专利名称：高纯度明月草查尔酮的提取方法
技术领域：
本发明属于医用、化工领域，具体涉及明月草中的化学物质的提取方法。
背景技术：
“明月草”，原产于日本长寿之乡八丈岛。“明月草”具有抗人体衰老、血栓、癌，降血糖、血压、胆固醇，改善肠胃道等等功能，能治疗和预防沈种疾病，其中降血糖、血压效果最明显。据国际权威机构日本大阪药科大学研究发现“明月草”含有比人参高的锗、查尔酮和多种天然有机素等。其中的查尔酮除了具有抗氧化、清除自由基的活性的功能外，还具有抗利什曼原虫病(尤指黑热病)、抗炎、抗HIV、抗肿瘤、抗菌、免疫促进等功能，在食品和医药工业中有着很广泛的用途。虽然明月草中含有丰富的查尔酮，但对于明月草的研究我国还处于初期阶段，目前没有专门用于从明月草中提取查尔酮的方法。如直接采用已有工艺从明月草中提取查尔酮的话，工艺复杂、成本高，而且难于获得较高的纯度。
发明内容
为了解决上述问题，本发明的目的在于，提供一种高纯度明月草查尔酮的提取方法，从明月草中提取出查尔酮。本发明所解决的技术问题可以采用以下技术方案来实现高纯度明月草查尔酮的提取方法，包括如下步骤(1)提取，将明月草干燥粉碎成明月草粉，将明月草粉用提取溶剂进行提取，得到提取液；(2)萃取，使用有机溶剂萃取提取液，获得有机溶剂萃取相和萃余相；(3)分离，将有机溶剂萃取相进行减压浓缩，得到浓缩物，将浓缩物通过柱层析分离，洗脱剂洗脱，获得含查尔酮的流出液，并减压浓缩此流出液，得查尔酮浓缩物；(4)结晶，将查尔酮浓缩物用有机溶剂结晶即得查尔酮纯品。通过上述步骤，可以从明月草中将查尔酮提取出来，得到查尔酮纯品，该提取方法工艺简单、成本低廉、适于工业化生产，为查尔酮单体药理的进一步研究提供了原料。步骤(1)中将明月草粉用提取溶剂进行提取的方法包括冷渗法、温浸法或回流法；所述提取溶剂为下述溶剂中的一种A.甲醇与水的混合物，混合物中甲醇的含量占 O-IOOwt% ；B.乙醇与水的混合物，混合物中乙醇的含量占O-IOOwt1^ ；C.丙酮与水的混合物，混合物中丙酮的含量占0-100wt% ；步骤O)中，有机溶剂采用搅拌萃取或采用连续流萃取分离机萃取的方式萃取提提取液；所述有机溶剂为正丁醇、乙酸乙酯、正己烷、氯仿或异戊醇中的一种；步骤(3)中，得到浓缩物的同时，可以回收其中的有机溶剂；洗脱剂由乙醇水溶液或甲醇水溶液或丙酮水溶液组成，其中水占的比例为IOO-Owt %，进行等度或梯度洗脱；用
4薄层层析检测法或高效液相色谱法检查流出液，收集含查尔酮的流出液；步骤中，所述有机溶剂是丙酮、乙醇、甲醇、异丙醚、氯仿或它们的混合溶剂。通过对各溶剂的选取以及对各步骤的优化，采用上述高纯度明月草查尔酮的制备方法，可以从明月草中提取到较高纯度的查尔酮纯品。经实验验证，通过上述方法获得的查尔酮纯品纯度可达90%以上。而且提取过程中，采用可重复使用的柱层析分离方法，使用水、醇、丙酮等无毒或低毒可回收溶剂，降低了生产成本的同时，减少了对环境的污染。
图1为本发明的流程示意图。
具体实施例方式为了使本发明实现的技术手段、创作特征、达成目的与功效易于明白了解，下面结合具体图示进一步阐述本发明。高纯度明月草查尔酮的提取方法，主要包括⑴提取、(2)萃取、(3)分离、⑷结晶四个步骤。步骤(1)中的冷渗法为在室温下以10 15倍质量比的溶剂浸泡明月草粉， 然后以渗漉的方法进行提取，提取次数为1 5次。为了节约时间，同时保证查尔酮的提取量，提取次数优选3次。步骤(1)中的温浸法为在30 45°C温度下以5 25倍质量比的溶剂浸泡明月草粉、搅拌并保温3 6小时；步骤(1)中的回流法是以2 15倍质量比的溶剂浸泡明月草粉，加热使溶剂回流并保持回流状态1 5小时。在进行步骤( 之前可以将提取液真空减压浓缩至真空度为0. 01 0. IMpa，温度40 80°C，浓缩液20°C时比重为1. 05 1. 15 ；回收提取液中的有机溶剂。步骤( 是用1 3倍体积比的有机溶剂萃取，萃取方式为搅拌萃取时，室温4 10°C低温静置分层。步骤C3)中的减压浓缩为真空减压浓缩，真空度为0. 01 0. IMpa，温度40 80°C，浓缩液20°C时比重为1. 05 1. 15 ；柱层析分离所使用的柱层析填料为大孔径树脂、聚酰胺或葡聚糖凝胶。为了提高提取液中的查尔酮的含量，同时不破坏查尔酮的化学结构，提取溶剂优选下述溶剂中的一种A.甲醇与水的混合物，混合物中甲醇的含量占50-70wt%;B.乙醇与水的混合物，混合物中乙醇的含量占50-70wt% ；C.丙酮与水的混合物，混合物中丙酮的含量占 50-70wt% ；实施例1称取干燥粉碎的明月草粉lKg，分别加入质量比1 4，1 3和1 3的水回流提取3次，第一次保持回流状态2小时，第二、第三次分别为1.5小时，过滤，合并滤液，减压浓缩至比重1. 15(20°C)，用异戊醇按1 1比例搅拌萃取3次，合并浓缩萃取液，所得浓缩物以500g大孔XAD-7树脂吸附，乙醇水梯度洗脱，其中水占乙醇水的比例由100wt%，间隔 20wt%，梯度递减至0wt%，用薄层层析裣测法检查流出液，收集含明月草查尔酮的流出液， 减压浓缩得明月草查尔酮浓缩物，再经甲醇结晶，得1. 17克纯度90. 13%的明月草查尔酮纯品。实施例2称取干燥粉碎的明月草粉lKg，以5倍量40%乙醇于50°C温浸提取6小时，过滤， 滤液减压回收乙醇，浓缩至比重1. 10(20°C)，用乙酸乙酯按1 1比例搅拌萃取3次，合并萃取液，减压回收乙酸乙酯，所得浓缩物以500g聚酰胺吸附，乙醇水梯度洗脱，其中水占乙醇水的比例由100wt%，间隔10wt%，梯度递减至0wt%，用薄层层析检测法检查流出液，收集含甘草查尔酮的流出液，减压浓缩得明月草查尔酮浓缩物，再经氯仿结晶，得2. 12克纯度90. 17 %的明月草查尔酮纯品。实施例3称取干燥粉碎的明月草粉lKg，以20倍量50%丙酮于50°C温浸提取3小时，提取液60°C减压浓缩至比重1.08(20°C)，用正丁醇按1 3比例搅拌萃取2次，合并浓缩萃取液，所得浓缩物以5009大孔DlOI树脂吸附，乙醇水梯度洗脱，其中水占乙醇水的比例由 100wt%，间隔10wt%，梯度递减至0wt%，用薄层层析检测法检查流出液，收集含明月草查尔酮的流出液，减压浓缩得明月草查尔酮浓缩物，再经氯仿结晶，得2. 96克纯度90. 76%的明月草查尔酮纯品。实施例4称取干燥粉碎的明月草粉lKg，以40%丙酮按质量比1 8，1 6和1 6回流提取3次，每次2小时，过滤，合并滤液，减压回收丙酮，浓缩至比重1. 10(20°C )，用乙酸乙酯按1 1比例搅拌萃取3次，合并萃取液，减压回收乙酸乙酯，所得浓缩物以500g大孔 XAD-7树脂吸附，乙醇水梯度洗脱，其中水占乙醇水的比例由100wt%，间隔15wt%，梯度递减至0wt%，用薄层层析检测法检查流出液，收集含明月草查尔酮的流出液，减压浓缩得明月草查尔酮浓缩物，再经甲醇一氯仿结晶，得2. 21克纯度90. 84%的明月草查尔酮纯品。实施例5称取干燥粉碎的明月草粉lKg，以无水丙酮按质量比1 5，1 4和1 4回流， 保持回流状态2小时，过滤，提取3次，合并滤液，减压回收丙酮，浓缩近干后加水至比重 1. 15(20°C)，用异戊醇按1 1比例搅拌萃取3次，合并浓缩萃取液，所得浓缩物以500g聚酰胺树脂吸附，乙醇水梯度洗脱，其中水占乙醇水的比例由IOOwt %，间隔20wt %，梯度递减至0wt%，用薄层层析检测法检查流出液，收集含明月草查尔酮的流出液，减压浓缩得明月草查尔酮浓缩物，再经异丙醚一丙酮结晶，得2. 58克纯度91. 52%的明月草查尔酮纯品。实施例6称取干燥粉碎的明月草粉lKg，分别用10倍、8倍、5倍量的80%丙酮水回流提取3次，第一次提取池，第二次提取lh，第三次提取Ih过滤，合并提取液，40°C减压回收丙酮，浓缩至比重1.05(20°C)，用乙酸乙酯按1 3比例连续流萃取，浓缩萃取液，所得浓缩物以500g大孔DlOI树脂吸附，乙醇水梯度洗脱，其中水占乙醇水的比例由IOOwt %，间隔 20wt%，梯度递减至0wt%，用薄层层析检测法检查流出液，收集含明月草查尔酮的流出液， 减压浓缩得明月草查尔酮浓缩物，再经异丙醚一丙酮结晶，得2. 73克纯度91. 77%的明月草查尔酮纯品。实施例7称取干燥粉碎的明月草粉lKg，以无水乙醇按质量比1 3和1 2回流提取2 次，每次1小时，过滤，合并滤液，减压回收乙醇，浓缩近干后加水至比重1. 10(20°c )，用乙酸乙酯按1 1比例搅拌萃取3次，合并萃取液，减压回收乙酸乙酯，所得浓缩物以500g聚酰胺吸附，乙醇水梯度洗脱，其中水占乙醇水的比例由100wt%，间隔15wt%，梯度递减至 0wt%，用薄层层析检测法检查流出液，收集含明月草查尔酮的流出液，减压浓缩得明月草查尔酮浓缩物，再经己醇一异丙醚结晶，得2. 07克纯度91. 82%的明月草查尔酮纯品。实施例8称取干燥粉碎的明月草粉lKg，以80%甲醇按质量比1 8，1 6和1 4回流提取3次，每次2小时，过滤，合并滤液，减压回收甲醇，浓缩至比重1. 10 (200C )，用正丁醇按 1 1比例搅拌萃取3次，合并萃取液，减压回收正丁醇，所得浓缩物以500g聚酰胺吸附，乙醇水梯度洗脱，其中水占乙醇水的比例由IOOwt %，间隔20wt %，梯度递减至Owt %，用薄层层析检测法检查流出液，收集含明月草查尔酮的流出液，减压浓缩得明月草查尔酮浓缩物， 再经乙醇一异丙醚结晶，得2. 02克纯度92. 12%的明月草查尔酮纯品。实施例9称取干燥粉碎的明月草粉lKg，以20倍量的80%乙醇在室温下浸泡2h，然后以冷渗法提取，渗漉速度为lOmL/min，渗漉液减压浓缩，浓缩至比重为1.08(20°C )时，用水饱和的正丁醇按1 1比例搅拌萃取3次，合并萃取液并减压浓缩回收正丁醇，所得浓缩物以500g大孔DlOI树脂吸附，乙醇水梯度洗脱，其中水占乙醇水的比例由IOOwt %，间隔 20wt %，梯度递减至Owt %，用薄层层析检测法检查流出液，收集含查尔酮的流出液，减压浓缩得查尔酮浓缩物，再经异丙醚一丙酮结晶，得2. 82克纯度92. 21%的查尔酮纯品。实施例10称取干燥粉碎的明月草粉IKg，以8倍量40%甲醇在45°C下温浸3小时，过滤，重复1次，合并滤液，滤液减压浓缩至比重1.08(20°C)，用氯仿按1 1比例搅拌萃取3次， 浓缩萃取液，所得浓缩物以500g kphadexLH-20分离，60%甲醇水溶液洗脱，用薄层层析检测法检查流出液，收集含明月草查尔酮的流出液，减压浓缩得明月草查尔酮浓缩物，再经异丙醚一丙酮精制，得2. 52克纯度92. 52%的明月草查尔酮纯品。实施例11称取干燥粉碎的明月草粉lKg，以50%甲醇按质量比1 8，1 6和1 6回流提取3次，合并提取液，减压回收甲醇，浓缩至比重1. 12(20°C)，用异戊醇按1 1比例搅拌萃取3次，合并浓缩萃取液，所得浓缩物以500g大孔AB-8树脂吸附，乙醇水梯度洗脱，其中水占乙醇水的比例由100wt%，间隔15wt%，梯度递减至Owt%，用薄层层析检测法检查流出液，收集含甘草查尔酮的流出液，减压浓缩得明月草查尔酮浓缩物，再经异丙醚一丙酮结晶，得2. 64克纯度93. 10%的明月草查尔酮纯品。实施例12称取干燥粉碎的明月草粉IKg，以10倍量无水甲醇在室温下进行渗漉，渗漉速度为5ml/min，渗漉液减压浓缩近干后加水至比重1. 10 (20°C )，用正己烷按1 1比例采用连续流萃取分离机萃取2次，合并萃取液并减压浓缩，所得浓缩物以500g大孔AB-8树脂吸附，丙酮水梯度洗脱，其中水占丙酮水的比例由100wt%，间隔IOwt %，梯度递减至Owt %， 用薄层层析检测法检查流出液，收集含明月草查尔酮的流出液，减压浓缩得明月草查尔酮浓缩物，再经丙酮结晶，得1. 80克纯度93. 70 %的明月草查尔酮纯品。上述各实施例中，在步骤( 里，为了使明月草粉中的查尔酮充分并快速的进入到提取溶剂中，在将明月草粉用提取溶剂进行提取的同时，将含有明月草粉的提取溶剂置于超声波发生装置的超声波发射范围内。当超声波在提取溶剂中传播时，由于提取溶剂微粒的剧烈振动，会在提取溶剂内部产生小空洞。这些小空洞迅速胀大和闭合，会使提取溶剂微粒之间发生猛烈的撞击作用，起到很好的搅拌效果，从而加速溶质的溶解，加速化学反应，进而使明月草粉中的查尔酮充分并快速的进入到提取溶剂中。从上述各实施例中，可以看出，当冷渗法以10 12倍质量比的溶剂浸泡明月草粉，温浸法以8 20倍质量比的溶剂浸泡明月草粉，回流法以5 10倍质量比的溶剂浸泡明月草粉时，等质量的明月草粉可以获得较多的查尔酮纯品，故步骤(1)中提取溶剂的量优选上述参数。以上显示和描述了本发明的基本原理和主要特征和本发明的优点。本行业的技术人员应该了解，本发明不受上述实施例的限制，上述实施例和说明书中描述的只是说明本发明的原理，在不脱离本发明精神和范围的前提下，本发明还会有各种变化和改进，这些变化和改进都落入要求保护的本发明范围内。本发明要求保护范围由所附的权利要求书及其等效物界定。
权利要求
1.高纯度明月草查尔酮的提取方法，其特征在于，包括如下步骤(1)提取，将明月草干燥粉碎成明月草粉，将明月草粉用提取溶剂进行提取，得到提取液；(2)萃取，使用有机溶剂萃取提取液，获得有机溶剂萃取相和萃余相；(3)分离，将有机溶剂萃取相进行减压浓缩，得到浓缩物，将浓缩物通过柱层析分离，洗脱剂洗脱，获得含查尔酮的流出液，并减压浓缩此流出液，得查尔酮浓缩物；(4)结晶，将查尔酮浓缩物用有机溶剂结晶即得查尔酮纯品。
2.根据权利要求1所述的高纯度明月草查尔酮的提取方法，其特征在于，步骤(1)中，将明月草粉用提取溶剂进行提取的方法包括冷渗法、温浸法或回流法；所述提取溶剂为下述溶剂中的一种A.甲醇与水的混合物，混合物中甲醇的含量占 O-IOOwt% ；B.乙醇与水的混合物，混合物中乙醇的含量占O-IOOwt1^ ；C.丙酮与水的混合物，混合物中丙酮的含量占0-100wt% ；步骤O)中，有机溶剂采用搅拌萃取或采用连续流萃取分离机萃取的方式萃取提提取液；所述有机溶剂为正丁醇、乙酸乙酯、正己烷、氯仿或异戊醇中的一种；步骤(3)中，得到浓缩物的同时，可以回收其中的有机溶剂；洗脱剂由乙醇水溶液或甲醇水溶液或丙酮水溶液组成，其中水占的比例为IOO-Owt%，进行等度或梯度洗脱；用薄层层析检测法或高效液相色谱法检查流出液，收集含查尔酮的流出液；步骤⑷中，所述有机溶剂是丙酮、乙醇、甲醇、异丙醚、氯仿或它们的混合溶剂。
3.根据权利要求2所述的高纯度明月草查尔酮的提取方法，其特征在于，在进行步骤 (2)之前将提取液真空减压浓缩至真空度为0. 01 0. IMpa，温度40 80°C，浓缩液20°C 时比重为1. 05 1. 15 ；回收提取液中的有机溶剂。
4.根据权利要求3所述的高纯度明月草查尔酮的提取方法，其特征在于，步骤(1)中的冷渗法为在室温下以10 15倍质量比的溶剂浸泡明月草粉，然后以渗漉的方法进行提取， 提取次数为1 5次；步骤(1)中的温浸法为在30 45°C温度下以5 25倍质量比的溶剂浸泡明月草粉、搅拌并保温3 6小时；步骤⑴中的回流法是以2 15倍质量比的溶剂浸泡明月草粉，加热使溶剂回流并保持回流状态1 5小时。
5.根据权利要求4所述的高纯度明月草查尔酮的提取方法，其特征在于，冷渗法以 10 12倍质量比的溶剂浸泡明月草粉，温浸法以8 20倍质量比的溶剂浸泡明月草粉，回流法以5 10倍质量比的溶剂浸泡明月草粉。
6.根据权利要求3所述的高纯度明月草查尔酮的提取方法，其特征在于，步骤C3)中的减压浓缩为真空减压浓缩，真空度为0. 01 0. IMpa,温度40 80°C，浓缩液20°C时比重 为 1. 05 1. 15 ；柱层析分离所使用的柱层析填料为大孔径树脂、聚酰胺或葡聚糖凝胶。
7.根据权利要求3所述的高纯度明月草查尔酮的提取方法，其特征在于，步骤( 是用 1 3倍体积比的有机溶剂萃取，萃取方式为搅拌萃取时，室温4 10°C低温静置分层。
8.根据权利要求2至7中的任意一项所述的高纯度明月草查尔酮的提取方法，其特征在于，步骤(1)中，在将明月草粉用提取溶剂进行提取的同时，将含有明月草粉的提取溶剂置于超声波发生装置的超声波发射范围内。
9.根据权利要求8所述的高纯度明月草查尔酮的提取方法，其特征在于，所述提取溶剂为下述溶剂中的一种A.甲醇与水的混合物，混合物中甲醇的含量占50-70wt%;B.乙醇与水的混合物，混合物中乙醇的含量占50-70wt% ；C.丙酮与水的混合物，混合物中丙酮的含量占50-70wt%。
10.根据权利要求9所述的高纯度明月草查尔酮的提取方法，其特征在于，以10倍量无水甲醇在室温下进行渗漉，渗漉速度为5ml/min，渗漉液减压浓缩近干后加水至比重1. 10(20°C)，用正己烷按1 1比例采用连续流萃取分离机萃取2次，合并萃取液并减压浓缩，所得浓缩物以大孔AB-8树脂吸附，丙酮水梯度洗脱，其中水占丙酮水的比例由 IOOwt %，间隔IOwt %，梯度递减至Owt %，用薄层层析检测法检查流出液，收集含明月草查尔酮的流出液，减压浓缩得查尔酮浓缩物，再经丙酮结晶，得草查尔酮纯品。
全文摘要
本发明涉及明月草中的化学物质的提取方法，高纯度明月草查尔酮的提取方法，包括如下步骤(1)提取，将明月草干燥粉碎成明月草粉，将明月草粉用提取溶剂进行提取，得到提取液；(2)萃取，使用有机溶剂萃取提取液，获得有机溶剂萃取相和萃余相；(3)分离，将有机溶剂萃取相进行减压浓缩，得到浓缩物，将浓缩物通过柱层析分离，洗脱剂洗脱，获得含查尔酮的流出液，并减压浓缩此流出液，得查尔酮浓缩物；(4)结晶，将查尔酮浓缩物用有机溶剂结晶即得查尔酮纯品。通过上述步骤，可以从明月草中将查尔酮提取出来，得到查尔酮纯品，该提取方法工艺简单、成本低廉、适于工业化生产。
文档编号C07C49/796GK102190571SQ20101012742
公开日2011年9月21日 申请日期2010年3月18日 优先权日2010年3月18日
发明者仇存科, 郝将 申请人:上海长庚生物科技有限公司