一种制备雪胆甲素、雪胆乙素的方法
【专利摘要】本发明涉及一种制备雪胆甲素、雪胆乙素的方法，属于中药提取【技术领域】。该方法包括以下步骤：a、取雪胆，加入乙醇提取，得提取液，然后将所述提取液进行浓缩，得浸膏；b、将所述浸膏拌入聚酰胺树脂，烘干，上样于聚酰胺层析柱，先用水洗脱，再用质量百分比浓度为60％～100％的乙醇溶液进行梯度洗脱，收集洗脱液，分别浓缩得雪胆甲素、雪胆乙素粗品；c、将所述雪胆甲素、雪胆乙素粗品分别用质量百分比浓度为70％～100％的乙醇溶液溶解，静置结晶，过滤，得雪胆甲素、雪胆乙素。本发明的有益效果是：该方法能快速、有效地实现雪胆甲素、乙素与其他成分的分离，且安全无毒，适用于工业化生产。
【专利说明】-种制备雪胆甲素、雪胆乙素的方法
【技术领域】
[0001] 本发明属于中药提取【技术领域】，具体涉及一种制备雪胆甲素、雪胆乙素的方法。
【背景技术】
[0002] 雪胆，别名金龟莲、金盆、罗锅底、曲莲，为葫芦科植物雪胆（Hemsleya amabilis Diels)及其同属数种植物的干燥块根。雪胆属植物共31种，除2种产于印度、越南外，主要 分布于我国云、贵、川三省，云南省占三分之二。本品性苦、寒，入胃、大肠二经，具有清热解 毒、抗菌消炎、利湿消肿、健胃止痛的功效。其主要功能性成分雪胆素为雪胆甲素和雪胆乙 素的混晶，两者多作为整体用于临床治疗。近期研究发现雪胆甲素具有显著抗肿瘤活性，在 体外抗HIV活性中，雪胆甲素和乙素表现出不同强度的抑制性，随着对雪胆甲素药理研究 的深入，其临床应用越加广泛。
[0003] 由雪胆素制成的成药制剂雪胆素片、胶囊等乙广泛应用于临床。其成分为雪胆甲 素、乙素的混合物。由于来自不同产地、采收季节，甲素和乙素的含量批次间有巨大差异，严 重影响产品质量控制和临床药效，因此，对甲素乙素进行有效分离，才能完全控制每批次间 产品内在品质。该技术是目前雪胆素产业中的核心技术问题。
[0004] 目前，雪胆甲素的制备主要通过溶剂提取与色谱分离相结合的方法，如申请号为 200610011065. 1的中国专利"一种提取雪胆素的方法"以及申请号为201010235765. 5的 中国专利"一种提取雪胆素的改进方法"均通过乙醇溶液对雪胆进行回流提取，所得提取液 回收溶剂后经大孔吸附树脂进行分离，但因雪胆素难溶于水，上述方法均存在雪胆素在大 孔吸附树脂上分散差、吸附困难的问题，后者通过反复吸附来增大吸附量，虽能部分改善， 但工艺繁琐，可操作性差；如改用高浓度乙醇溶液作为溶剂来提高雪胆素溶解性，分离效果 会显著降低，且成本较高。再如申请号为200610010906. 7的中国专利"雪胆甲素的制备方 法和在制备治疗癌症的药物中的应用"，该专利公开的方法是取雪胆属植物块根，粉碎，用 18?26重量倍的丙酮为溶剂，采用渗漉法提取，提取液在60?75°C水浴锅中回收，即得浸 膏；将提出的浸膏拌入1?2重量倍的硅胶，烘干，上硅胶柱，用氯仿-甲醇进行梯度洗脱， 其中甲醇体积浓度为2%?10%，回收洗脱液，得粗品；用甲醇或乙醇对粗品在水浴中加热 溶解，滤过，置室温，重结晶，得棱柱状结晶，即纯度为98%以上的雪胆甲素。该法中以丙酮 作为提取剂，因其细胞穿透性差，使得提取率不高，且溶剂用量大。另丙酮燃点低，安全性 差，所用洗脱剂均为毒性高危险品，因此成本较高，难于工业化。
[0005] 综上所述，针对现有技术缺陷，提出成本低、操作安全、简便的雪胆甲素、乙素提取 新方法，是提高雪胆植物资源利用率，实现雪胆甲素、乙素大规模产业化生产亟待解决的关 键问题。
【发明内容】
[0006] 本发明的目的是提供一种有效制备雪胆甲素、雪胆乙素的方法，该方法操作简便、 安全，适用于工业化生产。
[0007] 本发明所采取的技术方案是一种制备雪胆甲素、雪胆乙素的方法，包括以下步 骤：
[0008] a、取雪胆，加入乙醇提取，得提取液，然后将所述提取液进行浓缩，得浸膏；
[0009] b、将所述浸膏拌入聚酰胺树脂，烘干，上样于聚酰胺层析柱，先用水洗脱，再用质 量百分比浓度为60 %?100 %的乙醇溶液进行梯度洗脱，收集洗脱液，分别浓缩得雪胆甲 素、雪胆乙素粗品；
[0010] c、将所述雪胆甲素、雪胆乙素粗品分别用质量百分比浓度为70%?100%的乙醇 溶液溶解，静置结晶，过滤，得雪胆甲素、雪胆乙素。
[0011] 优选的，所述步骤a中乙醇的质量百分比浓度为50%?100%。
[0012] 优选的，所述步骤a中乙醇的加入量为所述雪胆重量的5?15倍。
[0013] 优选的，所述步骤a中提取的次数为2?4次，每次提取的时间为1?4小时。
[0014] 优选的，所述步骤b中拌入聚酰胺树脂的重量为所述浸膏重量的1?5倍。
[0015] 优选的，所述步骤b中聚酰胺树脂的型号选自尼龙-6或尼龙-66 ;所述聚酰胺树 脂的粒度为60目?120目。
[0016] 优选的，所述步骤a中用于提取雪胆的溶剂包括质量百分比浓度为50%?100% 的甲醇溶液。
[0017] 优选的，所述步骤b中用于洗脱雪胆甲素、雪胆乙素粗品的洗脱剂包括质量百分 比浓度为50%?100%的甲醇溶液。
[0018] 优选的，所述步骤c中用于溶解雪胆甲素、雪胆乙素粗品的溶解剂包括质量百分 比浓度为70%?100%的甲醇溶液、质量百分比浓度为70%?100%的丙酮溶液。
[0019] 本发明还提供一种所述制备方法得到的雪胆甲素或/和雪胆乙素。
[0020] 本发明的有益效果在于：本发明针对雪胆甲素、雪胆乙素的结构特点，通过与聚 酰胺树脂发生氢键吸附来进行精制，因氢键吸附具有选择性以及不同物质氢键缔合能力不 同，该法可快速、有效实现雪胆甲素、乙素与其他成分的分离，并采用固体上样，解决雪胆素 水溶液在分离填料上分散差、吸附困难的问题；与硅胶相比，聚酰胺树脂可重复利用，经济 性强，且所用洗脱剂为乙醇溶液，安全无毒，适用于工业化生产。
【具体实施方式】
[0021] 为使本领域技术人员详细了解本发明的生产工艺和技术效果，下面以具体的生产 实例来进一步介绍本发明的应用和技术效果。
[0022] 实施例1 :
[0023] a、取雪胆块茎100kg，粉碎至粗粉，加入7倍重量质量百分比浓度为95 %的乙醇加 热回流提取3次，每次提取2小时，过滤，得提取液，然后将提取液进行减压浓缩，得浸膏；
[0024] b、以浸膏的重量为基准，在浸膏中加入3倍重量的聚酰胺树脂，混匀，烘干，上样 于聚酰胺层析柱，先用3倍BV的水以3BV/h的流量进行洗脱，再用质量百分比浓度为70% 的乙醇溶液以lBV/h的流量进行梯度洗脱，收集洗脱液，分别浓缩得雪胆甲素、雪胆乙素粗 品；在收集洗脱液时，以雪胆甲素、雪胆乙素为对照品，采用薄层色谱法鉴别后来分别进行 收集。其中，聚酰胺树脂的型号选自粒度为100目的尼龙-6。
[0025] c、将所述雪胆甲素、雪胆乙素粗品分别用质量百分比浓度为85%的乙醇溶液加热 回流溶解，静置，结晶得棱柱状、针状晶体，过滤，得985g雪胆甲素、236g雪胆乙素。经检测， 雪胆甲素的纯度为98. 8%，雪胆乙素的纯度为98. 5%。
[0026] 实施例2 :
[0027] a、取雪胆块茎100kg，粉碎至粗粉，加入10倍重量质量百分比浓度为85 %的乙醇 加热回流提取4次，每次提取1. 5小时，过滤，得提取液，然后将提取液进行减压浓缩，得浸 膏；
[0028] b、以浸膏的重量为基准，在浸膏中加入5倍重量的聚酰胺树脂，混匀，烘干，上样 于聚酰胺层析柱，先用4倍BV的水以2BV/h的流量进行洗脱，再用质量百分比浓度为65% 的乙醇溶液以lBV/h的流量进行梯度洗脱，收集洗脱液，分别浓缩得雪胆甲素、雪胆乙素粗 品；在收集洗脱液时，以雪胆甲素、雪胆乙素为对照品，采用薄层色谱法鉴别后来分别进行 收集。其中，聚酰胺树脂的型号选自粒度为80目的尼龙-66。
[0029] c、将所述雪胆甲素、雪胆乙素粗品分别用质量百分比浓度为90%的乙醇溶液加热 回流溶解，静置结晶，分别得棱柱状、针状晶体，过滤，得992g雪胆甲素、243g雪胆乙素。经 检测，雪胆甲素的纯度为98. 4%，雪胆乙素的纯度为98. 1%。
[0030] 实施例3 :
[0031] a、取雪胆块茎100kg，粉碎至粗粉，加入10倍重量质量百分比浓度为100%的甲醇 加热回流提取4次，每次提取1. 5小时，过滤，得提取液，然后将提取液进行减压浓缩，得浸 膏；
[0032] b、以浸膏的重量为基准，在浸膏中加入5倍重量的聚酰胺树脂，混匀，烘干，上样 于聚酰胺层析柱，先用4倍BV的水以2BV/h的流量进行洗脱，再用质量百分比浓度为65% 的乙醇溶液以lBV/h的流量进行梯度洗脱，收集洗脱液，分别浓缩得雪胆甲素、雪胆乙素粗 品；在收集洗脱液时，以雪胆甲素、雪胆乙素为对照品，采用薄层色谱法鉴别后来分别进行 收集。其中，聚酰胺树脂的型号选自粒度为80目的尼龙-66。
[0033] c、将所述雪胆甲素、雪胆乙素粗品分别用质量百分比浓度为90%的乙醇溶液加热 回流溶解，静置结晶，分别得棱柱状、针状晶体，过滤，得983g雪胆甲素、251g雪胆乙素。经 检测，雪胆甲素的纯度为98. 3%，雪胆乙素的纯度为98. 1%。
[0034] 实施例4 :
[0035] a、取雪胆块茎100kg，粉碎至粗粉，加入10倍重量质量百分比浓度为75%的甲醇 加热回流提取4次，每次提取1. 5小时，过滤，得提取液，然后将提取液进行减压浓缩，得浸 膏；
[0036] b、以浸膏的重量为基准，在浸膏中加入5倍重量的聚酰胺树脂，混匀，烘干，上样 于聚酰胺层析柱，先用4倍BV的水以2BV/h的流量进行洗脱，再用质量百分比浓度为75% 的甲醇溶液以lBV/h的流量进行梯度洗脱，收集洗脱液，分别浓缩得雪胆甲素、雪胆乙素粗 品；在收集洗脱液时，以雪胆甲素、雪胆乙素为对照品，采用薄层色谱法鉴别后来分别进行 收集。其中，聚酰胺树脂的型号选自粒度为80目的尼龙-66。
[0037] c、将所述雪胆甲素、雪胆乙素粗品分别用质量百分比浓度为70%的丙酮溶液加热 回流溶解，静置结晶，分别得棱柱状、针状晶体，过滤，得994g雪胆甲素、233g雪胆乙素。经 检测，雪胆甲素的纯度为98. 9%，雪胆乙素的纯度为98. 7%。
[0038] 实施例5 :
【权利要求】
1. 一种制备雪胆甲素、雪胆乙素的方法，其特征在于：包括以下步骤： a、 取雪胆，加入乙醇提取，得提取液，然后将所述提取液进行浓缩，得浸膏； b、 将所述浸膏拌入聚酰胺树脂，烘干，上样于聚酰胺层析柱，先用水洗脱，再用质量百 分比浓度为60%?100%的乙醇溶液进行梯度洗脱，收集洗脱液，分别浓缩得雪胆甲素、雪 胆乙素粗品； c、 将所述雪胆甲素、雪胆乙素粗品分别用质量百分比浓度为70%?100%的乙醇溶液 溶解，静置结晶，过滤，得雪胆甲素、雪胆乙素。
2. 根据权利要求1所述的一种制备雪胆甲素、雪胆乙素的方法，其特征在于：所述步骤 a中乙醇的质量百分比浓度为50 %?100%。
3. 根据权利要求1所述的一种制备雪胆甲素、雪胆乙素的方法，其特征在于：所述步骤 a中乙醇的加入量为所述雪胆重量的5?15倍。
4. 根据权利要求1所述的一种制备雪胆甲素、雪胆乙素的方法，其特征在于：所述步骤 a中提取的次数为2?4次，每次提取的时间为1?4小时。
5. 根据权利要求1所述的一种制备雪胆甲素、雪胆乙素的方法，其特征在于：所述步骤 b中拌入聚酰胺树脂的重量为所述浸膏重量的1?5倍。
6. 根据权利要求1所述的一种制备雪胆甲素、雪胆乙素的方法，其特征在于：所述步骤 b中聚酰胺树脂的型号选自尼龙_6或尼龙-66;所述聚酰胺树脂的粒度为60目?120目。
7. 根据权利要求1所述的一种制备雪胆甲素、雪胆乙素的方法，其特征在于：所述步骤 a中用于提取雪胆的溶剂包括质量百分比浓度为50%?100%的甲醇溶液。
8. 根据权利要求1所述的一种制备雪胆甲素、雪胆乙素的方法，其特征在于：所述步骤 b中用于洗脱雪胆甲素、雪胆乙素粗品的洗脱剂包括质量百分比浓度为50%?100%的甲 醇溶液。
9. 根据权利要求1所述的一种制备雪胆甲素、雪胆乙素的方法，其特征在于：所述步骤 c中用于溶解雪胆甲素、雪胆乙素粗品的溶解剂包括质量百分比浓度为70%?100%的甲 醇溶液、质量百分比浓度为70%?100%的丙酮溶液。
10. -种基于权利要求1-9中任一项所述制备方法得到的雪胆甲素或/和雪胆乙素。
【文档编号】C07J9/00GK104059121SQ201410279399
【公开日】2014年9月24日 申请日期:2014年6月21日 优先权日:2014年6月21日
【发明者】周志宏, 刘菲菲, 王兵, 金良雄, 徐红昆 申请人:云南云药医药研究有限公司