专利名称：硅胶溶液在人体口腔细胞dna提取中的应用的制作方法
技术领域：
本发明涉及生物技术领域，更具体地，本发明涉及一种从样品中提取DNA的方法。
背景技术：
目前，从细胞样品中提取DNA的技术已经被越来越广泛地应用，获得的DNA比如可用于各种检测或科学研究。
从人体口腔细胞中提取DNA比其他方式提取DNA具有简单、快捷、无创口、洁净的特点，正越来越被广泛采用。
目前提取DNA的方法主要有酚氯仿法和DNA抽提试剂盒法两种。酚氯仿法主要用于从人体全血中提取DNA，有时也用于提取人体口腔细胞的DNA。由于其成本低，所以被广泛使用。此方法主要缺点是在提取过程中加入了饱和酚和氯仿-异戊醇来获得纯化后的DNA，因而引起酚-氯仿的环境污染。并且，由于在操作过程中需要多次用移液枪取上清，对操作者要求较高。所以酚氯仿法获取的DNA收获率低，纯度不高。
用DNA抽提试剂盒法来提取DNA，虽然提取过程相对酚氯仿法操作简单、步骤少、耗时较短，同时有效地降低了污染的风险。并且其获得DNA的效果比酚氯仿法好，但由于其成本高，一次提取DNA量小，无法在大规模生产中使用。
虽然有一些技术采用膜或树脂(如硅胶膜)来吸附和分离DNA，但是这种方法并不适合生物样品量很少的场合，例如对仅1ml左右的口腔样品进行检测；并且，这种方法也不适用于一次性处理多种样品。此外，口腔细胞中含有多种其它种类细胞样品中没有的酶和降解物质，利用传统的方法提取口腔细胞DNA往往遇到DNA得率低甚至完全被降解的问题，目前也没有一种特别针对口腔细胞样品的DNA提取产品。
因此，目前现有技术迫切需要开发一种收获率高、程序简单、成本低廉的提取口腔细胞DNA的方法。
发明内容
本发明的目的在于提供一种从口腔细胞样品中提取DNA的方法。所述方法具有收获率高、程序便捷、成本低廉的特点。
在本发明的第一方面，提供一种从口腔细胞样品中提取DNA的方法，包括步骤(1)裂解欲抽提DNA的口腔细胞样品，获得细胞裂解液；(2)在(1)获得的细胞裂解液中加入硅胶颗粒，从而使得DNA吸附于硅胶颗粒上，获得吸附有DNA的硅胶颗粒；(3)分离出吸附有DNA的硅胶颗粒；(4)从步骤(3)中获得的吸附有DNA的硅胶颗粒上获取DNA。
在另一优选例中，所述的细胞样品的数量为2-10000种，较佳地为10-5000种，更佳地为30-2000种。
在另一优选例中，所述的细胞样品位于24孔、48孔、96孔、192孔、384孔等多孔板的各孔中。
在另一优选例中，所述的硅胶颗粒以硅胶悬浊液形式加入，其中悬浊液中硅胶颗粒的平均粒径为0.5～10μm。
在另一优选例中，所述硅胶颗粒的粒径为1-5μm。
在另一优选例中，所述硅胶颗粒的pH值为1.0-3.0；更优选的，所述硅胶颗粒的pH值为1.5-2.5；最优选的，所述硅胶颗粒的pH值约为2.0。
在另一优选例中，所述的口腔细胞样品中含有口腔上皮细胞(比如口腔粘膜上皮细胞)，所述的口腔上皮细胞采集自哺乳动物(比如人)的口腔(比如口腔粘膜、舌苔等)中。
在另一优选例中，在步骤(1)中，包括在1体积口腔细胞样品中加入0.2-0.6体积(优选0.3-0.5体积，比如为0.4体积)的抽提缓冲液，在56±5℃中温育1-30分钟(优选温育2-15分钟，比如可温育5分钟)；以及加入0.4-0.9体积(优选0.5-0.8体积，比如为0.65体积)的裂解缓冲液。
在另一优选例中，在步骤(2)中，所述的硅胶颗粒的用量为0.1-10体积(优选0.5-5体积，更优选0.5-3体积，比如为1体积)；在另一优选例中，硅胶颗粒的用量为0.1-10mg；优选0.5-5mg，更优选0.5-3mg，比如为1mg。
在另一优选例中，在步骤(3)中，通过离心分离吸附有DNA的硅胶颗粒；并且在步骤(4)中，在所述的吸附有DNA的硅胶颗粒中加入0.01-0.1体积(优选0.02-0.6体积，比如为0.035体积)的洗脱缓冲液，在65±5℃温育5-60分钟(优选10-50分钟，比如为30分钟)，获取被洗脱的DNA。
在另一优选例中，在离心分离吸附有DNA的硅胶颗粒之后和加入洗脱缓冲液之前，还包括洗涤吸附有DNA的硅胶颗粒。
在另一优选例中，采用以下溶液洗涤吸附有DNA的硅胶颗粒(a)洗涤缓冲液；(b)50-90％(比如70％)乙醇；(c)95-100％(比如99.5％)丙酮；或(d)采用(a)、(b)、(c)中的两种或两种以上分别进行洗涤。
在另一优选例中，加入的洗涤缓冲液为0.2-0.6体积(优选0.3-0.5体积，比如0.4体积)；或加入的乙醇为0.1-0.6体积(优选0.2-0.5体积，比如0.3-0.4体积)；或加入的丙酮为0.1-0.6体积(优选0.2-0.5体积，比如0.4体积)。
在另一优选例中，所述的抽提缓冲液为5-15mM/l(优选8-12mM/l，如10mM/l)Tris-HCl、0.2-0.8M/l(优选0.3-0.6M/l，如0.5M/l)EDTA、0.2-0.8mg/l(优选0.3-0.6mg/l，如0.5mg/ml)丙酮酸激酶、和0.1-0.5％体积(优选0.1-0.3％体积，如0.2％体积)SDS的混合液(PH7.0～7.5)；或所述的裂解缓冲液为5-15M/l(优选6-10M/l，如8M/l)异硫氰酸胍、5-15mM/l(优选8-12mM/l，如10mM/l)Tris-HCl、30-50g/l(优选35-45g/l，如40g/l)Triton X-100混合液、和10-30mM/l(优选15-25mM/l，如20mM/l)EDTA的混合液(PH6.0-7.0)；或所述的洗涤缓冲液为3-9M/l(优选4-8M/l，如6M/l)异硫氰酸胍、和5-15mM/l(优选8-12mM/l，如10mM/l)Tris-HCl的混合液(PH6.0-7.0)；或所述的洗脱缓冲液为5-15mM/l(优选8-12mM/l，如10mM/l)Tris、和0.2-5mM/l(优选0.3-3mM/l，优选1mM/l)EDTA混合液(PH7.5-8.5)。
在另一优选例中，所述的方法包括以下步骤(1)提取1.5ml口腔细胞样品放入样品管内；(2)加600μl抽提缓冲液，放入56℃温浴中充分反应；(3)加1ml裂解缓冲液，1.5mg(即加水配制成80μl硅胶悬浊液)硅胶颗粒混匀；(4)充分离心后，弃上清；(5)600μl洗涤缓冲液重悬；(6)充分离心后弃上清；(7)500μl 70％乙醇重悬两次充分离心；(8)500μl丙酮重悬充分离心；(9)室温烘干2-5min；(10)加50μl洗脱缓冲液65℃溶解；(11)离心，取上清，其中含有所需的DNA。
在本发明的第二方面，提供一种提取口腔细胞DNA的试剂盒，所述的试剂盒中包括(1)第一容器，以及位于第一容器内的硅胶颗粒(在另一优选例中，所述的硅胶颗粒为含有粒径为0.5～10μm硅胶颗粒的硅胶悬浊液)，或硅胶悬浊液；(2)第二容器，以及位于第二容器内的抽提缓冲液，并且，所述的抽提缓冲液为5-15mM/l(优选8-12mM/l，如10mM/l)Tris-HCl、0.2-0.8M/l(优选0.3-0.6M/l，如0.5M/l)EDTA、0.2-0.8mg/l(优选0.3-0.6mg/l，如0.5mg/ml)丙酮酸激酶、和0.1-0.5％体积(优选0.1-0.3％体积，如0.2％体积)SDS的混合液(PH7.0～7.5)；(3)第三容器，以及位于第三容器内的裂解缓冲液，并且，所述的裂解缓冲液为5-15M/l(优选6-10M/l，如8M/l)异硫氰酸胍、5-15mM/l(优选8-12mM/l，如10mM/l)Tris-HCl、30-50g/l(优选35-45g/l，如40g/l)Triton X-100混合液、和10-30mM/l(优选15-25mM/l，如20mM/l)EDTA的混合液(PH6.0-7.0)；和(4)第四容器，以及位于第四容器内的洗脱缓冲液，并且，所述的洗脱缓冲液为5-15mM/l(优选8-12mM/l，如10mM/l)Tris、和0.2-5mM/l(优选0.3-3mM/l，优选1mM/l)EDTA混合液(PH7.5-8.5)。
在另一优选例中，所述的试剂盒中还包括第五容器，以及位于第五容器中的洗涤缓冲液，并且，所述的洗涤缓冲液为3-9M/l(优选4-8M/l，如6M/l)异硫氰酸胍、和5-15mM/l(优选8-12mM/l，如10mM/l)Tris-HCl的混合液(PH6.0-7.0)。
在另一优选例中，所述的试剂盒中还包括第六容器，以及位于第六容器中的50-90％(比如70％)乙醇。
在另一优选例中，所述的试剂盒中还包括第七容器，以及位于第七容器中的95-100％(比如99.5％)丙酮。
在另一优选例中，所述的试剂盒中还包括从口腔细胞中提取DNA的方法说明书。
本发明的其它方面由于本文的公开内容，对本领域的技术人员而言是显而易见的。
图1显示了从样品中提取DNA的方法的一种优选方式的流程图。
图2显示了未进行RNaseA消化的抽提电泳的结果。其中，1、2为硅胶吸附法；3、4为酚-氯仿法；5、6为DNA抽提试剂盒(博光)法抽提。
图3显示了经RNaseA 55℃30处理分钟后的电泳结果。其中，1、2为硅胶吸附法；3、4为酚氯仿法；5、6为DNA抽提试剂盒(博光)法抽提。
图4显示了PCR产物的电泳检测(Taq l，zdd)结果。其中，1、2为硅胶吸附法；3、4为酚氯仿法；5、6为DNA抽提试剂盒(博光)法抽提。
具体实施例方式
本发明人经过广泛而深入的研究，发现悬浮状态的硅胶颗粒具有的很强的吸附DNA的能力，因此特别适合从少量样品中快速提取DNA。通过优化条件，本发明开发了一种收获率高且操作方便，适合从少量样品中快速提取DNA的新方法，该方法适用于大规模的DNA提取。基于此完成了本发明。
更具体的，本发明的方法基本按照裂解、吸附、清洗、洗脱的过程将DNA提取出来。由于让DNA吸附在硅胶颗粒上，并进行不断地清洗提取，最后从硅胶颗粒上洗脱出纯化的DNA，故命名为“硅胶吸附法”。
硅胶吸附法通过用硅胶吸附住DNA，通过采用本发明所提供的试剂对吸附了DNA的硅胶在溶液中沉淀或不沉淀的状态进行控制。从而能更方便的处理上清，避免操作复杂和污染。能够在相对较短时间内，对大批量人体口腔细胞样品进行快速的DNA提取。
本发明人特别针对人体口腔细胞的特点来设计硅胶溶液以及配制适于口腔细胞提取的各种溶液(包括抽提缓冲液、裂解缓冲液等)。
细胞样品本发明的方法适合从任何细胞样品中提取DNA，比如可用本发明的方法从口腔细胞样品、血液样品等中提取DNA。特别优选的，本发明的方法适合用于从口腔细胞中提取DNA。
在本发明的优选方式中，所述的口腔细胞样品中含有口腔上皮细胞(比如口腔粘膜上皮细胞)，所述的口腔上皮细胞采集自哺乳动物(比如人)的口腔(比如口腔粘膜、舌苔等)中。
在本发明的优选方式中，所述的口腔细胞样品直接获自哺乳动物的口腔中，比如可用DNA采样拭或其它刮取工具从口腔粘膜或舌苔等处采集获得。所获得的口腔细胞样品的量可以为0.1-50ml，一般的为0.1-10ml，比如可以是0.1ml、0.2ml、0.5ml、1ml、1.5ml、2ml、3ml、5ml等。
在本发明的优选方式中，一次可收集多种细胞样品，同时用于DNA提取，所述的细胞样品的数量为2-10000种，较佳地为10-5000种，更佳地为30-2000种。
在本发明的优选方式中，所述的细胞样品位于48孔、96孔、192孔、384孔等多孔板的各孔中，便于大规模地进行提取操作。
可吸附DNA的吸附材料本发明中，采用的吸附DNA的物质是硅胶。硅胶是一种坚硬无定形链状和网状结构的硅酸聚合物颗粒，其分子式为SiO2·nH2O。一般常用的硅胶有球型、无定型、加工成型及粉末状四种。
在本发明的优选例中，将硅胶粉末(购自Sigma公司，如批号为S-5631的硅胶产品)配制成硅胶悬浊液(悬浊液中悬浮有硅胶颗粒)，用作吸附剂。在配制前，硅胶粉末粒径为0.5～10μm；通过将粉末加入1∶1-3体积(优选约1∶2体积)水中沉淀制备后，获得硅胶悬浊液，其pH约为2.0。在本发明的更特别的优选方式中，在制备时还包括去除颗粒粒径小于1μm的硅胶颗粒，获得硅胶悬浊液中颗粒粒径为1～5μm。
用于口腔细胞DNA提取的溶液针对从口腔中获得的口腔细胞样品的特点以及硅胶的吸附原理，本发明人设计了对于口腔细胞DNA提取特别有效的抽提、裂解、洗涤和洗脱溶液。下述的溶液成份对于口腔细胞DNA的提取特别有效。
本发明中采用的溶液成份主要如下(1)抽提缓冲液用于裂解细胞，并除去细胞中全部或部分的蛋白；在本发明的一个优选方式中，采用Tris-HCl，EDTA，PK(丙酮酸激酶)，SDS的混合液。
(2)裂解缓冲液用于裂解细胞，在本发明的一个优选方式中，采用GUSCN(异硫氰酸胍)，EDTA，Tris-HCl，Triton X-100的混合液。
(3)洗涤缓冲液用于清洗吸附材料上残留的液体或杂质；在本发明的一个优选方式中，采用GUSCN，Tris-HCl的混合液。应理解，只要能够将吸附有DNA的硅胶颗粒上多余的液体或杂质分离出来的物质都可作为洗脱液。
(4)洗脱缓冲液用于从吸附材料上分离出DNA；在本发明的一个优选方式中，采用Tris-HCl，EDTA的混合液。应理解，只要能够将DNA从硅胶颗粒上分离出来且不影响DNA活性的任何物质都可作为洗脱液，比如其可以是一种溶解DNA的溶剂。
在本发明的一种优选方式中，采用的抽提缓冲液为5-15mM/l(优选8-12mM/l，如10mM/l)Tris-HCl、0.2-0.8M/l(优选0.3-0.6M/l，如0.5M/l)EDTA、0.2-0.8mg/l(优选0.3-0.6mg/l，如0.5mg/ml)丙酮酸激酶、和0.1-0.5％体积(优选0.1-0.3％体积，如0.2％体积)SDS的混合液(PH7.0～7.5)；或采用的裂解缓冲液为5-15M/l(优选6-10M/l，如8M/l)异硫氰酸胍、5-15mM/l(优选8-12mM/l，如10mM/l)Tris-HCl、30-50g/l(优选35-45g/l，如40g/l)Triton X-100混合液、和10-30mM/l(优选15-25mM/l，如20mM/l)EDTA的混合液(PH6.0-7.0)；或采用的洗涤缓冲液为3-9M/l(优选4-8M/l，如6M/l)异硫氰酸胍、和5-15mM/l(优选8-12mM/l，如10mM/l)Tris-HCl的混合液(PH6.0-7.0)；或采用的洗脱缓冲液为5-15mM/l(优选8-12mM/l，如10mM/l)Tris、和0.2-5mM/l(优选0.3-3mM/l，优选1mM/l)EDTA混合液(PH7.5-8.5)。
本发明的主要优点在于(1)直接将硅胶悬浊液加入到样品中，无需将硅胶制备成硅胶膜或硅胶树脂等，简化了步骤，降低了成本。
(2)特别针对口腔细胞的DNA提取来设计提取工艺以及提取DNA所用的试剂材料，使DNA在提取过程中不易发生降解或受其它因素影响。
(3)采用本发明的方法从样品中提取DNA，获得的DNA纯度高，收获率高，并且操作过程稳定性高，特别适合在DNA的大规模生产中应用。
(4)采用本发明的方法从样品中提取DNA，操作过程简单快速，洁净无污染，并且与一般的DNA抽提试剂盒相比成本大大降低。
下面结合具体实施例，进一步阐述本发明。应理解，这些实施例仅用于说明本发明而不用于限制本发明的范围。下列实施例中未注明具体条件的实验方法，通常按照常规条件，或按照制造厂商所建议的条件。
除非另行定义，文中所使用的所有专业与科学用语与本领域熟练人员所熟悉的意义相同。此外，任何与所记载内容相似或均等的方法及材料皆可应用于本发明中。文中所述的较佳实施方法与材料仅作示范之用。
应理解，在实施例或其它内容中所显示的成分用量、反应条件等数字或是本申请说明书内容所使用的数字均为大约数值。因此，除非文中特别注明，本说明书的上述数字参数均为近似值，其可根据欲求得的本发明结果而加以变化。并且，这些参数并非用来限定与本发明申请专利范围均等的原理，而是应用正常操作技术下所得到的较佳数据。
实施例1从口腔细胞样品中获取DNA的方法本实施例的工艺流程见图1所示，具体步骤如下(1)用DNA采样拭从受试者的口腔中获取口腔细胞样品(约为1.5ml)，并将所获取的样品置于样品管内；(2)加600μl抽提缓冲液(Extraction Buffer)，放入56℃温浴中充分反应；(3)加1ml裂解缓冲液(Lysis Buffer)，80μl硅胶吸附剂(1.5mg)混匀。并且充分颠换；(4)充分离心后，弃上清；(5)600μl洗涤缓冲液(Washing Buffer)重悬；(6)充分离心后弃上清；(7)500μl 70％乙醇重悬两次充分离心；(8)500μl丙酮重悬充分离心；(9)室温烘干2-5min；(10)加50μl洗脱缓冲液(Elution Buffer)65℃溶解；(11)离心，取上清。
经检测，上清中含有1000ng～1200ng的DNA。
本实施例中采用的溶液成份(1)抽提缓冲液10mM/l Tris-HCl、0.5M/l EDTA、0.5mg/ml丙酮酸激酶、0.2％体积SDS的混合液；(2)裂解缓冲液8M/l异硫氰酸胍、10mM/l Tris-HCl、40g/l Triton X-100混合液、20mM/l EDTA的混合液；(3)洗涤缓冲液6M/l异硫氰酸胍、和10mM/l Tris-HCl的混合液；(4)洗脱缓冲液10mM/l Tris、和1mM/l EDTA混合液，灭菌。
实施例2硅胶吸附法和酚氯仿法、DNA抽提试剂盒法的比较图2、图3、图4为用相同量的口腔细胞样品，分别通过以上三种方法提取DNA。其中1、2为硅胶吸附法；3、4为酚氯仿法；5、6为博光DNA抽提试剂盒法抽提。
图2为未进行RNaseA消化的抽提电泳的结果，可见进行RNaseA消化前，3、4、5、6都参杂很多RNA，效果很差。
图3为经RNaseA 55℃处理30分钟后的电泳结果，可见1、2用硅胶吸附法和5、6用DNA抽提试剂盒法抽提结果明显好于3、4酚氯仿法，而硅胶吸附法优于DNA抽提试剂盒法。
图4为PCR产物电泳检测(Taq l，zdd)结果，可见各DNA均有明显的PCR产物条带，而硅胶吸附法的产物优于DNA抽提试剂盒法。
实施例3大规模提取在96孔板上，在多个孔中分别加入1.5ml采集自不同受试者的口腔细胞样品。针对每个孔中的试样，具体的操作流程同实施例1。
可见，采用本发明的硅胶吸附方法，可以一次性处理多个样品，优于DNA抽提试剂盒。
实施例4提取口腔细胞DNA的试剂盒在一个大容器中，装有若干小容器，各个小容器中分别装有(1)粒径为0.5～10μm硅胶颗粒的硅胶悬浊液；以及(2)抽提缓冲液，并且，所述的抽提缓冲液为10mM/l Tris-HCl、0.5M/lEDTA、0.5mg/ml丙酮酸激酶、和0.2％体积SDS的混合液(PH7.0～7.5)；以及(3)裂解缓冲液，并且，所述的裂解缓冲液为8M/l异硫氰酸胍、10mM/lTris-HCl、40g/l Triton X-100混合液、和20mM/l EDTA的混合液(PH6.0-7.0)；以及(4)洗脱缓冲液，并且，所述的洗脱缓冲液为10mM/l Tris、和1mM/l EDTA混合液(PH7.5-8.5)。
(5)洗涤缓冲液，并且，所述的洗涤缓冲液为6M/l异硫氰酸胍、和10mM/lTris-HCl的混合液(PH6.0-7.0)。
所述容器中还含有一种提取DNA的使用说明书。
通过以上实施例可得出结论(1)本发明硅胶吸附法抽提口腔细胞DNA的工艺流程是成功可行的，效率明显高于普通的酚氯仿法，同DNA抽提试剂盒法抽提结果类似(博光)。
(2)本发明硅胶吸附法整个抽提工艺流程约为3小时，明显比酚氯仿法快捷，如果加上RNaseA的DNA纯化步骤，略慢于DNA抽提试剂盒法。
(3)本发明单个成本约为1.5～2RMB，远低于DNA抽提试剂盒法。适合大规模生产中应用。
(4)本发明硅胶吸附法由于采用硅胶吸附DNA的工艺来提取，弃用杂质时操作较酚氯仿法更为简便，操作稳定性高。
(5)采用本发明从人体口腔细胞中提取DNA避免了酚氯仿法和DNA抽提试剂盒法的缺点，保存了它们的优点，即成本低、操作简单、快速、无创口、洁净等特点，适合大规模生产中应用。
应理解，在阅读了本发明的上述讲授内容之后，本领域技术人员可以对本发明作各种改动或修改，这些等价形式同样落于本申请所附权利要求书所限定的范围。
权利要求
1.一种从口腔细胞样品中提取DNA的方法，其特征在于，包括步骤(1)裂解欲抽提DNA的口腔细胞样品，获得细胞裂解液；(2)在(1)获得的细胞裂解液中加入硅胶颗粒，从而使得DNA吸附于硅胶颗粒上，获得吸附有DNA的硅胶颗粒；(3)分离出吸附有DNA的硅胶颗粒；(4)从步骤(3)中获得的吸附有DNA的硅胶颗粒上获取DNA。
2.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述的硅胶颗粒以硅胶悬浊液形式加入，其中悬浊液中硅胶颗粒的平均粒径为0.5～10μm。
3.如权利要求1所述的方法，其特征在于，在步骤(1)中，包括在1体积口腔细胞样品中加入0.2-0.6体积的抽提缓冲液，在56±5℃中温育1-30分钟；以及加入0.4-0.9体积的裂解缓冲液。
4.如权利要求3所述的方法，其特征在于，在步骤(2)中，所述的硅胶悬浊液的用量为0.1-10体积。
5.如权利要求4所述的方法，其特征在于，在步骤(3)中，通过离心分离吸附有DNA的硅胶颗粒；并且在步骤(4)中，在所述的吸附有DNA的硅胶颗粒中加入0.01-0.1体积的洗脱缓冲液，在65±5℃温育5-60分钟，获取被洗脱的DNA。
6.如权利要求5所述的方法，其特征在于，在离心分离吸附有DNA的硅胶颗粒之后和加入洗脱缓冲液之前，还包括洗涤吸附有DNA的硅胶颗粒。
7.如权利要求6所述的方法，其特征在于，采用以下溶液洗涤吸附有DNA的硅胶颗粒(a)洗涤缓冲液；(b)50-90％乙醇；(c)95-100％丙酮；或(d)采用(a)、(b)、(c)中的两种或两种以上分别进行洗涤。
8.如权利要求7所述的方法，其特征在于，所述的抽提缓冲液为5-15mM/lTris-HCl、0.2-0.8M/lEDTA、0.2-0.8mg/l丙酮酸激酶、和0.1-0.5％体积SDS的混合液；或所述的裂解缓冲液为5-15M/l异硫氰酸胍、5-15mM/lTris-HCl、30-50g/lTriton×-100混合液、和10-30mM/lEDTA的混合液；或所述的洗涤缓冲液为3-9M/l异硫氰酸胍、和5-15mM/lTris-HCl的混合液；或所述的洗脱缓冲液为5-15mM/lTris、和0.2-5mM/lEDTA混合液。
9.如权利要求1所述的方法，其特征在于，包括步骤(1)将1.5ml口腔细胞样品放入样品管内；(2)加600μl抽提缓冲液，放入56℃温浴中充分反应；(3)加1ml裂解缓冲液，1.5mg硅胶颗粒混匀；(4)充分离心后，弃上清；(5)600μl洗涤缓冲液重悬；(6)充分离心后弃上清；(7)500μl 70％乙醇重悬两次充分离心；(8)500μl丙酮重悬充分离心；(9)室温烘干2-5min；(10)加50μl洗脱缓冲液65℃溶解；(11)离心，取上清，其中含有所需的DNA。
10.一种提取口腔细胞DNA的试剂盒，其特征在于，其中包括(1)第一容器，以及位于第一容器内的硅胶颗粒，或硅胶悬浊液；(2)第二容器，以及位于第二容器内的抽提缓冲液，并且，所述的抽提缓冲液为5-15mM/l Tris-HCl、0.2-0.8M/l EDTA、0.2-0.8mg/l丙酮酸激酶、和0.1-0.5％体积SDS的混合液；(3)第三容器，以及位于第三容器内的裂解缓冲液，并且，所述的裂解缓冲液为5-15M/l异硫氰酸胍、5-15mM/l Tris-HCl、30-50g/l Triton×-100混合液、和10-30mM/l EDTA的混合液；和(4)第四容器，以及位于第四容器内的洗脱缓冲液，并且，所述的洗脱缓冲液为5-15mM/lTris、和0.2-5mM/lEDTA混合液。
全文摘要
本发明公开了一种能从口腔细胞中快速提取DNA的新方法，即采用硅胶吸附的方法，包括步骤(1)裂解欲抽提DNA的细胞，获得细胞裂解液；(2)在获得的细胞裂解液中加入硅胶颗粒；(3)分离吸附有DNA的硅胶颗粒，(4)从硅胶上获取DNA。采用本发明的方法具有DNA得率高、成本低廉、操作简单快速洁净等特点，特别适合用于大规模提取DNA。
文档编号C07K1/14GK101016330SQ200610023818
公开日2007年8月15日 申请日期2006年2月10日 优先权日2006年2月10日
发明者邓新达, 闫鹏荣, 徐梦晔, 卢大儒 申请人:上海主健生物工程有限公司