一种树头菜多糖提取纯化方法及其用图
【技术领域】
[0001] 本发明涉及一种多糖提取方法，尤其是涉及一种树头菜多糖提取纯化方法及其用 途。
【背景技术】
[0002] 树头菜（crateva unilocalaris Buch.)又名刺荀菜，我国多野生于云南、广东与 广西等山区，素有森林蔬菜的美誉。树头菜的外形似香椿，多在春天采摘食用。它是一种刺 藤乔木的伞状嫩尖，肥大香鲜。由于树头菜多生长于海拔1500米左右的湿润山区，需要适 宜的气候条件才能生长，目前还没有被人工驯化与栽培。
[0003] 树头菜具有很高的食用营养价值和中药药用价值。它含有丰富的蛋白质以及矿物 质元素，对人体健康有着促进作用。同时，树头菜还是人们餐桌上的宠儿，可以凉拌也可翻 炒，色香味俱全。树头菜还可入药，具有清热解毒、舒活筋络的疗效。在民间常作为清热解 毒、舒筋活络的中草药使用。其根、叶均可入药，味苦性寒。根可治肝炎、痢疾、腹泻、风湿性 关节炎、疟疾等；叶具有健胃之效；可解毒，治烂疮。树头菜营养丰富，含有氨基酸、维生素、 矿物质、黄酮、糖类、挥发油、有机酸等多种生物活性成分，是一种典型的无污染、高品质的 绿色蔬菜，具有很好的药食两用价值。多糖是一类重要的生物活性物质，广泛存在于各种植 物中，具有增强免疫力、抗肿瘤、抗辐射、抗疲劳、降血糖、降血脂、延缓衰老等作用。目前对 树头菜的研究主要以化学成分及分析方法为主，还没有针对树头菜多糖提取工艺的研究。
【发明内容】
[0004] 本发明所要解决的技术问题是提供一种提取效率高、产品纯度高以及抗氧化剂性 强的树头菜多糖提取纯化方法及其用途。
[0005] 本发明解决上述技术问题所采用的技术方案为：一种树头菜多糖提取纯化方 法，具体步骤如下：取树头菜在室温条件下进行微波脱水，微波功率为650W，脱水时间为 lOmin，然后用刀式粉碎机粉碎直至粒度为40目得到树头菜干粉，将树头菜干粉置于回流 装置中，加入体积浓度为95%的乙醇溶液，然后在97°C的恒温下回流提取3. 6h得到树头菜 粗多糖，将树头菜粗多糖加水溶解，用Sevag法重复进行纯化去除蛋白、核酸，直至树头菜 粗多糖在紫外检测中于260 nm和280 nm处无特征吸收峰为止，然后用丙酮、乙酸乙酯依次 洗涤沉淀3次，最后在50°C条件下烘干得到纯度达99. 2%的树头菜多糖产品。
[0006] 所述的树头菜干粉与乙醇溶液的混合比例为lg :34. 5ml。
[0007] 所述的树头菜粗多糖与所述的水的混合比例为lg :25ml。
[0008] 该树头菜多糖具有在制备抗氧化剂方面的用途。
[0009] 所述的树头菜多糖清除羟基自由基的IC5Q值为0. 735mg/mL。
[0010] 所述的树头菜多糖清除超氧阴离子自由基的IC5(I值为0. 802mg/mL。
[0011] 与现有技术相比，本发明的优点在于：本发明一种树头菜多糖提取纯化方法及其 用途，利用响应面法优化树头菜多糖的提取率，得到的最佳提取条件为提取温度97 °C、提 取时间3. 6h、液料比34. 5:1 (mL:g)。树头菜粗多糖提取率为3. 828%，最终树头菜多糖产 品纯度达99.2% ;体外抗氧化试验结果表明，树头菜多糖的抗氧化能力在一定质量浓度范 围内呈量效关系，树头菜多糖的还原能力、对羟基自由基和超氧阴离子自由基的清除能力 均表现出较好的效果，清除羟基自由基和超氧阴离子自由基的IC5Q分别为0.735mg/mL和 0.802mg/mL，其抗氧化能力高于VC和TBHQ，是一种很好的天然抗氧化剂。
【附图说明】
[0012] 图1为提取温度与树头菜粗多糖提取率的关系图； 图2为液料比与树头菜粗多糖提取率的关系图； 图3为提取时间与树头菜粗多糖提取率的关系图； 图4为颗粒尺寸与树头菜粗多糖提取率的关系图； 图5为树头菜多糖、VC和TBHQ三者的还原力比较图； 图6为树头菜多糖、VC和TBHQ三者对羟基自由基的清除率比较图； 图7为树头菜多糖、VC和TBHQ三者对超氧阴离子自由基的清除率比较图。
【具体实施方式】
[0013] 以下结合附图实施例对本发明作进一步详细描述。
[0014] 一、试验方法 1、多糖含量测定 以葡萄糖为标样，用苯酚-硫酸法测定多糖含量。标准曲线回归方程(该方程为紫外 可见分光光度法得到的方程）为右0. 0474+4. 8901a U为葡萄糖质量浓度，范围为20~ 12〇11^/1，^为吸光度），你0.9990，根据方程可计算多糖含量。树头菜粗多糖提取率/%=(提 取液中多糖含量/原料干质量）X 100。
[0015] 2、以VC和TBHQ为对照，还原力、羟基自由基清除率和超氧阴离子自由基清除率的 测定方法如下： (1)还原力的测定：去不同质量浓度的纯化样品溶液1. 〇ml于10mL比色管中，加入 pH6. 6的磷酸缓冲溶液（200mmol/L) 2. 5ml，1%铁氰化钾1. OmL，混匀后在50°C水浴中保 温20min，迅速冷却，加入10%三氯乙酸1. OmL，用蒸馈水稀释至刻度。以3000r/min离心 lOmin，取上清液2. 5mL，加入0. l%FeCl3l. OmL，用蒸馈水稀释至5mL，lOmin后于700nm处测 定吸光度，用蒸馏水做参比，以VC和TBHQ为对照，吸光度大小表示还原能力强弱。
[0016] (2)羟基自由基清除率测定：在10mL比色管中依次加入9mmol/L FeS04l. OmL， 10mmol/L水杨酸-乙醇溶液1. OmL，不同质量浓度样品溶液1. 0mL，9mmol/LH202l. OmL，于 37°C水浴中反映30min，取出用蒸馏水稀释至刻度。在510nm处测定吸光度，用蒸馏水做参 t匕，以VC和TBHQ为对照。清除率计算公式： 清除率/% =心-(4-〇/\*100,式中：A0为空白对照液的吸光度；\为样品溶液的吸 光度；Ax(l为不加H 202的样品溶液吸光度。
[0017] (3)超氧阴离子自由基清除率的测定：在10mL比色管中加入pH8. 2的Tris-HCl 缓冲液（50mmol/L)4. OmL，不同质量浓度的样品溶液1. OmL，于25°C水浴中放置lOmin，加入 25mmol/L邻苯三酚0. lmL，混