治疗或预防肾小球病的组合物的制作方法

专利名称：治疗或预防肾小球病的组合物的制作方法
技术领域：
本发明涉及具有优良的抗蛋白尿作用的治疗或预防肾小球病(特别是肾小球性肾炎和糖尿病性肾病)的组合物，并且涉及具有优良的IV型胶原酶抑制活性和抗蛋白尿作用的新型化合物，以及含有该化合物的用于治疗或预防的组合物。
背景技术：
肾小球是由上皮细胞、肾小球膜细胞(mesangial cells)、内皮细胞和肾小球囊上皮细胞组成。肾小球过滤血液产生肾小球滤液，该滤液实际上含有与血浆成分相同的分子量为10,000或以下的成分。通常，该过滤作用受到控制，不会漏出血液中的基本物质特别是血浆蛋白到尿液中。
肾小球的损害引起肾小球组成细胞之一的肾小球膜细胞的生长和邻近的细胞外基层的扩展，增加了尿蛋白排泄的量。已知尿蛋白排泄的增加通过使肾小球病导致肾小管的损害而进一步降低肾功能。因此，尿蛋白排泄的抑制有望改善与肾小球病有关的各种疾病。这种损害不仅来自原发性疾病，而且来自于全身性疾病如糖尿病。然而，其发生和进展机制仍不清楚，并且尚未确立治疗的根本方法。
按照目前的治疗方法，采用对症治疗，但是其仍有许多问题。例如，对肾炎患者使用免疫抑制剂，因为认识到许多类型的肾炎是由免疫机制引起的，但是长期给药可发生肾毒性。尽管也给予肾炎患者类固醇类药物，但某些肾炎对它们产生耐药性。最近，已证明血管紧张素转化酶抑制剂(抗高血压药)对肾炎有用。然而，仍需要没有降压作用的治疗肾炎的药剂。
因此，肾小球病的药物治疗已处于试验和错误阶段。由于引起肾小球病的原因不尽相同，并且充满变化的临床病程不易预测，使肾小球病的治疗更加困难。
作为肾炎的治疗剂，而不是上述提到的药剂，例举了JP-A-9-87176中所描述的化合物。
与本发明的那些化合物相同的化合物在WO97/27174、EP0757984A1、EP0757037 A2、WO97/45402、WO97/44315、WO96/00214、WO95/35276和WO97/05865中有描述。
发明的公开在上述情形中，本发明的发明者已研究出能够抑制肾小球病(如肾小球性肾炎和糖尿病性肾病)或尿蛋白排泄疾病的发生和发展的药剂。
本发明的发明者通过使用致肾炎的抗体建立了渗漏尿蛋白的肾小球病的大鼠模型，并寻找抑制模型大鼠损害的发生和进展的化合物。结果，本发明的发明者发现了某些磺胺类衍生物可通过抑制蛋白排泄而抑制肾小球病(特别是肾小球性肾炎和糖尿病性肾病)的发生和进展，并且它们对治疗或预防这些疾病是有用的。
本发明涉及下列i)到xxxiv)表示的各项。i)含有式(I)化合物的治疗或预防肾小球病的组合物

其中R1和R2是各自独立为氢原子、任选取代的低级烷基、任选取代的芳基、任选取代的芳烷基、任选取代的杂芳基或任选取代的杂芳烷基；R3是1，4-亚苯基或2，5-噻吩二基(thiophendiyl)；R4是由下式表示的取代基

其中R5是氢原子、羟基、任选取代的低级烷氧基、巯基、低级烷硫基、环烷基、卤素、羧基、低级烷氧基羰基、硝基、氰基、低级卤烷基、芳氧基、任选取代的氨基、胍基、任选取代的低级烷基、低级链烯基、低级炔基、酰基、酰氧基、-CONRARB、-N(RC)CORD(其中RA、RB和RC是相同或不同的，选自氢原子、低级烷基或芳烷基；RD是低级烷基、芳基和芳烷基)、任选取代的非芳香杂环基团或任选取代的杂芳基；R6是任选取代的低级烷基、环烷基、低级烷氧基、卤素、低级烷硫基、任选取代的氨基、羧基、低级烷氧基羰基、芳氧基、苯基、任选取代的非芳族杂环基团或任选取代的杂芳基；和Y是NHOH或OH、其旋光活性物质、它们的药学上可接受的盐或其水合物。ii)含有式(II)化合物的治疗或预防肾小球病的组合物

其中R1、R2和R3如上述所定义；R7是由下式表示的取代基

其中R8是氢原子、羟基、低级烷氧基、巯基、低级烷硫基、环烷基、卤素、羧基、低级烷氧基羰基、硝基、氰基、低级卤烷基、芳氧基、任选取代的氨基、胍基、任选取代的低级烷基、低级链烯基、低级炔基、链烷酰基、酰氧基或任选取代的杂芳基；R9是任选取代的低级烷基、环烷基、羧基、低级烷氧基羰基、芳氧基或苯基；和Y是NHOH或OH、其旋光活性物质、它们的药学上可接受的盐或其水合物。iii)含有式(I)化合物的治疗或预防肾小球病的组合物

其中R1、R2和R3如上述所定义；R4是由下式表示的取代基

其中R10是氢原子、任选取代的低级烷氧基、低级烷硫基、卤素、任选取代的氨基、任选取代的低级烷基或任选取代的非芳族杂环基团；R11是任选取代的低级烷基、低级烷硫基、卤素、任选取代的氨基、苯基、任选取代的非芳族杂环基团或任选取代的杂芳基；和Y是NHOH或OH、其旋光活性物质、它们的药学上可接受的盐或其水合物。iv)含有式(II)化合物的治疗或预防肾小球病的组合物

其中R1、R2和R3如上述所定义；R7是由下式表示的取代基

其中R12是氢原子、卤素、硝基、任选取代的低级烷基、低级烷氧基或低级烷硫基；R13是任选取代的低级烷基或苯基；和Y是NHOH或OH、其旋光活性物质、它们的药学上可接受的盐或其水合物。v)含有式(III)化合物的治疗或预防肾小球病的组合物

其中R1、R10和Y如上述所定义；以及R14是氢原子或低级烷基、其旋光活性物质、它们的药学上可接受的盐或其水合物。vi)含有式(IV)化合物的治疗或预防肾小球病的组合物

其中R1、R12、R14和Y是如上述所定义、其旋光活性物质、它们的药学上可接受的盐或其水合物。vii)含有式(V)化合物的治疗或预防肾小球病的组合物

其中R1、R10、R14和Y是如上述所定义、其旋光活性物质、它们的药学上可接受的盐或其水合物。viii)含有式(VI)化合物的治疗或预防肾小球病的组合物

其中R1、R12、R14和Y是如上述所定义、其旋光活性物质、它们的药学上可接受的盐或其水合物。ix)含有式(VII)化合物的治疗或预防肾小球病的组合物

其中R1、R10、R14和Y如上述所定义、其旋光活性物质、它们的药学上可接受的盐或其水合物。x)含有式(VIII)化合物的治疗或预防肾小球病的组合物

其中R1、R12、R14和Y如上述所定义、其旋光活性物质、它们的药学上可接受的盐或其水合物。xi)含有式(IX)化合物的治疗或预防肾小球病的组合物

其中R1、R10、R14和Y如上述所定义、其旋光活性物质、它们的药学上可接受的盐或其水合物。xii)含有式(X)化合物的治疗或预防肾小球病的组合物

其中R1、R12、R14和Y如上述所定义、其旋光活性物质、它们的药学上可接受的盐或其水合物。xiii)含有式(XI)化合物的治疗或预防肾小球病的组合物

其中R1、R10、R14和Y如上述所定义、其旋光活性物质、它们的药学上可接受的盐或其水合物。xiv)含有式(XII)化合物的治疗或预防肾小球病的组合物

其中R1、R12、R14和Y如上述所定义、其旋光活性物质、它们的药学上可接受的盐或其水合物。xv)含有式(XIII)化合物的治疗或预防肾小球病的组合物

其中R1、R10、R14和Y如上述所定义、其旋光活性物质、它们的药学上可接受的盐或其水合物。xvi)含有式(XIV)化合物的治疗或预防肾小球病的组合物

其中R1、R12、R14和Y如上述所定义、其旋光活性物质、它们的药学上可接受的盐或其水合物。xvii)含有式(XV)化合物的治疗或预防肾小球病的组合物

其中R1、R11、R14和Y如上述所定义、其旋光活性物质、它们的药学上可接受的盐或其水合物。xviii)含有式(XVI)化合物的治疗或预防肾小球病的组合物

其中R1、R13、R14和Y如上述所定义、其旋光活性物质、它们的药学上可接受的盐或其水合物。xix)上述i)到xviii)的任何一种治疗或预防肾小球病的组合物，其中R1是氢原子、甲基、异丙基、异丁基、任选取代的苄基、任选取代的吲哚-3-基甲基或苯氨基羰基乙基。xx)上述i)到xviii)的任何一种治疗或预防肾小球病的组合物，其中R1是异丙基、苄基或吲哚-3-基甲基。xxi)上述i)到xx)的任何一种治疗或预防肾小球病的组合物，其中R2和R14是氢原子。xxii)上述i)到xxi)的任何一种治疗或预防肾小球病的组合物，其中Y是OH。xxiii)上述i)到xxii)的任何一种治疗或预防肾小球病的组合物，其中肾小球病是肾小球性肾炎。xxiv)上述i)到xxii)的任何一种治疗或预防肾小球病的组合物，其中肾小球病是糖尿病性肾病。xxv)式(XVII)的化合物

其中R1、R10、R14和Y如上述所定义、其旋光活性物质、它们的药学上可接受的盐或其水合物。xxvi)式(XVIII)的化合物

其中R1、R10、R14和Y如上述所定义、其旋光活性物质、它们的药学上可接受的盐或其水合物。xxvii)式(XIX)的化合物

其中R1、R10、R14和Y如上述所定义、其旋光活性物质、它们的药学上可接受的盐或其水合物。xxviii)式(XX)的化合物

其中R1、R10、R14和Y如上述所定义、其旋光活性物质、它们的药学上可接受的盐或其水合物。xxix)式(XXI)的化合物

其中R1、R10、R14和Y如上述所定义、其旋光活性物质、它们的药学上可接受的盐或其水合物。xxx)式(XXII)的化合物

其中R1、R10、R14和Y如上述所定义、其旋光活性物质、它们的药学上可接受的盐或其水合物。xxxi)式(XXIII)的化合物

其中R1、R10、R14和Y如上述所定义、其旋光活性物质、它们的药学上可接受的盐或其水合物。xxxii)含有上述xxv)到xxxi)的任何一种化合物的药用组合物。xxxiii)含有上述xxv)到xxxi)的任何一种化合物的抑制基质金属蛋白酶的组合物。xxxiv)含有上述xxv)到xxxi)的任何一种化合物的抑制IV型胶原酶的组合物。xxxv)含有上述xxv)到xxxi)的任何一种化合物的治疗或预防肾小球病的组合物。xxxvi)含有式(XXIV)化合物的治疗或预防肾小球病的组合物

其中每个取代基的组合表示如下、其旋光活性物质、它们的药学上可接受的盐或其水合物。表1







xxxvii)含有式(XXIV)化合物的治疗或预防肾小球病的组合物

其中每个取代基的组合表示如下、其旋光活性物质、它们的药学上可接受的盐或其水合物。表2


xxxviii)上述xxxv)到xxxvii)的任何一种治疗或预防肾小球病的组合物，其中肾小球病是肾小球性肾炎。xxxix)上述xxxv)到xxxvii)的任何一种治疗或预防肾小球病的组合物，其中肾小球病是糖尿病性肾病。
在上述提到的具有治疗或预防肾小球病的优良活性的化合物中，优选的化合物显示如下化合物序号1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、15、16、17、18、19、20、21、23、24、26、28、29、31、32、33、34、35、39、40、41、44、48、51、52、54、55、56、57、59、61、62、73、81、82、84、86、91、92、93、94、95、97、98、100、101、102、103、104、105、106、107、108、109、112、113、114、115、119、120和121。
更优选的化合物是序号1、2、3、4、5、6、7、9、12、13、15、16、17、18、19、23、29、31、32、33、34、35、39、51、54、55、56、57、59、61、62、80、82、84、86、91、92、93、94、95、96、97、101、108、112、113、115、119、120和121的化合物。
最优选的化合物是序号1、2、4、7、9、12、15、16、17、18、19、23、31、33、32、34、39、54、56、57、61、62、80、84、86、91、92、95、97、101、108和121的化合物。
此处使用的术语“肾小球病”意指由内源性或外源性因素引起的肾小球功能障碍或肾小球形态的改变。
此处使用的术语“肾小球性肾炎”意指由遗传性或外源性因素或自身免疫紊乱引起的源于肾小球功能障碍的肾功能障碍。该术语包括肾病如没有炎症反应的膜性肾病。
此处使用的术语“糖尿病性肾病”意指在糖尿病危象后观察到的所有肾功能障碍。
此处使用的术语“低级烷基”意指C1到C6的直链或支链烷基，例如甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、异丁基、仲丁基、叔丁基、正戊基、正己基等等。优选C1到C4烷基。
此处使用的术语“环烷基”举例为环丙基、环丁基、环戊基、环己基、环庚基等等。
此处使用的术语“芳基”意指单环或稠环芳香烃。芳基的实例为苯基、1-萘基、2-萘基等等。
此处使用的术语“芳烷基”意指在任何可能的位置用上述提到的“芳基”取代的上述提到的“低级烷基”。芳烷基的实例为苄基、苯乙基(2-苯乙基)、苯基丙基(例如3-苯基丙基)、萘基甲基(例如1-萘基甲基和2-萘基甲基)、蒽基甲基(例如9-蒽基甲基)等等。优选苄基。
此处使用的术语“杂芳基”意指5到6元芳香杂环基团，其含有一个或多个选自环中的氧、硫和氮原子的杂原子，并且在任何可能的位置与上述提到的“芳基”、“非芳香杂环基团”和其它的“杂芳基”稠合。杂芳基的实例为吡咯基(例如1-吡咯基)、吲哚基(例如3-吲哚基)、咔唑基(例如3-咔唑基)、咪唑基(例如4-咪唑基)、吡唑基(例如1-吡唑基)、苯并咪唑基(例如2-苯并咪唑基)、吲唑基(例如3-吲唑基)、中氮茚基(例如6-中氮茚基)、吡啶基(例如4-吡啶基)、喹啉基(例如5-喹啉基)、异喹啉基(例如3-异喹啉基)、吖啶基(例如1-吖啶基)、菲啶基(例如2-菲啶基)、哒嗪基(例如3-哒嗪基)、嘧啶基(例如4-嘧啶基)、吡嗪基(例如2-吡嗪基)、肉啉基(例如3-肉啉基)、二氮杂萘基(例如2-二氮杂萘基)、喹唑啉基(例如2-喹唑啉基)、异噁唑基(例如3-异噁唑基)、苯并异噁唑基(例如3-苯并异噁唑基)、噁唑基(例如2-噁唑基)、苯并噁唑基(例如2-苯并噁唑基)、苯并噁二唑基(例如4-苯并噁二唑基)、异噻唑基(例如3-异噻唑基)、苯并异噻唑基(例如2-苯并异噻唑基)、噻唑基(例如2-噻唑基)、苯并噻唑基(例如2-苯并噻唑基)、呋喃基(例如3-呋喃基)、苯并呋喃基(例如3-苯并呋喃基)、噻吩基(例如2-噻吩基)、苯并噻吩基(例如2-苯并噻吩基)、四唑基等等。优选吲哚基、吡唑基和吡啶基。
此处使用的术语“杂芳基烷基”意指在任何可能的位置用上述提到的“杂芳基”取代的上述提到的“低级烷基”。杂芳基烷基的实例为噻唑基甲基(例如4-噻唑基甲基)、噻唑基乙基(例如5-噻唑基-2-乙基)、吲哚基甲基(例如吲哚-3-基甲基)、咪唑基甲基(例如4-咪唑基甲基)、苯并噻唑基甲基(例如2-苯并噻唑基甲基)、苯并吡唑基甲基(例如1-苯并吡唑基甲基)、苯并三唑基甲基(例如4-苯并三唑基甲基)、苯并喹啉基甲基(例如2-苯并喹啉基甲基)、苯并咪唑基甲基(例如2-苯并咪唑基甲基)、吡啶基甲基(例如2-吡啶基甲基)等等。以吲哚-3-基甲基为例，作为优选的杂芳基烷基。
此处使用的术语“非芳香杂环基团”意指5到7元非芳香环，其在环上和稠合的环上含有一个或多个选自氧、硫和氮原子的杂原子，所述稠环与两个或多个环稠合。非芳香杂环基团的实例为吡咯烷、哌啶、哌嗪、八氢喹啉、四氢呋喃、四氢吡喃、吗啉等等。优选吡咯烷和吗啉。
此处使用的术语“低级烷氧基”意指其烷基部分是上述提到的低级烷基的烷氧基。低级烷氧基的实例为甲氧基、乙氧基、正丙氧基、异丙氧基、正丁氧基、异丁氧基、仲丁氧基、叔丁氧基等等。优选C1到C4烷氧基。
此处使用的术语“卤素”意指氟、氯、溴和碘。优选氟、氯和溴。
此处使用的术语“低级烷硫基”意指其烷基部分是上述提到的“低级烷基”的烷硫基。低级烷硫基的实例为甲硫基、乙硫基等等。
此处使用的术语“低级烷氧基羰基”意指其烷氧基部分是上述提到的“低级烷氧基”的低级烷氧基羰基。低级烷氧基羰基的实例为甲氧基羰基、乙氧基羰基、正丙氧基羰基等等。
此处使用的术语“低级卤烷基”意指在1到5位置由上述提到的“卤素”取代的上述提到的“低级烷基”。低级卤烷基的实例为三氯甲基、三氯乙基、三氟甲基、三氟乙基等等。
此处使用的术语“芳氧基”意指其芳基部分是上述提到的“芳基”的芳氧基。芳氧基的实例为苯氧基等等。
此处使用的术语“低级链烯基”意指C2到C6的直链或支链链烯基。低级链烯基的实例为乙烯基、烯丙基、丙烯基、丁烯基等等。
此处使用的术语“低级炔基”意指C2到C8的直链或支链炔基。低级炔基的实例为乙炔基、1-丙炔基、炔丙基、1-己炔基等等。
此处使用的术语“酰基”意指其羰基与上述提到的“低级烷基”或“环烷基”结合的链烷酰基，和其羰基与上述提到的“芳基”结合的芳酰基。酰基的实例为乙酰基、正丙酰基、异丙酰基、正丁酰基、叔丁酰基、环丙酰基、环丁酰基、环戊酰基、环己酰基、苯甲酰基等等。优选乙酰基和苯甲酰基。
此处使用的术语“链烷酰基”意指其羰基与上述提到的“低级烷基”或“环烷基”结合的链烷酰基。链烷酰基的实例为乙酰基、正丙酰基、异丙酰基、正丁酰基、叔丁酰基、环丙酰基、环丁酰基、环戊酰基、环己酰基等等。优选乙酰基。
此处使用的术语“酰氧基”意指其氧原子直接与上述提到的“酰基”结合的酰氧基。酰氧基的实例为乙酰氧基、正丙酰氧基、异丙酰氧基、正丁酰氧基、叔丁酰氧基、环丙酰氧基、环丁酰氧基、环戊酰氧基、环己酰氧基、苯甲酰氧基、α-萘酰氧基、β-萘酰氧基等等。
此处使用的术语“任选取代的氨基”意指由一个、两个或多个上述提到的“低级烷基”、“芳烷基”或“杂芳烷基”取代的氨基或者未被取代的氨基。任选取代的氨基的实例为氨基、甲基氨基、二甲基氨基、乙基甲基氨基、二乙基氨基、苄基氨基等等。
对于R1和R2的“任选取代的烷基”的取代基是羟基、烷氧基(例如甲氧基和乙氧基)、巯基、烷硫基(例如甲硫基)、环烷基(例如环丙基、环丁基、环戊基和环己基)、卤素(例如氟、氯、溴和碘)、羧基、低级烷氧基羰基(例如甲氧基羰基和乙氧基羰基)、硝基、氰基、低级卤烷基(例如三氟甲基)、任选取代的氨基(例如甲基氨基、二甲基氨基和氨基甲酰基氨基)、任选取代的氨基甲酰基(例如苯基氨基甲酰基)、胍基、苯基、苄氧基等等。这些取代基能在一个或多个任何可能的位置与其结合。
R1和R2的“任选取代的烷基”的实例为甲基、乙基、正丙基、异丙基、异丁基、苯基氨基甲酰基乙基、甲基乙硫基等等。
R5、R6、R12和R13的“任选取代的烷基”的取代基是任选被保护的羟基(例如羟基、甲磺酰氧基和p-甲苯磺酰氧基)、烷氧基(例如甲氧基、乙氧基、正丙氧基和正丁氧基)、叠氮基、巯基、烷硫基(例如甲硫基)、环烷基(例如环丙基、环丁基、环戊基和环己基)、卤素(例如氟、氯、溴和碘)、羧基、低级烷氧基羰基(例如甲氧基羰基和乙氧基羰基)、硝基、氰基、低级卤烷基(例如三氟甲基)、任选取代的氨基(例如甲基氨基、二甲基氨基和氨基甲酰基氨基)、胍基、苯基、苄氧基等等。这些取代基能在一个或多个任何可能的位置与其结合。优选的取代基是任选被保护的羟基、叠氮基、卤素和任选取代的氨基。
R5、R6、R12和R13的“任选取代的烷基”的实例是甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、羟基甲基、2-羟基乙基、2-乙基叠氮基、三氟甲基等等。
R8、R9、R12和R13的“任选取代的烷基”的取代基是任意被保护的羟基(例如羟基、甲磺酰氧基和p-甲苯磺酰氧基)、烷氧基(例如甲氧基和乙氧基)、叠氮基、巯基、烷硫基(例如甲硫基)、环烷基(例如环丙基、环丁基、环戊基和环己基)、卤素(例如氟、氯、溴和碘)、羧基、低级烷氧基羰基(例如甲氧基羰基和乙氧基羰基)、硝基、氰基、低级卤烷基(例如三氟甲基)、任选取代的氨基(例如甲基氨基、二甲基氨基和氨基甲酰基氨基)、胍基、苯基、苄氧基等等。这些取代基能在一个或多个任何可能的位置与其结合。优选的取代基是任选被保护的羟基、叠氮基、卤素和任选取代的氨基。
此处使用的“任选取代的烷氧基”的取代基的实例为任选取代的氨基(氨基、甲基氨基、二甲基氨基、乙基氨基、乙基甲基氨基和二乙基氨基)等等。优选任选取代的氨基。
“任选取代的烷氧基”的实例为甲氧基、乙氧基、正丙氧基、正丁氧基、3-二甲基氨基丙基氧基等等。
“任选取代的芳基”、“任选取代的芳烷基”、“任选取代的杂芳基”和“任选取代的杂芳烷基”的芳香环上的取代基是，例如羟基、低级烷氧基(例如甲氧基和乙氧基)、巯基、低级烷硫基(例如甲硫基)、环烷基(例如环丙基、环丁基和环戊基)、卤素(例如氟、氯、溴和碘)、羧基、低级烷氧基羰基(例如甲氧基羰基和乙氧基羰基)、硝基、氰基、低级卤烷基(例如三氟甲基)、芳氧基(例如苯氧基)、任选取代的氨基(例如甲基氨基、二甲基氨基、二乙基氨基和亚苄基氨基)、胍基、低级烷基(例如甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、异丁基、仲丁基、叔丁基、正戊基、异戊基、新戊基和叔戊基)、低级链烯基(例如乙烯基和丙烯基)、炔基(例如乙炔基和苯乙炔基)、低级烷酰基(例如甲酰基、乙酰基和丙酰基)、酰氧基(例如乙酰氧基)、酰氨基、低级烷基磺酰基(例如甲磺酰基)、苯基、苄基、偶氮基(例如苯偶氮基)、任选取代的杂芳基(例如3-吡啶基)、任选取代的脲基(例如脲基和苯基脲基)等等。这些取代基能在一个或多个任何可能的位置与其结合。
“任选取代的非芳香杂环基团”的取代基的实例为低级烷基(例如甲基、乙基、正丙基和异丙基)等等。
“任选取代的非芳香杂环基团”的实例为1-吡咯烷基、吗啉代、哌啶子基、噁唑烷基等等。
图表简述

图1显示了在E30注射后，尿蛋白排泄的量随时间过程的改变。图2显示了在未处理组和实验开始后试验化合物处理5天的实验组中，每单个肾小球的PCNA阳性细胞的数量。图3显示了在未处理组和实验开始后试验化合物处理5天的实验组中，血尿素氮的浓度。图4显示了在未处理组和实验开始后试验化合物处理5天的实验组中，血浆肌酐的浓度。图5显示了不同浓度的试验化合物随时间过程变化的3H-胸腺嘧啶结合率，以调查对培养的肾小球膜细胞增生的影响。
进行本发明的最佳方式作为治疗或预防药剂的效果测试如下。(动物)在本试验中采用5到8周龄的雄性Slc-Wistar大鼠。(致肾炎抗体的建立步骤)按照以下描述建立针对大鼠肾小球的鼠单克隆抗体以及筛选诱导肾炎的单克隆抗体。
为了使抗体的注射诱导出肾小球性肾炎，细胞的表面就必须存在抗原。首先，我们通过免疫荧光法来观察所获得的单克隆抗体在静脉注射给大鼠后是否积聚在肾小球中。给单克隆抗体的每个克隆所识别的抗原确定其分布及分子量。然后，在单剂量抗体注射后一周内，以蛋白尿排泄为基础，评估诱导肾炎的活性。
在该研究期间，建立了单克隆抗体E30(J.J.N.，36卷，106页，1994年)。通过免疫组织化学研究，已知E30识别肾小球膜细胞的表面抗原，并且E30单剂量给予大鼠可诱导补体依赖的肾小球膜细胞损伤。以下描述其病理学改变。
E30抗体静脉注射给大鼠后立即与肾小球中的肾小球膜细胞的表面抗原结合，在随后的30分钟内激活补体系统。然后，肾小球膜细胞发生变性和坏死，导致肾小球基底膜从肾小球膜区域分离。已知这一系列病理学特征为肾小球膜坏死(mesangiolysis)。在肾小球膜坏死期间，可观察到血小板积聚和炎细胞如多形核白细胞和巨噬细胞侵润。肾小球膜坏死在抗体注射后1-3天显著，并且在这段时间常常观察到肾小球膜膨胀。肾小球细胞(主要是肾小球膜细胞)的增生在注射后3-5天开始发生，结果导致一周的肾小球膜增生性肾小球性肾炎的形态学特征。肾小球毛细血管网的重建伴随有肾小球膜细胞的有丝分裂和增生，以及不规则形式的血管生成。此后，增加数量的肾小球膜细胞和过度产生的细胞外基质随时间过程而消退，经过一个月，其病理特征恢复正常。
因此，由于单克隆抗体的一次注射可诱导可重复的肾炎模型，抗体诱导的肾炎模型对领会肾小球疾病中为生物学反应的基本变化是有用的。
在亚洲，一半的肾小球性肾炎患者被诊断为IgA肾病。IgA肾病是以IgA沉积在肾小球膜细胞上为特征。IgA肾病属于由针对肾小球膜细胞本身的免疫反应所引起的增生性肾炎。因此，单克隆抗体诱导的肾炎模型对研究IgA肾病的发病机理也是有用的。
此外，单克隆抗体E30还可用于建立某些慢性肾炎模型，通过与嘌呤霉素氨基核苷联合给予(J.J.N.，39卷，220页，1997年)或者通过其单剂量注射给单侧肾切除后的大鼠(J.J.N.，39卷，300页，1997年)来诱导这些模型。试验化合物对肾小球硬化症的发展的预防或治疗作用可通过使用这些慢性肾炎模型来评估。通过使用以下方法能够检测类似的实验1)通过采用其它的单克隆抗体或抗胸腺细胞血清代替E30的方法，2)通过采用遗传性肾炎大鼠或小鼠的方法，3)通过采用自发性糖尿病大鼠或小鼠的方法，4)通过采用链脲霉素或四氧嘧啶诱导的糖尿病大鼠或小鼠的方法。(测定的原始记录)为了诱导肾小球性肾炎，将20-500μg的E30，优选50-200μg，静脉注射给5到8周龄的大鼠。将0.1-500mg的试验化合物，优选1-200mg，混悬于3-10％，优选4-6％的阿拉伯胶溶液及其类似物中，在E30注射前1到5小时，优选1.5到3小时，口服给予。然后每天连续给予恒定量的试验化合物1到3次。在E30注射2天后蛋白尿达到最高水平时，通过尿蛋白排泄的量来确定试验化合物的评估值。
就某些化合物而论，其在上述方法中显示出抗蛋白尿作用，在这些化合物治疗以后，评定5到8天期间尿蛋白排泄的量、体重的改变、由尸检检测肾小球的形态学改变、肾小球膜增生的抑制率和肾功能。
通过用不锈钢代谢笼收集24小时尿样，随后检测尿蛋白的浓度来进行尿蛋白排泄量的测定。将在后续检查期间获得的血样进行处理，以测定表明肾功能的血尿素氮和血浆肌酐。作为肾小管损伤的标记，检测尿的N-乙酰基-D-葡糖胺酶(glycosaminidase)排泄的量。此外，为了研究随着E30注射后化合物对肾小球膜增生的抑制作用，计算每个肾小球的PCNA(增殖细胞核抗原)阳性细胞的数量。用光学和电子显微镜观察形态学变化。
用作治疗或预防肾小球病组合物的由式(I)表示的本发明化合物可按照WO97/27174中描述的方法合成。
此处使用的术语“本发明的化合物”包括所述化合物的药学上可接受的盐或水合物。所述盐的实例为与碱金属(如锂、钠、钾等)、碱土金属(如镁、钙等)、铵、有机碱、氨基酸、无机酸(如盐酸、氢溴酸、磷酸、硫酸等)或有机酸(如乙酸、柠檬酸、mallein酸、富马酸、苯磺酸、p-甲苯磺酸等)所成的盐。这些盐能通过常规方法形成。
当本发明的化合物给予人来治疗或预防上述疾病时，它们能作为粉剂、颗粒剂、片剂、胶囊、丸剂和液体药剂口服给予，或者作为注射剂、栓剂、经皮吸收制剂、吸入剂等胃肠外给予。如果需要的话，有效剂量的化合物可与合适的药用混合物混合配制，例如赋形剂、粘合剂、渗透剂、崩解剂、润滑剂等等。胃肠外注射剂可通过将所述化合物与合适的载体一起灭菌来制备。
剂量可随患者的病情、给药途径、他们的年龄和体重而变化。在口服给药情况下，日剂量通常在0.1-100mg/kg/日，成人优选1-20mg/kg/日。
以下提供的实施例进一步阐明了本发明，并且不构成对其范围的限制。
在以下实施例中使用下述缩写。Me甲基tBu叔丁基DMSO二甲亚砜p-TsOHp-甲苯磺酸(所述化合物的制备)实施例1

步骤1在冰冷条件下向4.72g(22.5mmol)D-缬氨酸叔丁酯盐酸盐(XXV)的二氯甲烷(100ml)溶液中加入6.19ml(2.5×22.5mmol)N-甲基吗啉和6.37g(1.05×22.5mmol)4-苯氧基苯磺酰氯。该混合物在室温搅拌5小时后，用乙酸乙酯稀释该反应混合物。有机层用1N-盐酸和饱和碳酸氢钠水溶液洗涤、硫酸钠干燥和真空浓缩。残余物经硅胶柱层析，并收集用CHCl3/MeOH＝50/1洗脱的部分，从乙酸乙酯和己烷中重结晶，获得8.13g(产量的89.1％)的目标化合物(XXVI)。熔点139-140℃。IR(KBr，νmax cm-1)3302，1731，1698，1584，1489，1439，1369，1342，1299，1253，1161，1136，1094，835。NMR(CDCl3，δppm)0.85(d，J＝6.9Hz，3H)，1.00(d，J＝6.9Hz，3H)，1.28(s，9H)，2.05(m，1H)，3.62(dd，J＝4.2，9.6Hz，1H)，5.08(d，J＝9.6Hz，1H)，6.97-7.05(m，2H)，7.18-7.28(m，4H)，7.40(m，1H)，7.75-7.81(m，2H)。[α]D-44.4±0.8(c＝1.008 CHCl324℃)步骤2向化合物(XXVI，3.23g，9.41mmol)的二氯甲烷(36ml)溶液中加入三氟乙酸(36ml，50×9.41mmol)，所得混合物在室温搅拌3小时。在室温搅拌5小时以后，减压下除去溶剂。残余物从乙酸乙酯和己烷中结晶，获得2.62g(产量的96.9％)的目标化合物(XXVII)(熔点137-138℃)。IR(KBr，νmax cm-1)3154，1728，1688，1583，1488，1251。NMR(CDCl3，δppm)0.89(d，J＝7.0Hz，3H)，0.98(d，J＝6.8Hz，3H)，2.12(m，1H)，3.80(dd，J＝4.6，9.6Hz，1H)，5.17(d，J＝9.6Hz，1H)，6.95-7.08(m，4H)，7.13-7.45(m，3H)，7.70-7.85(m，2H)。[α]D-3.7±0.4(c＝1.006 DMSO 24℃)步骤3在冰冷条件下向化合物(XXVII，0.3g，0.854mmol)的二氯甲烷(10ml)溶液中加入草酰氯(0.37ml，5×0.854mmol)和一滴二甲基甲酰胺，所得混合物在室温搅拌1小时。真空浓缩该反应混合物，将残余物溶于10ml四氢呋喃中。在冰冷条件下将包括羟基胺盐酸(474mg，8×0.854mmol)和碳酸氢钠(861mg，12×0.854mmol)的四氢呋喃(10ml)和水(6ml)的混合溶液搅拌5分钟。在冰冷条件下向所述混合的溶液中加入上面提到的酰氯溶液，并且该所得混合物在室温搅拌1小时。用乙酸乙酯萃取该反应混合物。有机层用饱和碳酸氢钠水溶液洗涤、硫酸钠干燥和真空浓缩。残余物经硅胶柱层析，并收集用CHCl3/MeOH＝20/1洗脱的部分，从己烷中结晶，获得288mg(产量的92.5％)的所述化合物(I)。结果显示于表3中。实施例2到6以与上述方法相似的方式合成化合物(2)到(6)。结果显示于表3中。表3

实施例7

步骤1在冰冷条件下向化合物(XXVIII，755mg，4.5mmol)的12ml二氯甲烷溶液中加入N-甲基吗啉(1.49ml，3×4.5mmol)和5-溴代噻吩-2-磺酰氯(1.24g，1.05×4.5mmol)。该反应混合物在室温搅拌15小时后，所得混合物用2N-盐酸、5％碳酸氢钠和水洗涤。有机层用硫酸钠干燥和真空浓缩。残余物经硅胶柱层析，并收集用乙酸乙酯/己烷＝1/3洗脱的部分，用正己烷洗涤，获得所述目标化合物(XXIX，1.32g，产量的82％，熔点109-110℃)。[α]D-34.5±0.7(c＝1.012 CHCl325℃)IR(CHCl3，νmax cm-1)1737，1356，1164，1138。NMR(CDCl3，δppm)0.89(d，J＝6.8Hz，3H)，1.00(d，J＝6.8Hz， 3H)，2.00(m，1H)，3.60(s，3H)，3.83(dd，J＝5.2，10.0Hz，1H)，5.20(d，J＝10.0Hz，1H)，7.04(d，J＝4.1Hz，1H)，7.32(d，J＝4.1Hz，1H)。步骤2向化合物(XXIX，500mg，1.4mmol)的无水四氢呋喃(12ml)溶液中加入碳酸钾粉末(387mg，2×1.4mmol)、4-甲氧基苯基硼酸(319mg，1.5×1.4mmol)和四(三苯膦)钯(81mg，0.05×1.4mmol)，并且所得混合物在75℃氩气下搅拌48小时。该反应混合物用乙酸乙酯稀释。有机层用1N-盐酸、5％碳酸氢钠水溶液和水洗涤、硫酸钠干燥和真空浓缩。残余物经硅胶柱层析，并收集用正己烷/乙酸乙酯＝3/1洗脱的部分，从正己烷中结晶，获得所述目标化合物(XXX，447mg，产量的83％，熔点122-123℃)。元素分析C17H21NO5S2计算值C ； 53.25 H；5.52 N；3.65 S；16.72实测值C ； 53.26 H；5.50 N；3.69 S；16.63[α]D-21.7±0.6(c＝1.000DMSO 25℃)IR(KBr，νmax cm-1)1735，1605，1505，1350，1167，1136。NMR(CDCl3，δppm)0.90(d，J＝7.0Hz，3H)，1.00(d，J＝6.6Hz，3H)，2.10(m，1H)，3.54(s，3H)，3.85(s，3H)，3.87(dd，J＝5.0，10.2Hz，1H)，5.20(d，J＝10.2Hz，1H)，6.94(d，J＝9.0Hz，2H)，7.52(d，J＝9.0Hz，2H)，7.11(d，J＝4.0Hz，1H)，7.49(d，J＝4.0Hz，1H)。步骤3向所述化合物(XXX，390mg，1.01mmol)的8ml四氢呋喃和8ml甲醇溶液中加入5.1ml 1N NaOH，所得混合物在60℃搅拌6小时。真空浓缩该反应混合物以除去有机溶剂。所得残余物用乙酸乙酯稀释。该混合物用柠檬酸水溶液酸化，并用乙酸乙酯萃取。有机层用盐水洗涤、硫酸钠干燥和真空浓缩，获得373mg(产量的100％)的化合物(7)。物理数据显示在表4中。实施例8到30以与上述方法相似的方式合成化合物(8)到(30)。结果显示于表4中。表4

实施例4

步骤1在冰冷条件下向化合物(XXV，20.94g，99.8mmol)的200ml二氯甲烷溶液中加入N-甲基吗啉(22ml，2×99.8mmol)和p-苯乙烯磺酰氯(20.27g，99.8mmol)。所得混合物在室温搅拌15小时。该混合物用2N-盐酸、5％碳酸氢钠水溶液和水洗涤。有机层用硫酸钠干燥和真空浓缩。残余物经硅胶柱层析，并收集用乙酸乙酯/正己烷/氯仿＝1/3/1洗脱的部分，用正己烷洗涤，获得所述目标化合物(XXXI，28.93g，产量的85％，熔点118-120℃)。IR(KBr，νmax cm-1)3419，3283，1716，1348，1168。NMR(CDCl3，δppm)0.85(d，J＝6.9Hz，3H)，1.00(d，J＝6.6Hz，3H)，1.21(s，9H)，2.04(m，1H)，3.62(dd，J＝9.8，4.5Hz，1H)，5.09(d，J＝9.8Hz，1H)，5.41(dd，J＝0.5，10.9Hz，1H)，5.84(dd，J＝0.5，17.6Hz，1H)，6.72(dd，J＝10.9，17.6Hz，1H)，7.49(d，J＝8.4Hz，2H)，7.79(d，J＝8.4Hz，2H)。步骤2在-78℃用臭氧处理所述化合物(XXXI，5.09g，15mmol)的二氯甲烷(300ml)溶液15分钟。向该反应混合物中加入二甲硫(22ml，20×15mmol)，并使所得混合物逐渐温热至室温超过80分钟，真空浓缩，获得6.03g乙醛衍生物(XXXII)。IR(CHCl3，νmax cm-1)3322，1710，1351，1170。NMR(CDCl3，δppm)0.85(d，J＝6.9Hz，3H)，1.00(d，J＝6.9Hz，3H)，1.22(s，9H)，2.07(m，1H)，3.69(dd，J＝4.5，9.9Hz，1H)，8.01(s，4H)，10.08(s，1H)。步骤3在室温下向所述化合物(XXXII，6.02g，15mmol)的60ml乙醇和15ml四氢呋喃溶液中加入2.72g(1.05×15mmol)苯磺酰肼，并搅拌所得混合物2小时。真空浓缩该反应混合物。残余物经硅胶柱层析，并收集用氯仿/乙酸乙酯＝1/4洗脱的部分，从乙酸乙酯中重结晶，获得所述目标化合物(XXXIII，4.44g，熔点163-164℃，步骤2收率60％)。元素分析C22H29N3O6S2计算值C；53.32 H；5.90 N；8.48 S；12.94实测值C；53.15 H；5.87 N；8.32 S；12.82[α]D-11.6±1.0(c＝0.509 DMSO 23.5℃)IR(KBr，νmax cm-1)3430，3274，1711，1364，1343，1172。NMR(CDCl3，δppm)0.84(d，J＝6.9Hz，3H)，0.99(d，J＝6.6Hz，3H)，1.19(s，9H)，2.00(m，1H)，3.63(dd，J＝4.5，9.9Hz，1H)，5.16(d，J＝9.9Hz，1H)，7.50-7.68(m，5H)，7.73(s，1H)，7.78-7.84(m，2H)，7.96-8.02(m，2H)，8.16(brs，1H)。步骤4向4-(甲硫基)苯胺(0.14ml，1.11×1mmol)的50％乙醇水溶液中加入0.3ml浓盐酸，并在0到5℃的内温下搅拌所得混合物。向该混合物中加入亚硝酸钠(78.4mg，1.14×1mmol)的1ml水溶液，并在同样温度下搅拌所得混合物15分钟。在-25℃用8分钟向所述化合物(XXXIII，496mg，1mmol)的5ml无水吡啶溶液中加入上述反应混合物。该混合物在-15℃到室温下另外搅拌4小时，倒入水中并用乙酸乙酯萃取。有机层用2N-盐酸、5％碳酸氢钠水溶液和水洗涤、用硫酸钠干燥和真空浓缩。残余物经硅胶柱层析，并收集用氯仿/乙酸乙酯＝1/9洗脱的部分，获得所述目标化合物(XXXIV，374mg，收率74％)。元素分析C23H29N5O4S2·0.3H2O计算值C；54.27 H；5.86 N；13.76 S；12.60实测值C；54.25 H；5.77 N；13.87 S；12.52IR(KBr，νmax cm-1)3422，3310，1705，1345，1171。NMR(d6-DMSO，δppm)0.83(d，J＝6.9Hz，3H)，0.86(d，J＝7.2Hz，3H)，1.19(s，9H)，2.00(m，1H)，2.59(s，3H)3.54(dd，J＝6.3，9.6Hz，1H)，7.56(d，J＝8.7Hz，2H)，8.00(d，J＝8.6Hz，2H)，8.10(d，J＝8.7Hz，2H)，8.33(d，J＝9.6Hz，2H)，8.34(d，J＝8.7Hz，2H)。步骤5在室温搅拌所述化合物(XXXIV，353mg)的2.5ml二氯甲烷和2.5ml三氟乙酸溶液3小时。真空浓缩该反应混合物，所得残余物用乙酸乙酯洗涤，获得所述化合物(31，308mg，收率98％)。结果显示于表5中。实施例32到62以与上述方法相似的方式合成化合物(32)到(62)。结果显示于表5和6中。表5

表6

实施例63

步骤1在冰冷条件下向化合物(XXV，755mg，4.5mmol)的12ml二氯甲烷溶液中加入N-甲基吗啉(1.49ml，3×4.5mmol)和5-溴代噻吩-2-磺酰氯(1.24g，1.05×4.5mmol)。在室温搅拌15小时后，该混合物用2N-盐酸、5％碳酸氢钠水溶液和水洗涤。有机层用硫酸钠干燥和真空浓缩。残余物经硅胶柱层析，并收集用乙酸乙酯/正己烷＝1/3洗脱的部分，用正己烷洗涤，获得所述目标化合物(XXXV，1.32g，收率82％，熔点109-110℃)。[α]D-34.5±0.7(c＝1.012 CHCl325℃)IR(CHCl3，νmax cm-1)1737，1356，1164，1138。NMR(CDCl3，δppm)0.89(d，J＝6.8Hz，3H)，1.00(d，J＝6.8Hz，3H)，2.00(m，1H)，3.60(s，3H)，3.83(dd，J＝5.2，10.0Hz，1H)，5.20(d，J＝10.0Hz，1H)，7.04(d，J＝4.1Hz，1H)，7.32(d，J＝4.1Hz，1H)。步骤2在氩气环境下，向所述化合物(XXXV，400mg，1.12mmol)的5ml二甲基甲酰胺的脱气溶液中加入4-甲氧基苯乙炔(222mg，1.5×1.12mmol)和碘化铜(I)(21mg，0.1×1.12mmol)。将双(三苯膦)钯二氯化物(II)(39mg，0.05×1.12mmol)和三乙胺(0.47ml，3×1.12mmol)加入该反应混合物。使所得混合物脱气，并在50℃氩气环境下搅拌过夜。用乙酸乙酯洗涤该反应混合物。有机层用1N-盐酸、5％碳酸氢钠和水洗涤、硫酸钠干燥和真空浓缩。所得残余物经硅胶柱层析。收集用正己烷/乙酸乙酯＝2/1洗脱的部分，并从乙酸乙酯/正己烷中重结晶，获得所述目标化合物(XXXVI，392mg，收率86％，熔点131-132℃)。元素分析C19H21NO5S2·0.2H2O计算值C；55.51 H；5.25 N；3.41 S；15.60实测值C；55.80 H；5.19 N；3.38 S；15.36IR(KBr，νmax cm-1)3268，2203，1736，1604，1524，1348，1164。NMR(CDCl3，δppm)0.90(d，J＝6.6Hz，3H)，1.00(d，J＝7.0Hz，3H)，2.00(m，1H)，3.60(s，3H)，3.84(s，3H)，3.86(dd，J＝5.0，10.2Hz，1H)，5.21(d，J＝10.2Hz，1H)，6.90(d，J＝9.0Hz，2H)，7.44(d，J＝9.0Hz，2H)，7.12(d，J＝4.0Hz，1H)，7.44(d，J＝4.0Hz，1H)。步骤3向所述化合物(XXXVI，407mg，1mmol)的8ml四氢呋喃和8ml甲醇溶液中加入5.1ml 1NNaOH。所得混合物在60℃搅拌6小时。真空浓缩该反应混合物以除去有机溶剂，残余物用乙酸乙酯稀释。该混合物用柠檬酸水溶液酸化，并用乙酸乙酯萃取。有机层用盐水洗涤、硫酸钠干燥和真空浓缩，获得化合物(63，373mg，收率100％)。结果显示于表7中。实施例64到89以与上述方法相似的方式合成化合物(64)到(89)。结果显示于表7和8中。表7


实施例90

步骤1在冰冷却条件下向所述化合物(XXXVII，5.0g，12.8mmol)的50ml二氯甲烷溶液中加入N-甲基吗啉(4.2ml，3×12.8mmol)和p-硝基苯磺酰氯(3.78g，1.2×12.8mmol)。该反应混合物搅拌过夜，并用2N-盐酸、5％碳酸氢钠水溶液和水洗涤。有机层用硫酸钠干燥和真空浓缩。所得残余物从丙酮-正己烷中重结晶，获得所述目标化合物(XXXVIII，5.05g，收率97.8％，熔点172-174℃)。IR(KBr，νmax cm-1)3417，3281，1745，1529，1353，1168。NMR(d6-DMSO，δppm)2.85(dd，J＝9.8，14.6Hz，1H)，3.08(dd，J＝4.8，14.4Hz，1H)，3.56(s，3H)，4.02(m，1H)，6.84-7.30(m，5H)，7.53(d，J＝8.6Hz，2H)，7.94(d，J＝8.6Hz，2H)，8.83(brs，1H)，10.37(s，1H)。[α]D+43.5±1.6(c＝0.508 DMSO 25℃)步骤2在室温使用10％Pd/C(1g)氢化所述化合物(XXXVIII，5.0g)的50ml甲醇和10ml二甲基甲酰胺溶液。过滤该反应混合物，并真空浓缩滤液。残余物从氯仿/乙醚中重结晶，获得所述目标化合物(XXXIX，3.43g，收率74.1％，熔点158-160℃)。IR(KBr，νmax cm-1)3468，3378，3283，1737，1623，1596，1335，1320，1155。NMR(d6-DMSO，δppm)2.85(dd，J＝6.6，14.2Hz，1H)，3.00(dd，J＝8.2，14.2Hz，1H)，3.30(s，3H)，3.86(m，1H)，5.93(s，2H)，6.56(d，J＝8.8Hz，2H)，6.90-7.10(m，3H)，7.20-7.38(m，2H)。[α]D+10.1±1.0(c＝0.503 DMSO 25℃)步骤3在冰冷条件下向所述化合物(XXXIX，500mg，1.3mmol)的13ml二氯甲烷溶液中加入N-甲基吗啉(0.29ml，2×1.3mmol)和p-溴苯甲酰氯(371mg，1.3×1.3mmol)，并且所得混合物在室温搅拌过夜。将甲基乙基酮加入该反应混合物中，并且所述混合物用2N-盐酸、5％碳酸氢钠水溶液和水洗涤。有机层用硫酸钠干燥和真空浓缩。残余物从丙酮-正己烷中重结晶，获得所述目标化合物(XL，720mg，产量的100％，熔点215-218℃)。IR(KBr，νmax cm-1)3397，3330，1787，1732，1668，1348，1337，1157。NMR(d6-DMSO，δppm)2.90(dd，J＝8.0，13.4Hz，1H)，3.33(s，3H)，3.06(dd，J＝7.0，14.8Hz，1H)，3.97(dt，J＝8，2，8，2Hz，1H)，6.90-7.10(m，3H)，7.24-7.32(m，2H)，7.62(d，J＝8.8Hz，2H)，7.78(d，J＝8.4Hz，2H)，7.86(d，J＝8.4Hz，2H)，7.93(d，J＝8.8Hz，2H)，8.07(d，J＝8.8Hz，1H)，8.39(d，J＝8.8Hz，1H)，10.59(s，1H)。[α]D-1.9±0.8(c＝0.51 DMSO 25℃)步骤4向所述化合物(XL，807mg)的6ml二甲亚砜溶液中加入2.9ml1NNaOH。所得混合物在室温搅拌5小时。将水加入该混合物中，并用2N-盐酸酸化。收集沉淀的结晶体，并用水洗涤，获得化合物(90，720mg，收率78.7％)。结果显示于表9中。实施例91到94以与上述方法相似的方式合成化合物(91)到(94)。结果显示于表9中。表9

实施例95到100以与在WO 97/27174中描述的方法和上述方法相似的方式合成化合物(95)到(100)。结果显示于表10中。表10

实施例101

步骤1在室温将苯磺酰肼(1.722g，10mmol)和化合物(XLI，1.43ml，1.05×10mmol)的20ml乙醇和2ml四氢呋喃溶液搅拌3小时。向该反应混合物中加入水，并用乙酸乙酯萃取该混合物。有机层用2N-盐酸、盐水和盐水洗涤、硫酸钠干燥和真空浓缩。残余物从己烷/乙酸乙酯中结晶，获得所述化合物(XLII，2.873g，87.5％，142-144℃)。IR(KBr，νmax cm-1)3431，3178，1325，1169，1123。1H NMR(CDCl3，δppm)7.51-7.72(m，2H)，7.79(s，1H)，7.98-8.04(m，2H)，8.24(brs，1H)。元素分析C14H11F3N2O2S计算值C；51.22，H；3.38，F；17.36，N；8.53，S；9.77实测值C；51.22，H；3.38，F；17.50，N；8.59，S；9.69步骤2向化合物(XLIII，572mg，2mmol)的20ml 50％乙醇水溶液中加入0.84ml浓盐酸，并在0到5℃的内温下搅拌所得混合物。向该混合物中加入亚硝酸钠(168mg，1.2×2mmol)的3ml水溶液，并在同样温度下搅拌所得混合物20分钟。在-25℃搅拌所述化合物(XLII，657mg，2mmol)的20ml吡啶溶液。向所述吡啶溶液中加入上述反应混合物，并且所得混合物在同样温度下搅拌1小时和在室温下搅拌过夜。将水加入该反应混合物中并用乙酸乙酯萃取所得混合物。有机层用2N盐酸、1N氢氧化钾和饱和盐水洗涤、用硫酸钠干燥和真空浓缩。残余物经硅胶柱层析，并收集用氯仿/甲醇＝50/1洗脱的部分，从丙酮/己烷中重结晶，获得化合物(XLIV，637mg，收率65.9％，熔点189-191℃)。IR(KBr，νmax cm-1)3282，1735，1350，1328，1165，1127。1H NMR(CDCl3，δppm)0.90(d，J＝6.9Hz，3H)，1.00(d，J＝6.6Hz，3H)，2.10(m，1H)，3.52(s，3H)，3.85(dd，J＝4.8，9.9Hz，1H)，5.23(d，J＝9.9Hz，1H)，7.79-7.85(m，2H)，8.05-8.10(m，2H)，8.36-8.42(m，4H)。[α]D+3.9±0.9(c＝0.512，DMSO，25℃)元素分析C20H20F3N5O4S计算值C；49.69，H；4.17，F；11.79，N；14.49，S；6.63实测值C；49.52，H；4.17，F；11.73，N；14.50，S；6.66步骤3向所述化合物(XLIV，637mg，1.32mmol)的8ml四氢呋喃和8ml甲醇溶液中加入1N KOH。所得混合物在60℃搅拌过夜。该反应混合物用2N盐酸酸化并用乙酸乙酯萃取。有机层用盐酸洗涤、硫酸钠干燥和真空浓缩。残余物从丙酮/己烷中重结晶，获得化合物(101，585mg，收率94.4％，熔点198-200℃)。结果显示于表11中。实施例102到121以与上述方法相似的方式合成化合物(102)到(121)。结果显示于表11中。表11

试验实施例试验实施例1在25℃室温、40-60％湿度和12小时光照及黑暗循环的条件下饲养5周龄的雄性Slc-Wistar大鼠，并且喂饲固体食物(CA-1，CleaJapan)和任意饮水。初步饲养一周以后，将每只大鼠关在一个不锈钢代谢笼中以适应一周，在7周龄时(体重150-180g)用于实验。E30单克隆抗体(J.J.N.，36卷，106页，1994年)用生理盐水以100μg/0.4ml稀释，并且以0.4ml/只的量从尾静脉给予。用5％阿拉伯胶溶液混悬化合物(2)，并在E30注射前2小时以100mg的剂量给予。随后，从第二天开始，每天一次口服给予100mg的化合物(2)。在给予试验化合物以后，即将大鼠关在不锈钢代谢笼中，然后收集24小时尿样。测定容积以后，该尿液在室温以3000rmp离心10分钟。上清液用于测定尿排泄的蛋白。尿蛋白通过邻苯三酚红方法(Micro TP-testWako，Wako Zyunyaku)测定。比较化合物处理组和溶媒处理组的第2天的尿蛋白排泄的量，并计算尿蛋白排泄的抑制率。结果显示于表11中。以与上述方法相似的方式检测化合物(1)和(3)到(121)，并且结果显示于表12中。图1显示全部实验尿蛋白排泄的变化。表12

在接下来检查的日子中(第5天)，动物在戊巴比妥麻醉下接受剖腹术，然后，在采集血液以后立即取出肾脏，在10％福尔马林或methacarn溶液中固定。石蜡包埋福尔马林固定的组织样本。切片用高碘酸席夫反应染色并用光学显微镜观查。另一方面，methacarn溶液固定的组织样本的石蜡切片用抗-PCNA抗体(鼠抗-PCNA IgG)进行免疫组织化学检查。然后，计算属于细胞周期中S相的PCNA阳性的肾小球细胞的数量。结果显示于图2中。
在随后检查的日子中(第5天)，采集血样并进行血尿素氮和血浆肌酐的测定。用Wako肌酐试验(Wako Zyunyaku)检测血尿素氮的浓度。结果显示于图3中。用Wako尿素氮B试验(Wako Zyunyaku)测定血浆肌酐的浓度。结果显示于图4中。试验实施例2将从4周龄的雄性Wistar大鼠的肾小球中分离出的肾小球膜细胞以每孔1000个细胞的密度接种在96孔组织培养板的孔中，并在含有20％胎牛血清的RPMI培养基中培养24小时。随后孵育20或44小时，将3H-胸腺嘧啶(100000dpm/孔)加入细胞培养液中。四小时后，洗涤培养的肾小球膜细胞，随后用0.1％SDS和脱氧胆酸盐(0.1mg/ml)溶解细胞。通过用液闪计数仪计算放射活性来测定结合的3H-胸腺嘧啶的量，并计算结合率。结果显示于图5中。
从图1和表12中总结的结果已证明，在试验化合物处理组中尿蛋白排泄的量显著降低。已知尿蛋白排泄的增加与肾小球损害密切相关(在人类也一样)，因此，蛋白尿是肾功能的良好指标。在注射E30以后，尿蛋白排泄的量显著增加。E30单克隆抗体对大鼠肾功能造成损害。在试验化合物处理组，尿蛋白排泄显著抑制，表明所述化合物对肾小球的损害起了预防或治疗剂的作用。
如图2所示，在试验化合物处理组细胞增生被抑制。在注射单克隆抗体5天后，肾小球中可观察到显著增生的肾小球膜细胞(光学和电子显微镜观察)。增生细胞可通过细胞周期中S相期间PCNA抗原表达由免疫组织化学方法来检测。因此，在溶媒处理组和试验化合物处理组之间每单个肾小球的PCNA阳性细胞数的比较学研究，为以上所述提供了证据。
图3显示了在试验化合物处理组中血尿素氮浓度显著降低。因此，通过试验化合物的治疗可减轻肾功能(肾小球滤过率)的减退，表明所述化合物对肾小球的损害起了预防或治疗剂的作用。
图4显示了在试验化合物处理组中血浆肌酐浓度显著降低。因此，通过试验化合物的治疗可减轻肾功能(肾小球滤过率)的减退，表明所述化合物对肾小球的损害起了预防或治疗剂的作用。
图5显示了所述试验化合物以剂量依赖形式抑制血清诱导的肾小球膜的增生。该实验被设计用来解释所述试验化合物对肾小球膜增生的抑制作用，如图2所示，是否源于其(对细胞的)直接作用。
如以上结果所显示，可清楚地认识到本发明的化合物抑制主要在肾小球病中观察到的尿蛋白排泄的量和肾小球膜细胞的增生。发生在这些实验模型中的疾病状况与人类肾小球性肾炎和糖尿病性肾病相同。因此，本发明的化合物可用作预防或治疗肾小球性肾炎和糖尿病性肾病的组合物。试验实施例3 MMP-9和MMP-2的抑制活性的测定用Knight，C.G.等描述的方法分析酶的活性(C.Graham Knight.、Frances Willenbrock和Gillian Murphy一种用于基质金属蛋白酶的敏感连续测定的新的香豆素标记肽。FEBS Lett.，296(1992)263-266)。
使用下列在以前报道中描述的联合方法纯化MMP-9。YasunoriOkada、Yukio Gonoji、Katsumi Naka、Katsuro Tomita、Isao Nakanishi、Kazushi Iwata和Taro HayakawaHT1080人纤维肉瘤细胞中的基质金属蛋白酶9(92-kDa明胶酶/IV型胶原酶)。前体的纯化和活化以及酶的特性。J.Biol.Chem.，267(1992)21712-21719。Yasunori Okada、Tatsuhisa Morodomi、Jan J、Enghild、Ko Suzuki、Atsushi Yasui、IsaoNakanishi、Guy Salvesen和Hideaki Nagase前体的纯化和活化以及酶的特性。Eur.J.Biochem.，194(1990)721-730。Robin V Ward、RosalindM Hembry、John J Reynolds和Gillian Murphy金属蛋白酶-2的组织抑制剂从其72kDa前明胶酶(progelatinase)复合物中的纯化。Biochem.J.，278(1991)179-187。
简而言之，于37℃将人纤维肉瘤ATCC HT1080细胞系含有10％胎牛血清的Dulbecco＇s改良培养基(DMEM)中培养48小时至融合。随后，将融合培养细胞的培养基改为无血清DMEM培养基。为获得MMP-9，必须将佛波醇-12-豆蔻酸-13-乙酸盐(TPA)以50ng/ml的浓度加入到该无血清DMEM培养基中。所述TPA处理的培养基以3000rpm离心15分钟，并且通过Toyo-Roshi UP-20装置用超滤膜将上清液浓缩至450ml。然后，通过使用Gelatin-Sepharose和ConcanavalinA-Sepharose柱纯化在该浓缩液中的前MMP-9。将含有前MMP-9的池(pool)透析、浓缩(Toyo-Roshi UP-20)并应用Sephacryl S-200和GreenA基质柱来从TIMPs中分离。所获得的前MMP-9片段通过TPCK-胰蛋白酶(终浓度3μg/μl反应混合物)活化用于检测。
MMP-2从Yagai(Yamagata pref.，日本)购置。
作为底物的MOCAc-Pro-Leu-Gly-Leu-A2pr(Dnp)-Ala-Arg-NH2从Petide研究所(Osaka pref.，日本)购得。该底物以1mM的浓度溶于DMSO中。
反应缓冲液由含有10mM CaCl2、0.3 M NaCl、0.005％Brij35和0.01％NaN3的50mM Tris-HCl缓冲液(pH7.5)组成。对MMP-9的抑制活性的检测方法将1.0μl试验化合物的DMSO液加入到含有0.08μl酶溶液的48.0μl的反应缓冲液中。在室温放置60分钟后，通过加入1.0μl底物溶液开始反应。在室温孵育60分钟后，用100μl的3％(v/v)AcOH终止反应，并分别用在320nm和405nm激发和发射的方法检测荧光(荧光分光光度计；Fluoroscan Ascent(Labsystem))。对MMP-2的抑制活性的检测方法将1.0μl试验化合物的DMSO液加入到含有0.05μl酶溶液的48.0μl的反应缓冲液中。在室温放置60分钟后，通过加入1.0μl底物溶液开始反应。在室温孵育60分钟后，用100μl的3％(v/v)AcOH终止反应，并分别用在320nm和405nm激发和发射的方法检测荧光(荧光分光光度计；Fluoroscan Ascent(Labsystem))。
以下列四种方法进行抑制活性(IC50)的检测；A)用底物、酶和抑制剂反应B)用底物和抑制剂反应，不用酶C)用底物和酶反应，不用抑制剂D)仅用底物反应通过使用下式和上述四种方法(A到D)的每个荧光值来计算IC50值。％抑制＝{1-(A-B)/(C-D)}×100IC50意指抑制50％的酶活性需要的浓度。结果显示于表13中。表13

制剂实施例制剂实施例1使用下列配料制备颗粒剂。
配料由式(I)代表的化合物10mg乳糖 700mg玉米淀粉 274mgHPC-L 16mg1000mg由式(I)代表的化合物和乳糖经过60目筛处理。玉米淀粉经过120目筛处理。它们通过双壳(twin shell)搅拌器混合。将HPC-L(低粘性羟基丙基纤维素)水溶液加入到该混合物中，并将所得混合物搓揉、成粒(由0.5到1mm孔径的筛孔挤出)和干燥。由此获得的干燥颗粒通过摇筛(12/60目)筛选，生产出所述颗粒剂。制剂2使用下列配料制备填充胶囊的粉剂。
配料由式(I)代表的化合物10mg乳糖 79mg玉米淀粉 10mg硬脂酸镁 1mg100mg由式(I)代表的化合物和乳糖经过60目筛处理。玉米淀粉经过120目筛处理。这些配料和硬脂酸镁通过双壳搅拌器混合。将100mg的10重研磨剂填充到5号硬明胶胶囊中。制剂3使用下列配料制备填充胶囊的颗粒剂。
配料由式(I)代表的化合物15mg乳糖 90mg玉米淀粉 42mgHPC-L 3mg150mg由式(I)代表的化合物和乳糖经过60目筛处理。玉米淀粉经过120目筛处理。它们混合以后，将HPC-L水溶液加入到该混合物中，并将所得混合物搓揉、成粒和干燥。润滑干燥的颗粒以后，将150mg的颗粒充填到4号硬明胶胶囊中。制剂4使用下列配料制备片剂。
配料由式(I)代表的化合物10mg乳糖 90mg微晶纤维素 30mgCMC-Na 15mg硬脂酸镁 5mg150mg由式(I)代表的化合物、乳糖、微晶纤维素和CMC-Na(羧甲基纤维素钠盐)经过60目筛处理，然后混合。所得混合物与硬脂酸镁混合，获得用于制备片剂的混合粉末。将该混合粉末压片，生产出150mg的片剂。
工业用途本发明的氨磺酰衍生物抑制肾小球病尤其是肾小球性肾炎和糖尿病性肾病的发病和发展，并且可作为治疗剂或预防剂使用。
权利要求
1.治疗或预防肾小球病的组合物，该组合物含有式(I)化合物
其中R1和R2各自独立为氢原子、任选取代的低级烷基、任选取代的芳基、任选取代的芳烷基、任选取代的杂芳基或任选取代的杂芳烷基；R3是1，4-亚苯基或2，5-噻吩二基(thiophendiyl)；R4是由下式表示的取代基
其中R5是氢原子、羟基、任选取代的低级烷氧基、巯基、低级烷硫基、环烷基、卤素、羧基、低级烷氧基羰基、硝基、氰基、低级卤烷基、芳氧基、任选取代的氨基、胍基、任选取代的低级烷基、低级链烯基、低级炔基、酰基、酰氧基、-CONRARB、-N(RC)CORD(其中RA、RB和RC可相同或不同，选自氢原子、低级烷基或芳烷基；RD是低级烷基、芳基和芳烷基)、任选取代的非芳香杂环基团或任选取代的杂芳基；R6是任选取代的低级烷基、环烷基、低级烷氧基、卤素、低级烷硫基、任选取代的氨基、羧基、低级烷氧基羰基、芳氧基、苯基、任选取代的非芳香杂环基团或任选取代的杂芳基；和Y是NHOH或OH、其旋光活性物质、它们的药学上可接受的盐或其水合物。
2.治疗或预防肾小球病的组合物，该组合物含有式(II)化合物
其中R1、R2和R3如上述所定义；R7是由下式表示的取代基
其中R8是氢原子、羟基、低级烷氧基、巯基、低级烷硫基、环烷基、卤素、羧基、低级烷氧基羰基、硝基、氰基、低级卤烷基、芳氧基、任选取代的氨基、胍基、任选取代的低级烷基、低级链烯基、低级炔基、烷酰基、酰氧基或任选取代的杂芳基；R9是任选取代的低级烷基、环烷基、羧基、低级烷氧基羰基、芳氧基或苯基；和Y是NHOH或OH、其旋光活性物质、它们的药学上可接受的盐或其水合物。
3.治疗或预防肾小球病的组合物，该组合物含有式(I)化合物
其中R1、R2和R3如上述所定义；R4是由下式表示的取代基
其中R10是氢原子、任选取代的低级烷氧基、低级烷硫基、卤素、任选取代的氨基、任选取代的低级烷基或任选取代的非芳香杂环基团；R11是任选取代的低级烷基、低级烷硫基、卤素、任选取代的氨基、苯基、任选取代的非芳香杂环基团或任选取代的杂芳基；和Y是NHOH或OH、其旋光活性物质、它们的药学上可接受的盐或其水合物。
4.治疗或预防肾小球病的组合物，该组合物含有式(II)化合物
其中R1、R2和R3如上述所定义；R7是由下式表示的取代基
其中R12是氢原子、卤素、硝基、任选取代的低级烷基、低级烷氧基或低级烷硫基；R13是任选取代的低级烷基或苯基；和Y是NHOH或OH、其旋光活性物质、它们的药学上可接受的盐或其水合物。
5.治疗或预防肾小球病的组合物，该组合物含有式(III)化合物
其中R1、R10和Y如上述所定义；以及R14是氢原子或低级烷基、其旋光活性物质、它们的药学上可接受的盐或其水合物。
6.治疗或预防肾小球病的组合物，该组合物含有式(IV)化合物
其中R1、R12、R14和Y是如上述所定义、其旋光活性物质、它们的药学上可接受的盐或其水合物。
7.治疗或预防肾小球病的组合物，该组合物含有式(V)化合物
其中R1、R10、R14和Y是如上述所定义、其旋光活性物质、它们的药学上可接受的盐或其水合物。
8.治疗或预防肾小球病的组合物，该组合物含有式(VI)化合物
其中R1、R12、R14和Y是如上述所定义、其旋光活性物质、它们的药学上可接受的盐或其水合物。
9.治疗或预防肾小球病的组合物，该组合物含有式(VII)化合物
其中R1、R10、R14和Y是如上述所定义、其旋光活性物质、它们的药学上可接受的盐或其水合物。
10.治疗或预防肾小球病的组合物，该组合物含有式(VIII)化合物
其中R1、R12、R14和Y是如上述所定义、其旋光活性物质、它们的药学上可接受的盐或其水合物。
11.治疗或预防肾小球病的组合物，该组合物含有式(IX)化合物
其中R1、R10、R14和Y是如上述所定义、其旋光活性物质、它们的药学上可接受的盐或其水合物。
12.治疗或预防肾小球病的组合物，该组合物含有式(X)化合物
其中R1、R12、R14和Y是如上述所定义、其旋光活性物质、它们的药学上可接受的盐或其水合物。
13.治疗或预防肾小球病的组合物，该组合物含有式(XI)化合物
其中R1、R10、R14和Y是如上述所定义、其旋光活性物质、它们的药学上可接受的盐或其水合物。
14.治疗或预防肾小球病的组合物，该组合物含有式(XII)化合物
其中R1、R12、R14和Y是如上述所定义、其旋光活性物质、它们的药学上可接受的盐或其水合物。
15.治疗或预防肾小球病的组合物，该组合物含有式(XIII)化合物
其中R1、R10、R14和Y是如上述所定义、其旋光活性物质、它们的药学上可接受的盐或其水合物。
16.治疗或预防肾小球病的组合物，该组合物含有式(XIV)化合物
其中R1、R12、R14和Y是如上述所定义、其旋光活性物质、它们的药学上可接受的盐或其水合物。
17.治疗或预防肾小球病的组合物，该组合物含有式(XV)化合物
其中R1、R11、R14和Y是如上述所定义、其旋光活性物质、它们的药学上可接受的盐或其水合物。
18.治疗或预防肾小球病的组合物，该组合物含有式(XVI)化合物
其中R1、R13、R14和Y是如上述所定义、其旋光活性物质、它们的药学上可接受的盐或其水合物。
19.权利要求1到18任何一项的治疗或预防肾小球病的组合物，其中R1是氢原子、甲基、异丙基、异丁基、任选取代的苄基、任选取代的吲哚-3-基甲基或苯氨基羰基乙基。
20.权利要求1到18任何一项的治疗或预防肾小球病的组合物，其中R1是异丙基、苄基或吲哚-3-基甲基。
21.权利要求1到20任何一项的治疗或预防肾小球病的组合物，其中R2和R14是氢原子。
22.权利要求1到21任何一项的治疗或预防肾小球病的组合物，其中Y是OH。
23.权利要求1到22任何一项的治疗或预防肾小球病的组合物，其中肾小球病是肾小球性肾炎。
24.权利要求1到22任何一项的治疗或预防肾小球病的组合物，其中肾小球病是糖尿病性肾病。
25.式(XVII)的化合物
其中R1、R10、R14和Y是如上述所定义、其旋光活性物质、它们的药学上可接受的盐或其水合物。
26.式(XVIII)的化合物
其中R1、R10、R14和Y是如上述所定义、其旋光活性物质、它们的药学上可接受的盐或其水合物。
27.式(XIX)的化合物
其中R1、R10、R14和Y是如上述所定义、其旋光活性物质、它们的药学上可接受的盐或其水合物。
28.式(XX)的化合物
其中R1、R10、R14和Y是如上述所定义、其旋光活性物质、它们的药学上可接受的盐或其水合物。
29.式(XXI)的化合物
其中R1、R10、R14和Y是如上述所定义、其旋光活性物质、它们的药学上可接受的盐或其水合物。
30.式(XXII)的化合物
其中R1、R10、R14和Y是如上述所定义、其旋光活性物质、它们的药学上可接受的盐或其水合物。
31.式(XXIII)的化合物
其中R1、R10、R14和Y是如上述所定义、其旋光活性物质、它们的药学上可接受的盐或其水合物。
32.含有权利要求25到31任何一项化合物的药用组合物。
33.含有权利要求25到31任何一项的化合物的用于抑制基质金属蛋白酶的组合物。
34.含有权利要求25到31任何一项的化合物的用于抑制IV型胶原酶的组合物。
35.含有权利要求25到31任何一项的化合物的用于治疗或预防肾小球病的组合物。
36.含有式(XXIV)化合物的治疗或预防肾小球病的组合物
其中每个取代基的组合表示如下、其旋光活性物质、它们的药学上可接受的盐或其水合物。表1
37.含有式(XXIV)化合物的治疗或预防肾小球病的组合物
其中每个取代基的组合表示如下、其旋光活性物质、它们的药学上可接受的盐或其水合物。表2
38.权利要求35到37任何一项的治疗或预防肾小球病的组合物，其中肾小球病是肾小球性肾炎。
39.权利要求35到37任何一项的治疗或预防肾小球病的组合物，其中肾小球病是糖尿病性肾病。
全文摘要
肾小球病的治疗或预防剂,含有由通式(Ⅰ)代表的作为活性成份的化合物,其中,例如,R
文档编号C07D333/12GK1270518SQ98809147
公开日2000年10月18日 申请日期1998年7月17日 优先权日1997年7月22日
发明者栗原秀刚, 渡边文彦, 田村嘉则, 筱崎俊宏 申请人:盐野义制药株式会社