连翘苷、其衍生物、连翘苷/连翘脂素组合物在制备治疗细菌感染药物中的应用

连翘苷、其衍生物、连翘苷/连翘脂素组合物在制备治疗细菌感染药物中的应用
【专利摘要】本发明公开了一种连翘苷、其衍生物、连翘苷/连翘脂素组合物在制备治疗细菌感染药物中的新应用。试验证明，连翘苷、连翘苷衍生物、连翘苷与连翘脂素组合物治疗细菌感染的疗效显著，见效快、毒副作用小、是一种安全、高效、稳定、制备工艺简单的治疗细菌感染药物，适于工业化生产，易于推广。本发明为预防、缓解和治疗细菌感染及其并发症提供了一种新的药物来源。
【专利说明】
连翘苷、其衍生物、连翘苷/连翘脂素组合物在制备治疗细 菌感染药物中的应用
技术领域
[0001] 本发明涉及医药领域，涉及一种治疗细菌感染的药物或保健食品，特别涉及一种 中药连翘及连翘叶提取成分在缓解和/或治疗细菌感染药物或保健食品中的应用。
【背景技术】
[0002] 在全球范围内，抗生素耐药性己成为一个令人担忧的普遍性问题，导致与感染性 疾病相关的发病率和死亡率及其治疗费用的不断上升，并且，细菌对新出现的抗菌药物产 生耐药性的周期越来越短，已经成为困扰临床医生的一大难题，如何解决抗生素耐药性问 题是广大科研工作者和临床医生不可回避的重要课题。细菌对-内酞胺类抗生素耐药是抗 生素耐药中最为普遍和重要的耐药类型。目前革兰阴性杆菌中最引人注目的问题是细菌对 第三代头抱菌素和新的广谱-内酞胺类抗生素耐药，其主要机制是细菌产超广谱-内酰胺 酶（extended spectrum-laetamases, ESBLs)导致细菌对第三代一内酰胺类抗生素和氨曲 南耐药。ESBLs是一组由质粒介导，能水解绝大多数头饱菌素、单酞胺类抗生素的酶，大多 数EsBLs能被酶抑制剂如他唑巴坦和克拉维酸抑制。ESBLs主要分为SHV、TEM、CTX - M、 0ΧΑ和其它型。在不同的国家、地区和医院，由于抗生素的使用不同，ESBLs的基因型各不 相同，在我国主要是以CTX - Μ型为主.因而对产CTX - Μ型ESBLs细菌感染的疾病采用 何种药物进行治疗就成了我国目前治疗产ESBLS细菌的难点和重点"
[0003] 连翘是中药临床常用传统药物之一，应用广泛，用量巨大，它具有清热〃解毒〃消 肿散结"清除自由基的功能，临床上常与其他的中草药制成配方，用于各类细菌感染治疗。 但是，其中具体活性成分尚不清楚，
【发明人】经过艰苦探索，制备提取了其中活性单体化合物 连翘苷，并经化学合成，制备了相应的衍生物，进行了一系列的药理活性研究，发现连翘苷、 连翘苷衍生物、连翘苷与连翘脂素组合物具有抑制细菌感染，增强人体免疫功能活性，为细 菌感染患者开辟了新的治疗途经。
[0004]
[0005] 本发明人通过大量的现代科学研究，采用先进的分离纯化技术从连翘及连翘叶中 提取其治疗细菌感染的有效成分连翘苷，并经进一步研究合成制备了连翘苷衍生物。可以 为细菌感染患者提供一种高效低毒的药物。

【发明内容】

[0006] 本发明的首要目的是针对现有治疗细菌感染的药物或保健品在应用过程中存在 的技术问题，提供连翘苷、连翘苷衍生物、连翘苷与连翘脂素组合物（即连翘苷/连翘脂 素）预防、缓解或/和治疗细菌感染所导致的疾病的性能和功效，并提供连翘苷、连翘苷衍 生物、连翘苷与连翘脂素组合物新的药用用途，即在治疗、调理、预防和缓解细菌感染的药 物或保健食品中的新应用。
[0007] 为实现上述目的，本发明一方面提供一种连翘苷、连翘苷衍生物、连翘苷与连翘脂 素组合物在制备预防或/和治疗细菌感染所致疾病的药物或保健品中的应用。
[0008] 在筛选具有预防、缓解、治疗细菌感染作用的天然活性成分的过程中，发明人发现 连翘的化学成分中连翘苷、连翘苷衍生物、连翘脂素具有强烈的抑制细菌感染的作用。
[0009] 其中，所述药物或保健品由连翘苷、连翘苷衍生物或连翘苷与连翘脂素组合物和 药学上可接受的载体组成。
[0010] 特别是，所述连翘苷衍生物选择连翘脂素葡萄糖醛酸衍生物。
[0011] 特别是，所述连翘苷衍生物包括33-羟基-连翘脂素葡萄糖醛酸苷（33-Hydroxy phi 1 lygenin-8-〇- β -D-glucuronide)、9-羟基-连翘脂素葡萄糖醛酸苷（9-Hydroxy phillygenin-8-〇-β -D-glucuronide)、33, 34-亚甲基二氧-连翘脂素葡萄糖醛酸 苷（33,34-Methylenedioxy phillygenin-8-〇-0-D-glucuronide)、连翅脂素葡萄 糖酸酸甲酯（（2R，3R，4R，5S)-methyl6-(5-((lR，4S)-4-(3,4-dimethoxyphenyl) hexahydrofuro[3, 4~c]furan-1-yl)-2-methoxyphenoxy)-3, 4, 5-trihydroxyte tra hydr〇-2H-pyran-2_carboxylate)、连翅脂素葡萄糖酸酸钠（sodium(2R, 3R, 4R, 5S) -6 -(5-((1R, 4S)-4-(3, 4-dimethoxyphenyl)hexahydrofuro[3, 4~c]furan-1-yl)-2~met hoxyphenoxy)_3, 4, 5-trihydroxytetrahydr〇-2H-pyran-2_carboxylate)、连翅月旨素 葡萄糖酸酸钾（potassium(2R,3R, 4R,5S)-6_ (5-( (1R,4S)-4_ (3, 4-dimethoxyphenyl) hexahydrofuro[3, 4~c]furan-1-yl)-2-methoxyphenoxy)-3, 4, 5-trihydroxytetrahydr〇-2H-pyran-2-carboxylate)、连翘脂素葡萄糖醛酸（(2R, 3R, 4R, 5S)-6-(5_((lR, 4S)-4_(3, 4 -dimethoxyphenyl) hexahydrofuro [3, 4~c] furan-1-yl)-2-methoxyphenoxy)-3, 4, 5~trih ydroxytetrahydr〇-2H-pyran-2_carboxylic acid);优选为 33-羟基-连翅脂素葡萄糖酸 酸苷、9-羟基-连翘脂素葡萄糖醛酸苷、33, 34-亚甲基二氧-连翘脂素葡萄糖醛酸苷、连翘 脂素葡萄糖醛酸甲酯、连翘脂素葡萄糖醛酸钠或连翘脂素葡萄糖醛酸钾。
[0012] 特别是，所述连翘苷与连翘脂素组合物中连翘苷与连翘脂素的重量份配比为2~ 98 :2~98 ;优选为2-10:90-98 ;进一步优选为80:20或20:80,进一步优选为90:10或 10:90,更进一步优选为98:2或2:98 ;再进一步优选为98:2。
[0013] 其中，所述的连翘苷、连翘苷衍生物的含量多1%，优选为多30%，进一步优选为 多60%，更进一步优选为多80%，再更进一步优选为多98% ;连翘苷与连翘脂素组合物含 量多1%，优选为多30%，进一步优选为多60%，更进一步优选为多80%，再更进一步优选 为彡98%。
[0014] 特别是，所述的连翘苷、连翘苷衍生物含量为1%~98% ;优选为30~80% ;连翘 苷与连翘脂素组合物含量为1 %~98 % ;优选为30~80 %。
[0015] 特别是，药学上可接受的载体通常被保健专家认可用于这一目的且作为 药剂的非活性成分。有关药学上可接受的载体的汇编可以在《药物赋形剂手册》 (Handbook of Pharmaceutical excipients，第 2 版，由 A. Wade 和 P.J. Weller 编辑； American Pharmaceutical Association 出片反，Washington and The Pharmaceutical Press, London, 1994)等工具书中找到。
[0016] 尤其是，所述的载体包括赋形剂，如淀粉、水等；润滑剂，如硬脂酸镁等；崩解剂， 如微晶纤维素等；填充剂，如乳糖等；粘结剂，如预胶化淀粉、糊精等；甜味剂；抗氧化剂；防 腐剂、矫味剂、香料等；
[0017] 其中，所述药物以片剂、胶囊剂、丸剂、散剂、颗粒剂、糖浆剂形式存在。
[0018] 特别是，所述的连翘苷、连翘苷衍生物含量彡1%，优选为彡30%，进一步优选为 多60%，更进一步优选为多80%，再更进一步优选为多98% ;连翘苷与连翘脂素组合物含 量多1%，优选为多30%，进一步优选为多60%，更进一步优选为多80%，再更进一步优选 为彡98%。
[0019] 本发明另一方面提供一种含有连翘苷、连翘苷衍生物或连翘苷与连翘脂素组合物 的预防、缓解和/或治疗细菌感染导致的疾病的药物或保健品。
[0020] 其中，所述连翘苷衍生物选择连翘脂素葡萄糖醛酸衍生物。
[0021] 特别是，所述连翘苷衍生物包括33-羟基-连翘脂素葡萄糖醛酸苷、9-羟基-连翘 脂素葡萄糖醛酸苷、33, 34-亚甲基二氧-连翘脂素葡萄糖醛酸苷、连翘脂素葡萄糖醛酸甲 酯、连翘脂素葡萄糖醛酸钠、连翘脂素葡萄糖醛酸钾、连翘脂素葡萄糖醛酸；优选为33-羟 基-连翘脂素葡萄糖醛酸苷、9-羟基-连翘脂素葡萄糖醛酸苷、33, 34-亚甲基二氧-连翘 脂素葡萄糖醛酸苷、连翘脂素葡萄糖醛酸甲酯、连翘脂素葡萄糖醛酸钠或连翘脂素葡萄糖 醛酸钾。
[0022] 其中，所述连翘苷与连翘脂素组合物中连翘苷与连翘脂素的重量份配比为2~ 98 :2~98 ;优选为2-10:90-98 ;进一步优选为80:20或20:80,进一步优选为90:10或 10:90,更进一步优选为98:2或2:98 ;再进一步优选为98:2。
[0023] 特别是，所述的连翘苷、连翘苷衍生物的含量多1%，优选为多30%，进一步优选 为多60 %，更进一步优选为多80 %，再更进一步优选为多98% ;连翘苷与连翘脂素组合物 含量多1%，优选为多30%，进一步优选为多60%，更进一步优选为多80%，再更进一步优 选为彡98%。
[0024] 尤其是，所述的连翘苷、连翘苷衍生物的含量多1%，优选为1%~98% ;优选为 30~80%，更进一步优选为60%;连翘苷与连翘脂素组合物含量多1 %，优选为1 %~98%; 优选为30~80 %，更进一步优选为60 %。
[0025] 特别是，所述连翘苷、连翘苷衍生物或连翘苷与连翘脂素组合物的重量与所述药 物或保健品的总重量之比为〇. 01-10 :1〇〇,优选为〇. 1~10 :1〇〇,进一步优选为1~10 : 100〇
[0026] 其中，所述连翘苷/连翘脂素组合物以连翘苷和连翘脂素以单体组成、或采用溶 剂加热提取方法制备而成的连翘脂素-连翘苷提取组合物，或连翘脂素和连翘苷与环糊精 或环糊精的衍生物组合而成连翘脂素-连翘苷-环糊精组合物。
[0027] 特别是，所述连翘脂素-连翘苷-环糊精组合物选择连翘脂素和连翘苷与α _、 β-或γ-环糊精或其衍生物相混合而成的混合物，或连翘脂素和连翘苷与α-、β-或 γ -环糊精或其衍生物经物理、化学方法处理形成的复合物。
[0028] 其中，所述连翘脂素-连翘苷-环糊精组合物中连翘苷和连翘脂素重量与环糊精 或环糊精的衍生物的重量之比为1 :1-50。
[0029] 特别是，所述环糊精为α -或β -、γ -环糊精；所述环糊精衍生物为羟乙基-环 糊精、2, 6-二甲基-环糊精、2, 3, 6-三甲基-环糊精、2, 6-二乙基-环糊精、2, 3, 6-三乙 基-环糊精、麦芽糖基-环糊精或磺丁醚β-环糊精、对甲基苯磺酰氯（p-TsCl)取代的 β -环糊精、6-位取代的β -⑶对甲基苯磺酸酯（β -环糊精-6-OTs)、2_氧羟丙基-β -环 糊精、2-位单取代的对甲基苯磺酸酯（β-环糊精-2-OTs)、β-环糊精对甲基苯磺酸酯 (Tosyl- β -CD)、β -环糊精的星形大分子 PCL- (Tos) 7- β -CD。
[0030] 特别是，所述药物或保健品中还包括穿心莲提取物，四季青提取物，金银花提取 物，板蓝根提取物，蒲公英提取物，黄柏提取物，黄连提取物，黄芩提取物，马齿苋提取物，白 头翁提取物，大蒜提取物，鱼腥草提取物，野菊花提取物，苦参提取物、维生素 C及其衍生物 或维生素 E及其衍生物。
[0031] 与现有技术相比，本发明具有如下的明显优点：
[0032] 1、本发明对已知化合物连翘苷、连翘苷衍生物、连翘苷/连翘脂素组合物发掘了 新的药用价值，将其用于预防、缓解、治疗细菌感染，并可制备成预防、缓解和/或治疗细菌 感染的药物或保健食品，从而为连翘及连翘叶药材的应用开拓了一个新的领域。
[0033] 2、本发明的系列试验研究证明已知化合物连翘苷、连翘苷衍生物、连翘苷/连翘 脂素组合物具有显著的缓解、治疗细菌感染的功效。
[0034] 3、本发明的已知化合物连翘苷、连翘苷衍生物、连翘苷/连翘脂素组合物药理作 用强，用于缓解、预防、治疗细菌感染的功效显著，见效快、毒副作用小、安全性好，能够长期 服用，具有良好的药用前景。
[0035] 4、本发明的产品原料来源丰富、价廉、临床使用安全，制备工艺简单，可制成各种 剂型，且服量小，使用方便，因此易于推广。
[0036] 5、本发明既可采用单一成分的连翘苷、连翘苷衍生物或连翘苷/连翘脂素组合物 活性成分制备预防、缓解、治疗细菌感染所致疾病的药物，又可采用连翘苷、连翘苷衍生物 或连翘苷/连翘脂素组合物与其它活性成分（例如与穿心莲提取物，四季青提取物，金银花 提取物，板蓝根提取物，蒲公英提取物，黄柏提取物，黄连提取物，黄零提取物，马齿苋提取 物，白头翁提取物，大蒜提取物，鱼腥草提取物，野菊花提取物，苦参提取物、维生素 C及其 衍生物或维生素 E及其衍生物）共同组方，制备预防、治疗细菌感染的复方药物。
【具体实施方式】
[0037] 下面通过【具体实施方式】来进一步描述本发明所述配方的有益效果，这些实施例包 括了本发明的连翘苷、连翘苷衍生物的胶囊、片剂、软胶囊剂的药效学试验。这些实施例仅 是范例性的，并不对本发明的范围构成任何限制。本领域技术人员应该理解的是，在不偏离 本发明的配方思路、用途范围下可以对本发明技术方案的细节和形式进行修改或替换，但 这些修改和替换均落入本发明的保护范围内。
[0038] 本发明中所述连翘苷衍生物33-羟基-连翘脂素葡萄糖醛酸苷、9-羟基-连翘 脂素葡萄糖醛酸苷、33, 34-亚甲基二氧-连翘脂素葡萄糖醛酸苷与专利申请（申请号： 201510319303. 4,优先权号：201510164294.6)中所述连翘苷衍生物相同；连翘脂素葡萄糖 醛酸甲酯、连翘脂素葡萄糖醛酸钠、连翘脂素葡萄糖醛酸钾、连翘脂素葡萄糖醛酸与专利申 请（申请号：201510320579. 4,优先权号：201410825547. 5)中的相同。
[0039] 实施例1连翘苷片剂
[0040] 1、按照如下配比准备原料
[0041] 连翘苷（纯度50%) 500g 淀粉 l〇〇〇g 滑石粉 15g 硬脂酸镁 15g
[0042] 2、将连翘苷和淀粉混合均匀后制成颗粒，加入滑石粉和硬脂酸镁混合均匀后压制 成10000片。
[0043] 实施例2连翘苷胶囊剂
[0044] 1、按照如下配比准备原料
[0045] 连翘苷（纯度) 2〇Og
[0046] 淀粉 1000g
[0047] 2、将连翘苷和淀粉混合均匀后装胶囊，制成10000粒。
[0048] 实施例3连翘苷胶囊剂
[0049] 1、按照如下配比准备原料
[0050] 连翘苷（纯度98% ) 500g
[0051] 淀粉 1000g
[0052] 2、将连翘苷和淀粉混合均匀后装胶囊，制成10000粒。
[0053] 实施例4连翘苷片剂
[0054] 1、按照如下配比准备原料
[0055] 连翘苷（纯度63%) 50g 穿心莲提取物 200 g 维生素 C 400 g 淀粉 i〇〇〇g 滑石粉 1_% 硬脂酸镁 1%
[0056] 2、将连翘苷、穿心莲提取物、维生素 C和淀粉混合均匀后，制成颗粒，加入滑石粉 和硬脂酸镁混合均匀后压制成10000片。
[0057] 实施例5连翘苷胶囊剂
[0058] 1、按照如下配比准备原料
[0059] 连翘苷（纯度98%) 300g 金银花提取物 400 g 维生素 C 600 g 淀粉 1000 g
[0060] 2、将连翘苷、金银花提取物、维生素 C和淀粉混合均匀后装胶囊，制成10000粒。
[0061] 实施例6连翘苷颗粒剂
[0062] 1、按照如下配比准备原料
[0063] 连翘苷（纯度92%) 500g 黄芩提取物 200 g 维生素 C 600 g 蔗糖粉 5000 g
[0064] 2、将连翘苷、黄芩提取物、维生素 C和蔗糖粉混合均匀制成颗粒后装袋，制成 10000 袋。
[0065] 实施例7连翘苷口服液
[0066] 1、按照如下配比准备原料
[0067] 连翘苷 4g 蒲公英提取物 3g 马齿苋提取物 3g 葡萄糖糖浆 5|
[0068] 全方最终加去离子水至100%。
[0069] 2、取连翘苷、蒲公英提取物、马齿苋提取物，用乙醇溶解后加入葡萄糖糖浆，最终 加去离子水至l〇〇ml，即得。
[0070] 实施例8 33-羟基-连翘脂素葡萄糖醛酸苷片剂
[0071] 1、按照如下配比准备原料
[0072] 33-羟基-连翘脂素葡萄糖醛酸苷（纯度66%) 5Wg 淀粉 1細〇§ 滑石粉 15g 硬脂酸镁 15g:
[0073] 2、将33-羟基-连翘脂素葡萄糖醛酸苷和淀粉混合均匀后，制成颗粒，加入滑石粉 和硬脂酸镁混合均匀后压制成10000片。
[0074] 实施例9 33-羟基-连翘脂素葡萄糖醛酸苷胶囊剂
[0075] 1、按照如下配比准备原料
[0076] 33-羟基-连翘脂素葡萄糖醛酸苷（纯度60 % ) 200g
[0077] 淀粉 l〇〇〇g
[0078] 2、将33-羟基-连翘脂素葡萄糖醛酸苷和淀粉混合均匀后装胶囊，制成10000粒。
[0079] 实施例10 33-羟基-连翘脂素葡萄糖醛酸苷胶囊剂
[0080] 1、按照如下配比准备原料
[0081] 33-羟基-连翘脂素葡萄糖醛酸苷（纯度98 % ) 500g
[0082] 淀粉 l〇〇〇g
[0083] 2、将33-羟基-连翘脂素葡萄糖醛酸苷和淀粉混合均匀后装胶囊，制成10000粒。
[0084] 实施例11 33-羟基-连翘脂素葡萄糖醛酸苷片剂
[0085] 1、按照如下配比准备原料
[0086] 33-羟基-连翅脂素葡萄糖醛酸苷（纯度63%) 50g 金银花提取物 20 g 维牛i C 400 g 淀粉 1000g 滑石粉 14.7g 硬脂酸镁 14.7g
[0087] 2、将33-羟基-连翘脂素葡萄糖醛酸苷、金银花提取物、维生素 C和淀粉混合均匀 后制粒，加入滑石粉和硬脂酸镁混匀后压制成10000片。
[0088] 实施例12 33-羟基-连翘脂素葡萄糖醛酸苷胶囊剂
[0089] 1、按照如下配比准备原料
[0090] 33-羥基-连翘脂素葡萄糖醛酸苷（纯度98%) 板蓝根提取物 30 g 维生素 C 600 g 辽粉 1000g
[0091] 2、将33-羟基-连翘脂素葡萄糖醛酸苷、板蓝根提取物、维生素 C和淀粉混合均匀 后装胶囊，制成10000粒。
[0092] 实施例13 33-羟基-连翘脂素葡萄糖醛酸苷颗粒剂
[0093] 1、按照如下配比准备原料
[0094] 33-羟基-连翘脂素葡萄糖醛酸苷（纯度92%) 500? 白头翁提取物 30 g 维 600 g 蔗糖粉 邠00 g
[0095] 2、将33-羟基-连翘脂素葡萄糖醛酸苷、白头翁提取物、维生素 C和蔗糖粉混合均 匀制成颗粒后装袋，制成10000袋。
[0096] 实施例14 33-羟基-连翘脂素葡萄糖醛酸苷口服液
[0097] 1、按照如下配比准备原料
[0098] 33-羟基-连翘脂素葡萄糖醛酸苷（纯度98%) 4g 金银花提取物 3g 白头翁提取物 3g 葡萄糖糖浆 5g 去离子水 适量
[0099] 2、取33-羟基-连翘脂素葡萄糖醛酸苷、白头翁提取物、金银花提取物，用乙醇溶 解后加入葡萄糖糖浆，最终加去离子水至l〇〇ml，即得。
[0100] 实施例15 9-羟基-连翘脂素葡萄糖醛酸苷片剂
[0101] 1、按照如下配比准备原料 9-羟基-连翘脂素葡萄糖醛酸苷（纯度66%) 500g
[0102] 淀粉 KKM) g 滑石粉 15g
[0103] 硬脂酸镁 15g
[0104] 2、将9-羟基-连翘脂素葡萄糖醛酸苷和淀粉混合均匀后，制成颗粒，加入滑石粉 和硬脂酸镁混合均匀后压制成10000片。
[0105] 实施例16 9-羟基-连翘脂素葡萄糖醛酸苷胶囊剂
[0106] 1、按照如下配比准备原料
[0107] 9-羟基-连翘脂素葡萄糖醛酸苷（纯度97% ) 200g
[0108] 淀粉 1000g
[0109] 2、将9-羟基-连翘脂素葡萄糖醛酸苷和淀粉混合均匀后装胶囊，制成10000粒。
[0110] 实施例17 9-羟基-连翘脂素葡萄糖醛酸苷胶囊剂
[0111] 1、按照如下配比准备原料
[0112] 9-羟基-连翘脂素葡萄糖醛酸苷（纯度98 % ) 500g
[0113] 淀粉 1000g
[0114] 2、将9-羟基-连翘脂素葡萄糖醛酸苷和淀粉混合均匀后装胶囊，制成10000粒。
[0115] 实施例18 9-羟基-连翘脂素葡萄糖醛酸苷片剂
[0116] 1、按照如下配比准备原料
[0117] 9-羟基-连翘脂素葡萄糖醛酸苷（纯度63%) 50g 金银花提耽物 20 g 维生素 C 400 g 淀粉 1000 g 滑石粉 14.7g 硬脂酸镁 14.7g
[0118] 2、将9-羟基-连翘脂素葡萄糖醛酸苷、金银花提取物、维生素 C和淀粉混合均匀 后制粒，加入滑石粉和硬脂酸镁混匀后压制成10000片。
[0119] 实施例19 9-羟基-连翘脂素葡萄糖醛酸苷胶囊剂
[0120] 1、按照如下配比准备原料
[0121] 9-羟基-连翘脂素葡萄糖醛酸苷（纯度98%) 300 g 板蓝根提取物 30 g 维生素 C 600 g 淀粉 1000 g
[0122] 2、将9-羟基-连翘脂素葡萄糖醛酸苷、板蓝根提取物、维生素 C和淀粉混合均匀 后装胶囊，制成10000粒。
[0123] 实施例20 9-羟基-连翘脂素葡萄糖醛酸苷颗粒剂
[0124] 1、按照如下配比准备原料
[0125] 9-羟基-连翘脂素葡萄糖醛酸苷（纯度92%) 500g 白头翁提取物 30 g 维生素 C 600 g 蔗糖粉 5000 g
[0126] 2、将9-羟基-连翘脂素葡萄糖醛酸苷、白头翁提取物、维生素 C和蔗糖粉混合均 匀制成颗粒后装袋，制成10000袋。
[0127] 实施例21 9-羟基-连翘脂素葡萄糖醛酸苷口服液
[0128] 1、按照如下配比准备原料
[0129] 9-羟基-连翘脂素葡萄糖醛酸苷（纯度98%) 4g 鱼腥草提取物 3.:g_ 白头翁提取物 3:;g. 葡萄糖糖浆 ：5:g 去离子水 适量
[0130] 2、取9-羟基-连翘脂素葡萄糖醛酸苷、白头翁提取物、鱼腥草提取物，用乙醇溶解 后加入葡萄糖糖浆，最终加去离子水至l〇〇ml，即得。
[0131] 实施例22 33, 34-亚甲基二氧-连翘脂素葡萄糖醛酸苷片剂
[0132] 1、按照如下配比准备原料
[0133] 33, 34-亚甲基二氧-连翘脂素葡萄糖醛酸苷(纯度66%) 5繼g 淀粉 丨000g 滑石粉 15g 硬脂酸镁 1?
[0134] 2、将33, 34-亚甲基二氧-连翘脂素葡萄糖醛酸苷和淀粉混合均匀后，制成颗粒， 加入滑石粉和硬脂酸镁混合均匀后压制成10000片。
[0135] 实施例23 33, 34-亚甲基二氧-连翘脂素葡萄糖醛酸苷胶囊剂
[0136] 1、按照如下配比准备原料
[0137] 33, 34-亚甲基二氧-连翘脂素葡萄糖醛酸苷（纯度97% ) 200g
[0138] 淀粉 1000g
[0139] 2、将33, 34-亚甲基二氧-连翘脂素葡萄糖醛酸苷和淀粉混合均匀后装胶囊，制成 10000 粒。
[0140] 实施例24 33, 34-亚甲基二氧-连翘脂素葡萄糖醛酸苷胶囊剂
[0141] 1、按照如下配比准备原料
[0142] 33, 34-亚甲基二氧-连翘脂素葡萄糖醛酸苷（纯度98% ) 500g
[0143] 淀粉 1000g
[0144] 2、将33, 34-亚甲基二氧-连翘脂素葡萄糖醛酸苷和淀粉混合均匀后装胶囊，制成 10000 粒。
[0145] 实施例25 33, 34-亚甲基二氧-连翘脂素葡萄糖醛酸苷片剂
[0146] 1、按照如下配比准备原料
[0147] 33, 34-亚甲基二氧-连翘脂素葡萄糖醛酸苷（纯度63%) 50g 鱼腥草提取物 ：2(Jg 维生素 C 400 g 淀粉 1000 g 滑石粉 14.7g 硬脂酸镁 14.7g
[0148] 2、将33, 34-亚甲基二氧-连翘脂素葡萄糖醛酸苷、鱼腥草提取物、维生素 C和淀 粉混合均匀后制粒，加入滑石粉和硬脂酸镁混匀后压制成10000片。
[0149] 实施例26 33, 34-亚甲基二氧-连翘脂素葡萄糖醛酸苷胶囊剂
[0150] 1、按照如下配比准备原料
[0151] 飞3, 34-亚甲基二氧-连翘脂素葡萄糖醛酸苷（纯度98%) 3繼g 板蓝根提取物 30 g 维生素 C 淀粉 I朋§:g
[0152] 2、将33,34_亚甲基二氧-连翘脂素葡萄糖醛酸苷、板蓝根提取物、维生素 C和淀 粉混合均匀后装胶囊，制成10000粒。
[0153] 实施例27 33, 34-亚甲基二氧-连翘脂素葡萄糖醛酸苷颗粒剂
[0154] 1、按照如下配比准备原料 33, 34-亚甲基二氧-连翘脂素葡萄糖醛酸苷' (纯度92%) DOOg
[0155] 白头翁提取物 30 g 维牛.尜C 600 g
[0156] 蔗糖粉 5000 g
[0157] 2、将33, 34-亚甲基二氧-连翘脂素葡萄糖醛酸苷、白头翁提取物、维生素 C和蔗 糖粉混合均匀制成颗粒后装袋，制成10000袋。
[0158] 实施例28 33, 34-亚甲基二氧-连翘脂素葡萄糖醛酸苷颗粒剂
[0159] 1、按照如下配比准备原料
[0160] 33, 34-亚甲基二氧-连翘脂素葡萄糖醛酸苷（纯度98%) 300g 白头翁提取物 3?g 维牛.索C 600 g 蔗糖粉 5000 g
[0161] 制成 10000 袋
[0162] 2、将33, 34-亚甲基二氧-连翘脂素葡萄糖醛酸苷、白头翁提取物、维生素 C和蔗 糖粉混合均匀制成颗粒后装袋，制成10000袋。
[0163] 实施例29 33,34_亚甲基二氧-连翘脂素葡萄糖醛酸苷口服液
[0164] 1、按照如下配比准备原料
[0165] 33, 34-亚甲基二氧-连翘脂素葡萄糖醛酸苷（纯度98%> 4g 鱼腥草提取物 3g 白头翁提取物 ：3:g: 葡萄糖糖浆 5g 去离子水 适量
[0166] 2、取33,34_亚甲基二氧-连翘脂素葡萄糖醛酸苷、白头翁提取物、鱼腥草提取物， 用乙醇溶解后加入葡萄糖糖浆，最终加去离子水至l〇〇ml，即得。
[0167] 实施例30连翘苷和连翘脂素组合物片剂制备
[0168] 1、按照如下配比制备连翘苷/连翘脂素组合物的片剂：
[0169] 连翘苷/连翘脂素组合物(两者重量比为98:2) 500g 淀粉 480g 滑石粉 l〇g 硬脂酸镁 l〇g
[0170] 2、取连翘苷490g、连翘脂素10g与淀粉混合均匀后，制成颗粒，加入滑石粉和硬脂 酸镁混合均匀后压制成10000片。
[0171] 实施例31连翘苷/连翘脂素组合物颗粒剂制备
[0172] 1、按照如下配比制备连翘苷/连翘脂素组合物的颗粒剂：
[0173] 连翘苷/连翘脂素组合物（两者重量比为98:2) 100g
[0174] 微晶纤维素 10000g
[0175] 2、取连翘苷98g、连翘脂素2g与微晶纤维素混合均匀后，制成颗粒装袋，制成 10000 袋。
[0176] 实施例32连翘苷/连翘脂素组合物胶囊剂制备
[0177] 1、按照如下配比制备连翘苷/连翘脂素组合物的胶囊剂：
[0178] 连翘苷/连翘脂素组合物（两者重量比为98:2) 250g
[0179] 淀粉 2500g
[0180] 2、取连翘苷245g、连翘脂素5g与淀粉混合均匀后装胶囊，制成10000粒。
[0181] 实施例33-36连翘苷/连翘脂素组合物胶囊剂制备
[0182] 实施例33-36中，连翘苷/连翘脂素组合物分别按下表的重量比与淀粉混合均匀 后装胶囊，各制成10000粒胶囊。
[0183]
[0184] 实施例：37-40连翘苷/连翘脂素组合物颗粒剂制备
[0185] 实施例37-30中，连翘苷/连翘脂素组合物分别按下表的重量比与微晶纤维素混 合均匀后，制成颗粒装袋，制成10000袋。
[0186]
[0187] 实施例41连翘苷/连翘脂素组合物片剂制备
[0188] 1、按照如下配比制备连翘苷/连翘脂素组合物的片剂： 连翘苷/连翘脂素组合物(两者重量比为98:2) 500g 淀粉 380g
[0189] 黄芩提取物 100g 滑石粉 10g
[0190] 硬脂酸镤 10g
[0191] 2、称取连翘苷490g、连翘脂素10g与黄芩提取物粉末混合均匀，再与淀粉混合均 匀后制成颗粒，加入滑石粉和硬脂酸镁混合均匀后压制成10000片。
[0192] 实施例42连翘苷/连翘脂素组合物颗粒剂制备
[0193] 1、按照如下配比制备连翘苷/连翘脂素组合物的颗粒剂：
[0194] 连翘苷/连翘脂素组合物(两者重量比为98:2) 250g 野菊花提取物 250g 黄芩提取物 25t)g 微晶纤维素 24500g
[0195] 2、取连翘苷245g、连翘脂素5与野菊花提取物、黄芩提取物粉末混合均匀，再与微 晶纤维素混合均匀后制成颗粒装袋，制成10000袋。
[0196] 实施例43连翘苷/连翘脂素组合物胶囊剂制备
[0197] 1、按照如下配比制备连翘苷/连翘脂素组合物的胶囊剂：
[0198] 连翘衍连翘脂素组合物(两者重量比为98:2) 250g 苦参提取物 25% 四季青提取物 250g 穿心莲提取物 250g 淀粉 1000g
[0199] 2、连翘苷245g、连翘脂素5g与苦参提取物、四季青提取物、穿心莲提取物粉末混 合均匀，再与淀粉混合均匀后装胶囊，制成10000粒。
[0200] 实施例44连翘苷/连翘脂素组合物片剂制备
[0201] 1、按照如下配比制备连翘苷/连翘脂素组合物的片剂：
[0202] 连翘苷/连翘脂素组含物(两者重量比为紐:額） 500g 淀粉 480g 四季青提取物 50% 滑石粉 1% 硬脂酸镁 l〇g
[0203] 2、取连翘苷490g、连翘脂素10g与四季青提取物粉末混合均匀，再与淀粉混合均 匀后制成颗粒，加入滑石粉和硬脂酸镁混合均匀后压，制成10000片。
[0204] 实施例45连翘苷/连翘脂素组合物颗粒剂制备
[0205] 1、按照如下配比制备连翘苷/连翘脂素组合物的颗粒剂：
[0206] 连翘苷/连翘脂素组合物(两者重量比为90:10) 1000g 鱼腥草提取物 500g 板蓝根提取物 500g 微晶纤维素 10000g
[0207] 2、取连翘苷900g、连翘脂素100g与上述提取物（鱼腥草、板蓝根）粉末混合均匀， 再与微晶纤维素混合均匀后制成颗粒装袋，制成10000袋。
[0208] 实施例46连翘苷/连翘脂素组合物胶囊剂制备
[0209] 1、按照如下配比制备连翘苷/连翘脂素组合物的胶囊剂：
[0210] 连翘苷/连翘脂素组合物(两者重量比为94:6) 2000g 鱼腥草提取物 250g 草豆蔻提取物 500g 四季青提取物 250g 淀粉 1000g
[0211] 2、连翘苷1880g、连翘脂素120g与上述提取物（鱼腥草、草豆蔻、四季青）粉末混 合均匀，再与淀粉混合均匀后装胶囊，制成10000粒。
[0212] 试验例1连翘苷抗菌作用的实验研究
[0213] 1实验材料
[0214] 1. 1药物与试剂
[0215] 连翘苷（含量> 98% )，白色粉末，大连富生天然药物开发有限公司生产，经高 效液相色谱两种检测器紫外检测器和蒸发光散射检测器面积归一化法测定，其纯度为 99. 5%，并用中国药品生物制品含量测定用连翘苷对照品标定和确认其含量为99. 5%。批 号：20130303。
[0216] 1.2 菌种
[0217] (1)细菌枯草芽抱杆菌（Bacillus subtilis)、金黄色葡萄球菌（Staphylococcus aureus)、大肠杆菌（Escherichia coli)，
[0218] (2)霉菌黑曲霉（Aspergillus niger)、黄曲霉（Aspergillus flavus)，桔青霉 (Penicillium citrinum)，
[0219] (3)酵母（Saccharomyces cerevisiae) 〇
[0220] 以上菌种均由大连医科大学微生物实验室提供。
[0221] 1.3实验仪器及培养基
[0222] 微量多点接种仪：北京医科大学昆仑药物发展研究所生产。
[0223] 培养基：Mueller_Hinton琼脂（法国事物梅里埃公司，简称M-Η琼脂）。
[0224] 1. 4实验方法
[0225] 采用琼脂稀释法，用M-Η琼脂进行连翘苷的定量抗菌实验。
[0226] 1)药液稀释：取无菌试管10只排列于试管架中，于第2~10只试管中分别加入 无菌蒸馏水101^;接着取0.3%连翘苷无菌0.5%01(：-~&溶液（称取连翘苷38，用适量的 0. 5% CMC-Na溶液混悬后，加0. 5% CMC-Na溶液至1000ml，充分混匀后使用。）10mL加入 到第1只试管中；然后再取10mL的0. 3%连翘苷无菌0. 5% CMC-Na溶液加入到第2只试管 中，混匀后从第2只试管中取10mL混合液加入到第3只试管内，再混合均匀后取10mL混合 液加入到第4只试管中，混匀后再从第4只试管中取10ml混合液计入到第5只试管中，混 匀，如此连续稀释至第9只试管混匀后，取出10mL弃掉。第10只试管中只有无菌蒸馏水， 以第10只试管中的无菌蒸馏水作为对照。这样1~9管含有不同浓度药液各10mL。
[0227] 2)含药平板制备
[0228] 在无菌操作台上按照无菌操作方法，将已经溶化的无菌M-Η琼脂900mL，分装于 10个三角瓶中，每瓶90mL熔融的无菌M-Η琼脂，将第1只试管中含有的10mL的0. 3%连 翘苷无菌蒸馏水溶液放入到含90mL培养基的第1个三角瓶中，混合后平均倾倒至7个平板 (即平皿）中，每个平板约含14mL含药（即连翘苷）琼脂，凝固后备用，为第1含药琼脂平 板组，其中：第1含药琼脂平板组每个平板中实际含连翘苷3. Omg/ml。
[0229] 第2-10只试管内的溶液按照与第1只试管内的溶液同样的方法倾倒平板，制成第 2-10含药平板组，每个平板组含有7个平板，每个平板约含14mL含药（即连翘苷）琼脂，凝 固后备用。第2含药琼脂平板组中每个平板实际含连翘苷1. 5mg/ml ;第3含药琼脂平板组 中每个平板实际含连翘苷为〇. 75mg/ml ;第4含药琼脂平板组中每个平板实际含连翘苷为 0. 375mg/ml ;第5含药琼脂平板组中每个平板实际含连翘苷为0. 1875mg/ml ;第6含药琼脂 平板组中每个平板实际含连翘苷为0. 〇938mg/ml ;第7含药琼脂平板组中每个平板实际含 连翘苷为0. 〇469mg/ml ;第8含药琼脂平板组中每个平板实际含连翘苷为0. 0234mg/ml ;第 9含药琼脂平板组中每个平板实际含连翘苷为0. 0117mg/ml ;第10含药琼脂平板组中每个 平板实际含连翘苷为〇. 〇mg/ml。
[0230] 3)用多点接种仪分别吸取各种菌液并将菌液点种于含不同药物浓度的琼脂平板 上。于35°C培养18~24h，观察菌体生长情况，生长菌体为阳性（+)，不生长菌体为阴性 (一），以不生长菌体的最低浓度为最低抑菌浓度（MIC)。
[0231] 2实验结果
[0232] 金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、枯草芽孢杆菌、酵母、桔青霉、黑曲霉、黄曲霉抑菌效 果测定结果如表1所示。
[0233] 表1连翘苷对7种细菌的MIC
[0234]
[0235] 注：-表示无菌生长；+表示菌体生长少；++表示菌体生长较多；+++表示菌体生长 多，下同
[0236] 由表1的研究结果表明，连翘苷对金黄色葡萄球菌、酵母菌、桔青霉菌、黑曲霉菌 等抗菌作用显著，其对金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、枯草芽孢杆菌、酵母、桔青霉、黑曲霉、黄 曲霉的 MIC 为：0· 0469mg/ml、1. 5mg/ml、1. 5mg/ml、0. 1875mg/ml、0. 0469mg/ml、0. 0469mg/ ml、0.1875mg/ml〇
[0237] 试验例2连翘苷衍生物抗菌作用的实验研究
[0238] 1实验材料
[0239] 1. 1药物与试剂
[0240] 33-羟基-连翘脂素葡萄糖醛酸苷（连翘苷衍生物A)，（含量> 98% )，白色粉末， 大连富生天然药物开发有限公司生产，批号=20130301。经高效液相色谱两种检测器紫外检 测器和蒸发光散射检测器面积归一化法测定，其纯度为98. 5%。
[0241] 9-羟基-连翘脂素葡萄糖醛酸苷（连翘苷衍生物B)，（含量> 98% )，白色粉末， 大连富生天然药物开发有限公司生产，批号=20130302。经高效液相色谱两种检测器紫外检 测器和蒸发光散射检测器面积归一化法测定，其纯度为99. 2%。
[0242] 33, 34-亚甲基二氧-连翘脂素葡萄糖醛酸苷（连翘苷衍生物C)，（含量>98%)， 白色粉末，大连富生天然药物开发有限公司生产，批号=20130301。经高效液相色谱两种检 测器紫外检测器和蒸发光散射检测器面积归一化法测定，其纯度为98. 7%。
[0243] 1. 2 菌种
[0244] 菌种与试验例1相同，均由大连医科大学微生物实验室提供。
[0245] 1. 3实验仪器及培养基
[0246] 与试验例1相同。
[0247] L 4实验方法
[0248] 采用琼脂稀释法，用M-Η琼脂进行连翘苷的定量抗菌实验。
[0249] 1)配制连翘苷衍生物药液
[0250] 称取33-羟基-连翘脂素葡萄糖醛酸苷3g，用适量的0. 5% CMC-Na溶液混悬后， 加0. 5 % CMC-Na溶液至1000ml，充分混匀，制得0. 3 % 33-羟基-连翘脂素葡萄糖醛酸苷无 菌0. 5% CMC-Na溶液（简称连翘苷衍生物A药液），备用；
[0251] 称取9-羟基-连翘脂素葡萄糖醛酸苷3g，用适量的0. 5% CMC-Na溶液混悬后，加 0. 5 % CMC-Na溶液至1000ml，充分混勾，制得0. 3% 9-羟基-连翘脂素葡萄糖醛酸苷无菌 0. 5% CMC-Na溶液（简称连翘苷衍生物B药液），备用；
[0252] 称取33, 34-亚甲基二氧-连翘脂素葡萄糖醛酸苷3g，用适量的0.5 % CMC-Na溶 液混悬后，加0. 5% CMC-Na溶液至1000ml，充分混匀，制得0. 3% 33, 34-亚甲基二氧-连翘 脂素葡萄糖醛酸苷无菌〇. 5 % CMC-Na溶液（简称连翘苷衍生物C药液），备用。
[0253] 2)药液稀释：
[0254] 取无菌试管30只分成3组，每组10只分布排列于试管架中，在第一组的10只试 管中于第2~10只试管中分别加入无菌蒸馏水10mL ;接着取连翘苷衍生物A药液10mL加 入到第1只试管中；再取10mL连翘苷衍生物A药液加入到第2只试管中，混匀后从第2只 试管中取10mL混合液加入到第3只试管内，再混合均匀后取10mL混合液加入到第4只试 管中，混匀后再从第4只试管中取10ml混合液计入到第5只试管中，混匀，如此连续稀释至 第9只试管混匀后，取出10mL弃掉。第10只试管中只有无菌蒸馏水，以第10只试管中的 无菌蒸馏水作为对照。这样1~9管含有不同浓度药液各10mL。
[0255] 第二组试管中除了加入的药液是连翘苷衍生物B药液之外，其它操作方法与第一 组试管的药液进行稀释方法相同；第三组试管中除了加入的药液是连翘苷衍生物C药液之 外，其它操作方法与第一组试管的药液进行稀释方法相同。
[0256] 3)含药平板制备
[0257] 3-1)连翘苷衍生物A含药琼脂平板组
[0258] 在无菌操作台上按照无菌操作方法，将已经溶化的无菌M-Η琼脂900mL，分装于10 个三角瓶中，每瓶90mL熔融的无菌M-Η琼脂，将第一组试管中的第1只试管中含有的10mL 的连翘苷衍生物A药液放入到含90mL培养基的第1个三角瓶中，混合后平均倾倒至7个平 板（即平皿）中，每个平板约含14mL含药（即连翘苷衍生物A)琼脂，凝固后备用，为第1 含药琼脂平板组，其中：第1含药琼脂平板组每个平板中实际含连翘苷衍生物A 3. 0mg/ml。
[0259] 第一组试管中的第2-10只试管内的溶液按照与第1只试管内的溶液同样的方法 倾倒平板，制成第2-10含药平板组，每个平板组含有7个平板，每个平板约含14mL含药（即 连翘苷衍生物A)琼脂，凝固后备用。第2含药琼脂平板组中每个平板实际含连翘苷衍生物 Al. 5mg/ml ;第3含药琼脂平板组中每个平板实际含连翘苷衍生物A为0. 75mg/ml ;第4含 药琼脂平板组中每个平板实际含连翘苷衍生物A为0. 375mg/ml ;第5含药琼脂平板组中每 个平板实际含连翘苷衍生物A为0. 1875mg/ml ;第6含药琼脂平板组中每个平板实际含连 翘苷衍生物A为0. 0938mg/ml ;第7含药琼脂平板组中每个平板实际含连翘苷衍生物A为 0. 0469mg/ml ;第8含药琼脂平板组中每个平板实际含连翘苷衍生物A为0. 0234mg/ml ;第 9含药琼脂平板组中每个平板实际含连翘苷衍生物A为0. 0117mg/ml ;第10含药琼脂平板 组中每个平板实际含连翘苷衍生物A为0. 0mg/ml。
[0260] 3-2)连翘苷衍生物B、C含药琼脂平板组
[0261] 按照连翘苷衍生物A含药琼脂平板组的配制方法制备连翘苷衍生物B含药琼脂平 板组，除了向第二组三角瓶中加入第二组试管中的连翘苷衍生物B药液之外，其余与步骤 3-1)相同。
[0262] 按照连翘苷衍生物A含药琼脂平板组的配制方法制备连翘苷衍生物C含药琼脂平 板组，除了向第三组三角瓶中加入第三组试管中的连翘苷衍生物C药液之外，其余与步骤 3-1)相同。
[0263] 4)用多点接种仪分别吸取各种菌液并将菌液点种于含不同药物浓度的琼脂平板 上。于35°C培养18~24h，观察菌体生长情况，生长菌体为阳性（+)，不生长菌体为阴性 (一），以不生长菌体的最低浓度为最低抑菌浓度（MIC)。
[0264] 2实验结果
[0265] 连翘苷衍生物A、连翘苷衍生物B和连翘苷衍生物C对金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、 枯草芽孢杆菌、酵母、桔青霉、黑曲霉、黄曲霉抑菌效果测定结果如表2-4所示。
[0266] 表2连翘苷衍生物A对7种细菌的MIC
[0267]
[0268] 表3连翘苷衍生物B对7种细菌的MIC
[0269]
[0270] 表4连翘苷衍生物C对7种细菌的MIC[0271]
[0272] 由表2-4的研究结果表明，连翘苷衍生物A、B、C对金黄色葡萄球菌、酵母菌、 桔青霉菌、黑曲霉菌等抗菌作用显著，连翘苷衍生物A对金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、枯 草芽孢杆菌、酵母、桔青霉、黑曲霉、黄曲霉的MIC为：0. 0234mg/ml、0. 75mg/ml、0. 75mg/ ml、0. 0938mg/ml、0. 0469mg/ml、0. 0234mg/ml、0. 0938mg/ml。连翘苷衍生物 B 对金黄色葡 萄球菌、大肠杆菌、枯草芽孢杆菌、酵母、桔青霉、黑曲霉、黄曲霉的MIC为：0. 0938mg/ml、 0· 75mg/ml、0. 75mg/ml、0. 0938mg/ml、0. 0938mg/ml、0. 0938mg/ml、0. 0469mg/ml。
[0273] 连翘苷衍生物C对金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、枯草芽孢杆菌、酵母、桔青霉、黑 曲霉、黄曲霉的 MIC 为：0· 0469mg/ml、1. 5mg/ml、1. 5mg/ml、0. 1875mg/ml、0. 0469mg/ml、 0· 0469mg/ml、0. 1875mg/ml。
[0274] 试验例3连翘苷/连翘脂素组合物抗菌作用的实验研究
[0275] 1实验材料
[0276] 1. 1药物与试剂
[0277] 连翘苷/连翘脂素组合物A，连翘苷（含量>98%)，白色粉末，大连富生天然药物 开发有限公司生产，批号：20130303 ;连翘脂素（含量> 98% )，白色粉末，大连富生天然药 物开发有限公司生产，批号：20130301 ;连翘苷与连翘脂素的重量之比为98 :2。
[0278] 连翘苷/连翘脂素组合物B，连翘苷（含量>98%)，白色粉末，大连富生天然药物 开发有限公司生产，批号：20130303 ;连翘脂素（含量> 98% )，白色粉末，大连富生天然药 物开发有限公司生产，批号：20130301 ;连翘苷与连翘脂素的重量之比为89 :11。
[0279] 1. 2 菌种
[0280] 菌种与试验例1相同，均由大连医科大学微生物实验室提供。
[0281] 1.3实验仪器及培养基
[0282] 与试验例1相同。
[0283] 1. 4实验方法
[0284] 采用琼脂稀释法，用M-Η琼脂进行连翘苷的定量抗菌实验。
[0285] 1)配制连翘苷/连翘脂素组合物药液
[0286] 称取连翘苷/连翘脂素组合物A 3g，用适量的0. 5%CMC_Na溶液混悬后，加0. 5% CMC-Na溶液至1000ml，充分混匀，制得0. 3 %连翘苷/连翘脂素组合物A无菌0. 5 % CMC-Na 溶液（简称连翘苷/连翘脂素组合物A药液），备用；
[0287] 称取连翘苷/连翘脂素组合物B 3g，用适量的0. 5%CMC_Na溶液混悬后，加0. 5% CMC-Na溶液至1000ml，充分混匀，制得0. 3 %连翘苷/连翘脂素组合物B无菌0. 5 % CMC-Na 溶液（简称连翘苷/连翘脂素组合物B药液），备用；
[0288] 2)药液稀释：
[0289] 取无菌试管20只分成2组，每组10只分布排列于试管架中，在第一组的10只试 管中于第2~10只试管中分别加入无菌蒸馏水10mL ;接着取连翘苷/连翘脂素组合物A药 液10mL加入到第1只试管中；再取10mL连翘苷/连翘脂素组合物A药液加入到第2只试 管中，混匀后从第2只试管中取10mL混合液加入到第3只试管内，再混合均匀后取10mL混 合液加入到第4只试管中，混匀后再从第4只试管中取10ml混合液计入到第5只试管中，混 匀，如此连续稀释至第9只试管混匀后，取出10mL弃掉。第10只试管中只有无菌蒸馏水， 以第10只试管中的无菌蒸馏水作为对照。这样1~9管含有不同浓度药液各10mL。
[0290] 第二组试管中除了加入的药液是连翘苷/连翘脂素组合物B药液之外，其它操作 方法与第一组试管的药液进行稀释方法相同。
[0291] 3)含药平板制备
[0292] 3-1)连翘苷/连翘脂素组合物A含药琼脂平板组
[0293] 在无菌操作台上按照无菌操作方法，将已经溶化的无菌M-Η琼脂900mL，分装于 10个三角瓶中，每瓶90mL熔融的无菌M-Η琼脂，将第一组试管中的第1只试管中含有的 lOmL的连翘苷/连翘脂素组合物A药液放入到含90mL培养基的第1个三角瓶中，混合后 平均倾倒至7个平板（即平皿）中，每个平板约含14mL含药（即连翘苷/连翘脂素组合物 A)琼脂，凝固后备用，为第1含药琼脂平板组，其中：第1含药琼脂平板组每个平板中实际 含连翘苷/连翘脂素组合物A 3. Omg/ml。
[0294] 第一组试管中的第2-10只试管内的溶液按照与第1只试管内的溶液同样的方 法倾倒平板，制成第2-10含药平板组，每个平板组含有7个平板，每个平板约含14mL含 药（即连翘苷/连翘脂素组合物A)琼脂，凝固后备用。第2含药琼脂平板组中每个平板 实际含连翘苷/连翘脂素组合物Al. 5mg/ml ;第3含药琼脂平板组中每个平板实际含连翘 苷/连翘脂素组合物A为0. 75mg/ml ;第4含药琼脂平板组中每个平板实际含连翘苷/连 翘脂素组合物A为0. 375mg/ml ;第5含药琼脂平板组中每个平板实际含连翘苷/连翘脂 素组合物A为0. 1875mg/ml ;第6含药琼脂平板组中每个平板实际含连翘苷/连翘脂素 组合物A为0. 0938mg/ml ;第7含药琼脂平板组中每个平板实际含连翘苷/连翘脂素组 合物A为0. 0469mg/ml ;第8含药琼脂平板组中每个平板实际含连翘苷/连翘脂素组合 物A为0. 0234mg/ml ;第9含药琼脂平板组中每个平板实际含连翘苷/连翘脂素组合物A 为0. 0117mg/ml ;第10含药琼脂平板组中每个平板实际含连翘苷/连翘脂素组合物A为 0· Omg/ml 〇
[0295] 3-2)连翘苷/连翘脂素组合物B含药琼脂平板组
[0296] 按照连翘苷/连翘脂素组合物A含药琼脂平板组的配制方法制备连翘苷/连翘脂 素组合物B含药琼脂平板组，除了向第二组三角瓶中加入第二组试管中的连翘苷/连翘脂 素组合物B药液之外，其余与步骤3-1)相同。
[0297] 4)用多点接种仪分别吸取各种菌液并将菌液点种于含不同药物浓度的琼脂平板 上。于35°C培养18~24h，观察菌体生长情况，生长菌体为阳性（+)，不生长菌体为阴性 (一），以不生长菌体的最低浓度为最低抑菌浓度（MIC)。
[0298] 2实验结果
[0299] 连翘苷/连翘脂素组合物A、连翘苷/连翘脂素组合物B对金黄色葡萄球菌、大肠 杆菌、枯草芽孢杆菌、酵母、桔青霉、黑曲霉、黄曲霉抑菌效果测定结果如表5、6所示。
[0300] 表5连翘苷/连翘脂素组合物A对7种细菌的MIC

[0303] 表6连翘苷/连翘脂素组合物B对7种细菌的MIC
[0305] 由表5、6的研究结果表明，连翘苷/连翘脂素组合物A、连翘苷/连翘脂素组 合物B对金黄色葡萄球菌、酵母菌、桔青霉菌、黑曲霉菌等抗菌作用显著，连翘苷/连翘脂 素组合物A对金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、枯草芽孢杆菌、酵母、桔青霉、黑曲霉、黄曲霉的 MIC 为：0· 0234mg/ml、0. 375mg/ml、0. 375mg/ml、0. 0469mg/ml、0. 0234mg/ml、0. 0234mg/ml、 0.0469mg/ml〇
[0306] 连翘苷/连翘脂素组合物B对金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、枯草芽孢杆菌、酵母、 桔青霉、黑曲霉、黄曲霉的 MIC 为：0· 0938mg/ml、0. 75mg/ml、0. 75mg/ml、0. 0938mg/ml、 0· 0938mg/ml、0. 0938mg/ml、0. 0469mg/ml。
[0307] 根据上述试验结果可知，连翘苷、连翘苷衍生物、连翘苷与连翘脂素组合物均具有 抑制细菌的作用，这一试验结果对指导临床预防常见致病菌感染具有重要指导意义。
[0308] 试验例4连翘脂素抗菌作用的实验研究
[0309] 1实验材料
[0310] 1. 1药物与试剂
[0311] 连翘脂素（含量>98%)，白色粉末，大连富生天然药物开发有限公司生产，批号： 20130301ο
[0312] 1.2 菌种
[0313] 与试验例1相同
[0314] 1.3实验仪器及培养基
[0315] 与试验例1相同
[0316] 1.4实验方法
[0317] 采用琼脂稀释法，用M-Η琼脂进行连翘脂素的定量抗菌实验。
[0318] 1)药液稀释：取无菌试管10只排列于试管架中，于第2~10只试管中分别加入无 菌蒸馏水10mL ;接着取0. 3%连翘脂素无菌0. 5% CMC-Na溶液（称取连翘脂素3g，用适量 的0. 5 % CMC-Na溶液混悬后，加0. 5 % CMC-Na溶液至1000ml，充分混匀后使用。）10mL加 入到第1只试管中；然后再取10mL的0. 3%连翘脂素无菌0. 5% CMC-Na溶液加入到第2只 试管中，混匀后从第2只试管中取10mL混合液加入到第3只试管内，再混合均匀后取10mL 混合液加入到第4只试管中，混匀后再从第4只试管中取10ml混合液计入到第5只试管 中，混匀，如此连续稀释至第9只试管混匀后，取出10mL弃掉。第10只试管中只有无菌蒸 馏水，以第10只试管中的无菌蒸馏水作为对照。这样1~9管含有不同浓度药液各10mL。
[0319] 2)含药平板制备
[0320] 在无菌操作台上按照无菌操作方法，将已经溶化的无菌M-Η琼脂900mL，分装于10 个三角瓶中，每瓶90mL熔融的无菌M-Η琼脂，将第1只试管中含有的10mL的0. 3%连翘 脂素无菌蒸馏水溶液放入到含90mL培养基的第1个三角瓶中，混合后平均倾倒至7个平板 (即平皿）中，每个平板约含14mL含药（即连翘脂素）琼脂，凝固后备用，为第1含药琼脂 平板组，其中：第1含药琼脂平板组每个平板中实际含连翘脂素3. Omg/ml。
[0321] 第2-10只试管内的溶液按照与第1只试管内的溶液同样的方法倾倒平板，制成 第2-10含药平板组，每个平板组含有7个平板，每个平板约含14mL含药（即连翘脂素）琼 月旨，凝固后备用。第2含药琼脂平板组中每个平板实际含连翘脂素 1. 5mg/ml ;第3含药琼 脂平板组中每个平板实际含连翘脂素为0. 75mg/ml ;第4含药琼脂平板组中每个平板实际 含连翘脂素为〇. 375mg/ml ;第5含药琼脂平板组中每个平板实际含连翘脂素为0. 1875mg/ ml ;第6含药琼脂平板组中每个平板实际含连翘脂素为0. 0938mg/ml ;第7含药琼脂平板组 中每个平板实际含连翘脂素为〇. 〇469mg/ml ;第8含药琼脂平板组中每个平板实际含连翘 脂素为〇. 〇234mg/ml ;第9含药琼脂平板组中每个平板实际含连翘脂素为0. 0117mg/ml ;第 10含药琼脂平板组中每个平板实际含连翘脂素为〇. 〇mg/ml。
[0322] 3)用多点接种仪分别吸取各种菌液并将菌液点种于含不同药物浓度的琼脂平板 上。于35°C培养18~24h，观察菌体生长情况，生长菌体为阳性（+)，不生长菌体为阴性 (一），以不生长菌体的最低浓度为最低抑菌浓度（MIC)。
[0323] 2实验结果
[0324] 金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、枯草芽孢杆菌、酵母、桔青霉、黑曲霉、黄曲霉抑菌效 果测定结果如表7所示。
[0325] 表7连翘脂素对7种细菌的MIC
[0326]
[0327] 注：-表示无菌生长；+表示菌体生长少；++表示菌体生长较多；+++表示菌体生长 多，下同
[0328] 由表7的研究结果表明，当连翘脂素达到3mg/ml时，其对金黄色葡萄球菌、酵母 菌、桔青霉菌、黑曲霉菌等细菌的生长也没有抑制作用。因此可知连翘苷基本没有抗菌的作 用。
【主权项】
1. 连翘苷、连翘苷衍生物、连翘苷与连翘脂素组合物在制备用于预防和/或治疗细菌 感染的药物或保健品中的应用。2. 根据权利要求1所述的应用，其特征是所述药物由连翘苷、连翘苷衍生物或连翘苷 与连翘脂素组合物和药学上可接受的载体组成。3. 根据权利要求1或2所述的应用，其特征是所述药物以片剂、胶囊剂、丸剂、散剂、颗 粒剂、糖浆剂、溶液剂形式存在。4. 根据权利要求1或2所述的应用，其特征是所述的连翘苷、连翘苷衍生物的纯度为 彡1% ;连翘苷与连翘脂素组合物的含量彡1%。5. 根据权利要求4所述的应用，其特征是所述的连翘苷、连翘苷衍生物的纯度为1 %~ 98% ;连翘苷与连翘脂素组合物的含量为1 %~98%。6. -种预防或/和治疗细菌感染的药物或保健品，其特征是含有连翘苷、连翘苷衍生 物或连翘苷与连翘脂素组合物。7. 根据权利要求6所述的药物或保健品，其特征是所述的连翘苷、连翘苷衍生物的纯 度为彡1% ;连翘苷与连翘脂素组合物的含量彡1%。8. 根据权利要求6所述的药物或保健品，其特征是所述连翘苷、连翘苷衍生物或连翘 苷与连翘脂素组合物的重量与所述药物或保健品的总重量之比为〇. 01-10 :1〇〇。9. 根据权利要求6所述的药物或保健品，其特征是所述连翘苷与连翘脂素组合物选择 连翘脂素和连翘苷与α_、β-或γ-环糊精或其衍生物相混合而成的混合物，或连翘脂素 和连翘苷与α-、β-或γ-环糊精或其衍生物经物理、化学方法处理形成的复合物。10. 根据权利要求6所述的药物或保健品，其特征是还包括穿心莲提取物，四季青提取 物，金银花提取物，板蓝根提取物，蒲公英提取物，黄柏提取物，黄连提取物，黄芩提取物，马 齿苋提取物，白头翁提取物，大蒜提取物，鱼腥草提取物，野菊花提取物，苦参提取物、维生 素 C及其衍生物或维生素 Ε及其衍生物。
【文档编号】A23L33/105GK106063793SQ201510690295
【公开日】2016年11月2日
【申请日】2015年10月21日 公开号201510690295.4, CN 106063793 A, CN 106063793A, CN 201510690295, CN-A-106063793, CN106063793 A, CN106063793A, CN201510690295, CN201510690295.4
【发明人】王凯乾, 富力, 惠敏, 鲁明明, 刘正贤, 王硕, 付强, 刘国友
【申请人】富力