简易牙齿扫描电镜样品的制备方法
【技术领域】
[0001]本发明属于电镜样品制备方法技术领域，具体涉及简易牙齿扫描电镜样品的制备方法。
【背景技术】
[0002]由于扫描电镜的问世，对各种物质和物体形态的微细结构研究开辟了广阔的前景，其应用范围在地质、矿物、金属和生物等科学领域中，扩大了微观世界的视野。扫描电镜可以观察扩大面积的试样，而且立体感强，如果结合光谱仪、能谱和波谱仪即电子探针分析它对正常物质的定性、定位和定量的研究以及物质、物体的变态检查，具有其特殊的功能。因此，它对无机物质和有机物质的自然表面和切面的超微研究工作提供了有利条件。而且是一种近代的先进手段，用先进手段对牙体硬组织(牙釉质、牙本质和牙骨质)进行研究，其前景是乐观的。先进的手段必须首先制备适应先进手段的样品。而现有技术中缺乏对于牙齿结构的样品处理方法，不利于采用电镜对牙齿结构进行观察，效果不佳。
【发明内容】
[0003]本发明解决的技术问题是，现有技术中缺乏对于牙齿结构的样品处理方法，限制了采用电镜对牙齿结构进行观察的效果，不利于对于牙体硬组织的研究。
[0004]为解决上述问题，我们结合具体实际情况在一般实验室的条件下，针对牙齿的结构特点和应用研究，采用化学金属盐沉淀等方法结合磨片技术对牙体内外自然表面和牙体断面的外貌观察，收到比较满意的效果。
[0005]为实现上述目的，本发明提供一种简易牙齿扫描电镜样品的制备方法，包括以下步骤:
[0006](1)将牙齿样品用15%的中性甲醛固定12-25小时，或用pH7.4的戊二醛在4°C冰箱中固定24-48小时；
[0007](2)打磨或化学处理；
[0008](3) PBS缓冲液或蒸馏水冲洗；
[0009](4)用60%、80%、100%的丙酮液作脱水后，直接或用真空镀膜仪蒸喷金后，即可用扫描电镜观察。
[0010]在制备牙齿破折面扫描电镜样品时，采用打磨处理，具体包括如下步骤:
[0011](1)将离体牙齿样品用15%的中性甲醛固定12-25小时后，再用pH7.4的戊二醛在4°C冰箱中固定24或48小时。
[0012](2)打磨处理；先用金刚外圆分隔片作纵切或横切面，得到观察面；再用粗砂纸(16目)作粗磨平，用细砂纸(180目)作细磨平，用微粉(1000目)作精磨平；最后用氧化抛光液在抛光机上把观察面进行抛光即可。
[0013](3)用5%甲酸和盐酸1:1的混合液作平面蚀剂处理10-15分钟，再用10%的次氯酸钠水液清洗三次共15分钟；最后用蒸馈水水洗。
[0014](4)用60%、80%、100%的丙酮液作脱水后，用真空镀膜仪蒸喷金，即可用扫描电镜观察。
[0015]在制备牙体自然表面扫描电镜样品时，采用化学处理，具体包括如下步骤:
[0016](1)将样品用15%中性甲醛固定12小时或用2.5% pH7.4的戊二醛在4°C冰箱中固定24-48小时。
[0017](2)化学处理:先用10%次氯酸钠液泡12小时后用蒸馏水洗一次；再用0.1M的pH7.4的PBS缓冲液荡洗片刻；用1%锇酸浸泡2小时后用缓冲液洗片刻；用体积比为1:1的2%甘氨酸和2%谷氨酸液泡12小时后用缓冲液洗片刻；用1%的pH4的丹宁酸水溶液浸泡24小时；再用2%的锇酸在室温下浸泡2-4小时后，用双蒸水荡洗片刻；最后用1%的氯化金水溶液浸泡24-48小时后，用双蒸水荡洗片刻。
[0018](3)用2%甲酸或2%的酒石酸还原1小时后，用缓冲液冲洗。
[0019](4)用60%、80%、100%的丙酮液作脱水后，即可用扫描电镜观察。
[0020]本发明的有益效果在于:
[0021]1.在具有完备条件的科室中采用打磨处理的方法得到的样品，在电镜下观察，组织清晰完整，视野良好。
[0022]2.在简陋的科室中，没有真空镀膜仪时，采用化学处理的方法，增加氯化金盐沉淀于组织中，经过还原成为一层金属膜，从而达到比较良好的导电目的，也能顺利开展工作并能收到满意的效果。
【附图说明】
[0023]为了更清楚地说明本发明实施例或现有技术中的技术方案，下面将对实施例或现有技术描述中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图是本发明的一些实施例，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其他的附图。
[0024]图1是牙体自然表面扫描电镜图A ；
[0025]图2是牙体自然表面扫描电镜图B;
[0026]图3是牙体自然表面扫描电镜图C;
[0027]图4是牙齿破折面扫描电镜图A ;
[0028]图5是牙齿破折面扫描电镜图B;
[0029]图6是牙齿破折面扫描电镜图C。
【具体实施方式】
[0030]为使本发明实施例的目的、技术方案和优点更加清楚，下面将结合本发明实施例中的附图，对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有作出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。
[0031]实施例1:
[0032]—种简易牙齿扫描电镜样品的制备方法，在制备牙齿破折面扫描电镜样品时，具体包括如下步骤:
[0033](1)将离体牙齿样品用15%的中性甲醛固定12小时后，再用pH7.4的戊二醛在4°C冰箱中固定24小时。
[0034](2)打磨处理；先用金刚外圆分隔片作纵切或横切面，得到观察面；再用粗砂纸(16目)作粗磨平，用细砂纸(180目)作细磨平，用微粉(1000目)作精磨平；最后用氧化抛光液在抛光机上把观察面进行抛光即可。
[0035](3)用5 %甲酸和盐酸1:1的混合液作平面蚀剂处理15分钟，再用10 %的次氯酸钠水液清洗三次共15分钟；最后用蒸馏水水洗。
[0036](4)用60%、80%、100%的丙酮液作脱水后，用真空镀膜仪蒸喷金，即可用扫描电镜观察。
[0037]实施例2:
[0038]—种简易牙齿扫描电镜样品的制备方法，在制备牙体自然表面扫描电镜样品时，具体包括如下步骤:
[0039](1)将样品用15%中性甲醛固定12小时。
[0040](2)化学处理:先用10%次氯酸钠液泡12小时后用蒸馏水洗一次；再用0.1M的PH7.4的PBS缓冲液荡洗片刻；用1%锇酸浸泡2小时后用缓冲液洗片刻；用1:1的2%甘氨酸和2%谷氨酸液泡12小时后用缓冲液洗片刻；用1 %的pH4的丹宁酸水溶液浸泡24小时；再用2%的锇酸在室温下浸泡2小时后，用双蒸水荡洗片刻；最后用1%的氯化金水溶液浸泡24小时后，用双蒸水荡洗片刻。
[0041](3)用2%甲酸或2%的酒石酸还原1.5小时后，用缓冲液冲洗。
[0042](4)用60%、80%、100%的丙酮液作脱水后，即可用扫描电镜观察。
[0043]实施例3:
[0044]在制备牙体自然表面扫描电镜样品时，步骤(1)为用2.5% pH7.4的戊二醛在4°C冰箱中固定24小时。其余均与实施例(2)相同。
【主权项】
1.简易牙齿扫描电镜样品的制备方法，其特征在于包括以下步骤: (1)将牙齿样品用体积分数15%的中性甲醛固定12-25小时，或用pH7.4的戊二醛在4°C冰箱中固定24-48小时； (2)打磨或化学处理； (3)PBS缓冲液或蒸馏水冲洗； (4)用60%、80%、100%的丙酮液作脱水后，直接或用真空镀膜仪蒸喷金后，用扫描电镜观察。2.如权利要求1所述的简易牙齿扫描电镜样品的制备方法，其特征在于:所述步骤(1)为将牙齿样品用体积分数15%的中性甲醛固定12-25小时后，再用PH7.4的戊二醛在4°C冰箱中固定24或48小时。3.如权利要求1所述的简易牙齿扫描电镜样品的制备方法，其特征在于:所述步骤(1)为用体积分数15%中性甲醛固定12小时或用2.5% pH7.4的戊二醛在4°C冰箱中固定24-48小时。4.如权利要求1或2所述的简易牙齿扫描电镜样品的制备方法，其特征在于:所述步骤(2)为打磨处理；先用金刚外圆分隔片作纵切或横切面，得到观察面；再用粗砂纸(16目)作粗磨平，用细砂纸(180目)作细磨平，用微粉(1000目)作精磨平；最后用氧化抛光液在抛光机上把观察面进行抛光即可。5.如权利要求1或3所述的简易牙齿扫描电镜样品的制备方法，其特征在于:所述步骤(2)为化学处理；先用10%次氯酸钠液泡12小时后用蒸馏水洗一次；再用0.1M的pH7.4的PBS缓冲液荡洗片刻；用1%锇酸浸泡2-3小时后用0.1M的pH7.4的缓冲液洗片刻；用体积比1:1的2%甘氨酸和2%谷氨酸液泡12小时后用0.1M的pH7.4的缓冲液洗片刻；用1 %的pH4的丹宁酸水溶液浸泡24小时；再用2%的锇酸在室温下浸泡2小时后，用双蒸水荡洗片刻；最后用1%的体积比氯化金水溶液浸泡24小时后，用双蒸水荡洗片刻。6.如权利要求1或2所述的简易牙齿扫描电镜样品的制备方法，其特征在于:所述步骤(3)为蒸馏水冲洗；先用5%甲酸和盐酸1:1的混合液作平面蚀剂处理10分钟，再用10%的次氯酸钠水液清洗三次共15分钟；最后用蒸馏水水洗。7.如权利要求1或3所述的简易牙齿扫描电镜样品的制备方法，其特征在于:所述步骤(3)为PBS缓冲液冲洗；具体为用2%甲酸或2%的酒石酸还原1-2小时后，用缓冲液冲洗。
【专利摘要】本发明属于电镜样品制备方法技术领域，具体涉及简易牙齿扫描电镜样品的制备方法。包括以下步骤：(1)将牙齿样品用15％的中性甲醛固定12-25小时，或用pH7.4的戊二醛在4℃冰箱中固定24-48小时；(2)打磨或化学处理；(3)PBS缓冲液或蒸馏水冲洗；(4)用60％、80％、100％的丙酮液作脱水后，直接或用真空镀膜仪蒸喷金后，用扫描电镜观察。本发明在一般实验室的条件下，针对牙齿的结构特点和应用研究，采用化学金属盐沉淀等方法结合磨片技术对牙体内外自然表面和牙体断面的外貌观察，收到比较满意的效果。
【IPC分类】G01N1/28
【公开号】CN105277417
【申请号】CN201510850013
【发明人】白生宾, 陈红香, 秦纹, 钟近洁, 廖礼彬, 冯树海, 李甜, 毛晓峰
【申请人】新疆医科大学
【公开日】2016年1月27日
【申请日】2015年11月27日