一种霍山石斛多糖的提取方法
【专利摘要】本发明提供了一种霍山石斛多糖的提取方法，具体的说是利用超声辅助热回流提取法对霍山石斛多糖进行提取的方法。所述提取方法提取后的多糖通过苯酚?硫酸法进行检测其含量。本发明是将石斛粗粉加乙醚初步除杂后，加甲醇适量，通过超声辅助热回流提取后，趁热过滤，洗涤，将滤渣置于烧瓶中，加水适量，再经超声辅助热回流提取，趁热过滤，重复操作4次，将得到的滤液及洗液合并，经过旋转蒸发，得到目标产物霍山石斛多糖。所述霍山石斛多糖的提取方法所得多糖含量高，提取时间短，提取比较彻底，适合工业化应用。
【专利说明】
_种霍山石解多糖的提取方法
技术领域
[0001]本发明涉及一种霍山石斛多糖的提取方法。
【背景技术】
[0002]石斛为兰科石斛属植物，是我国传统医药学中一种名贵药材，其有效成分主要为多糖和生物碱，其中，石斛的品质优劣在很大程度上取决于石斛中多糖的含量多少。而石斛中以霍山石斛最为著名，霍山石斛多糖的药理作用主要表现在免疫、强壮、抗衰老、抗肿瘤等作用。随着社会发展，人们对健康的关注越来越高，其需求量也会越来越大，但传统霍山石斛多糖的提取方法是用霍山石斛属植物的根、茎、叶等植物体提取所得，这种工艺所得的产品已经不能满足未来市场对霍山石斛精深加工的需求。虽然，随着科学技术的不断发展，出现了不少霍山石斛的加工方法，但效果甚微，因此研究重点又回归到从霍山石斛粗粉中尽可能多的将多糖成分提取出来这一观点上。因此开发一种高效、高产率的霍山石斛多糖类提取方法是十分有意义的。
[0003]目前石斛多糖的研究存在物质基础不明确，质量不可控，分离纯化工艺粗糙等弊端。
[0004]中国发明专利申请第200810162496.7号公开说明书中记载了一种金钗石斛多糖提取物的制备方法，所属金钗石斛多糖提取物经脱脂、提取、醇沉、除蛋白、除单糖和寡糖、凝胶柱纯化等步骤实现，所得多糖提取物中多糖含量90%以上，但是该方法操作复杂，工艺繁多，用时较长，不适合工业化应用。
[0005]第中国发明专利申请第200810162496.7号公开说明书中中记载了一种降糖活性石斛多糖及其提取方法，选用粉碎的干燥石斛，加入其20?40倍重量的水，纤维素酶添加量为10?20g/mg，酶解PH为4.5-5.5,先采用超声波_酶解协同提取，酶解温度45?55°C，提取时间10?20min，再升温灭酶后得到石斛多糖提取液，本发明工艺简单、用时短，提高了石斛多糖的得率和纯度，但该方法所用纤维素酶量较多，PH为4.5?5.5会影响多糖的结构，不适合工业化应用。
【发明内容】
[0006]针对现有技术中的缺陷，本发明的目的是提供一种霍山石斛多糖的提取方法，所得多糖含量高，提取时间短，提取比较彻底，适合工业化应用。
[0007]本发明解决技术问题采用如下技术方案:
本发明涉及一种霍山石斛多糖的提取方法，包括如下步骤:
(I)在索氏提取器相连的烧瓶中加入10mL乙醚，将5g石斛粗粉置于索氏提取器中，加热回流0.5~6h，取出石斛粗粉；
(2 )将上述石斛粗粉加入500mL烧瓶中，加入加甲醇适量，通过超声辅助热回流提取20?10min，趁热过滤，洗涤；
(3)将滤渣置于烧瓶中，加水适量，再经超声辅助热回流提取20?lOOmin，趁热过滤，重复操作4次，将得到的滤液及洗液合并，经过旋转蒸发，得到目标产物霍山石斛多糖。
[0008]优选地，所述索氏提取器采用水浴加热。
[0009]优选地，所述水浴温度控制在70?80°C，最优选为72?75°C。
[00? O] 优选地，所述水浴加热0.5~6h，最优选为3?4h。
[0011]优选地，所述甲醇的加入量为50?150mL，最优选为80?120mL。
[0012]优选地，所述(2)中超声辅助回流时间为20?lOOmin，最优选为25?35min。
[0013]优选地，所述(2)回流温度为60?80°C，最优选为65?70°C。
[0014]优选地，所述水的加入量为50?150mL，最优选为80?120mL。
[0015]优选地，所述(3)中超声辅助回流时间为20?lOOmin，最优选为25?35min。
[0016]优选地，所述(3)回流温度为90?120°C，最优选为95?110°C。
[0017]与现有技术相比，本发明具有如下的有益效果:
所述霍山石斛多糖的提取方法所得多糖含量高，提取时间短，提取比较彻底，适合工业化应用。
【具体实施方式】
[0018]下面结合具体实施例，进一步阐述本发明。这些实施例仅用于说明本发明而不用于限制本发明的范围。
[0019]实施例1:
在索氏提取器相连的烧瓶中加入10mL乙醚，将5g石斛粗粉置于索氏提取器中，水浴加热，控制温度72?75 °C，加热回流3h，取出石斛粗粉；将石斛粗粉加入500mL烧瓶中，加入10mL甲醇，温度控制在65°C左右，超声辅助热回流提取25min，趁热过滤，并用甲醇洗涤2次;将滤渣置于烧瓶中，加水10mL，于100°C左右经超声辅助热回流提取25min，趁热过滤，并重复操作4次，将得到的滤液及洗液合并，旋转蒸发出去溶剂，得到目标产物霍山石斛多糖1.0228，收率20.44%。
[0020]实施例2:
在索氏提取器相连的烧瓶中加入10mL乙醚，将5g石斛粗粉置于索氏提取器中，水浴加热，控制温度72?75°C，加热回流Ih，取出石斛粗粉；将石斛粗粉加入500mL烧瓶中，加入10mL甲醇，温度控制在65°C左右，超声辅助热回流提取25min，趁热过滤，并用甲醇洗涤2次;将滤渣置于烧瓶中，加水10mL，于100°C左右经超声辅助热回流提取25min，趁热过滤，重复操作4次，将得到的滤液及洗液合并，旋转蒸发出去溶剂，得到目标产物霍山石斛多糖
0.9258，收率18.50%。
[0021]实施例3:
在索氏提取器相连的烧瓶中加入10mL乙醚，将5g石斛粗粉置于索氏提取器中，水浴加热，控制温度72?75 °C，加热回流5h，取出石斛粗粉；将石斛粗粉加入500mL烧瓶中，加入10mL甲醇，温度控制在65°C左右，超声辅助热回流提取25min，趁热过滤，并用甲醇洗涤2次;将滤渣置于烧瓶中，加水10mL，于100°C左右经超声辅助热回流提取25min，趁热过滤，重复操作4次，将得到的滤液及洗液合并，旋转蒸发出去溶剂，得到目标产物霍山石斛多糖1.0268，收率20.52%。
[0022]实施例4: 在索氏提取器相连的烧瓶中加入10mL乙醚，将5g石斛粗粉置于索氏提取器中，水浴加热，控制温度72?75°C，加热回流3h，取出石斛粗粉;将石斛粗粉加入500mL烧瓶中，加入50mL甲醇，温度控制在65°C左右，超声辅助热回流提取25min，趁热过滤，并用甲醇洗涤2次;将滤渣置于烧瓶中，加水10mL，于1000C左右经超声辅助热回流提取25min，趁热过滤，重复操作4次，将得到的滤液及洗液合并，旋转蒸发出去溶剂，得到目标产物霍山石斛多糖0.935g，收率18.70%
实施例5:
在索氏提取器相连的烧瓶中加入10mL乙醚，将5g石斛粗粉置于索氏提取器中，水浴加热，控制温度72?75 °C，加热回流3h，取出石斛粗粉；将石斛粗粉加入500mL烧瓶中，加入150mL甲醇，温度控制在65°C左右，超声辅助热回流提取25min，趁热过滤，并用甲醇洗涤2次;将滤渣置于烧瓶中，加水10mL，于100°C左右经超声辅助热回流提取25min，趁热过滤，重复操作4次，将得到的滤液及洗液合并，旋转蒸发出去溶剂，得到目标产物霍山石斛多糖
0.9938，收率19.86%
实施例6:
在索氏提取器相连的烧瓶中加入10mL乙醚，将5g石斛粗粉置于索氏提取器中，水浴加热，控制温度72?75 °C，加热回流3h，取出石斛粗粉；将石斛粗粉加入500mL烧瓶中，加入10mL甲醇，温度控制在80°C左右，超声辅助热回流提取25min，趁热过滤，并用甲醇洗涤2次;将滤渣置于烧瓶中，加水10mL，于100°C左右经超声辅助热回流提取25min，趁热过滤，重复操作4次，将得到的滤液及洗液合并，旋转蒸发出去溶剂，得到目标产物霍山石斛多糖
0.9858，收率19.71%。
[0023]实施例7:
本实施例的制备过程同实施例1，不同的是加入甲醇后的回流提取时间为lOOmin，分离得到目标产物霍山石斛多糖0.988g，收率19.76%ο
[0024]实施例8:
本实施例的制备过程同实施例1，不同的是水的加入量为50mL，分离得到目标产物霍山石斛多糖0.86仏，收率17.22%
实施例9:
本实施例的制备过程同实施例1，不同的是加入水后的回流提取时间为lOOmin，分离得到目标产物霍山石斛多糖0.945g，收率18.91%
如若采用常规提纯方法对相同原料进行分离提纯，其过程如下:
称取干燥的霍山石斛粉末5g加入4倍质量的75%(V/V)乙醇水溶液冷浸搅拌提取48小时，再利用45微米微孔滤膜对所得霍山石斛浸提液进行抽滤，对滤液进行SOOOrpm高速离心30分钟，获得上清液和沉淀;将所述沉淀中加入3倍量蒸馏水溶解，于100°C煮沸10分钟，冷却后SOOOrpm高速离心30分钟，获得上清液和沉淀;进一步对上清液进行旋转蒸发浓缩，再干燥至恒重，获得可溶性霍山石斛多糖粉。称量得到的霍山石斛多糖的重量为0.828g，收率为 16.57%。
[0025]通过上述对比提取，可以很清楚的判定本发明所述的霍山石斛多糖提取法所得多糖收率可接近甚至超过常规霍山石斛多糖的提取方法，具有较好的应用前景。
[0026]以上对本发明的具体实施例进行了描述。需要理解的是，本发明并不局限于上述特定实施方式，本领域技术人员可以在权利要求的范围内做出各种变形或修改，这并不影响本发明的实质内容。
【主权项】
1.一种霍山石斛多糖的提取方法，其特征在于:包括如下步骤: (1)在索氏提取器相连的烧瓶中加入石斛粗粉和溶剂，其中两者的加入比例为石斛粗粉:乙醚为5g: 10ml，加热回流0.5?6h，取出石斛粗粉； (2)将上述石斛粗粉加入烧瓶中，加入加甲醇，通过超声辅助热回流提取20?lOOmin，趁热过滤，洗涤； (3)将滤渣置于烧瓶中，加水适量，再经超声辅助热回流提取20?lOOmin，趁热过滤，重复操作4次，将得到的滤液及洗液合并，经过旋转蒸发，得到目标产物霍山石斛多糖。2.根据权利要求1所述的霍山石斛多糖的提取方法，其特征在于:所述步骤(I)中，索氏提取器采用水浴加热，所述水浴温度控制在70?80°C，所述水浴加时间为0.5?6小时。3.根据权利要求2所述的霍山石斛多糖的提取方法，其特征在于:所述水浴温度控制在72?75 cC。4.根据权利要求2所述的霍山石斛多糖的提取方法，其特征在于:所述水浴加热时间为3?4小时。5.根据权利要求1所述的霍山石斛多糖的提取方法，其特征在于:所述步骤(2)中，甲醇的加入体积量为石斛粗粉质量的10~30倍，最优选为16?24倍。6.根据权利要求1所述的霍山石斛多糖的提取方法，其特征在于:所述步骤(2)中，超声辅助回流时间为25?35min。7.根据权利要求1所述的霍山石斛多糖的提取方法，其特征在于:所述步骤(2)中，回流温度为65?70 °C。8.根据权利要求1所述的霍山石斛多糖的提取方法，其特征在于:所述步骤(3)中，水的加入体积量为石斛粗粉质量的16?24倍。9.根据权利要求1所述的霍山石斛多糖的提取方法，其特征在于:所述步骤(3)中，超声辅助回流时间为25?35min。10.根据权利要求1所述的霍山石斛多糖的提取方法，其特征在于:所述步骤(3)中，回流温度为95?110°C。
【文档编号】C08B37/00GK106046194SQ201610611390
【公开日】2016年10月26日
【申请日】2016年7月30日
【发明人】韩冬
【申请人】安徽斛生记生物科技有限公司