一种葱白多糖提取纯化方法
【技术领域】
[0001]本发明涉及生物技术领域，尤其涉及一种从葱白中提取纯化多糖的方法。
【背景技术】
[0002]葱是中国的一种很普遍的调味品和蔬菜，属石蒜科葱属，为多年生宿根草本植物。葱资源为我国大宗经济作物资源，葱产业是我国的优势产业，在国际蔬菜贸易中具有良好的发展前景，葱是我国目前主要出口创汇蔬菜，葱姜蒜出口量约占我国蔬菜出口总量的1/4，占世界葱姜蒜出口贸易量70%以上。我国在葱产业发展方面，占有生产规模、人力资源等独特优势，是其他国家所不具备的。葱生产属于劳动和技术密集型产业。近年来，多数发达国家蔬菜生产弱化，进口增加。因此，全球蔬菜进出口贸易额将不断增加，我国是传统葱出口国，劳动力资源充足，生产优势明显，为我国葱产业的发展提供了良好的机遇。
[0003]葱白为植物葱的鳞茎，其中含有多糖类物质，但国内外迄今为止尚未开发利用葱白多糖。传统上葱白被中医药所利用，其中含有挥发油、维生素和多糖类，干葱白中多糖含量为10°/『20%，因此葱白多糖的开发利用极具可行性。而植物多糖的生理功能较广泛，据资料报道多糖具有调节免疫、降血糖、降血脂、抗衰老等作用。随着社会经济的发展和人民生活水平的提高以及个人保健意识的加强，功能保健食品越来越受消费者关注。
[0004]目前市场上植物多糖产品很多，但是未见有葱白多糖的产品，更没有专门针对葱白多糖的提取纯化方法。
【发明内容】
[0005]本发明提供一种葱白多糖提取纯化方法，其采取了水提醇沉法和膜分离技术的长处，摒弃了单一方法的高品质和低成本难以融合的缺点，该技术既能保持多糖结构破坏少、纯度高、提取率高、达到多级分离的效果，又能减少能耗降低加工成本。
[0006]本发明采用如下技术方案:一种葱白多糖提取纯化方法，包括如下步骤:
(1)将干燥的香葱葱白进行粉碎并过筛，得到香葱葱白粉末；
(2)取香葱葱白粉末，将香葱葱白粉末与无菌水以1:5-1:8比例混合，加热煮沸2-3小时，并辅以超声波辅助提取，至少离心10-15分钟，取上清液；离心后的残渣按上述方法再提取至少3-4次，上清液合并，得多糖提取液；
(3)采用旋转蒸发仪在60-80°C下将多糖提取液浓缩至原体积的1/4~1/7，得多糖浓缩液；
(4)以4-25°C食用酒精沉淀多糖浓缩液，使酒精含量达到总体积65-80%，多糖以沉淀形式析出，水、部分杂质和色素溶解在酒精相中，至少离心10-15分钟，取沉淀相，再用酒精溶解，重复醇沉至少2-3次；
(5)将醇沉粗多糖充分溶于蒸馏水中，用Na2C03稀溶液调该粗多糖溶液的pH值为4.5-7.6，加入胰蛋白酶，甲苯体积1_2%，35-37°C恒温水解一定时间，旋转蒸发浓缩；
(6)将蛋白酶解后的浓缩液加入占体积1/3的Sevag试剂，抽提1_3小时，离心10-15分钟，取上清液；上清液继续用1/3体积的Sevag试剂进行脱蛋白，重复至少2_3次；
(7)将脱蛋白多糖液浓缩至原体积1/3-1/4，4-25°(:醇沉2411以上，至少离心10?15min，弃上淸液并室温挥发干乙醇，得到多糖；
(8)用多糖质量5-15倍的蒸馏水进行溶解，利用超滤膜将葱白多糖提取液进行超滤，收集分子量10000道尔顿以上的组分，再进行葡聚糖凝胶Sephadex G-100于25度以下进行柱层析得纯化多糖，收集多糖组分，冷冻干燥，得到葱白多糖。
[0007]本发明的进一步改进在于，步骤(2)、步骤(4)和步骤(6)所述离心提取的速度为8000 ~ 10000 转 / 分钟。
[0008]本发明的进一步改进在于，步骤(1)所述过筛是过80-120目筛。
[0009]本发明的进一步改进在于，步骤(6)所述Sevag试剂为体积比为4:1的氯仿和正丁醇配制成的混合液。
[0010]本发明的进一步改进在于，步骤(5)所述粗多糖溶液的pH值调节至7.5，所述胰蛋白酶的活性为8000-10000U/g。
[0011]本发明的进一步改进在于，步骤(7)所述乙醇是浓度为体积百分比90-98%的乙醇。优选地，步骤(7)所述乙醇是浓度为体积百分比95%的乙醇。
[0012]本发明与现有技术相比具有如下的优点及有益效果:
(1)本发明提取方法产品回收率高、纯度好，葱白多糖得率大于2.0%，多糖的纯度大于90.0%。
[0013](2)本发明工艺简单，所用试剂易得，生产成本低，易于实现工业化。
【附图说明】
[0014]图1 一种葱白多糖提取纯化方法的一个实施例的工艺流程图。
【具体实施方式】
[0015]为了加深对本发明的理解，下面结合附图和实施例对本发明进一步说明，该实施例仅用于解释本发明，并不对本发明的保护范围构成限定。
[0016]如图1所示，一种葱白多糖提取纯化方法，包括如下步骤:
(1)将干燥的香葱葱白进行粉碎并过筛，得到香葱葱白粉末，参见图1中的101；
(2)取香葱葱白粉末，将香葱葱白粉末与无菌水以1:5-1:8比例混合，加热煮沸2-3小时，并辅以超声波辅助提取，至少离心10-15分钟，取上清液；离心后的残渣按上述方法再提取至少3-4次，上清液合并，得多糖提取液，参见图1中的102 ;
(3)采用旋转蒸发仪在60-80°C下将多糖提取液浓缩至原体积的1/4~1/7，得多糖浓缩液，参见图1中的103 ；
(4)以4-25°C食用酒精沉淀多糖浓缩液，使酒精含量达到总体积65-80%，多糖以沉淀形式析出，水、部分杂质和色素溶解在酒精相中，至少离心10-15分钟，取沉淀相，再用酒精溶解，重复醇沉至少2-3次，参见图1中的104 ；
(5)将醇沉粗多糖充分溶于蒸馏水中，用Na2C03稀溶液调该粗多糖溶液的pH值为4.5-7.6，加入胰蛋白酶，甲苯体积1_2%，35-37°C恒温水解一定时间，旋转蒸发浓缩，参见图1中的105 ； (6)将蛋白酶解后的浓缩液加入占体积1/3的Sevag试剂，抽提1_3小时，离心10-15分钟，取上清液；上清液继续用1/3体积的Sevag试剂进行脱蛋白，重复至少2-3次，参见图1中的106 ；
(7)将脱蛋白多糖液浓缩至原体积1/3-1/4，4-25°(:醇沉2411以上，至少离心10?15min，弃上淸液并室温挥发干乙醇，得到多糖，参见图1中的107 ;
(8)用多糖质量5-15倍的蒸馏水进行溶解，利用超滤膜将葱白多糖提取液进行超滤，收集分子量10000道尔顿以上的组分，再进行葡聚糖凝胶Sephadex G-100于25度以下进行柱层析得纯化多糖，收集多糖组分，冷冻干燥，得到葱白多糖，参见图1中的108。
[0017]在上述实施例中，步骤(2)、步骤(4)和步骤(6)离心提取的速度为8000?10000转/分钟。步骤(1)过筛是过80-120目筛。步骤(6) Sevag试剂为体积比为4:1的氯仿和正丁醇配制成的混合液。步骤(5)粗多糖溶液的pH值调节至7.5，胰蛋白酶的活性为8000-10000U/go步骤(7)乙醇是浓度为体积百分比90-98%的乙醇优选的乙醇浓度为体积百分比95%。
实施例1
(1)将干燥的香葱葱白进行粉碎并80目过筛，得到香葱葱白粉末；
(2)取香葱葱白粉末，将香葱葱白粉末与无菌水以1:5比例混合，加热煮沸2小时，并辅以超声波辅助提取，离心10分钟，取上清液；离心后的残渣按上述方法再提取3次，上清液合并，得多糖提取液；
(3)采用旋转蒸发仪在60°C下将多糖提取液浓缩至原体积的1/4，得多糖浓缩液；
(4)以4°C食用酒精沉淀多糖浓缩液，使酒精含量达到总体积65%，多糖以沉淀形式析出，水、部分杂质和色素溶解在酒精相中，离心10分钟，取沉淀相，再用酒精溶解，重复醇沉2次；
(5)将醇沉粗多糖充分溶于蒸馏水中，用Na2C03稀溶液调pH值为7.5，加入胰蛋白酶，体积1%甲苯，37°C恒温水解一定时间，旋转蒸发浓缩；
(6)将蛋白酶解后的浓缩液加入占体积1/3的Sevag试剂，抽提1小时，离心10分钟，取上清液；上清液继续用1/3体积的Sevag试剂进行脱蛋白，重复2次；
(7)将脱蛋白多糖液浓缩至原体积1/3，4°C醇沉24h，离心lOmi