专利名称：一种提取与纯化红杉醇的方法
技术领域：
本发明涉及中药提取领域，具体地说涉及一种提取与纯化红杉醇的方法。
背景技术：
红杉醇(Sequoyitol)是从红豆杉中分离出的天然有机化合物，可被用于治疗糖尿病等适应症。其分子式如下 从红豆杉中可提取紫杉醇、三尖杉宁碱、10-DAB III及其它重要有机物，并利用10-DAB III可半合成多西紫杉醇。其中，紫杉醇和多西紫杉醇为国际上公认的最有效的抗癌药物之一。我国对红豆杉有效成分之一紫杉醇抗肿瘤作用研究始于1984年，1986年列入国家医药总局的“七五”攻关科研计划，1995年2月经卫生部批准对国产紫杉醇进行临床研究，同年9月得到许可证。紫杉醇被誉为90年代中国抗肿瘤药的重大成果之一。
但是直到目前为止，无论是国际上还是国内的专利或文献，都还没有发现关于从植物红豆杉(包括其他同系物种)中或其他相关植物中提取红杉醇的相关报道。其中，与之相近的专利文献，如2004年4月14日，中国药科大学申请的“一种防治糖尿病的植物提取物及其制备方法与药物用途”，公开号CN1488344A，其文献也涉及到从红豆杉中提取一种防治糖尿病的植物提取物，其主要成分是myo-肌醇衍生物类化合物，其含量为60％以上。虽然，红杉醇也属于肌醇衍生物类化合物，但中国药科大学的发明是指myo-肌醇衍生物类化合物，而由于甲基在6个羟基中的位置的不一样及其空间结构中羟基的手性结构不一，造成了myo-肌醇衍生物类化合物包含至少10种以上的单一组分。所以，严格意义上说，中国药科大学的发明主要是指一种混合物而非一种单一组分；另外，中国药科大学的专利中60％的含量是指myo-肌醇衍生物类化合物的总含量为60％以上，其得率很低。
发明内容
本发明所要解决的技术问题在于提供一种提取和纯化红杉醇的方法，以解决现有技术中的缺陷。
本发明提供了一种从药用植物红豆杉，尤其是中国南方红豆杉(Taxus chinensis var.mairei)，云南红豆杉(Taxus Yunnanensis)，欧洲浆果红豆杉(Taxus Baccata)，加拿大红豆杉(Taxus Canadensis)，和太平洋红豆杉(Taxus Pacific，Taxus Brevifolia)等红豆杉中提取、分离的红杉醇，含量可达99％以上。该化合物可直接用于制备针剂、胶囊、片剂等抗糖尿病药物。
本发明所提供的从药用植物红豆杉中提取红杉醇的方法，概括包括如下用溶剂提取，浓缩得到浸膏，将浸膏分干法上柱和湿法上柱的两种方法进行柱层析分离，收集到含有红杉醇组分的流分，经浓缩，再用醇类或丙酮多次结晶，经过滤、干燥，得到99％以上的红杉醇原料药中间体。
本发明提供了一种提取和纯化红杉醇的方法，该方法包括如下步骤A.对红豆杉进行提取；具体地说包括如下步骤(1)将红豆杉原料进行粉碎，使其粒径在1mm以下；(2)用提取剂对上述原料进行提取，过滤除去滤渣后，得到提取液，提取时的工艺条件为料液比物料(w)∶提取剂(V)＝1∶2～5；提取温度40～100℃；提取时间3～5小时；搅拌转速60～240转/分；提取次数1～3次。
其中所用的红豆杉包括南方红豆杉(TAXUS CHINENSIS VARMAIREI(LEMEE ET L‘EVL)CHENG ET L.K.FU)、云南红豆杉(TAXUS YUENNAN ENSIS CHENG ET L.K.FU)、西藏红豆杉(TAXUS WALL ICHIANA IUCC)、东北红豆杉(TAXUS CUSPIDATASTEB.ET IUCC)、中国红豆杉(TAXUS CHINENSIS(PILGER)ROHD)、曼地亚红豆杉(TAXUS MEDIA)、欧洲浆果红豆杉(TAXUSBACCATA)、加拿大红豆杉(TAXUS CANADENSIS)、太平洋红豆杉(TAXUS PACIFIC TAXUS BREVIFOLIA)。
所说的红豆杉原料包括叶子、嫩芽、枝条、树皮、树干、树根等，可为湿的也可为干的。
步骤(2)中所述的提取剂为醇类、乙腈、丙酮或水的一种或一种以上，其中醇类包括甲醇、乙醇、异丙醇或正丁醇；优选的提取剂为甲醇、乙醇或水。
本发明所提供的提取和纯化红杉醇的方法还包括如下步骤B对红豆杉粗提物进行纯化，具体的说包括如下步骤(1)将步骤A中所得提取液经减压浓缩，得到红杉醇含量为0.3％～5％的浓缩提取液粗原料，简称粗品A；(2)用甲醇或乙醇溶解粗品A，使粗品A(W)与甲醇或乙醇(V)的比例为1∶2-10，使其成均一溶液；(3)将步骤(2)中所得的溶液中加入粒径为10～50μm的硅胶做吸附剂，搅拌均匀，再蒸发除去甲醇或乙醇制成“硅胶混合物”，然后将此“硅胶混合物”置于填充硅胶的玻璃或不锈钢层析柱的上部(干法上柱)；或将步骤(2)中的溶液加入于填充大孔树脂或活性炭的玻璃或不锈钢层析柱的上部(湿法上柱)；(4)用0.1～0.8∶1的醇类和丙酮组成的混合溶剂进行洗脱层析，分段收集馏分，取样分析，将合格的馏分蒸发除去混合溶剂后得到含量≥10％(wt)的红杉醇“粗品B”。
其中步骤(3)中所述的大孔树脂为强酸性大孔树脂或弱酸性大孔树脂；步骤(4)中所述的醇类为甲醇、乙醇、异丙醇或正丁醇。
本发明所提供的提取和纯化红杉醇的方法还可以包括如下步骤C对红杉醇进行结晶处理，具体地说包括如下步骤
以粗品B为原料，50℃～100℃溶解于的醇类或丙酮溶剂中，原料(W)与溶剂(V)的比例为1∶2-10，然后冷冻结晶，过滤；如此重复结晶2-3次，经过滤干燥，得到99％以上的纯品红杉醇。
最终得到的产品为白色结晶状粉末，主要成分是红杉醇(Sequoyitol)，含量可达99％以上，甚至99.9％以上。
本发明所述的方法中对主要成分红杉醇的含量可以用下述的高效液相(HPLC)方法检测含量测定取本品约25mg，紧密称定，至于25ml容量瓶中，用流动相稀释至刻度线，摇匀，得供试品溶液。HPLC色谱条件C18柱，5μm，4.6×250mm，折光或蒸发散射检测器，进样量20μl，流动相甲醇∶水＝50∶50，使用前经0.45μm有机虑膜抽虑并脱气，流速1.0ml/min。
图1红杉醇制备流程图具体实施方式
下面就是本发明的具体的提取和纯化过程提供一些的实施例，以进一步阐明本发明的内容。但应理解，这些实施例仅为说明目的，而非用于限制本发明得范围。
实施例1取南方红豆杉鲜枝叶200公斤，以2.5倍体积的80％甲醇回流3小时提取3次，合并提取液，浓缩至粘稠状溶液，加入1∶1(体积/体积)的硅胶，搅拌均匀，真空烘干，粉碎，制成原料干样。按物料∶硅胶＝1∶20的比例装柱，上样。以甲醇∶丙酮＝15∶85和甲醇∶丙酮＝40∶60的比例梯度淋洗，用HPLC法检测分段，合并产品段，浓缩至干。用无水乙醇结晶3次，抽虑，干燥，得到124.1克白色结晶装粉末，用HPLC方法检测，其中红杉醇的含量为99.68％。
实施例2取欧洲浆果红豆杉干枝叶200公斤，以2.5倍体积的95％乙醇于50℃回流3小时提取3次，合并提取液，浓缩至不能浓缩为止。用流动相甲醇∶水＝70∶30完全溶解，上酸性大孔树脂层析柱，以甲醇∶水＝70∶30～50为流动相梯度洗脱，用HPLC法监测，合并红杉醇馏分，减压浓缩至干，用丙酮结晶3次，得到212.5克白色结晶状粉末，经HPLC方法检测，其中红杉醇的含量为99.98％。
实施例3取太平洋红豆杉干树皮粉末2公斤，以2.5倍量80％乙腈于45℃回流3小时提取3次，合并提取液，浓缩至不能浓缩为止。用流动相甲醇∶水＝70∶30完全溶解，上活性炭层析柱，以甲醇∶水＝70∶30～60为流动相梯度洗脱，用HPLC法监测，合并红杉醇馏分，减压浓缩至干，用甲醇结晶3次，得到1.64克白色结晶状粉末，经HPLC方法检测，其中红杉醇的含量为99.12％。
实施例4取曼地亚红豆杉干树根粉末200公斤，以2.5倍量98％丙酮于20℃回流3小时提取3次，合并提取液，浓缩至粘稠状态，加入1∶1(体积/体积)硅藻土，搅拌均匀，真空烘干，粉碎，制得干样。按物料∶硅藻土＝1∶20的比例上柱装柱，用流动相乙醇∶丙酮＝20～50∶80为流动相梯度洗脱，用HPLC法监测，合并红杉醇馏分，减压浓缩至干，用异丙醇结晶4次，得到84.8克白色结晶状粉末，经HPLC方法检测，其中红杉醇的含量为99.35％。
权利要求
1.一种提取与纯化红杉醇的方法，其特征在于该方法包括步骤A对红豆杉进行提取，具体步骤为(1)将红豆杉原料进行粉碎，使其粒径在1mm以下；(2)用提取剂对上述原料进行提取，过滤除去滤渣后，得到提取液，提取时的工艺条件为料液比物料(w)∶提取剂(V)＝1∶2～5；提取温度40～100℃；提取时间3～5小时；搅拌转速60～240转/分；提取次数1～3次。
2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于所述的提取剂为醇类、乙腈、丙酮或水的一种或一种以上，其中醇类包括甲醇、乙醇、异丙醇或正丁醇。
3.根据权利要求2所述的方法，其特征在于所述的提取剂为甲醇、乙醇或水。
4.根据权利要求1-3任一项所述的方法，其特征在于该方法还包括步骤B对红豆杉粗提物进行纯化，具体步骤为(1)将步骤A中所得提取液经减压浓缩，得到红杉醇含量为0.3％～5％的浓缩提取液粗原料，简称粗品A；(2)用甲醇或乙醇溶解粗品A，使粗品A(W)与甲醇或乙醇(V)的比例为1∶2-10，使其成均一溶液；(3)将步骤(2)中所得的溶液中加入粒径为10～50μm的硅胶做吸附剂，搅拌均匀，再蒸发除去甲醇或乙醇制成“硅胶混合物”，然后将此“硅胶混合物”置于填充硅胶的玻璃或不锈钢层析柱的上部；或将步骤(2)中的溶液加入于填充大孔树脂或活性炭的玻璃或不锈钢层析柱的上部；(4)用0.1～0.8∶1的醇类和丙酮组成的混合溶剂进行洗脱层析，分段收集馏分，取样分析，将合格的馏分蒸发除去混合溶剂后得到红杉醇“粗品B”；其中步骤(3)中所述的大孔树脂为强酸性大孔树脂或弱酸性大孔树脂；步骤(4)中所述的醇类为甲醇、乙醇、异丙醇或正丁醇。
5.根据权利要求4所述的方法，其特征在于该方法还包括步骤C所述的对红杉醇进行结晶处理，具体步骤为以粗品B为原料，50℃～100℃溶解于的醇类或丙酮溶剂中，原料(W)与溶剂(V)的比例为1∶2-10，然后冷冻结晶，过滤；如此重复结晶2-3次，并过滤干燥；其中所述的醇类为甲醇、乙醇、异丙醇或正丁醇。
6.根据权利要求5所述的方法，其特征在于该方法包括如下步骤A、对红豆杉进行提取(1)将红豆杉原料进行粉碎，使其粒径在1mm以下；(2)用甲醇、乙醇或水对上述原料进行提取，过滤除去滤渣后，得到提取液，提取时的工艺条件为料液比物料(w)∶提取剂(V)＝1∶2～5；提取温度40～100℃；提取时间3～5小时；搅拌转速60～240转/分；提取次数1～3次；B、对红豆杉粗提物进行纯化(1)将步骤A中所得提取液经减压浓缩，得到红杉醇含量为0.3％～5％的浓缩提取液粗原料，简称粗品A；(2)用甲醇或乙醇溶解粗品A，使粗品A(W)与甲醇或乙醇(V)的比例为1∶2-10，使其成均一溶液；(3)将步骤(2)中所得的溶液中加入粒径为10～50μm的硅胶做吸附剂，搅拌均匀，再蒸发除去甲醇或乙醇制成“硅胶混合物”，然后将此“硅胶混合物”置于填充硅胶的玻璃或不锈钢层析柱的上部；或将步骤(2)中的溶液加入于填充强酸性大孔树脂或弱酸性大孔树脂或活性炭的玻璃或不锈钢层析柱的上部；(4)用0.1～0.8∶1的醇类和丙酮组成的混合溶剂进行洗脱层析，分段收集馏分，取样分析，将合格的馏分蒸发除去混合溶剂后得到红杉醇“粗品B”；C对红杉醇进行结晶处理以“粗品B”为原料，50℃～100℃溶解于的醇类或丙酮溶剂中，原料(W)与溶剂(V)的比例为1∶2-10，然后冷冻结晶，过滤；如此重复结晶2-3次，并过滤干燥；其中所述的醇类为甲醇、乙醇、异丙醇或正丁醇。
全文摘要
本发明公开了一种提取与纯化红杉醇的方法，该法主要包括三大部分，1.用醇类、丙酮或水为提取剂从红豆杉原料中提取含红杉醇有效成分，获得含0.3～5％(wt)的红杉醇粗原料；2.以上述红杉醇粗原料为原料，经层析分离，得到10％以上含量的红杉醇原料；3.以10％以上含量的红杉醇经2－4次结晶，得到99％以上的纯品红杉醇。
文档编号C07C43/196GK1994995SQ20061002315
公开日2007年7月11日 申请日期2006年1月6日 优先权日2006年1月6日
发明者杨继东, 詹华杏, 林复兴, 林炯明, 杨海鹰, 沈鑫 申请人:上海百灵医药科技有限公司