专利名称：：6-o-甲基红霉素a晶型ⅲ的制作方法
技术领域：
：本发明涉及具有治疗作用的化合物及其制备方法。具体地讲本发明涉及新化合物6-O-甲基红霉素A晶型III,其制备方法，含该化合物的药用组合物及作为治疗物的使用方法。
背景技术：
：6-0-甲基红霉素A(甲红霉素)是下式(1)的半合成大环内酯类抗生素，6-0-甲基红霉素A对革兰氏阳性细菌，一些革兰氏阴性细菌、厌氧细菌、衣原体和支原体具有优异的抗菌活性。它在酸性条件下是稳定的而且口服有效。已确定的6-O-甲基红霉素A的结晶型式，称为晶型"III",结晶型式是通过粉末或单晶的衍射图确定。见图l。发明概述已知的6-0-甲基红霉素a存在四种结晶型式，指定为"0"型、't，型、"ii"型和"a"型。见美国专利5.858.986、5.844.105及中国专利971814325、03106552.X，通过粉末X射线衍射确定。美国专利5.858.986指出"I"型晶体具有良好的体内溶解性，而稳定性较差。美国专利.844.105指出"II"型晶体具有较好的热稳定性，但体内溶解性较差。中国专利971814325指出"0"型晶体是"1"、"II"晶体的中间体，是湿晶。中国专利03106552.X是另一种结晶型式，6-0-甲基红霉素A晶型III与晶型"0"、"1"、"11"、"A"具有相同的抗菌活性谱，对比"o"、"r，、"n"、"a"其优越性在于晶型"nr'，具有更优良的体内溶解性，晶型"nr相对晶型"r、"n"、"a"的优良易溶性可增加抗菌素的生物利用度和提供有意义的配制优点，特别是对比晶型"r、"n"等晶体6-o-甲基红霉素A晶型III配制成注剂时，完全消除了注射过程中的静脉炎及疼痛等严重副反应，在临床上有广泛应用意义。6-o-甲基红霉素a晶型ni的特征在于粉末x射线衍射2-6的特征峰值为4.94±0.2、6.42±0.2、9.05±0.5、io.oi土0.2、11.21±0.2、12.04±0.2、1196±0.2、15.12±0.2、15.49±0.2、16.16±0.2、16.91±0.2、18.36±0.2、18.71±0.2、19.45±0.2、20.26±0.2、22.71±0.2、23.69±0.2、24.98±0.2、25.85±0.2,其在粉末X-射线衍射2-6对应的1/10值为U.852.825.01003.938.230.438.919.738.31.816.629.66.615.516.813.717.85.019.4发明详述6-0-甲基红霉素A晶型m通过将红霉素A的6—羟基团甲基化制备。代表性6-0-甲基红霉素A制备方法描述于美国专利43311803、4670549和4990602及中国的991062310,在此将它们引为参考，通过多种合成途径由红霉素A制备6-0-甲基红霉素A,特别有用的一种方法包括将红霉素A9肟及2，、4"分别保护，使用的保护基如三甲基甲硅烷基、叔一丁基二苯甲基甲硅烷基等单一或混合保护基，然后脱保护去肟化得6-0-甲基红霉素A。至于"药学上可接受的盐"，它的意思是指在正确的医学判断范围内，适合用于与人和较低等动物组织接触，并无过度的毒性、刺激性、过敏反应等，以及与合理的利益/风险(benefit/risk)比相称的盐。本领域熟知药学上可接受的盐。例如，S.M.Berge等在J.PharmaceuticalSciences,1977.66:1-19中详细介绍药学上可接受的盐。在本发明化合物最后的分离和纯化过程中原地制备所述盐或使游离碱官能团与适当有机酸反应分离所述盐。代表性的酸加成盐包括乙酸盐、已二酸盐、藻酸盐、抗坏血酸盐、天冬氨酸盐、苯磺酸盐、苯甲酸盐、硫酸氢盐、硼酸盐、丁酸盐、樟脑酸盐、环腺苷酸磺酸盐(camphersulfonate)、柠檬酸盐、环戊烷丙酸盐、二葡糖酸盐、十二烷基硫酸盐、乙碘酰盐、富马酸盐、葡庚糖酸盐、甘油磷酸盐、半硫酸盐(hemisulfate)、庚酸盐、已酸盐、氢溴酸盐、盐酸盐、氢磷酸盐、2-羟基-乙磺酸盐、乳糖酸盐、乳酸盐、月桂酸盐、月桂基硫酸盐、苹果本盐、马来酸盐、丙二酸盐、甲碘酸盐、2-萘烯磺酸盐、烟酸盐、硝酸盐、油酸盐、草酸盐、棕榈酸盐、pamoate、果胶酯酸盐、过硫酸盐、3-苯基丙酸盐、磷酸盐、苦味酸盐、新戊酸盐、丙酸盐、硬脂酸盐、丁二酸盐、硫酸盐、酒石酸盐、硫腈酸盐、甲苯横酸盐、十一烷酸盐、戊酸盐等。有代表性的碱或碱土金属盐包括钠、锂、钾、镁等，以及无毒的铵、季铵和氨阳离子，包括(但不限于此)四甲基铵、四乙基铵、甲铵、二甲铵、三甲铵、三乙胺、乙胺等。在本发明的方法中，将通过上述任何方法制备的6-0-甲基红霉素A悬浮于所需溶剂中，如乙醇并加热至大约该溶剂的回流温度。继续加热并将悬浮液搅拌足够的时间以便使大部份固体溶解，一般约IO分钟至35分钟。然后，将此悬浮液进行热过滤，如果需要，可将此滤液在该溶剂的回流温度或该温度左右加热以形成清澈的溶液，然后慢慢地将此滤液冷却至室温，任选地在冰洛中进一步冷却。在此说明书中，室温是约2(TC-25°C，然后分离6-0-甲基红霉素A,并在约4(TC-约78。C常压或真空干燥得6-0-甲基红霉素A晶型III。优选分离6-0—甲基红霉素A晶型III的溶剂是乙醇、乙酸异丙酯、四氢^^喃和异丙醇及含5%-10%水份的乙醇。最优选分离6-0—甲基红霉素A晶型m的溶剂是乙醇。本发明也提供药用组合物，其中包括6-0-甲基红霉素A晶型ni与一种或多种无毒的药学上可接受的载体配制，可专门配制药用组合物为口服药的固体或液体型式、非肠道注射或直肠给药。对人和其它动物可以经口服、直肠、非直肠、脑池内、阴道内、腹膜内、局部(如粉剂、软膏剂或滴剂)、舌下或作为口腔或鼻腔喷雾剂给予本发明的药用组合物。在此所用的术语"胃肠外"给药指静脉输注的给药模式。对非肠道注射的本发明药用组合物包括药学可接受的无菌水溶液或非水溶液、分散液、悬浮液或乳化液以及使用前将无菌粉末再组合成无菌可注射溶液或分散液。合适的水溶的和非水溶的载体、稀释剂、溶剂或溶媒包括水、乙醇、多元醇(如丙三醇、丙二醇、聚乙二醇等)和其适合的混合物、植物油(如橄榄油)、和可注射的有机酯如油酸乙酯。例如使用包衣材料(如卵磷酯)，在分散的情况下保持所需的粒度和使用表面活性剂来保持适当的流动性。所述的组合物也含有辅料如保护剂、润湿剂、乳化剂和分散剂。为了确保防止微生物的作用可加入各种抗菌剂和抗真菌剂，例如对羟基苯甲酸酯类、氯丁醇、山梨酸苯酚酯等。含有等渗剂如糖、氯化钠等也是所需的。通过加入延缓吸收剂如单硬脂酸铝和明胶可引起可注射的药用型式的延长吸收。通过在生物降解聚合物如聚交酯一聚乙交酯中型成药物的微囊基质可制备注射的储药型式。根据药物对聚合物的比率和所用具体聚合物的性质，可以控制药物的释放速度，其它生物降解聚合物的实例包括聚(原酸酯)和聚(酐)。通过在脂质体或为身体组织相容的微乳剂中截留药物也可制备储药可注射的制剂。例如通过除菌过滤器过滤或将消毒剂加入无菌固体组合物型式(在使用之前用无菌水或其它无菌可注射的介质溶解或分散)来使可注射的制剂灭茵。口服给药的固体剂型包括胶囊、片剂、丸剂、粉剂和颗粒剂。在这样的固体剂型中，将活性化合物混合于至少一种惰性，药学上可接受的赋型剂或载体如柠檬酸钠或磷酸二钙和/或a)填充剂或膨胀剂如淀粉、乳糖、蔗糖、葡萄糖、甘露醇和硅酸，b)粘合剂例如像羧甲基纤维素、藻酸盐、明胶、聚乙烯吡咯烷酮、蔗糖和阿拉伯树胶，c)湿润剂如甘油，d)崩解剂如琼脂、碳酸钙、马铃薯或木薯淀粉、藻酸、某些硅酸盐和碳酸钠，e)溶液抑制剂如石蜡，f)加速吸收剂如季铵化合物，g)润湿剂例如像十六烷醇和单硬脂酸甘油酯，、h)吸收剂如高岭土和皂土和O润滑剂如滑石、硬脂酸钙、硬脂酸镁、固体聚乙二醇、月桂基硫酸钠和其混合物。在胶囊、片剂和丸剂情况下，剂型也可包括缓冲剂。使用像乳糖或乳糖这样的赋型剂以及高分子量聚乙二醇等作为软和硬填充明胶胶囊的填充剂也可以用于相似类型的固体制剂。用包衣和外层如肠溶衣和药学制剂技术上熟知的其它包衣可制备片剂、糖衣丸、胶囊、丸剂和颗粒剂的固体剂型。它们可任选含有不透明剂和也是仅释放活性成分的制剂或优选在某部分肠道，优选以延缓方式释放。所用的包埋组合物实例包括聚合物和蜡。活性化合物也可以是徼囊包裹制型，若合适与一种或多种上述赋型剂组合。口服给药的液体剂型包括药学上可接受的乳化剂、溶液、悬浮液、糖浆剂和酏剂。除活性化合物外，液体剂型可含有本领域中所常用的惰性稀释剂，例如像水或其它溶剂、增溶剂和乳化剂如乙醇、异丙醇、碳酸乙酯、乙酸乙酯、苄醇、苯甲酸苄酯、丙二醇、1,3丁二醇、二甲基甲酰胺、油(特别是棉仔油、落花生油、谷物油、胚芽油、橄榄油、蓖麻油和芝麻油)、丙三醇、四氢呋喃基醇、聚乙二醇和脱水山梨醇脂肪酸酯，及其混合物。除隋性稀释剂外，口服制剂也包括辅料如润湿剂、乳化剂和悬浮剂，甜味剂、调味剂和香味剂。除活性化合物外，悬浮液可含有悬浮剂例如像乙氧化异十八烷醇、聚氧乙烯山梨醇和脱水山梨醇酯，微晶纤维素、偏氢氧化铝(aluminummetahydroxide)皂土、琼脂和黄蓍胶及其混合物。直肠或阴道给药的制剂优选栓剂，通过将本发明化合物与合适的非刺激性的赋型剂或载体如可可脂、聚乙二醇混合或在室温为固体但在体温为液体的栓剂蜡来制备，因而可在直肠或阴道腔融化并释放活性化合物。本发明化合物也可以是脂质体型式给药。如本领域所熟知，脂质体一般衍生于磷脂或其它脂质物质。通过分散于含水介质中的单一或多薄层水化液晶来型成脂质体。可以使用任何无毒、生理上可接受的和能型成脂质体的可代谢脂质。除本发明化合物外，本发明的脂质体型式的制剂可含有稳定剂、防腐剂、赋型剂等。优选的脂质是磷脂和磷脂酰胆碱(卵磷脂)，两者可以是天然的和合成的。本领域熟知型成脂质体的方法。例如见Prescott,Ed.，MethodsinlCellBi0L0gy，VolumeXIV,AcademicPress,NewYork,N，Y,(1976)，P.33etseq本发明化合物的表面给药剂型包括粉剂、喷雾剂、软膏剂和吸入剂、在无菌条件下将活性化合物混合于药学上可接受的载体和任何需要的防腐剂、缓冲剂或抛射剂(需要时)中.眼科(Opthalmic)用制剂、眼膏、粉剂和溶液也设计在本发明范围内。对特定患者、制剂及给药模式而言，本发明的药用制剂中活性成分的实际剂量水平是可以改变的，以使获得有效取得所需的治疗反应的活性化合物用量。选择剂量水平将取决于特定化合物的活性，给药途径、所治疗病症的严重性和所治疗患者的症状和治疗史。然而，在本领域技术人员内开始的化合物剂量水平低于所要求取得所需的治疗效果的用量并逐步增加剂量直到取得所需的效果为止。对哺乳纲病者每天每公斤体重一般给予约1至约900mg,更优选约5至约200mg的6-0—甲基红霉素A晶型III的剂量水平。若所需，有效的日剂量可以分为多次剂量的给药方式，如每日分为2-4次开的剂量。提供下面实施例使本领域技术人员能够实施本发明，但仅仅为说明本发明。它们并不构成如权利要求中所定义的对本发明范围的限制。实施例1:制备6-0—甲基红霉素A晶型m按照通过C-9羟肟化，保护C-9肟羟基，C-2，和C-4"羟基。将C-6羟基甲基化，去肟化并除去保护基，并用乙醇重结晶，由红霉素A制备6-0—甲基红霉素A。将上述制备的6-0—甲基红霉素A(10.Og)和95°/。乙醇UOml)的混合物加热至回流并滤去不溶物质(3.2g),将此滤液转移至清洁的烧瓶中并加热至回流。将此清澈的溶液冷却至室温，然后再在冰浴中冷却，将此液体倾析，湿固体在78。C下干燥得6-0—甲基红霉素A晶型III(3.3g)。实施例26-o—甲基红霉素a晶型"i"、"n"、"a"、"in"的溶解速率使用恒定表面积(13/32"直径)的药块，在37"C于300ml的0.05M辚酸盐缓冲液在60rpm下进行溶解性研究。定时除去等分量(alliquote)并经HPLC[5cmx4.6mm+3uODS-2"LittleChamp"(Regis)柱;50:50乙腈-O.05MpH4.0辚酸盐缓冲液流动相；1.Oml/min流速]直接测定。如表1所示6-0—甲基红霉素A晶型"1"、"n"、"a"、"III"的固有溶解速率。表16-0—甲基红霉素A晶型"1"、"n"、"a"、"III"的固有溶解速率<table>tableseeoriginaldocumentpage13</column></row><table>说明书图1为X射线衍射图谱，其样品名为6—0—甲Ji3^霉素A晶型m。其特征26(度)为4.9386.4227.8129.0510.01311.20612.03612.56713.96315.12015.49116.16416.91217.36318.36018.71319.4520.25521.2522.70523.69324.97725.84727.46129.36933.131其对应的d值为17.882313.752511.30789.76338.82627.88957.34707.03776.33735.85495.71525.47885.23835.10324.82824.73804.56004.38054.17773.91313.75223.56213.44423.24533.03862.7017其对应的1/1。为12.852.87.525.01003.938.21.830.438.919.738.31.81.616.629.66.615.516.813.717.85.019.45.57.62.9其对应的I.cps值为1258517973624499812385374817529833812193437621751601630290064515221653134117454941901540750287其对应的FWHM值为0.390.210.310.310.200.320.220.310.340.240.350.340.430.320.310.350.390.270.310.210.2权利要求1、指定为6-O-甲基红霉素A晶型III的化合物，其在粉末X-射线衍射2-θ的特征峰值为4.94±0.2、6.42±0.2、9.05±0.5、10.01±0.2、11.21±0.2、12.04±0.2、13.96±0.2、15.12±0.2、15.49±0.2、16.16±0.2、16.91±0.2、18.36±0.2、18.71±0.2、19.45±0.2、20.26±0.2、22.71±0.2、23.69±0.2、24.98±0.2、25.85±0.2，其在粉末X-射线衍射2-θ对应的I/I0值为12.852.825.01003.938.230.438.919.738.31.816.629.66.615.516.813.717.85.019.4或其药学上可接受的盐。2、包括治疗有效量的6-0-甲基红霉素A晶型III与药学上可接受的载体组合的制剂。3、对需要此种治疗的宿主哺乳动物治疗细菌感染的方法，该方法包括对所述哺乳动物给予治疗有效量的6-0-甲基红霉素A晶型III。4、制备6-0-甲基红霉素A晶型III的方法，其包括(a)将红霉素A转化为6-0-甲基红霉素A;(b)用选自下面的溶剂处理6-0-甲基红霉素A(I)乙醇(II)乙酸异丙酯(III)异丙醇(c)分离步骤(b)中型成的结晶的6-0-甲基红霉素A;(d)在室温至78X:的温度下干燥步骤(c)中分离的6-0-甲基红霉素A型成6-0-甲基红霉素A晶型III。5、权利要求4的方法，其中在从约40。C至78'C的温度干燥所述的6-0-甲基红霉素A。6、权利要求4的方法，其中步骤(a)包括(I)将红霉素A转化成红霉素A9-肟；(II)保护步骤a中制备的红霉素A9-膀2，和4"羟基；(III)使步骤b的产物与甲基化试剂反应；(IV)将步骤c产物脱保护和脱肟型成6-0-甲基红霉素A。7、权利要求6的方法，其中6-0-甲基红霉素A是在从约4(TC至约78'C温度下进行常压或真空干燥的。8、根据权利要求7的制备6-O-甲基红霉素A晶型ni的方法，其中所述溶剂选自(a)乙醇(b)乙酸异丙酯(c)异丙醇9、根据权利要求7的制备6-0-甲基红霉素A晶型III的方法，其中所述的溶剂是乙醇。全文摘要本发明涉及新化合物6-O-甲基红霉素A晶型III，其制备方法，含该化合物的药用组合物及作为治疗物的使用方法。文档编号C07H17/08GK101190933SQ200610164410公开日2008年6月4日申请日期2006年11月30日优先权日2006年11月30日发明者王凌峰申请人:王凌峰