一种从枣花蜜中提取、纯化酚类化合物的方法
【技术领域】
[0001] 本发明涉及一种酚类化合物的提取、纯化方法，具体涉及一种从枣花蜜中提取、纯 化酚类化合物的方法。
【背景技术】
[0002] 枣树具有丰富的花蜜，深受蜜蜂喜爱。枣花蜜是由蜜蜂采集枣树花儿生产的蜂蜜。 枣花蜜有一种特殊的味道，具有良好的口感和甜味。枣花蜜中的酚类化合物主要来自枣花 儿的花蜜和花粉，是一类含有氧杂环的有机化合物，包括单体和多聚体酚类化合物。酚类化 合物主要包括酚酸、黄酮及其衍生物，是作为抗氧化活性的评价指标之一。
[0003] 酚类化合物的生物活性主要表现为具有DPPH抗氧化活性，三价铁离子的还原能 力，对DNA损伤的保护作用。研究表明蜂蜜的抗氧化性能主要是由于酚类化合物的作用，酚 类化合物可以生成活性氧(如超氧阴离子⑹、过氧化氢(H 2O2)和羟基自由基(OHC)等），可以 清除DPPH自由基，有显著的抑制血清脂蛋白氧化，增加细胞膜的通透性、提高抗氧化血浆和 血清的活性和降低酒精中毒作用。
[0004] 枣花蜜是我国最宝贵的市场蜂蜜的类型，深受消费者喜爱和赞赏。我国的枣花蜜 主要产于陕西、山西和河南等省份，它符合欧盟的质量标准，在欧洲市场非常受欢迎。由于 枣花蜜的发展和市场的需要，我国对于枣花蜜的研究日益深入，最近几年更是成为研究的 热点。
[0005] 目前，我国枣花蜜的研究主要集中在对枣花蜜理化和生理等方面的研究。程妮等 人研究和比较了中国不同地区的枣花蜜样品的的理化性质、酚酸、总酚酸含量和其抗氧化 性。安萨里等人研究了枣花蜜的抗真菌特性。而在对枣花蜜中酚类化合物的提取方法缺乏 系统的研究，这成为制约枣花蜜中酚类化合物应用开发的瓶颈。
【发明内容】
[0006] 本发明的目的在于克服现有技术的不足，提供一种从枣花蜜中提取、纯化酚类化 合物的方法。
[0007] 为实现上述目的，本发明采用的技术方案是：
[0008] -种从枣花蜜中提取、纯化酚类化合物的方法，包括如下步骤：
[0009] 步骤1、枣花蜜水溶液的制备：向枣花蜜中加入1-10倍体积蒸馏水，搅拌均匀；
[0010] 步骤2、初步纯化:大孔吸附树脂湿法装柱，加入步骤1制备得到的枣花蜜水溶液， 然后依次用酸水、蒸馏水、无水甲醇进行洗脱，洗脱流速均为〇.7ml/min，收集无水甲醇的洗 脱溶液，旋转蒸干，即得粗提物；
[0011]步骤3、粗提物的萃取处理:将得到的酚类化合物的粗提物用蒸馏水溶解，然后用1 倍体积的乙酸乙酯进行充分萃取，收集萃取相液体，旋转蒸干，收集所得干物质，即得乙酸 乙酯萃取相的酚类物质；
[0012]步骤4、硅胶柱层析纯化:将所得乙酸乙酯萃取相的酚类物质上样，再分别用不同 比例的二氯甲烷和甲醇混合液作为洗脱剂进行洗脱，流速为〇.6ml/min，收集洗脱液，得纯 化液，将纯化液旋转蒸干，得到纯化后的枣花蜜酚类化合物。
[0013] 本发明的特点还在于，在步骤1中，向枣花蜜中加入蒸馏水时，枣花蜜与蒸馏水的 体积比为1:6。
[0014] 本发明的特点还在于，在步骤4中，洗脱分三步进行，依次用体积比为25:1、15:1和 13:1的二氯甲烷和甲醇混合液作为洗脱剂进行洗脱。
[0015] 本发明的特点还在于，在步骤4中，收集洗脱液时，对三次洗脱得到的洗脱液分别 进行收集，并分别旋转蒸干。
[0016] 本发明的特点还在于，步骤2的大孔吸附树脂为XAD-2型。
[0017] 本发明的特点还在于，步骤4中，硅胶柱层析纯化所用的柱层析硅胶为ZCX-2型。
[0018] 本发明的特点还在于，步骤2-4中旋转蒸干利用旋转式蒸发器进行。
[0019] 本发明的特点还在于，步骤2中，酸水洗脱所用酸水为盐酸，pH=2。
[0020] 本发明的特点还在于，步骤3中，酚类化合物的粗提物按照质量体积比1:5~20溶 解在蒸馏水中。
[0021 ]本发明的有益效果如下：
[0022] 本发明提供的一种从枣花蜜中提取、纯化酚类化合物的方法，通过选用大孔吸附 树脂XAD-2作为提取枣花蜜中酚类物质的吸附剂，以乙酸乙酯作为粗提液的萃取剂，同时以 硅胶ZCX-2作为分离纯化酚类化合物的吸附剂，以不同比例的二氯甲烷和甲醇混合液作为 洗脱剂，确定出了从枣花蜜中提取、纯化酚类化合物的最佳方案，为充分开发枣花蜜中酚类 化合物提供了理论基础，为我国蜂蜜行业的发展和酚类化合物分离的研究做出贡献。本发 明能够有效的从枣花蜜中分离出高纯度的酚类化合物，分离出的三种物质的纯度可分别达 至 Ij82.3%、67.7% 和 92.7%。
【附图说明】
[0023] 图1为本发明实施例一种从枣花蜜中提取、纯化酚类化合物的方法的流程图；
[0024] 图2为本发明实施例经初步纯化所得粗提物的高效液相色谱图；
[0025] 图3为本发明实施例中利用不同萃取相和水相的定容液所得的高效液相色谱图；
[0026] 图4为本发明实施例分离纯化得到的3种酚类化合物的高效液相色谱图。
【具体实施方式】
[0027] 为了使本发明的目的、技术方案及优点更加清楚明白，以下结合附图和实施例，对 本发明进行进一步详细说明。应当理解，此处所描述的具体实施例仅仅用以解释本发明，并 不用于限定本发明。
[0028] 图1示出了本发明实施例提供的一种从枣花蜜中提取、纯化酚类化合物的方法的 实现流程。如图1所示，本发明实施例给出的一种从枣花蜜中提取、纯化酚类化合物的方法， 具体按照如下步骤进行：
[0029]步骤S101、枣花蜜水溶液的制备：向枣花蜜中加入1 -10倍体积蒸馏水，优选的，枣 花蜜与蒸馏水按照体积比1:6搅拌均匀；
[0030] 步骤S102、初步纯化:大孔吸附树脂湿法装柱，大孔吸附树脂为XAD-2型，加入步骤 SlOl制备得到的枣花蜜水溶液，然后依次用酸水、蒸馏水、无水甲醇进行洗脱，洗脱流速均 为0.7ml/min，收集无水甲醇的洗脱溶液，利用旋转式蒸发器于40°C旋转蒸干，即得粗提物； 其中的酸水洗脱所用酸水为盐酸，pH = 2;在此步骤中，枣花蜜水溶液利用酸水进行洗脱，枣 花蜜中的酚类化合物经酸水洗涤后仍然留在层析柱内，而糖和其他极性化合物则被洗脱 掉，这使得酚类物质的吸附率非常高。
[0031]步骤S103、粗提物的萃取处理:将得到的酚类化合物的粗提物用蒸馏水溶解，然后 用1倍体积的乙酸乙酯进行充分萃取，收集萃取相液体，利用旋转式蒸发器于40°c旋转蒸 干，收集所得干物质，即得乙酸乙酯萃取相的酚类物质；在本实施例中，酚类化合物的粗提 物可按照质量体积比1:5~20溶解在蒸馏水中。
[0032]步骤S104、硅胶柱层析纯化:将所得乙酸乙酯萃取相的酚类物质上样，硅胶柱层析 纯化所用柱层析硅胶为ZCX-2型，洗脱分三步进行，依次用体积比为25:1、15:1和13:1的二 氯甲烷和甲醇混合液作为洗脱剂进行洗脱，流速为〇.6ml/min，对不同比例的洗脱剂洗脱得 到的洗脱液分别进行收集，得到纯化液，然后将所得纯化液分别利用旋转式蒸发器于40°C 旋转蒸干，得到纯化后的三种枣花蜜酚类化合物。
[0033] 本发明选择大孔吸附树脂做吸附剂，主要是依靠大孔吸附树脂和吸附质的分子之 间的范德华引力，通过树脂的比表面进行物理吸附。通过试验发现，大孔吸附树脂XAD-2对 枣花蜜中的酚类化合物的吸附效果最好，而对其他物质的吸附作用较弱。根据吸附力及其 分子量大小