2,3,5,4′-四羟基二苯乙烯-2-O-β-D-葡萄糖苷的分离纯化工艺的制作方法
【专利摘要】本发明提供了2,3,5,4′-四羟基二苯乙烯-2-O-β-D-葡萄糖苷（以下简称“二苯乙烯苷”）的分离纯化工艺，通过称取二苯乙烯苷提取物经硅胶拌样呈松散状，置玻璃柱上面用洗脱剂洗脱，经过TLC跟踪检测，合并含有二苯乙烯苷的流份，回收溶剂，干燥得二苯乙烯苷的提取物，加纯水加热溶解二苯乙烯苷提取物后冷冻结晶，待其溶化后抽滤，并用纯水洗涤，可得类白色的结晶，将滤渣转移至真空干燥箱干燥，得到二苯乙烯苷纯品；该工艺操作简单可行，并可以提高产品纯度，能够快速大量地分离和纯化二苯乙烯苷；该工艺操作简便，成本低廉，收率稳定，在保持低成本和高收率的同时，经重结晶处理后能获得高纯度的二苯乙烯苷，适合规模化工业生产的需要。
【专利说明】2, 3, 5, 4f -四羟基二苯乙烯-2-0- ^ -D-葡萄糖苷的分离
纯化工艺【技术领域】
[0001]本发明涉及中药分离纯化【技术领域】，尤其是2，3，5，4'-四羟基二苯乙烯-2-0-0 -D-葡萄糖苷(以下简称“二苯乙烯苷”)的分离纯化工艺。
【背景技术】
[0002]何首乌，为寥科植物何首乌Polygonum multiflorum Thunb.的干燥块根，始载于 《开元本草》，分布于华东、中南及河北、山西、陕西、甘肃、台湾、四川、贵州、云南等地，具有解毒、消痈、润肠通便之功效，同时还具有补益精血、乌须发、强筋骨和补肝肾。药理研究表明何首乌具有抗衰老、提高机体非特异性免疫功能、降血脂、抗动脉粥样硬化、保护心肌、保肝、神经保护及抗菌等药理活性，临床研究主要用于治疗高脂血症，失眠症，白发，疖肿等。 何首乌中的有效成分主要包括以大黄酚、大黄素、大黄酸、大黄素甲醚为主的蒽醌类成分及二苯乙烯苷，其中蒽醌类成分能解毒、消痈、润肠通便，而二苯乙烯苷具有明显的降低胆固醇和保肝作用。二苯乙烯苷是何首乌药材中的主要活性成分，《中华人民共和国药典》2010 年版一部对二苯乙烯苷的总量限度作出明确规定，何首乌药材中二苯乙烯苷的总量不得少于1.0%。二苯乙烯苷是何首乌中具有重要药理作用的活性成分之一，临床应用及现代药理研究表明二苯乙烯苷具有显著的抗衰老及降脂作用。
[0003]如何快速分离纯化大量的二苯乙烯苷是工业生产中密切关注的问题。目前关于二苯乙烯苷分离纯化的方法有结晶法、聚酰胺吸附色谱法、大孔树脂吸附色谱法、高速逆流色
;並妹坐 P曰I衣寸o
[0004]例如，结晶法是比较传统的提取方法，用95%乙醇回流提取何首乌粗粉，回收乙醇得何首乌流浸膏，用适量的蒸馏水稀释后以等量的乙醚萃取3次，水层用两倍的醋酸乙酯热回流5-6h，收集醋酸乙酯层，减压浓缩至原体积的1/10，室温下静置析晶，过滤，得到二苯乙烯苷粗品。粗品于适量热水或热醋酸乙酯中溶解，趁热过滤，放冷析晶，如此反复结晶， 得到二苯乙烯苷精品，为灰色无定形结晶粉末。经HPLC法分析，粗品中二苯乙烯苷纯度为 68.71%，精品中为99.94%。该方法分离纯化得到的二苯乙烯苷纯度虽高，然而此法存在着溶剂用量大，工艺复杂，资源利用率偏低等缺点。
[0005]此外还有研究采用高效液相色谱法分离得到纯度较高的二苯乙烯苷单体，但是此方法仪器成本高，溶剂消耗量大，制约了该技术的发展。本领域需要有能够快速和(/或)大量地制备纯度较高的二苯乙烯苷的方法。
【发明内容】
[0006]本发明所要解决的技术问题在于提供二苯乙烯苷的分离纯化工艺。
[0007]为解决上述技术问题，本发明的技术方案是:
[0008]二苯乙烯苷的分离纯化工艺，具体步骤为:精密称量初步纯化的二苯乙烯苷提取物，加纯水I溶解后冷冻结晶，待其融化后快速抽滤，并用纯水II洗涤，可得类白色的结晶，将滤渣转移至真空干燥箱干燥，得二苯乙烯苷纯品。
[0009]优选的上述二苯乙烯苷的分离纯化工艺，所述初步纯化的二苯乙烯苷提取物与用于溶解提取物的纯水I及用于洗涤结晶的纯水II的重量:体积:体积按g/ml/ml计为1:3-7:3-7，冷冻结晶温度为-20±1°C _0±1°C。
[0010]优选的上述二苯乙烯苷的分离纯化工艺，所述初步纯化的二苯乙烯苷提取物与用于溶解提取物的纯水I及用于洗涤结晶的纯水II的重量:体积:体积按g/ml/ml计为1:3:5，冷冻结晶温度为-10°C ±1°C。
[0011]优选的，上述二苯乙烯苷的分离纯化工艺，具体步骤如下:
[0012]( I)称取二苯乙烯苷提取物，加甲醇或95%乙醇将其溶解后，加硅胶拌样，待溶剂挥发后研磨成松散状，其中，二苯乙烯苷提取物、甲醇或95%乙醇和硅胶的重量/体积/重量比按 g/ml/g 计为 100 =120-200 =100-200 ；
[0013](2)将乙酸乙酯和硅胶按体积重量比ml/g计5:1进行混合，除去气泡后倾入玻璃柱中，并继续不断加入乙酸乙酯将附着于管壁的硅胶洗下，使玻璃柱表面硅胶平整；
[0014](3)将步骤(1)处理后的样品加至玻璃柱表层，开始用乙酸乙酯洗脱，经过TLC跟踪检测，合并含有二苯乙烯苷的流份，回收溶剂，干燥即得二苯乙烯苷提取物；
[0015](4)精密称量初步纯化的二苯乙烯苷提取物，加纯水I溶解后冷冻结晶，待其融化后快速抽滤，并用纯水II洗涤，可得类白色的结晶，将滤渣转移至真空干燥箱干燥，得二苯乙烯苷纯品。
[0016]优选的,上述二苯乙烯苷的分离纯化工艺,所述步骤(4)中初步纯化的二苯乙烯苷提取物与用于溶解提取物的纯水I及用于洗涤结晶的纯水II的重量:体积:体积按g/ml/ml计为1:3-7:3-7，冷冻结晶温度为-20±1°C _0±1°C。
[0017]优选的,上述二苯乙烯苷的分离纯化工艺,所述步骤(4)中初步纯化的二苯乙烯苷提取物与用于溶解提取物的纯水I及用于洗涤结晶的纯水II的重量:体积:体积按g/ml/ml计计为1:3:5，冷冻结晶温度为-10°C ±1°C。
[0018]本发明的有益效果是:
[0019]上述二苯乙烯苷的分离纯化工艺，克服了现有自二苯乙烯苷提取物(何首乌提取物)中分离纯化二苯乙烯苷技术中存在的不足，操作简单可行，并可以提高产品纯度，能够快速大量地分离和纯化二苯乙烯苷；该工艺操作简便，无污染，成本低廉，收率稳定，在保持低成本和高收率的同时，经重结晶处理后能获得高纯度的二苯乙烯苷，且重复性好，适用性较广，纯度10%-80%的二苯乙烯苷样品都可以纯化至96%以上，适合规模化工业生产的需要。
【专利附图】
【附图说明】
[0020]图
的含量。
[0021]图的含量。
[0022]图
的含量。
I是用3ml纯水溶解,2是用5ml纯水溶解,3是用7ml纯水溶解，
-1O0C 土 1°C中的条件冷冻结晶，用5ml-1O0C 土 1°C中的条件冷冻结晶，用5ml-1O0C 土 1°C中的条件冷冻结晶，用3ml
的纯水洗涤得到的纯水洗涤得到的纯水洗涤得到[0023]图4是用3ml纯水溶解，-10°C 土 1°C中的条件冷冻结晶，用7ml的纯水洗涤得到
的含量。
[0024]图5是用3ml纯水溶解，(TC ± I°C中的条件冷冻结晶，用3ml的纯水洗涤得到的含量。
[0025]图6是用5ml纯水溶解，(TC ± I°C中的条件冷冻结晶，用7ml的纯水洗涤得到的含量。
[0026]图7是用7ml纯水溶解，(TC ± I°C中的条件冷冻结晶，用5ml的纯水洗涤得到的含量。
[0027]图8是用7ml纯水溶解，-20 °C ± TC中的条件冷冻结晶，用7ml的纯水洗涤得到
的含量。
[0028]图9是用3ml纯水溶解，-20 °C ± TC中的条件冷冻结晶，用5ml的纯水洗涤得到
的含量。
[0029]图10是用5ml纯水溶解，-20 °C ± I °C中的条件冷冻结晶，用3ml的纯水洗涤得到
的含量。
图11是用二苯乙烯苷的提取物(二苯乙烯苷纯度50%)分离纯化二苯乙烯苷的HPLC检测图谱。
图12是用二苯乙烯苷的提取物(80%)分离纯化二苯乙烯苷的HPLC检测图谱。
【具体实施方式】
[0030]为了使本领域的技术人员更好的理解本发明的技术方案，下面结合附图及【具体实施方式】对本发明所述技术方案作进一步的详细说明。
[0031]以下实施例中的二苯乙烯苷提取物均为购自市场的何首乌提取物，经HPLC检测， 上述二苯乙烯苷提取物中的二苯乙烯苷的纯度为10%-80%。通过下面的实施例用来说明本发明，但是不用来限制本发明的范围。本领域的专业人员能够理解，在不背离本发明的精神和范围的前提下，可以对本发明进行各种变化和修饰。本发明对试验中所使用到的材料以及试验方法进行一般性和/或具体的描述。虽然为实现本发明目的所使用的许多材料和操作方法是本领域公知的，但是本发明仍然在此作尽可能详细描述。在本发明中(除实施例I和2 二苯乙烯苷纯品采用超高效液相色谱法检测，色谱柱:ACQUITY UPLC BEH C18 (3.0X 100mm, 1.7 u m);流动相:乙腈:/jC =10:90 ;流速:0.4mL/min ;柱温:50°C ;检测波长: 320nm)，其余检测提取物或单体成分所使用的HPLC方法为《中华人民共和国药典》关于何首乌中二苯乙烯苷的测定方法，如下表所示。采用外标一点法测定其纯度。二苯乙烯苷对照品购于中国食品药品检定研究院，含量以94.7%计；批号:110844-201109 ;条形码: 8E0S-NMAB。
[0032]色谱柱:AgilentEclipse XDB-C18 (4.6 X 150mm, 5 U m);
[0033]流动相:乙腈冰=18:82
[0034]流速:lmL/min;
[0035]柱温:20°C；
[0036]检测波长:320nm；
[0037]方法:以流动相(乙腈冰=18:82)等度洗脱，时间15min。
[0038]实施例1[0039]用二苯乙烯苷的提取物(二苯乙烯苷纯度50%)分离纯化二苯乙烯苷，具体步骤如下:
[0040](I)称取50% 二苯乙烯苷提取物110g，置于烧杯中，加95% (v/v)乙醇150ml将其充分混合溶解后，加150g硅胶(200-300目)拌样，在通风橱里研磨并使溶剂自然挥干呈松散状；
[0041](2)将5000ml乙酸乙酯和1000g硅胶(100-200目)进行混合，搅拌以除去气泡，
待浸泡完全后慢慢倾入玻璃柱中，然后继续加入乙酸乙酯，将附着于管壁的硅胶洗下，使玻璃柱表面硅胶平整；
[0042](3)将步骤(1)处理后的样品缓缓加在已制备好的玻璃柱上面，用乙酸乙酯洗脱，每600ml为I个流份，共收集20个流份，经过TLC跟踪检测，合并4~19，在365nm下可观察到蓝色荧光，合并含有二苯乙烯苷的流份，回收溶剂，干燥即得二苯乙烯苷的提取物；
[0043](4)精密称量初步纯化的二苯乙烯苷提取物约70g，置于烧杯中，用约3倍量(210ml)的纯水I加热溶解后，置于-10°C 土 1°C的条件下冷冻至结晶后取出，待室温条件下溶化后转移至抽滤装置中抽滤，并用5倍量(350ml)的纯水II少量分次洗涤，可见滤渣为类白色的结晶，将滤渣转移至真空干燥箱减压干燥即得二苯乙烯苷纯品41.78g，经HPLC检测，通过低温水媒法处 理后，二苯乙烯苷的纯度97.76%，结果见图11。
[0044]实施例2
[0045]用二苯乙烯苷的提取物(80%)分离纯化二苯乙烯苷，具体步骤如下:
[0046]称量二苯乙烯苷样品(80% 二苯乙烯苷的提取物)约70g，置于烧杯中，用约3倍量(210ml)的纯水I加热溶解后，置于_10±1°C的条件下冷冻至结晶后取出，待室温条件下溶化后转移至抽滤装置中抽滤，并用5倍量(350ml)的纯水II少量分次洗涤，可见滤渣为类白色的结晶，将滤渣转移至真空干燥箱减压干燥即得二苯乙烯苷纯品41.59g J^HPLC检测，通过低温水媒法处理后，二苯乙烯苷的纯度96.50%，结果见图12。
[0047]实施例3
[0048]用二苯乙烯苷的提取物(50%)分离纯化二苯乙烯苷，具体步骤如下:
[0049](I)称取50% 二苯乙烯苷提取物100g，置于烧杯中，加120ml95%乙醇将其充分混合溶解后，加200g硅胶(200-300目)拌样，在通风橱里研磨并使溶剂自然挥干呈松散状；
[0050](2)将5000ml乙酸乙酯和1000g硅胶(100-200目)进行混合，搅拌以除去气泡，待浸泡完全后慢慢倾入玻璃柱中，然后继续加入乙酸乙酯，将附着于管壁的硅胶洗下，使玻璃柱表面硅胶平整；
[0051](3)将步骤(1)处理后的样品缓缓加在已制备好的玻璃柱上面，用乙酸乙酯洗脱，每600ml为I个流份，共收集20个流份，经过TLC跟踪检测，合并4~19，在365nm下可观察到蓝色荧光，合并含有二苯乙烯苷的流份，回收溶剂，干燥即得二苯乙烯苷的纯化粗品；
[0052](4)精密称量初步纯化的二苯乙烯苷提取物约10g，置于烧杯中，用约5倍量(50ml)的纯水I加热溶解后，置于_20°C ± 1°C的条件下冷冻至结晶后取出，待室温条件下溶化后转移至抽滤装置中抽滤，并用5倍量(50ml)的纯水II少量分次洗涤，可见滤渣为类白色的结晶，将滤渣转移至真空干燥箱减压干燥即得二苯乙烯苷纯品7.53g，经HPLC检测，通过低温水媒法处理后，二苯乙烯苷的纯度91.7%。
[0053]实施例4[0054]用二苯乙烯苷的提取物(50%)分离纯化二苯乙烯苷，具体步骤如下:
[0055](I)称取50% 二苯乙烯苷提取物100g，置于烧杯中，加200ml95%乙醇将其充分混合溶解后，加100g硅胶(200-300目)拌样，在通风橱里研磨并使溶剂自然挥干呈松散状；
[0056](2)将5000ml乙酸乙酯和1000g硅胶(100-200目)进行混合，搅拌以除去气泡， 待浸泡完全后慢慢倾入玻璃柱中，然后继续加入乙酸乙酯，将附着于管壁的硅胶洗下，使玻璃柱表面硅胶平整；
[0057](3)将步骤(1)处理后的样品缓缓加在已制备好的玻璃柱上面，用乙酸乙酯洗脱， 每600ml为I个流份，共收集20个流份，经过TLC跟踪检测，合并4~19，在365nm下可观察到蓝色荧光，合并含有二苯乙烯苷的流份，回收溶剂，干燥即得二苯乙烯苷的纯化粗品；
[0058](4)精密称量初步纯化的二苯乙烯苷提取物约10g，置于烧杯中，用约4倍量 (40ml)的纯水I加热溶解后，置于_15°C ±1°C的条件下冷冻至结晶后取出，待室温条件下溶化后转移至抽滤装置中抽滤，并用5倍量(50ml)的纯水II少量分次洗涤，可见滤渣为类白色的结晶，将滤渣转移至真空干燥箱减压干燥即得二苯乙烯苷纯品7.47g，经HPLC检测， 通过低温水媒法处理后，二苯乙烯苷的纯度94.32%。
[0059]工艺比较试验例
[0060]制备80% 二苯乙烯苷含量的提取物:称取50%的二苯乙烯苷提取物约20g，采用硅胶柱层析的方法用乙酸乙酯等度洗脱，并根据薄层色谱跟踪检测，使二苯乙烯苷完全被洗脱，合并含二苯乙烯苷的洗脱液，回收溶解得到二苯乙烯苷样品粉末。以下试验均使用该样品粉末(二苯乙烯苷含量约80%)。
[0061]试验1:称取上述二苯乙烯苷样品约1.0g置于试管中，用3mL纯水加热溶解，使其在-10°C ± I°C中的条件冷冻结晶，取出待溶化后，采用抽滤装置抽滤，并用5mL的纯水洗涤滤渣，所得固体干燥成粉末。经HPLC检测后，二苯乙烯苷的纯度96.72%，见图1。
[0062]试验2:称取上述二苯乙烯苷样品约1.0g置于试管中，用5mL纯水加热溶解，使其在-10°C ± I°C中的条件冷冻结晶，取出待溶化后，采用抽滤装置抽滤，并用5mL的纯水洗`涤滤渣，所得固体干燥成粉末。经HPLC检测后，二苯乙烯苷的纯度为96.31%，见图2。
[0063]试验3:称取上述二苯乙烯苷样品约1.0g置于试管中，用7mL纯水加热溶解，使其在-10°C ± I°C中的条件冷冻结晶，取出待溶化后，采用抽滤装置抽滤，并用3mL的纯水洗涤滤渣，所得固体干燥成粉末。取样，用HPLC进行检测。经HPLC检测后，二苯乙烯苷的纯度为91.80%，见图3。
[0064]试验4:称取上述二苯乙烯苷样品约1.0g置于试管中，用3mL纯水加热溶解,并使其在-10°C ± I°C中的条件冷冻结晶，取出待溶化后，采用抽滤装置抽滤，并用7mL的纯水洗涤滤渣，所得固体干燥成粉末。取样，经HPLC检测后，二苯乙烯苷的纯度为91.31%，见图4。
[0065]试验5:称取上述二苯乙烯苷样品约1.0g置于试管中，用3mL纯水加热溶解,使其在(TC ± I°C中的条件冷冻结晶，取出待溶化后，采用抽滤装置抽滤，并用3mL的纯水洗涤滤渣，所得固体干燥成粉末。取样，经HPLC检测后，二苯乙烯苷的纯度为93.83%，见图5。
[0066]试验6:称取上述二苯乙烯苷样品约1.0g置于试管中，用5mL纯水加热溶解,使其在(TC ± I°C中的条件冷冻结晶，取出待溶化后，采用抽滤装置抽滤，并用7mL的纯水洗涤滤渣，所得固体干燥成粉末。取样，经HPLC检测后，二苯乙烯苷的纯度为93.36%，见图6。
[0067]试验7:称取上述二苯乙烯苷样品约1.0g置于试管中，用7mL纯水加热溶解，使其在(TC ±1°C中的条件冷冻结晶，取出待溶化后，采用抽滤装置抽滤，并用5ml的纯水洗涤滤渣，所得固体干燥成粉末。取样，经HPLC检测后，二苯乙烯苷的纯度为91.51%，见图7。
[0068]试验8:称取上述二苯乙烯苷样品约1.0g置于试管中，用7mL纯水加热溶解，并使其在_20°C ± I°C中的条件冷冻结晶，取出待溶化后，采用抽滤装置抽滤，并用7mL纯水洗涤滤洛，所得固体干燥成粉末。取样，经HPLC检测后，二苯乙烯苷的纯度为93.01%，见图8。
[0069]试验9:称取上述二苯乙烯苷样品约1.0g置于试管中，用3mL纯水加热溶解，使其在-20°C ±1°C中的条件冷冻结晶，取出待溶化后，采用抽滤装置抽滤，并用5mL的纯水洗涤滤渣，所得固体干燥成粉末。取样，经HPLC检测后，二苯乙烯苷的纯度为96.64%，见图9。
[0070]试验10:称取上述二苯乙烯苷样品约1.0g置于试管中，用5mL纯水加热溶解,并使其在_20°C ± I°C中的条件冷冻结晶，取出待溶化后，采用抽滤装置抽滤，并用3mL的纯水洗涤滤渣，所得固体干燥成粉末。取样，经HPLC检测后，二苯乙烯苷的纯度为89.25%，见图10。
[0071]综上，通过试验1-10可以看出，本发明的分离纯化工艺中，每1.0g 二苯乙烯苷样品使用溶媒(纯水)的体积是3ml，结晶温度是-10°C ± I°C，洗涤体积是5ml时，效果更好。
[0072]上述参照【具体实施方式】对该2，3，5，4'-四羟基二苯乙烯-2_0_ β -D-葡萄糖苷的分离纯化工艺进行的详细描述，是说明性的而不是限定性的，可按照所限定范围列举出若干个实施例，因此在不脱离本发明总体构思下的变化和修改，应属本发明的保护范围之内。
【权利要求】
1.2，3，5，4'-四羟基二苯乙烯-2-0-β-D-葡萄糖苷(以下简称“二苯乙烯苷”)的分离纯化工艺，其特征在于:具体步骤为:精密称量初步纯化的二苯乙烯苷提取物，加纯水I溶解后冷冻结晶，待其融化后快速抽滤，并用纯水II洗涤，可得类白色的结晶，将滤渣转移至真空干燥箱干燥，得二苯乙烯苷纯品 。
2.根据权利要求1所述的二苯乙烯苷的分离纯化工艺，其特征在于:所述初步纯化的二苯乙烯苷提取物与用于溶解提取物的纯水I及用于洗涤结晶的纯水II的重量:体积:体积按g/ml/ml计为1:3-7:3_7，冷冻结晶温度为_20±1°C -0±l°Co
3.根据权利要求1或2所述的二苯乙烯苷的分离纯化工艺，其特征在于:所述初步纯化的二苯乙烯苷提取物与用于溶解提取物的纯水I及用于洗涤结晶的纯水II的重量:体积:体积按g/ml/ml计为1:3:5，冷冻结晶温度为_10°C ±1°C。
4.根据权利要求1所述的二苯乙烯苷的分离纯化工艺，其特征在于:具体步骤如下:(1)称取二苯乙烯苷提取物，加甲醇或95%乙醇将其溶解后，加硅胶拌样，待溶剂挥发后研磨成松散状，其中，二苯乙烯苷提取物、甲醇或95%乙醇和硅胶的重量/体积/重量比按 g/ml/g 计为 100:120-200:100-200 ；(2)将乙酸乙酯和硅胶按体积重量比ml/g计5:1进行混合，除去气泡后倾入玻璃柱中，并继续不断加入乙酸乙酯将附着于管壁的硅胶洗下，使玻璃柱表面硅胶平整；(3)将步骤(1)处理后的样品加至玻璃柱表层，开始用乙酸乙酯洗脱，经过TLC跟踪检测，合并含有二苯乙烯苷的流份，回收溶剂，干燥即得二苯乙烯苷提取物；(4)精密称量初步纯化的二苯乙烯苷提取物，加纯水I溶解后冷冻结晶，待其融化后快速抽滤，并用纯水II洗涤，可得类白色的结晶，将滤渣转移至真空干燥箱干燥，得二苯乙烯苷纯品。
5.根据权利要求4所述的二苯乙烯苷的分离纯化工艺，其特征在于:所述步骤(4)中初步纯化的二苯乙烯苷提取物与用于溶解提取物的纯水I及用于洗涤结晶的纯水II的重量:体积:体积按g/ml/ml计为1:3-7:3_7，冷冻结晶温度为-20 +TC -0±l°Co
6.根据权利要求4或5所述的二苯乙烯苷的分离纯化工艺，其特征在于:所述步骤(4)中初步纯化的二苯乙烯苷提取物与用于溶解提取物的纯水I及用于洗涤结晶的纯水II的重量:体积:体积按g/ml/ml计为1:3:5，冷冻结晶温度为-10±1°C。
【文档编号】C07H15/203GK103524576SQ201310350567
【公开日】2014年1月22日 申请日期:2013年8月12日 优先权日:2013年8月12日
【发明者】王跃飞, 高秀梅, 朱彦, 刘二伟, 刘海涛, 焦玉娇, 杨静 申请人:天津中医药大学