一种肾活检电镜样品制备方法
【技术领域】
[0001]本发明涉及一种肾活检电镜样品制备方法。
【背景技术】
[0002]肾活检即经皮肾穿刺活检，既是病理学的一个重要分支，也是肾脏病学一个不可少的组成部分，肾活检对于了解肾脏疾病的病理变化、病理类型、病变进展及不断优化个体化治疗方案、判断预后具有重要意义。20世纪50年代，肾活检电镜检查尤其是透射电镜的应用，对肾脏病理变化的观察深入到了亚细胞水平。目前，肾活检电镜检查已成为肾病研究和诊断的常规检查方法之一，尤其对原发性肾小球疾病的分类起着不可替代的作用，但由于临床经皮肾穿刺获取标本常有失误(如组织为皮肤或脂肪或仅为无球的髓质等)，以及后续将穿刺标本盲目制样或常规纵向包埋肾组织段等原因，导致修块、半薄定位观察时才发现标本有误或难以定位到肾小球，常在电镜下找不到肾小球结构而无法进行诊断，浪费人力、物力，又延缓了诊断时间。
【发明内容】
[0003]为了解决肾活检电镜样品制备存在的上述技术问题，本发明提供一种快速、准确的肾活检电镜样品制备方法。
[0004]本发明解决上述技术问题的技术方案包括以下步骤:
取材:将肾穿刺组织移至载玻片上，置于具有光源的显微镜下，选用2.5倍的物镜，并将聚光镜旋到最高位，用双面刀片截取有肾小球的肾组织段，每段长度约1-3_;
将截取的肾组织段进行清洗、脱水、浸泡处理；
将肾组织块进行包埋处理:包埋时，如果只有I段肾组织，则先将组织与包埋孔的长轴斜交叉放置，并将肾小球密集的一端置包埋孔的尖端;如果有2段肾组织，则分别垂直放置于包埋孔的两端；如果有3段以上组织段，则面包片式前后错开堆叠、垂直放置于包埋孔的两端；
将已包埋、聚合、凝固成块的肾组织块削去多余的包埋介质和组织，让待观察的部位露出在样品包埋块的尖端，将包埋块尖端粗略地修成梯形，并削去一个角作为方位标记，再切成约I微米厚的半薄切片，经美蓝或甲苯胺蓝染色，置光镜下观察，根据光镜观察结果确定需要电镜观察的部位后，再进行修整、精准定位，进一步修整、修小，截面不超过0.5毫米2，再用超薄切片机切成超薄切片。
[0005]本发明的技术效果在于:
本发明在具有强光源的显微镜下进行肾穿刺组织预选、取材，可及时发现不良标本并提早纠正，避免了重复制样及人力、物力浪费；
用双面刀片截取有肾小球的肾组织段长度约为l-3mm，这样其可视性好，后续操作方便；
本发明在包埋时注意将肾小球密集的一端置包埋块前端，又利于尽快发现、定位到肾小球;如果一个患者有2段组织，则垂直放置于包埋孔的两端，如果一个患者有3段以上组织段，则面包片式前后错开堆叠、垂直放置于包埋孔的两端，这样修块、定位时很易定位到肾小球，而且同一半薄切片上出现多个肾小球的几率增多，在肾组织及肾小球多时，垂直或堆叠包埋可更快定位到肾小球、同时定位到多个肾小球，而且同一半薄切片上出现多个肾小球的几率大大增多，有利于通过光镜观察了解肾小球的不同病变程度，更有利于选取有代表性病变的肾小球做超薄切片、电镜观察，提高诊断率及诊断的精准度。采用本发明的肾活检标本，表明肾穿刺标本可诊断率从75%上升为100%，定位耗时大为减少，平均每例修块、定位时间从1.5小时降为30?40分钟，大大降低了劳动力成本。
【具体实施方式】
[0006]下面对本发明作进一步的详细说明。
[0007]将送检电镜诊断的已固定的肾穿刺组织移至干净载玻片上，置于具有灯光源的显微镜下，选用2.5倍的物镜，并将聚光镜旋到最高位，首先判断标本是否为肾组织，如为肾组织再判断标本是否有肾肾小球及肾小球的多少及分布情况。再用双面刀片截取有肾小球的肾组织段，每段长度约l_3mm，注意尽可能将肾小球密集处集中截取。将有球的组织段画图标记备用(此操作宜迅速，组织标本上要用生理盐水或固定液保湿，以防干燥)。如标本的光通透性差，可翻转标本双向观察或滴加甘油以提高光通透性。
[0008]将截取的肾组织进行清洗、脱水、浸泡处理;将肾组织进行包埋处理，包埋方向及方式取决于肾组织段的段数、肾小球的多少与及分布状况，分情况处理:如果一个患者只有I段组织，则先将组织段与包埋孔的长轴斜交叉放置(约呈45°角)并注意将肾小球密集的一端置包埋孔的尖端；如果一个患者有2段组织，则分别垂直放置于包埋孔的两端，如果一个患者有3段以上组织段，则面包片式前后错开堆叠、垂直放置于包埋孔的两端，待聚合凝固后修块、定位。将组织块截面修成锥形小塔，切成约I微米厚的半薄切片，经美蓝或甲苯胺蓝染色，置光镜下确定需要电镜观察的部位后，进一步修整、修小(截面不超过0.5毫米2)，再在超薄切片机上切成厚度为20?10nm的超薄切片。
【主权项】
1.一种肾活检电镜样品制备方法，包括以下步骤: 取材:将已固定的肾穿刺组织移至载玻片上，置于具有光源的显微镜下，选用2.5倍的物镜，并将聚光镜旋到最高位，用双面刀片截取有肾小球的肾组织段，每段长度约1-3_; 将肾组织段进行清洗、脱水、浸泡处理； 将肾组织段进行包埋处理:包埋时，如果只有I段肾组织，则先将组织段与包埋孔的长轴斜交叉放置，并将肾小球密集的一端置包埋孔的尖端;如果有2段肾组织，则垂直于长轴放置于包埋孔的两端；如果有3段以上组织段，则面包片式前后错开堆叠、垂直放置于包埋孔的两端； 将已包埋的肾组织聚合成块，将已聚合成块的样品进行修块、定位，即削去多余的包埋介质和组织，让待观察的部位露出在样品包埋块的尖端，再将组织截面修成锥形小塔，切成I微米厚的半薄切片，经美蓝或甲苯胺蓝染色、光镜观察;根据光镜观察结果再进一步精准定位、修小，截面不超过0.5毫米2，再用超薄切片机切成超薄切片。2.根据权利要求1所述的肾活检电镜样品制备方法，其特征在于，所述肾组织段是在光镜下预选的有肾小球的肾组织段。3.根据权利要求1所述的肾活检电镜样品制备方法，其特征在于，所述有球肾组织段的包埋方向、方式取决于穿刺标本可切取的组织段数及含肾小球的多少与分布，即如果只有I段肾组织，则先将组织段与包埋孔的长轴斜交叉放置，即与孔的长轴成45°角，并将肾小球密集的一端置包埋孔的尖端;如果有2段肾组织，则垂直放置于包埋孔的两端;如果有3段以上组织段，则面包片式前后错开堆叠、垂直放置于包埋孔的两端。
【专利摘要】本发明公开了一种肾活检电镜样品制备方法<b>，</b>包括以下步骤：将已固定的肾穿刺组织移至载玻片上，置于具有光源的显微镜下用双面刀片截取为1-3mm长且有肾小球的肾组织段；将截取的肾组织进行清洗、脱水、浸泡处理；将肾组织进行包埋处理；将已包埋、聚合成块的样品进行修块、定位；根据光镜观察结果再进行精准修整、定位；用超薄切片机切成超薄切片。采用本本发明进行肾活检电镜样品制备，可早期发现不良误穿标本并及时纠正，避免了重复制样；并具有修块快、定位耗时少、定位精准的优点，有效缩短了样品制备时间，显著提高了肾穿刺标本的可诊断率及诊断的精准度。
【IPC分类】G01N1/28, G01N1/30
【公开号】CN105606413
【申请号】CN201510667800
【发明人】吴晓英
【申请人】中南大学
【公开日】2016年5月25日
【申请日】2015年10月16日