专利名称：高含量快速提取胆红素的方法
技术领域：
本发明是胆红素的一种提取方法。
胆红素系从动物胆汁中提取之胆色素，为橙色或深红棕色单斜棱晶，是配制人工合成牛黄的重要原料。
目前全国普遍采用传统方法提取胆红素，简称为胆钙盐法，此法是1960年武汉生化制药厂首先报导的。近年来不少研究单位和生化药厂相继对传统工艺从不同方面进行了改进，其基本工艺为制备胆钙盐向胆汁中加饱和石灰水3-4倍量，温升50-60℃捞去泡沫，95℃时桔黄色钙盐浮起，过滤，即得胆钙盐，酸化向胆钙盐中加80%水，加0.5%的NaHSO3，边搅边缓慢加入稀盐酸，(有的改进乙酸与盐酸混合)调PH1-1.5，过滤酸化沉淀物。酒精沉析加10倍量95%乙醇和0.3%的NaHO3沉淀静置12小时，虹吸上部乙醇后再用乙醇二次沉析，过滤即得胆红素粗品。氯仿精制胆红素粗品中加6-10倍量氯仿分三次回流提取，每次1小时左右，分出氯仿蒸馏后即得胆红素，再用无水乙醇，乙醚洗涤，即得胆红素精品。
去年10月由四川成都中药研究所首先研究成功的离子交换树脂法提取胆红素开始在全国推广。即在柱子内装入离子交换树脂，将皂化后的胆汁到入柱子内，其它步骤与技术参数同传统方法一样进行提取。产率为万分之三至四，含量为90%左右，周期4-6小时。但该法试剂用量是传统方法的4倍左右，由于操作过程中氯仿与乙醇、蒸馏水相混合，很难回收，而且每次都得用大量试剂处理树脂。
为了克服传统方法和离子交换树脂法的上述缺点，我们从胆红素的性质出发，试图改进传统工艺且不需树脂实现高含量快速提取胆红素的目的。经过一年多的反复实验，终于探索出高含量快速提取胆红素的方法。
本发明的方法是取新鲜或冷冻胆、用不锈刀取出胆汁，用丝织布或纱布过滤掉油脂。加少量氯仿或抗氧剂(亚硫酸钠或亚硫酸氢钠)，目的是防止胆红素在皂化过程中氧化。加热到60-70℃时用1N或2N氢氧化钠或氢氧化钾溶液调PH11-12，继续加热到沸腾并维持3-5分钟左右。这样可使胆汁中的胆红素二葡萄糖醛酸脂及胆红素其它形式的结合物与氢氧化钠反应后变为胆红素钠盐。冷却到室温，将0.1-0.2%的抗氧剂用适量蒸馏水溶液后加入，加氯仿25-30%。边搅边用1∶2或1∶5的稀盐酸或乙酸调PH值，用广泛试纸测PH6-5，精精密试纸测PH4.5-3.5，这样可使胆红素的钠盐变为胆红素而溶于氯仿中，倒入分液漏斗中静置，分层后将下部红棕色氯仿液放入蒸馏瓶内，将上部乳状黄水层倒入三角瓶内进行二次提取，即加15-20%的氯仿，用很少量稀盐酸调PH3.5左右，充分摇动后倒入分液漏斗中静置，分层后将下部氯仿液放入蒸馏瓶内，也可以作一次大循环进行提取，即将上部黄水层(包括沉淀出的胆酸层)倒入三角瓶内，用氢氧化钠溶液调PH10-11，加热沸腾并维持几分钟，冷却至室温，加0.05-0.1%抗氧剂和5-15%蒸馏水，加氯仿15-20%，边搅边用稀盐酸调PH4.5-3.5，倒入分液漏斗中静置，分层后将下部氯仿液放入蒸馏瓶内。将氯仿液在85-90℃的水浴中进行蒸馏，蒸干时加适量95%乙醇，在80℃水浴中敞口蒸几分钟让乙醇冲出残留氯仿及清洗胆红素中所含的胆酸，冷却后过滤出胆红素。30-50℃条件下烘干，放入干燥器内保存。回收的氯仿，乙醇可继续使用。
给提取胆红素后的黄水层(包括中间沉淀层)加入稀盐酸，调PH0.5-1.5，胆酸即凝结析出，用冷水洗涤后凉干，就得到胆酸。
由于胆红素在氯仿溶液中形成四个分子的内氢键而获得最大的稳定性。整个过程都是在氯仿保护下进行，因而收率明显提高。
本发明与传统工艺相比其特点是生产周期由原来的2-3天缩短为1.5小时左右，且在整个周期中溶媒都是胆红素的稳定剂，产率由原来的万分之三左右提高到万分之四到七。与离了交换树脂法相比不需树脂，提取速度是离了交换法的2倍，试剂用量是树脂法的1/2，产率提高20%左右，而且试剂容易回收重复使用。
本发明提取的胆红素含量90%左右，产率万分之四至七，提取周期为1.5小时左右。
实施例1、取新鲜胆汁100ml，用丝织布过滤掉油脂。
2、加氯仿0.5ml或抗氧剂0.1克。
3、加热到65℃，用1N的氢氧化钠溶液6-9ml调PH11-12，继续加热到沸腾并维持4分钟左右，测PH8-9，冷却。
4、将0.15克抗氧剂用10ml蒸馏水溶后加入;加氯仿25-30ml。
5、在搅拌条件下加1∶5稀盐酸4-6ml，测PH4-3.5，最佳为3.8-3.7。
6、倒入分液漏斗中静置，分层后将下部氯仿液放入蒸馏瓶内。
7、将上部黄水层(包括中间层)倒入三角瓶内，加氯仿15-20ml，用少量稀酸调PH3.5，充分搅动后倒入分液漏斗中静置，分层后将下部氯仿液放入蒸馏瓶内。
8、也可以作一次大循环进一步提取;即将上部黄水层(包括中间层)倒入三角瓶内，用氢氧化钠溶液调PH10-11，加热沸腾并维持4-5分钟，冷却后将0.1克抗氧剂用10ml蒸馏水溶后加入，加氯仿15-20ml，用1∶5的稀盐酸调PH4-3.5，倒入分液漏斗中，分层后将下部氯仿液放入蒸馏瓶内。
9、在85-90℃水浴中蒸馏氯仿，蒸干时加8-10ml0.5%乙醇，在80℃水浴中蒸3分钟，让乙醇冲出残留氯仿，观察到胆红素红色结晶明显析出为止，冷却。
10、用滤纸过滤胆红素，在30-50℃条件下烘干，放入干燥器内保存。
权利要求
1.一种提取胆红素的方法，其特征在于提取过程都是在氯仿的保护下进行，向胆汁中加氢氧化钠溶液调PH值，加热到沸腾，冷却后加入氯仿和抗氧剂，用稀盐酸调PH值，分出溶入胆红素的氯仿，蒸干后用乙醇除去杂质，过滤即得胆红素精品。
2.如权利要求1所述，本发明的特征是所说加氢氧化钠溶液调PH值是指PH11-12。
3.如权利要求1所述，本发明的特征是所说用稀盐酸调PH值是指用精密试纸测PH4.5-3.5。
全文摘要
本发明是胆红素的一种提取方法。即用氢氧化钠溶液在沸腾条件下同胆汁中的胆红素结合物反应生成胆红素钠盐，室温条件下加入氯仿和抗氧剂，稀盐酸调pH，生成的胆红素溶于氯仿中。分液蒸馏氯仿，乙醇除杂，过滤就得到含量为90％左右的胆红素精品，产率万分之四到七，提取周期为1.5小时左右。
文档编号C07D277/44GK1042908SQ88107930
公开日1990年6月13日 申请日期1988年11月25日 优先权日1988年11月25日
发明者曹赫扬, 董学武 申请人:曹赫扬