:唐毓强