专利名称：向精神药物的制作方法
技术领域：
本发明涉及向精神药物，更确切地说，涉及对脑中神经传递系统具有长期作用的药物，因此可用于治疗痴呆等。
神经元烟碱乙酰胆碱受体(nACh，neuronal nicotinicacetylcholine)优先存在于突触前部位，参与调节神经递质的释放(K.F.Funk等，《生物医学与生物化学学报》11，1301，1984；G.Spignoli等，《药学、生化学与行为》27，491，1987；M.Marchi等，《欧洲药理学杂志》185，247，1990；S.Watabe等，《药理学杂志》238，303，1993)，一系列证据表明，它们促进与认知功能有关的海马神经传递(S.M.Satoh等《神经科学快报》68，216，1986)。
直到现在，几乎还没有找到临床上有效的治疗痴呆的药物。最近，已经研制出几种类型的向精神药物；不过，它们的具体机理还是未知的。
本发明的一个目的是提供一种长时间改善脑神经传递的药物，该药物基于一种长时间促进海马神经传递的药剂，用于治疗多种类型的痴呆，例如可归因于脑积水的痴呆，或阿尔茨海默氏病。
大量研究显示，某种类型的向精神药物(或认知增强剂)能够改善脑的多种神经传递，包括多巴胺能、胆碱能、谷酰胺能和GABA能系统。
还已知一些向精神药物可促进长期增强作用(LTP)，后者是由响应于强直性刺激(电刺激)的神经传递活化作用所激发的(M.Satoh等《神经科学快报》68，216，1986)。LTP充当记忆和学习的模型系统。不过，在实际的医学实践中，电刺激(强直性刺激)的应用对抑制痴呆来说既不是现实的，也不是临床上有用的。
有鉴于此，本发明人作出了巨大努力，以找到一种不用电刺激(强直性刺激)即可长时间激活神经传递的物质。结果发现，下列化合物可用作治疗由多种原因导致的痴呆的药物，即向精神药物，从而完成了本发明(1)一种物质，长时间激活蛋白激酶C活化途径；(2)一种物质，提供了蛋白激酶C的长期活化与烟碱乙酰胆碱受体的长期活化之间的相互作用；(3)一种物质，长时间激活蛋白激酶C活化途径，从而基于与蛋白激酶C的相互作用激活突触前烟碱乙酰胆碱受体，由此长时间增加谷氨酸盐的释放，用于长时间改善海马神经传递；和(4)一种物质，在没有电刺激的情况下引起LTP样作用。
因此，本发明提供了一种向精神药物，它含有一种物质作为活性成分，该物质长时间激活蛋白激酶C活化途径。
本发明也提供了一种向精神药物，它含有一种物质作为活性成分，该物质提供了蛋白激酶C的长期活化与烟碱乙酰胆碱受体的长期活化之间的相互作用。
本发明也提供了一种向精神药物，它含有一种物质作为活性成分，该物质长时间激活蛋白激酶C活化途径，从而基于与蛋白激酶C的相互作用激活突触前烟碱乙酰胆碱受体，由此长时间增加谷氨酸盐的释放，用于长时间改善海马神经传递。
本发明也提供了一种向精神药物，它含有一种物质作为活性成分，该物质在没有电刺激的情况下引起LTP样作用。
本发明也提供了一种用于长时间促进大脑神经传递的药剂；一种用于长时间促进蛋白激酶C活化途径的药剂；一种用于长时间促进蛋白激酶C活化途径的药剂；一种用于在没有电刺激的情况下引起LTP样作用的药剂；和一种用于谷氨酸盐释放的长期增强剂；各自含有下式(1)的2-氧代-1-吡咯烷基烷基羧酸酰胺作为活性成分 ，由-SO2R5代表的磺酰基(其中R5代表氨基或C1-3烷基)，和由-COO(CH2)2-N(R6)(R7)代表的取代的氨基乙氧基羰基(其中R6和R7各自代表氢原子、甲基或乙基)]，或其药学上可接受的酸加成盐。
本发明也提供了一种物质在制备向精神药物中的用途，该物质长时间激活蛋白激酶C活化途径。
本发明也提供了一种物质在制备向精神药物中的用途，该物质提供了蛋白激酶C的长期活化与烟碱乙酰胆碱受体的长期活化之间的相互作用。
本发明也提供了一种物质在制备向精神药物中的用途，该物质长时间激活蛋白激酶C活化途径，从而基于与蛋白激酶C的相互作用激活突触前烟碱乙酰胆碱受体，由此长时间增加谷氨酸盐的释放，用于长时间改善海马神经传递。
本发明也提供了式(1)化合物的用途，用于制备大脑神经传递的长期促进剂、蛋白激酶C活化途径的长期激活剂、无需电刺激的LTP样作用诱导剂或谷氨酸盐释放的长期增强剂。
本发明也提供了用于增强认知的治疗方法，其特征在于将一种物质对受治疗者给药，该物质长时间激活蛋白激酶C活化途径。
本发明也提供了用于增强认知的治疗方法，其特征在于将一种物质对受治疗者给药，该物质提供了蛋白激酶C的长期活化与烟碱乙酰胆碱受体的长期活化之间的相互作用。
本发明也提供了用于增强认知的治疗方法，其特征在于将一种物质对受治疗者给药，该物质长时间激活蛋白激酶C活化途径，从而基于与蛋白激酶C的相互作用激活突触前烟碱乙酰胆碱受体，由此长时间增加谷氨酸盐的释放，用于长时间改善海马神经传递。
本发明也提供了用于增强认知的治疗方法，其特征在于将一种物质对受治疗者给药，该物质无需电刺激就能引起LTP样作用。
本发明也提供了一种治疗方法，该方法用于长时间促进大脑神经传递；用于激活蛋白激酶C活化途径；用于无需电刺激而引起LTP样作用；或者用于长时间增加谷氨酸盐的释放；各自包括将式(1)化合物对受治疗者给药的步骤。
图1显示奈非西坦(nefiracetam)对非NMDA受体电流的作用。GluR 1，2，3受体是AMPA受体，它们是在非洲爪蟾卵母细胞中表达的。在奈非西坦(1μM)给药前后记录用红藻氨酸盐(100μM)引起的细胞膜电流(n＝5)。保持电压为-30mV。
图2显示奈非西坦对Ca2+依赖性氯化物电流和通过正常烟碱ACh受体的Ca2+流入的作用。
(A)在不含阿托品的青蛙Ringer溶液中，对没有表达ACh受体的卵母细胞用以乙酰胆碱(100μM)。保持电压为-30mV。
(B)用钙绿载入表达正常ACh受体的卵母细胞。在不含Ca2+(extCa2+(-))的细胞外溶液(extCa2+(-))和普通(即含有Ca2+)的细胞外溶液中，记录细胞内Ca2+([Ca2+]i)和ACh引起的电流(IA)。用“荧光强度的Δ增加量(DI)”除以“基本强度(I)”，进一步除以“由不含Ca2+的溶液(2)得到的电流幅度(μA)”，对Ca2+的升高进行归一化处理。“(1)”表示由含Ca2+溶液得到的电流。图2中，每个数值都代表7个卵母细胞的平均值，用线条表示误差，即SD。
图3显示由奈非西坦引起的α4β2和α7受体电流的增强作用。
使用双电极电压夹(two-electrode voltage-clamp)技术记录卵母细胞中的α4β2或α7受体表达。在有或没有α-BuTX(50 nM)或MCA(3μM)的情况下，对单个卵母细胞用以ACh(100μM)。对α4β2-nAChR或α7-nAChR的保持电压分别为-30或-60mV。向下的方向相当于向内的电流。
利用下列手段来寻找本发明的提供神经传递的长期增强作用的物质。
(1)利用标准技术从诸如大鼠这样的动物脑中制备海马切片。将切片置于记录室中，其中含有用适量氧和碳酸饱和的人工脑脊髓液，由此进行连续过冷。通过电刺激Schaeffer侧副纤维/连合纤维的方法，记录CA1区锥体细胞层中的树状场兴奋性突触后电位。也就是说在这种方法中，通过测量突触后电位来评价加强海马神经传递的物质。
(2)另一种方法使用体外转录。在这种方法中，获得称为大脑nACh受体的mRNA受体，将其注入非洲爪蟾卵母细胞中，并使用表达该受体的细胞。例如，作为nACh受体，使用大鼠α4β2 mRNA和α7mRNA，还使用具有PKC抑制功能的肽NP152和抑制失活的PKC的肽NP153的mRNA；作为AMPA受体，使用GluR1，2，3受体mRNA的mRNA。将各自的mRNA注入非洲爪蟾卵母细胞后，受体或肽被表达。随后，利用表达该受体的卵母细胞测量各自的受体电流。
(3)还有一种方法通过定量所释放的谷氨酸盐来确定神经传递途径，谷氨酸盐是一种神经递质。
(4)在本发明的评价方法中，GF109203X可用作蛋白激酶C抑制剂，H89可用作蛋白激酶A抑制剂，α-银环蛇毒素可用作α7受体抑制剂，美加明(MCAM)可用作α4β2受体抑制剂，D-2-氨基-5-二氧磷基戊酸(APV)可用作非NMDA型谷氨酸盐受体抑制剂，6，7-二硝基喹喔啉-2，3-二酮(DNQX)可用作选择性非NMDA型谷氨酸盐抑制剂。
通过使用上述方法，验证了按照本发明的物质起到长期大脑神经传递增强剂的作用。下面描述该发现。
(1)利用本发明化合物加强突触后电位通过测量突触后电位能够确定一种化合物是否是长期神经传递改善剂。基于下列事实，已经证实本发明化合物可加强突触后电位。也就是说，当记录经浓度为0.01-10μM的本发明化合物处理过的大鼠海马切片的CA1区锥体细胞层的突触后电位时，该化合物以剂量依赖方式加强了突触后电位(表1和2)。另一方面，本发明化合物在低浓度(0.1μM或以下)下提供了短期的抑制作用，在高浓度(1μM或以上)下提供了LTP样长期加强作用，说明具有剂量依赖性双相作用(表18)。
在用本发明物质处理的表达α7和α4β2受体—称为大脑烟碱乙酰胆碱(以下简称“nACh”)受体—的非洲爪蟾卵母细胞实验中，证实了0.001μM或以上(最大为0.1μM)的浓度下对α4β2受体而言的ACh激发性电流具有加强作用，0.01μM或以上(最大为1μM)的浓度下对α7受体而言的ACh激发性电流具有加强作用(表7和8)。
(2)证实对蛋白激酶C(以下简称“PKC”)的活化作用PKC是一种丝氨酸-苏氨酸氧化酶，在钙和磷脂的情况下被激活(磷脂酰丝氨酸；PS)，这是由Nishizuka等人于1977年发现的。当细胞膜肌醇磷脂的代谢转换被多种外部信号加速时，产生两种类型的第二信使，即DG(二酰基甘油)和肌醇三磷酸。肌醇三磷酸从细胞内的钙库中释放钙，由此提高了细胞内的钙浓度。相比之下，DG在钙和磷脂的情况下激活PKC。也就是说，PKC与钙对磷酸化的协同作用调节了多种细胞功能(Naoyosi Saitoh，《新陈代谢》，28189-222)。
如上所述，本发明物质加强了突触后电位。通过实验能够证明，对突触后电位的加强作用可归因于PKC活化作用，实验使用用GF109203X(一种PKC抑制剂)处理过的海马切片，测量来自表达nACh受体的非洲爪蟾卵母细胞膜的nACh受体电流。
对突触后电位的加强作用显著被本发明物质所抑制，但是不被蛋白激酶A(以下简称“PKA”)—一种选择性抑制剂—所抑制，这一事实说明，本发明物质对突触后电位的加强作用有影响。
在使用表达α7和α4β2受体的非洲爪蟾卵母细胞膜的实验中，ACh激发性电流被PKC抑制剂所抑制。另外，当受体与PKC抑制性肽被共同表达时(NP152；αPKC1Peunova，N.等《自然》364，450-453，1993)，本发明物质抑制了对ACh激发性电流的加强作用，当受体与失活的PKC抑制性肽(NP153；ipKPC)被共同表达时，也抑制了对ACh激发性电流的加强作用(表10)。
这些事实说明，因用本发明物质处理而导致的对ACh激发性电流的长期加强作用是由PKC活化作用的变化来调节的。
(3)证实对nACh受体的活化作用按照上述方法进行的研究显示，本发明物质激活nACh受体，如下所述。
当海马CA1区的神经元用本发明物质(1μM)处理时，由海马CA1区诱发的突触后电位的加强作用被α-银环蛇毒素(选择性α7受体抑制剂)和美加明(α4β2受体抑制剂)抑制。这说明，本发明物质激活了nACh受体(表3和4)。
本发明物质加强了具有α7和α4β2受体的细胞内ACh激发性电流，该受体是目前已知的大脑nACh受体(表8)。
这些结果说明，本发明物质提供了通过神经元nACh受体对突触后电位的长期改善作用。
而且，本发明物质(1μM)对α和δ亚单位上缺乏有效的PKC磷酸化位点的ACh受体突变体(mαΔPKC/Ser333mδΔPKC/Ser377)没有表现出电流加强作用(V.M.Gehle等，《脑分子研究》5，183，1991)(表17)。这些结果说明，本发明物质通过活化Ca2+依赖性PKC加强了ACh开关通道电流和受体的PKC磷酸化作用。
如上所述说明，本发明物质对神经传递的长期促进作用(突触后电位的加强作用)是基于对PKC的长期活化作用与对nACh受体的长期活化作用之间的相互作用。
(4)增加所释放的谷氨酸盐在使用海马切片的实验中，本发明物质(1μM)显著增加了谷氨酸盐的释放，其条件是兴奋性神经递质谷氨酸盐是在电刺激去极化下释放的；不过，α-银环蛇毒素或美加明的存在可抑制这种提高作用(表11)。这说明，本发明物质激活nACh受体，于是增加谷氨酸盐的释放，由此提供了对突触后电位的长期加强作用。
(5)对AMPA/红藻氨酸盐受体电流的作用突触后电位的来源是α-氨基-3-羟基-5-甲基-4-异噁唑丙酸盐(以下简称“AMPA”)/红藻氨酸盐受体电流。
本发明物质对海马神经传递的促进作用被AMPA/红藻氨酸盐受体(非NMDA型受体)的选择性抑制剂(DNQX)所抑制，但是不被NMDA型受体选择性抑制剂(APV；6，7-双磷酸戊酸)所抑制。这说明，本发明物质“对突触后电位的加强作用”是通过红藻氨酸盐受体电流实现的。不过，在利用表达AMPA/红藻氨酸盐受体(GluR 1，2，3)—属于非NMDA型受体—的非洲爪蟾卵母细胞所进行的研究(图1)中，本发明物质没有加强AMPA/红藻氨酸盐受体电流，说明“对突触后电位的加强作用”不是通过调节在突触后膜上表达的AMPA/红藻氨酸盐受体来实现的。
(6)对ACh开关通道电流的作用非洲爪蟾卵母细胞膜表达系统中ACh激发性电流是由ACh开关通道(具有受ACh调节的开关机理的通道)电流和其次的活化钙依赖性氯化物电流所组成的(R.Miledi等，《生理学杂志》357，173，1984)。不过，按照本发明人的研究，本发明物质对因内源性毒蕈碱性ACh受体刺激作用诱发产生的钙依赖性氯化物电流没有作用(图2)，对nACh受体通道的钙通透性也没有作用(图2；表15)。这说明，本发明物质调节ACh开关通道电流，而不调节钙(Ca2+)敏感性氯化物(Cl-)电流。
(7)双相作用在来自海马切片的突触后电位的测量中，低浓度(≤0.1μM)的本发明物质瞬时表现出对突触后电位的轻微抑制作用(表13)。
本发明物质当经口给药时，对体内脑兴奋性突触后电位(PS)表现出显著的长期加强作用(表24)。
下面将更详细地描述本发明。
本发明涉及含有一种物质作为活性成分的向精神药物，所述物质长时间激活PKC活化途径。
本发明人已经发现，长时间激活PKC的药物能够起到向精神药物的作用。也就是说，本发明人已经发现，通过对PKC、特别是与突触前烟碱乙酰胆碱(nACh)受体有联系的PKC的长期活化作用，nACh受体被磷酸化作用长时间激活，由此以细胞内传递系统为媒介促进谷氨酸盐的释放，所释放的谷氨酸盐激活AMPA/红藻氨酸盐型谷氨酸盐受体和NMDA型谷氨酸盐受体，这些受体导致Ca++和Na++流入细胞，促进了神经传递。
这一点也由下列结果得以说明，在选择性PKC抑制剂的情况下没有观察到在本发明物质情况下所表现出来的突触后电位加强作用(表5)。
本发明也涉及一种向精神药物，其特征在于对海马神经元传递的长期改善作用，这是由通过长时间激活PKC活化途径而长时间激活突触前nACh受体来实现的。
试验结果证实了nACh受体参与本发明物质对神经传递的加强作用这一事实，试验中突触后电位被α-银环蛇毒素(α-BuTX)抑制(表3)。由本发明人所进行的试验还证明，长时间激活PKC活化途径与长时间激活nACh受体之间的相互作用提供了对海马神经传递的长期促进作用。这些结果说明，本发明物质是一种向精神药物，它通过长时间激活PKC活化途径与长时间激活nACh受体之间的相互作用来改善海马神经传递。
本发明也涉及含有一种物质作为活性成分的向精神药物，所述物质长时间激活PKC活化途径，从而长时间激活突触前烟碱乙酰胆碱(nACh)受体，由此长时间增加谷氨酸盐的释放，用于长时间改善海马神经传递。
nACh受体参与由本发明物质所导致的神经传递加强作用的事实例如是由下列试验结果得以证实的，试验中突触后电位被α-银环蛇毒素(α-BuTX)强烈地抑制(表3)。由本发明人所进行的试验还证明，对PKC的长期活化作用与对nACh受体的长期活化作用之间的相互作用提供了对谷氨酸盐释放的长期促进作用(表11)。这些结果说明，本发明物质是一种向精神药物，它通过上述途径和机理最终长时间改善海马神经传递。
本发明也涉及含有一种物质作为活性成分的向精神药物，所述物质引起LTP样作用，而不需要电刺激。
本文所用的LTP代表“长期增强作用”(以下缩写为LTP)，它指的是大脑神经传递被长时间激活的状态，具体是指这样一种现象，当突触前纤维受到高频率电刺激(强直性刺激)、之后受到单一刺激时，长时间(0.5-10小时)观察到高于强直性刺激前观察值的突触后电位，即，经由强直性刺激对突触神经传递的长期促进作用(New-Cerebral Receptors，Norio Ogawa，World Press，No.296-299)。
“LTP样作用”这一表达方式指的是与本发明向精神药物有关的现象，其中长时间观察到类似于LTP的突触后电位。LTP样作用的意义在于这种作用能够被本发明的向精神药剂单独引起，因此无需使用强直性刺激。而且，尽管之后引起的突触后电位被类似地激活，还不知道引起该突触后电位之前的生物化学过程是否也是相同的。换句话说，尽管尚不清楚LTP作用和LTP样作用彼此是否相同，本发明物质的独特之处在于它提供了对突触后电位的长期加强作用，该加强作用类似于LTP作用，不需要强直性刺激(即，单独用本发明物质进行处理)。
LTP作用被认为是代表了神经传递的长期促进作用，它是中枢神经系统记忆和学习可塑性形成的模型，基于此，公认LTP作用参与多种精神神经元疾病，例如癫痫、缺血性脑病、阿尔茨海默氏病等。LTP样作用也被认为发挥相同的作用。因此，引起LTP样作用的本发明物质是这些神经精神疾病的有效治疗和预防药物。
本发明的向精神药物也可用作由慢性硬膜下出血导致的痴呆的治疗药物和脑积水导致的痴呆的治疗药物。
由于人们认为在由慢性硬膜下出血导致的痴呆和由常压脑积水导致的痴呆中，脑神经传递受损伤或者其功能降低，因此，预期长时间改善神经传递的本发明向精神药物用作这些疾病的预防和治疗剂是有利的。
上述本发明向精神药物的活性成分是下式(1)的2-氧代-1-吡咯烷基烷基羧酸酰胺 ，由-SO2R5代表的磺酰基(其中R5代表氨基或C1-3烷基)，和由-COO(CH2)2-N(R6)(R7)代表的取代的氨基乙氧基羰基(其中R6和R7各自代表氢原子、甲基或乙基)]，或其药学上可接受的盐。
苯基的取代基的实例包括卤原子，例如氯原子或氟原子；烷基，例如甲基、乙基、正丙基、仲丁基和正丁基；烷氧基，例如甲氧基或异丙氧基；烷基巯基，例如甲基巯基、正丙基巯基、异丙基巯基、仲丁基巯基或正庚基巯基；取代的巯基，例如2-羟基丙基巯基、2-(N，N-二甲氨基)丙基巯基或2-(N-甲基-N-苄氨基)乙基巯基；式-S-(CH2)n-CH(R3)-N(R8)(R9)的N-甲基-N-苄氨基烷基巯基，其中由R9代表的取代的苄基是被甲氧基取代的苄基，例如2-N-甲基-N-(3，4-二甲氧基苄基)氨基乙基巯基；式-S-(CH2)n-CH(R3)-N(R8)(R9)的1-吡咯烷基烷基巯基，其中由R8和R9所形成的吡咯烷基环被2-氧代基取代，例如2-(2-氧代-1-吡咯烷基)乙基巯基；以及2-(N，N-二乙氨基)乙氧羰基。可以使用由R2代表的吡啶基或4-吡啶基。
另一组适合于本发明治疗药物的化合物实例包括1. 2-氧代-1-吡咯烷基乙酸2，6-二甲基N-酰苯胺；2. 4-羟基-2-氧代-1-吡咯烷基乙酸2，6-二乙基N-酰苯胺；3. 4-羟基-2-氧代-1-吡咯烷基乙酸2，6-二甲基N-酰苯胺；4. 2-[2-氧代吡咯烷基]丙酸N-3-吡啶基酰胺；5. 2-氧代-1-吡咯烷基乙酸4-异丙基巯基N-酰苯胺；6. 2-[2-氧代-1-吡咯烷基]-1-丙酸4-(2-丁基巯基)N-酰苯胺；
7. 2-[2-氧代-1-吡咯烷基]丙酸4-异丙基N-酰苯胺；8. 2-[2-氧代-1-吡咯烷基]丙酸2，4-二甲基N-酰苯胺；9. 2-[2-氧代-1-吡咯烷基]丙酸2，4，6-甲氧基-5-甲基N-酰苯胺；10. 2-[2-氧代-1-吡咯烷基]丙酸2-甲氧基-5-甲基N-酰苯胺；11. 2-[2-氧代-1-吡咯烷基]丙酸2，6-二氯N-酰苯胺；12. 2-吡咯烷酮乙酰胺；13. 1-茴香酰-2-吡咯烷酮；和14. 4-羟基-2-氧代-1-吡咯烷乙酰胺。
而且，日本特许公报(公告)No.3-46466(p 1019)的表3中所公开的化合物也可用作本发明治疗药物的活性成分。
在上面列举的第二组化合物中，特别优选的是2-氧代-1-吡咯烷基乙酸2，6-二甲基N-酰苯胺(N-(2，6-二甲基苯基)-2-(2-氧代-1-吡咯烷基)乙酰胺；非专利名奈非西坦)；2-吡咯烷酮-乙酰胺；1-茴香酰-2-吡咯烷酮；以及4-羟基-2-氧代-1-吡咯烷乙酰胺。
上面列举的两组化合物都是已知的，按照日本特许出愿公报(公开)Nos.56-2960、61-280470和4-160496等所述的方法是易于制备的。日本特许公报(公告)No.3-46466中公开的吡咯烷基乙酰胺衍生物已知具有多种生物学作用，包括大脑功能增强作用(日本特许公报(公告)No.62-5404)，对阿尔茨海默型痴呆的改善作用(日本特许出愿公报(公开)No.5-163144)，对脑血管痴呆的改善作用(日本特许出愿公报(公开)No.5-163145)，对EL小鼠的抗惊厥作用(Nakamoto等，日本神经病学学会第十七次大会，1993年12月7日至9日，Nagoya，纲要p 84，简报No.P1A20)，对线粒体膜的稳定作用(日本特许公报No.8-260649)。不过，这些化合物的LTP样作用(在没有强直性刺激的情况下所发挥的作用)迄今是未知的。
由于上述(1)至(7)的作用，本发明化合物可用作脑神经传递增强剂；谷氨酸盐释放的长期增强剂；多种类型痴呆治疗药，例如可归因于脑积水、慢性硬膜下出血等的痴呆；不需要电刺激的LTP样作用诱导剂；和蛋白激酶C的长期增强剂。
由式(1)代表的化合物中，奈非西坦对上述目的是特别有用的。也就是说，奈非西坦特别可用作蛋白激酶C活化途径的长期激活剂。简而言之，突触前nAC受体当被PKC长时间磷酸化时，也被长时间激活，由此诱发—经由细胞内传递系统—谷氨酸盐释放的长时间增加，从而通过AMPA/红藻氨酸盐型谷氨酸盐受体和NMDA型谷氨酸盐受体促进海马CA1区的神经传递，最终起到痴呆治疗药的作用。
奈非西坦可用作LTP样作用诱导剂，无需电刺激。
奈非西坦也可用作长期谷氨酸盐释放增强剂，这基于对PKC活化途径的长期活化作用与对突触前烟碱乙酰胆碱受体的长期活化作用之间的相互作用。
简单地说，如下面实施例所示，奈非西坦是一种化合物，它长时间激活PKC(表5和7)，长时间激活突触前nACh受体(表5、8、9和17)，长时间增加信使谷氨酸盐的释放(表11)。
奈非西坦可用作脑神经传递的长期促进剂，这基于对蛋白激酶C活化途径的长期活化作用与对突触前烟碱乙酰胆碱(nACh)受体的长期活化作用之间的相互作用。
如下面实施例所示，奈非西坦长时间激活PKC(表5和7)，长时间激活突触前nACh受体(表5、8、9和17)，长时间增加信使谷氨酸盐的释放(表11)，由此长时间促进脑神经传递。因此，奈非西坦是一种具有长时间促进脑神经传递的作用的药物。
在奈非西坦给药的动物中观察到上述作用，这一事实(表24)提示了本发明化合物在人体中的用途。
而且，由于对神经传递的长期促进作用与LTP作用相似，因此被认为是LTP样作用。
奈非西坦可用作治疗由脑慢性硬膜下出血导致的痴呆的药物，这基于它通过对PKC活化途径的长期活化作用，无需电刺激即可引起LTP样作用。
奈非西坦可用作治疗由脑积水导致的痴呆的药物，这基于它通过对PKC活化途径的长期活化作用，无需电刺激即可引起LTP样作用。
在导致痴呆的各种脑积水类型中，奈非西坦特别可用作治疗由常压脑积水导致的痴呆的药物。
奈非西坦可用作一种向精神药物，其特征在于它通过对谷氨酸盐释放的长期增加作用，诱发对海马神经传递的长期促进作用，这基于对PKC活化途径与突触前nACh受体的长期活化作用的相互作用。
在这种情况下，“向精神药物”指的是多种痴呆、阿尔茨海默氏病的治疗药，是可用于在需要促进或改善脑代谢功能时对受治疗者给药的药物。
奈非西坦可用作谷氨酸盐释放的长期增强剂。
已经证实，奈非西坦长时间增加谷氨酸盐的释放，谷氨酸盐是一种神经传递途径中的信使。因此，奈非西坦据说是一种长时间增加谷氨酸盐释放的药剂。
由于谷氨酸盐的释放增加了，海马神经传递得以长时间改善，由此使奈非西坦成为对受治疗者有用的治疗和预防剂，该受治疗者具有脑神经传递降低的症状，部分地缺乏脑神经传递，需要长时间改善海马神经传递。
游离型化合物和其生理学上可接受的盐都可以用作本发明的治疗药。也可以使用其任意的水合物或溶剂化物形式。生理学上可接受的盐的实例包括酸加成盐，例如无机酸盐，如盐酸盐、氢溴酸盐、氢碘酸盐、硫酸盐、硝酸盐和磷酸盐；有机酸盐，如乙酸盐、马来酸盐、富马酸盐、柠檬酸盐、草酸盐、琥珀酸盐、酒石酸盐、苹果酸盐、扁桃酸盐、甲磺酸盐、对甲苯磺酸盐和10-樟脑磺酸盐。
对用作本发明药物活性成分的化合物中一个或几个不对称碳的构型没有特别限制，可以使用任意旋光物质、任意旋光异构体的混合物或外消旋变体。也可以使用具有两个或更多个不对称碳的任意非对映异构体混合物。
对本发明药物的给药方式没有特别限制，可以是经口给药或胃肠外给药。可以使用充当活性成分的化合物本身、例如由上式(1)代表的化合物，优选提供一种药物组合物，其中含有充当活性成分的化合物和药理学上与药学上可接受的药物制剂用添加剂。药理学上与药学上可接受的添加剂可以使用的实例包括载体、崩解剂或其助剂、粘合剂、润滑剂、包衣剂、着色剂、稀释剂、基质、增溶剂或其佐剂、等渗剂、pH调节剂、稳定剂、推进剂和增粘剂。适合于口服给药的药物制剂实例包括片剂、胶囊、粉剂、微颗粒、颗粒、液体和糖浆。适合于胃肠外给药的药物制剂实例包括注射剂、滴剂、栓剂、吸入剂和贴剂。向本发明药物中可以加入一种或多种活性成分。
对本发明药物的给药剂量没有特别限制，可以根据不同条件选择给药剂量，例如治疗或预防目的、疾病类型、患者的年龄或症状和给药途径。通常，对成人口服给药的每日剂量约为19mg-1,000mg，优选约为60-900mg每天。本发明特别优选使用的2-氧代-1-吡咯烷基乙酸2，6-二甲基N-酰苯胺(非专利名；奈非西坦)的急性毒性为2,005mg/kg(雄性小鼠，经口给药)，因此是非常安全的(日本特许出愿公报(公开)No.163144)。
实施例下面将通过实施例对本发明进行详细描述，实施例不应被理解为是对本发明的限制。
实施例11.突触后电位的测量(表1)利用标准技术从大鼠脑中制备海马切片(400μm)。将切片转移至记录室中，该记录室用经过95％O2和5％CO2气体饱和的34℃人工脑脊髓液(以mM计125 NaCl、5 KCl、1.24 KH2PO4、1.3 MgCl2、2 CaCl2、26 NaHCO3、10葡萄糖)进行连续过冷。用电刺激(0.2Hz)Schaffer侧副纤维/连合纤维途径，记录CA1区锥体细胞层中树状场的兴奋性突触后电位(表1)。
利用标准技术从大鼠脑中制备海马切片(400μm)。将切片转移至记录室中，用经过预定量O2和CO2气饱和的人工脑脊髓液进行连续过冷。用奈非西坦(0.01-10μM)处理，剂量依赖地促进了来自海马CA1区的激发性突触后电位(表2)。在1μM处理后60分钟观察到最大促进作用，大小约为150％(表1，表2)。这种作用被α-银环蛇毒素(α-BuTX)抑制，它是一种选择性神经元α7nACh受体拮抗剂(表3)。这种作用也被美加明抑制，它是一种非选择性神经元nACh受体拮抗剂；不过，抑制程度小于α-银环蛇毒素(表4)。这些结果说明，奈非西坦经由神经元nACh受体诱发对突触后电位的长期促进作用。
在GF109203X的情况下(它是一种选择性PKC抑制剂)奈非西坦从不加强突触后电位(表5)。相比之下，H89不显示这样的作用，它是一种cAMP依赖性PKA的选择性抑制剂(表5)。该结果说明，由奈非西坦诱发的对突触后电位的长期加强作用受PKC活化作用的调节。
表1奈非西坦对大鼠海马切片突触后电位的作用(随时间变化)
“nef.”表示用1μM奈非西坦处理(n＝7)。
表2奈非西坦对大鼠海马切片突触后电位的作用(剂量依赖性)奈非西坦 突触后电位(原始幅度的％)(μM) 平均±SD0.001 95±60.01 94±50.1 111±91156±610 144±11(n＝5-7)表3银环蛇毒素对大鼠海马切片被奈非西坦加强的突触后电位的作用
=>nef.1μM奈非西坦BuTX100 nM α-银环蛇毒素n5表4美加明对大鼠海马切片被奈非西坦加强的突触后电位的作用时间 突触后电位(原始幅度的％)(分钟)平均±SD (分钟) 平均±SD-30100± 73124±8 ←meca.-10100± 0←nef. 4129±4 ←meca.-9 108± 7←nef. 5129±9-8 113± 5←nef. 6137±9-7 123± 10 ←nef. 7137±5-6 136± 10 ←nef. 8139±5-5 137± 9←nef. 9143±5-4 137± 9←nef. 10145±6-3 140± 10 ←nef. 11150±7-2 139± 8←nef. 12150±8-1 141± 7←nef. 13153±90 144± 8←meca.14154±51 128± 10 ←meca.15155±42 123± 7←mecanef.1μM奈非西坦meca.3μM α-美加明n5
表5PKC抑制剂或PKA抑制剂对大鼠海马切片被奈非西坦加强的突触后电位的作用突触后电位(原始幅度的％)时间GF109203X H-89(分钟)平均 ±SD 平均 ±SD-30 102 ±3 103±4-10 100 ±0 100±0 ←nef.-994.2 ±6.8 109±2.2←nef.-896.2 ±9.5 112±4.6←nef.-799.7 ±11.2116±6 ←nef.-699.4 ±12.1116±7.2←nef.-5105 ±10.8122±9.8←nef.-4103.4±11.9128±11.35 ←nef.-3102.5±13.6132±17 ←nef.-2101.1±12.5136±16.3 ←nef.-1108.2±13.6142±9.8←nef.0106 ±11.4144±8.32105.5±11.7145±7.3499.25±11 150±76105.5±12 151±6.58104.5±12.7154±910 108.8±11.6155±8nef1μM奈非西坦。n是5。
GF109203XPKC选择性抑制剂H-89PKA抑制剂(N-[2-(对溴肉桂酰氨基)乙基]-5-异喹啉磺酰胺·2HCl)
表6奈非西坦对大鼠海马切片(用成对脉冲处理)突触后电位的作用促进作用(第1次脉冲的％)脉冲间间隔奈非西坦(-)奈非西坦(+)(秒/1000) 平均±SD 平均±SD50 164±22125±17100 134±21116±18150 124±17112±15在奈非西坦给药前和给药后10分钟，对切片施以50至150毫秒不等脉冲间间隔的成对脉冲。奈非西坦给药的切片显示了对突触后电位的成对脉冲促进作用。简单地说，所用第一脉冲诱发的反应被下一脉冲加强至最大120％。不过，脉冲始终低于不接受奈非西坦给药的切片(表6)；因此，认为奈非西坦最大地增加了谷氨酸盐的释放，起到兴奋性神经递质的作用。
实施例2非洲爪蟾卵母细胞内的体外转录和翻译(表7至10；图3)如前文所述构造大鼠α4β2受体与α7受体、GLUR1，2，3受体、NP152和NP153的mRNAs。手工从非洲爪蟾卵巢中分离卵母细胞，用胶原酶(0.5mg/ml)处理。然后，将处理过的卵母细胞在Barth溶液(以mM计88 NaCl，1 KCl，2.4 NaHCO3，0.82 MgSO4，0.33Ca(NO2)2，0.41 CaCl2，7.5 Tris；pH 7.6)中培养过夜。向卵母细胞中注入α4β2或α7受体mRNA，在18℃下培养。在某些情形中，NP152和NP153与α4β2和α7受体共同表达。将注射过的卵母细胞培养2-7天后，转移至记录室中，用标准青蛙Ringer溶液(以mM计115 NaCl，2 KCl，1.8 CaCl2，5 HEPES；pH 7.0)在室温(20-22℃)下进行连续过冷。为了排除内源性毒蕈碱性ACh受体的作用，向细胞外溶液中加入1μM阿托品。利用双电极电压夹技术和放大器(GeneClamp-500，Axon Instrument，Inc.USA)记录ACh激发性电流。将电流在微型计算机上用pClamp软件(Axon Instrument，Inc.；第6版)进行分析。由分析结果可以判断奈非西坦是否真正作用于nACh受体。α4β2和α7受体是在非洲爪蟾卵母细胞中表达的，电流是被ACh激发的。发现α-银环蛇毒素强烈地抑制α7受体，美加明强烈地抑制α4β2受体中的电流(图3)。
因此，这些发现支持了这样一种观点，这些受体存在于海马中，参与了对突触后电位的促进作用。
而且，奈非西坦(1μM)处理以时间依赖的方式加强了ACh激发性电流，在α4β2受体和α7受体的情况下，分别在处理后60分钟的时间点达到了180％和195％(表7)。
表7奈非西坦对非洲爪蟾卵母细胞中表达的α7和α4β2受体中激发性电流的作用(随时间变化)原始幅度的％时间 奈非西坦(+) 奈非西坦(-)(分钟) α4β2 α7 α4β2α7平均±SD 平均±SD 平均±SD平均±SD(n＝8) (n＝8) (n＝5) (n＝5)-30 128±5 100±2-20 116±4 100±3-10100 ± 0100 ± 0100±0 100±00108.9± 4.2 139.3±11.9 98±3.1 100±110119 ±10.6 155.3±16 97±4.2 99±220129.4±13.2 176.6± 5.1 96±3.6 99±330160.7±12.6 194.6± 8.8 95±5.6 98±240172.2±14.2 193.6± 2.2 95±2.1 98±150178.8±12.2 192.1± 2.8 94±3.4 98±460180.1± 9. 3 195 ± 6.3 94±2.2 97±3
在α4β2受体和α7受体中，分别在0.0001μM或以上和0.01μM或以上的浓度下观察到对ACh激发性电流的加强作用，分别在浓度为0.1和1μM下达到最大(表8)。奈非西坦对氯离子(Cl-)电流没有作用，该电流是被通过卵母细胞内nACh受体通道的Ca2+流入所激发的(数据没有表示出来)，说明奈非西坦作用于nACh受体，但是不作用于Ca2+激活的氯离子通道。ACh剂量响应曲线在奈非西坦给药进入α4β2和α7受体后没有漂移(表9)。
表8奈非西坦对非洲爪蟾卵母细胞细胞膜上表达的α7和α4β2受体的作用(剂量响应)原始幅度的％奈非西坦 α4β2 α7(μM)平均±SD 平均±SD0.0001 100.2±15.50.001 150.3±13.60.01 211.6±20.5 97.4± 5.50.1225.1±18.9181.4±10.81 160.7±12.6194.6± 8.810 155.9±17.6116.1± 7.2n＝5-8这意味着，奈非西坦对ACh激发性电流的加强作用不是由于对ACh亲和性的调节作用所产生的。在两种受体中，该加强作用完全被GF109203X所抑制，提示奈非西坦通过PKC激活来加强电流。
另外，奈非西坦从不加强与活性PKC抑制性肽(NP152；αPKCI)共同表达的α4β2和α7受体中的电流(Peunova，N.等，《自然》364，450-453，1993)。
相形之下，在失活PKC抑制性肽(NP153；iPKCI)的情况下，电流分别被加强至169.3％和193.6％。这证明，奈非西坦与PKC途径发生相互作用，导致经由PKC激活对ACh激发性电流的长期加强作用。
表9奈非西坦处理对非洲爪蟾卵母细胞细胞膜上表达的α4β2受体中ACh激发性电流的作用归一化响应(％)ACh α4β2α4β2α7 α7(μM)nef(-)nef(+)nef(-) nef(+)平均 平均 平均平均0.10 0 001 3 2 0.5 1.510433613100 756628 351000 100 100 100 100(+)nef加入奈非西坦(1μM)(-)nef没有加入奈非西坦n＝5
表10选择性PKC抑制剂和PKC抑制性肽对奈非西坦对非洲爪蟾卵母细胞ACh激发性电流的加强作用的作用原始幅度的％α4β2 α7平均 ± SD 平均±SDnef.(-) 95±5.6 98±2nef.(+) 160±5.6 194.6±8.8GF109203X 79.3±15 102.2±9.6GF109203X+nef.80.5±10 108±6NP152 78±12.5 95± 3.1NP152+nef.78.1±10 96.1±6NP153 80±997±5NP153+nef.169.3±12193.6±17.7星形孢菌素 90±8101±8星形孢菌素 + 93±13 103±12nef.H8998.8±12 99.4±5.8H89+nef. 163.9±20180.4±19.6NP210 95.5±8 99±12NP210+nef. 160±18 188±21NP211 94±11 98±12NP211+nef. 162±21 196±22GDPβS 96±10 100±11GDPβS+nef.185±14 201±18nef奈非西坦(1μM)GF100 nM GF109203XNP152α-PKC1，PKC抑制性肽NP153i-PKC1，PKC抑制性(失活)肽H-89蛋白激酶A(PKA)选择性抑制剂(N-[2-(对溴肉桂基氨基)乙基]-5-异喹啉磺酰胺·2HCl)NP210活性PKA抑制性肽NP211无活性PKA抑制性肽GDPβS广谱G蛋白抑制剂n＝6-8
从表10可以明显看出，在与PKA有联系的H-89、NP-210或NP-211的情况下，观察到奈非西坦的显著加强作用。在G蛋白(GTP结合蛋白)抑制剂(GDPβS)的情况下，也观察到类似的作用。不过，在一种选择性PKC抑制剂星形孢菌素的情况下，从没有观察到奈非西坦的这种作用。这些都证明，奈非西坦是以PKC为媒介发挥其作用的。
实施例3奈非西坦对海马切片谷氨酸盐释放的增加作用利用豚鼠的海马切片，在有或没有河豚毒素(0.5μM；TTX)和电刺激(ES)的情况下，进行谷氨酸盐释放试验。在有或没有α-银环蛇毒素(50nM)或美加明(缩写为MCA；3μM)的情况下，将切片在含有奈非西坦(1μM)的标准溶液中处理，进行定量试验。每条表示独立进行的实验结果平均值(±SD)。按照ANNOVA，利用Fischer最小平方法确定统计学意义。
海马切片用一对银电极(10Hz，5V，持续0.1毫秒)刺激10分钟，间隔为一分钟。在有或没有河豚毒素的情况下，将一些切片用经过95％O2和5％CO2气体饱和过的标准ACSF(人工脑脊髓液)在36℃下培养。在有或没有α-银环蛇毒素或美加明的情况下，将奈非西坦对其他切片给药。用HPLC测量释放进入培养基中的谷氨酸盐。
表11-1谷氨酸盐的释放所释放的谷氨酸盐的量处理 nmol/mg蛋白质/10分钟1. St (ES-) 0.86±0.32. St (ES+) 2.03±0.43. St (ES+)+河豚毒素 0.85±0.34. St (ES+)+奈非西坦 3.23±0.5(a)5. St (ES+)+α-银环蛇毒素1.68±0.2(b)6. St (ES+)+美加明 2.45±0.3(c)
(a)显著性差异为0.01((2)与(4)比较)(b)显著性差异为0.01((2)与(4)比较)(c)显著性差异为0.1((6)与(4)比较)St(ES-)没有电刺激St(ES+)电刺激在使用海马切片的实验中，由电刺激诱发的去极化作用释放兴奋性神经递质谷氨酸盐。奈非西坦(1μM)处理显著增加了谷氨酸盐的释放(表11-1)。由奈非西坦处理诱发的(谷氨酸盐释放的)增加明显被α-银环蛇毒素或美加明抑制(表11-1)，说明奈非西坦是通过激活神经元nACh受体而增加谷氨酸盐释放的。
表11-2从大鼠海马CA1区记录下的奈非西坦对烟碱敏感性微小兴奋性突触后电流(mEPSC)的加强作用的影响和α-BuTX与MCA对该影响的作用时间(秒)mEPSC(归一化频率)平均±SD20.92±0.1240.93±0.0960.90±0.0980.86±0.0810 0.90±0.0612 0.90±0.0514 0.90±0.0516 0.93±0.0618 0.93±0.0520 0.97±0.0422 0.97±0.0424 0.96±0.0326 0.97±0.0228 0.98±0.0230 0.98±0.0132 0.97±0.0434 0.92±0.0536 0.93±0.0438 0.96±0.0340 0.95±0.0342 0.97±0.0344 0.96±0.0346 0.98±0.02
480.99±0.02500.99±0.02521.01±0.01541.00±0.01561.02±0.01581.02±0.01601.00±0 ←加入烟碱(1秒)[500nM]621.29±0.13641.25±0.07661.25±0.07681.27±0.10701.33±0.11721.32±0.09741.36±0.09761.34±0.08781.34±0.08801.34±0.07821.34±0.07841.36±0.06861.37±0.06881.38±0.05901.38±0.05921.42±0.06941.38±0.05961.38±0.05981.33±0.06100 1.34±0.06102 1.33±0.06104 1.34±0.04106 1.37±0.04108 1.38±0.04110 1.38±0.04112 1.39±0.04114 1.39±0.04116 1.38±0.04118 1.37±0.04120 1.35±0.04奈非西坦(1μM)使用10分钟(600秒)，在此过程中不进行记录。12分钟(720秒)后重新开始记录。
7201.79±0.13加入烟碱(1秒)[500nM]7221.66±0.097241.65±0.117261.69±0.097281.65±0.087301.65±0.087321.67±0.077341.68±0.077361.69±0.087381.70±0.087401.71±0.087421.71±0.087441.68±0.087461.65±0.087481.65±0.077501.64±0.067521.82±0.167541.80±0.117561.84±0.137581.87±0.157601.84±0.157621.81±0.137641.80±0.117661.79±0.117681.78±0.107701.75±0.097721.76±0.117741.76±0.117761.75±0.107781.74±0.107801.34±0.08 ←加入烟碱(1秒) [500nM]7821.32±0.07←α-BuTX+MCA7841.30±0.05←α-BuTX+MCA7861.36±0.09←α-BuTX+MCA7881.24±0.07←α-BuTX+MCA7901.20±0.08←α-BuTX+MCA7921.18±0.06←α-BuTX+MCA7941.00±0.04←α-BuTX+MCA7961.02±0.05←α-BuTX+MCA7981.00±0.02←α-BuTX+MCA8001.35±0.04←α-BuTX+MCA8021.01±0.04←α-BuTX+MCA8041.00±0.03←α-BuTX+MCA
8061.02±0.04←α-BuTX+MCA8081.00±0.03←α-BuTX+MCA8101.01±0.02←α-BuTX+MCA8121.00±0.04←α-BuTX+MCA8140.99±0.03←α-BuTX+MCA8160.98±0.03←α-BuTX+MCA8180.97±0.02←α-BuTX+MCA8200.95±0.04←α-BuTX+MCA8220.96±0.06←α-BuTX+MCA8240.98±0.04←α-BuTX+MCA8261.07±0.05←α-BuTX+MCA8281.02±0.04←α-BuTX+MCA8300.90±0.03←α-BuTX+MCA8321.00±0.03←α-BuTX+MCA8340.96±0.04←α-BuTX+MCA8360.95±0.02←α-BuTX+MCA8380.98±0.03←α-BuTX+MCA8400.95±0.04←α-BuTX+MCAα-BuTXα-银环蛇毒素(50nM)MCA美加明(3μM)n＝20从大鼠胎脑的海马CA1区收集细胞。培养细胞10-14天，从而建立初级神经元培养系统。通过药贴致痉挛法(patch-crampmethod)，记录细胞固有的烟碱敏感性微小兴奋性突触后电流(mEPSC)。首先，研究烟碱对固有mEPSC的作用。观察到烟碱导致的加强作用，证实了该培养系统中存在有突触传递系统。下面，加入奈非西坦10分钟。然后，将本发明药物充分洗涤，使用烟碱。mEPSC比单用烟碱进一步被增强了。随后，在有α-BuTX+MCA的情况下使用烟碱，它们是烟碱ACh受体抑制剂。结果，mEPSCs恢复至原来的水平。这些结果提示，奈非西坦对mEPSCs的加强作用是以烟碱ACh受体为媒介而发挥出来的。
表11-3从大鼠海马CA1区记录下的奈非西坦对烟碱敏感性微小兴奋性突触后电流(mEPSC)的加强作用的影响和GX109203X对该影响的作用时间(秒) mEPSC(归一化频率)平均±SD21.02±0.11 ←连续加入GF109203X直至试验结束41.03±0.0961.00±0.0880.96±0.0610 1.00±0.0712 1.00±0.0514 1.00±0.0716 0.96±0.0418 0.93±0.0520 0.97±0.0422 0.95±0.0324 0.96±0.0326 0.97±0.0528 1.02±0.0630 1.00±0.0432 0.97±0.0334 0.92±0.0236 0.93±0.0438 0.98±0.0440 0.97±0.0342 0.97±0.0444 0.96±0.0646 0.98±0.0548 1.02±0.0450 1.03±0.0552 1.01±0.0654 1.00±0.0456 1.02±0.0358 1.02±0.0460 1.00±0.06 ←加入烟碱(1秒) [500nM]62 1.61±0.1264 1.51±0.0966 1.44±0.0668 1.41±0.0570 1.39±0.1072 1.46±0.0174 1.44±0.0176 1.39±0
781.39±0.04801.32±0.02821.28±0.01841.24±0.01861.27±0.01881.28±0.02901.27±0.04921.23±0.04941.12±0.01961.19±0.06981.22±0.05100 1.20±0.05102 1.33±0.06104 1.27±0.01106 1.30±0.01108 1.34±0.01110 1.31±0.01112 1.30±0.03114 1.32±0.03116 1.34±0.02118 1.36±0.02120 1.35±0.03奈非西坦(1μM)使用10分钟(600秒)，在此过程中不进行记录。12分钟(720秒)后重新开始记录。
7201.14±0.06 ←加入烟碱(1秒) [500nM]7221.18±0.057241.12±0.057261.12±0.167281.02±0.117301.06±0.107321.04±0.117341.01±0.087361.03±0.017381.15±0.027401.13±0.057421.13±0.087441.15±0.087461.20±0.057481.23±0.077501.19±0.04
7521.19±0.047541.20±0.047561.24±0.057581.24±0.037601.24±0.037621.24±0.057641.27±0.057661.28±0.067681.28±0.067701.26±0.067721.23±0.047741.23±0.067761.23±0.077781.23±0.10GF109203X100nMn＝5以相似方法，在有选择性PKC抑制剂GF109203X的情况下，首先研究烟碱的作用。结果在最初阶段，烟碱增强了固有的mEPSCs。随后，加入奈非西坦10分钟。然后，将本发明药物充分洗涤，在有GF109203X的情况下使用烟碱。结果，mEPSCs比单用烟碱时降低了，恢复至原来的水平。这些结果提示，奈非西坦对mEPSCs的加强作用是以PKC为媒介而发挥出来的。
实施例4a奈非西坦对非NMDA受体电流的作用以类似于前文所述的方法，利用大鼠海马的CA1区记录突触后电位。在奈非西坦(1μM)给药前后，在有APV(100μM)(n＝5)或DNQX(5μM)(n＝5)的情况下记录电位。
表12奈非西坦对大鼠海马CA1区中记录下的突触后电位(非NMDA受体电流)的作用突触后电位(原始幅度的％)时间 DNOX APV(分钟) 平均 ±SD平均 ± SD-10 100±0100±0-9 86±6 95±5-8 81±1 93±3-7 73±3 93±5-6 73±3 93±3-5 70±9 89±9-4 62±7 87±7-3 59±9 88±8-2 58±8 89± 11-1 57±7 88±80 59±9 87±7←nef.159±8 93±9←nef.263±5102±5←nef.367±7106±6←nef.476±6110±9←nef.578±8112±8←nef.678± 10112±9←nef.776±6112±7←nef.877±7114±7←nef.978±8115±8←nef.10 79± 10120±6nef.奈非西坦(1μM)；n＝5APVD-2-氨基-5-膦酰基戊酸DNQX6，7-二硝基喹喔啉-2，3-二酮由奈非西坦诱发的对海马神经传递的促进作用被6，7-二硝基喹喔啉-2，3-二酮(DNQX)抑制，它是一种选择性非N-甲基-D-门冬氨酸盐(非NMDA)受体拮抗剂(表12)。不过，该作用不被D-2-氨基-5-膦酰基戊酸(APV)抑制，它是一种选择性NMDA受体拮抗剂(表12)。
结果说明，奈非西坦对突触后电位的加强作用的来源是α-氨基-3-羟基-5-甲基-5-甲基-4-异噁唑丙酸盐(AMPA)/红藻氨酸盐受体电流。
实施例4b奈非西坦对非洲爪蟾卵母细胞中表达的GluR1，2，3受体中红藻氨酸盐激发性电流的作用在非洲爪蟾卵母细胞中表达GluR1，2，3受体。在奈非西坦(1μM)处理前后记录由红藻氨酸盐(100μM)激发的细胞膜电流(n＝5)。保持电压固定在-30mV。奈非西坦从不加强AMPA(GluR1，2，3)受体电流(图1)。因此，结果说明，奈非西坦对突触后电位的加强作用不是由于突触后AMPA/红藻氨酸盐受体的调节作用而导致的。
这里列出的结果清楚地显示，nACh受体起到认知增强剂的目标的作用。
实施例5奈非西坦对Ach激发性电流的作用利用双电极电压夹技术记录细胞膜电流(T.Nishizaki等，Ikeuchi，《脑研究》687，214，1995)。在卵母细胞用奈非西坦处理前和处理后10分钟，将ACh(100μM)对表达正常ACh受体的单个卵母细胞给药，间隔为10分钟。保持电压为-30mV。按照常规方法，在非洲爪蟾卵母细胞中表达了野生型的乙酰胆碱(nACh)受体(K.Sumikawa等，《脑分子研究》5，183，1989)，利用ACh(100μM)激发了向内的膜电流(表13)。以10分钟间隔记录电流。在记录过程中，电流的自发衰减在5％以内(数据没有表示出来)。当低浓度(不足微摩尔)的奈非西坦—用在本发明中的一种向精神药剂—给药10分钟时，ACh激发性电流的幅度显著减小(表13)。洗去药物后，幅度逐渐恢复(表13)。奈非西坦浓度为0.01μM时，电流减小70％(n＝7)，浓度为0.1μM时，电流减小62％。
表13奈非西坦对ACh激发性电流的作用原始幅度的％时间 奈非西坦(分钟)0.01μM 0.1μM 1μM 10μM平均±SD 平均±SD 平均±SD平均±SD-10 100± 0100± 0 100± 0 100± 00 30± 938±11134±10 155±1510 37±13 45±14150±15 158±1120 40±15 49±15155±18 162±2030 63±19 54±15170±21 169±1640 65±20 66±16188±16 177±1950 75±18 80±20190±25 195±2060 94±23 90±21209±28 216±1670 104±19 103±20219±20 230±1880 106±20 120±19244±29 260±2290 105±15 122±14243±20 255±18(n＝7)相比之下，用较高(微摩尔)浓度奈非西坦处理10分钟，电流逐渐增强，洗去药物后90分钟达到243％(n＝7，1μM)或255％(n＝7，10μM)(表13)。在不足微摩尔浓度的奈非西坦(0.1μM)给药抑制了电流的条件下，使用微摩尔(≥1μM)的奈非西坦导致电流从抑制转为增强(表13和14)。
这提示至少两种不同的信号转导途径参与了该奈非西坦的双相作用。
表14奈非西坦对非洲爪蟾卵母细胞中表达的电鳐属nACh受体(α，β，γ，δ)的作用时间 原始幅度的％(分钟) 平均±SD-10 100±0←nef.(0.01μM)0 32±910 39±820 43±12←nef.(1μM)30 140±1540 158±750 163±10(n＝7)nef.奈非西坦处理实施例6a奈非西坦对钙依赖性氯化物电流和钙通过正常nACh受体流入的作用按照上述方法记录突触后电位(PS)和电压夹。按照上述方法在非洲爪蟾卵母细胞中表达ACh受体。
在不含阿托品的青蛙Ringer溶液中，将乙酰胆碱(ACh)(100μM)对没有表达过ACh受体的卵母细胞给药。保持电压为-30mV。
在非洲爪蟾卵母细胞表达系统中，ACh激发性电流已知是由ACh开关通道电流和钙依赖性氯化物电流组成的(R.Miledi等，《生理学杂志》357，173，1984)。不过，奈非西坦对因内源性毒蕈碱性ACh受体受刺激诱发产生的钙依赖性氯化物电流没有作用(图2)。
实施例6b用钙绿载入表达正常ACh受体的卵母细胞。在不含Ca2+的细胞外溶液(extCa2+(-))中或在普通的细胞外溶液(将钙绿TM-1(Molecular Probes，Inc.USA)注入卵母细胞)中进行ACh(100μM)给药，记录两者的细胞内钙([Ca2+]i)和激发性电流(IA)。用强度的Δ增加量(δI)/基本强度/由不含钙的介质得到的电流幅度(μA)对Ca2+的升高进行归一化处理。
表15中，每个数值都代表七个卵母细胞的平均值(SD标准偏差)。非洲爪蟾属卵母细胞表达系统中ACh激发性电流由乙酰胆碱开关通道电流和钙依赖性氯化物电流组成。奈非西坦对钙通过nACh受体通道的通透性没有作用(表15)。实施例6a和6b结果说明，奈非西坦调节乙酰胆碱开关通道电流，而不调节钙敏感性氯化物(Cl-)电流。
表15奈非西坦对正常ACh受体中钙通透性的作用归一化的Ca2+的升高(强度的Δ增加量/基本强度/电流幅度)平均±SD不含Ca2+的溶液 0±0正常溶液 6.5±1.5正常溶液+奈非西坦(1μM)6.6±1.4n＝7实施例7a奈非西坦介导的PKA活化作用对ACh激发性电流的调节作用在用奈非西坦(0.01μM)处理前后，对表达正常ACh受体的卵母细胞和表达缺乏PKA磷酸化部位的ACh受体突变体(mγΔPKA/Ser353，354m δΔPKA/Ser361，362)的卵母细胞都使用ACh(100μM)。表达正常ACh受体的卵母细胞在记录前用H-89(1μM)处理15分钟，或者在实验前用百日咳毒素(0.1μg/ml)处理24小时。表16中阐述的电流是在用奈非西坦处理前和处理后30分钟记录下的。保持电压为-30mV。表16中，每个点代表七个卵母细胞的平均值。
为了阐明介导奈非西坦诱发的电流抑制作用和加强作用的细胞内信号传递，而进行了尝试。
H89是一种cAMP依赖性蛋白激酶(PKA)选择性抑制剂，它抑制了0.01μM奈非西坦的抑制作用，相反，加强了电流。加强的量在奈非西坦处理后30分钟是72％(n＝7)(表16)。这提示，较低浓度的奈非西坦经由PKA活化作用导致了对电流的抑制作用。
同样，奈非西坦(0.01μM)抑制了实验中ACh激发性电流的抑制作用，实验中卵母细胞用一种G蛋白(Gi/o)抑制剂百日咳毒素(PTX)处理，抑制水平与H89处理的情况相等，但相反，加强了电流(表16)。
这提示奈非西坦的抑制作用是经由百日咳毒素敏感性G蛋白而以PKA活化作用为媒介的。
另外，微摩尔(μM)浓度奈非西坦的促进作用在有H89的情况更高(数据没有表示出来)。在有H89的情况下，用1μM奈非西坦处理后30分钟观察到的增加量为136％(n＝5)(数据没有表示出来)。这明显提示较高浓度(≥1μM)的奈非西坦仍然能够激活PKA，并保持电流抑制作用。
不过，这种抑制作用将被显然的电流加强作用所屏蔽。
为了进一步检查奈非西坦的电流抑制作用是否是由于受体的PKA磷酸化作用，在非洲爪蟾卵母细胞中表达γ与δ亚单位上缺乏有效PKA磷酸化部位的ACh受体突变体(mγΔPKA/Ser353，354m δΔPKA/Ser361，362)。
奈非西坦(0.01μM)没有降低ACh受体突变体中的ACh激发性电流，相反，处理后30分钟测量该电流增加至159％(n＝7)(表16)。这说明奈非西坦抑制电流是PKA活化作用诱发的ACh受体的PKA磷酸化作用的结果。
为了进一步检查电流抑制作用是否是由于nACh受体的PKA磷酸化作用，在非洲爪蟾卵母细胞细胞膜中表达γ与δ亚单位上缺乏有效PKA磷酸化部位的ACh受体突变体(mγΔPKA/Ser353，354m δΔPKA/Ser361，362)。本发明物质(0.01μM)没有减少ACh受体突变体中的ACh激发性电流，相反，增加了该电流(表16)。这说明，本发明物质抑制电流是通过可归因于PKA活化作用的ACh受体上PKA磷酸化作用。
显然，本发明物质影响两种类型的信号传递途径，这一点通过对ACh开关通道电流的加强作用和基于该机理的对PKA的活化作用得到了证明；即，对钙依赖性PKC的活化作用和PKC对ACh受体的磷酸化作用。
表16奈非西坦的介导作用对因激活PKA而引起的ACh激发性电流的调节作用原始幅度的％时间(分钟)αβγδ αβγδ+H89 αβγδ+PTXmγΔPKAmδΔPKA平均±SD 平均±SD 平均±SD 平均±SD-10100± 0 100± 0 100± 0 100± 0←nef.030± 9166±16154± 4 115± 41037±13 170±20156±10 118± 62040±15 173±18160± 7 151± 63063±19 172±13168±11 159±20nef.奈非西坦(0.01μM)处理。(n＝7)
实施例7b奈非西坦对表达正常ACh受体或缺乏PKA磷酸化部位的ACh受体突变体的卵母细胞的作用在有和没有GF109203X(100nM)的情况下或者在不含钙的细胞外溶液中，对表达正常ACh受体的卵母细胞和表达缺乏PKA磷酸化部位的ACh受体突变体(mγΔPKA/Ser353，354mδΔPKA/Ser361，362)的卵母细胞都使用ACh(100μM)。
每个数值代表从七个卵母细胞得到的平均值。在有选择性PKC抑制剂GF109203X的情况下，奈非西坦给药后30分钟时，不同微摩尔浓度(1-10μM)奈非西坦对ACh激发性电流的加强作用被抑制和减小至60％(n＝7)(表17)。这说明，奈非西坦经由PKC活化作用加强了ACh受体电流。在不含钙的介质中，从没有观察到该加强作用，电流减小至类似于GF109203X的程度(表17)。
而且，奈非西坦(1μM)对α和δ亚单位上缺乏有效PKC磷酸化位点的ACh受体突变体(mαγΔPKC/Ser333mδΔPKC/Ser377)没有表现出电流加强作用(V.M.Gehle等，《脑分子研究》5，183，1991)(表17)。这些结果说明，奈非西坦通过钙依赖性PKC的活化作用和之后的受体的PKC磷酸化作用，加强了ACh开关通道电流。因此，奈非西坦似乎作用于两种不同的信号转导途径一个负责百日咳毒素敏感性G蛋白调节的PKA活化作用，另一个负责钙依赖性PKC活化作用。
表17奈非西坦的介导作用对因激活PKC而引起的ACh激发性电流的调节作用原始幅度的％时间 mαΔPKCαβγδ+αβγδ+(分钟)αβγδ mδΔPKC GF109203XextCa2+(-)平均±SD 平均±SD 平均±SD 平均±SD-10100± 0 100± 0 100± 0 100± 0←nef.0134±10 74± 3 70± 381± 410150±15 75± 7 68±15 61± 620155±18 59± 7 63± 952± 730170±21 50± 6 60±16 48± 5nef.用奈非西坦(1μM)处理(n＝7)实施例8A奈非西坦对突触后电位(PS)的作用按照上述方法，记录来自锥体细胞层CA1区的突触后电位。从大鼠脑制备海马切片，记录锥体细胞层CA1区的场突触后电位。切片用所示浓度的奈非西坦处理。各浓度奈非西坦的作用的时间过程总结在表18中。每个数值代表在-10分钟记录的突触后电位(基线)的％(n＝6)。为了判定在奈非西坦介导的信号传递中的功能作用，记录锥体细胞层CA1区的树状场突触后电位。
有意思的是，奈非西坦对突触后电位也发挥出剂量依赖性双相作用在较低浓度(≤0.1μM)下为短时间的抑制作用，在较高浓度(≥1μM)下为类似于LTP的长期增强作用(表18-1)。表18-1奈非西坦对突触后电位(PS)的作用突触后电位(PS)(原始幅度的％)奈非西坦时间0.01μM 0.1μM 1μM 10μM(分钟)平均±SD 平均±SD 平均±SD平均±SD-30 100±2 100±5 100±3 100±4-20 100±5 100±3 100±7 100±5-10 100±0 100±0 100±0 100±0←nef.-9 95±5 100±8 108±1 97±7←nef.-8 90±9 96±9 109±2 110±6←nef.-7 81±9 91±9 111±2 115±6←nef.-6 75±8 87±6 122±8 121±8←nef.-5 76±8 85±9 133±6 116±3←nef.-4 74±8 81±13 127±4 122±9←nef.-3 75±6 75±6 132±7 126±7←nef.-2 74±7 75±9 132±7 138±7←nef.-1 79±4 78±10 131±9 135±6←nef.0 81±1181±6 131±8 133±82 80±7 81±5 136±9 135±44 81±8 83±5 129±6 135±66 83±1285±9 131±9 135±88 85±9 87±13 135±9 137±610 85±5 87±12 143±2 137±615 86±5 88±9 144±1 143±620 85±9 94±10 142±12 144±225 85±13100±14144±8 143±530 86±5 101±7 140±10 143±735 86±1 106±8 141±10 144±840 89±3 111±10155±5 145±1245 88±4 109±9 153±9 142±550 92±2 111±6 155±10 142±555 93±6 110±10156±7 143±960 94±5 111±9 156±6 144±11(n＝6)
表18-2奈非西坦对场兴奋性突触后电位(fEPSP)的作用fEPSP(基线EPSP斜率的％)时间(分钟) 对照 奈非西坦(1μM)平均±SD 平均±SD-30 102± 3103± 5-10 100± 0100± 0 ←加入奈非西坦(10分钟)0 101± 2120± 85 100± 4151±1010 99± 5173±1815 98± 2170± 820 97± 4175±1425 100± 3180±1230 95± 2180±1535 98± 6182±1740 95± 5183±1645 92± 4185±1950 99± 3190±1755 97± 6195±1460 95± 8192±1690 94±15 191±18120 96±14 198±20150 97± 9198±12180 92±17 190±19210 91±14 186±14240 90±12 180±20对照组n＝5奈非西坦组n＝7研究了奈非西坦诱发的对海马突触传递的长期促进作用。通过电刺激大鼠海马切片的Schaeffer侧副途径，记录CA1区锥体细胞层中的场兴奋性突触后电位(fEPSP)。对海马切片使用奈非西坦(1μM)10分钟。使用奈非西坦后，fEPSPs逐渐增加。直到实验结束即240分钟后仍观察到这种作用(表18-2)。另一方面，对照组(未经处理的组)没有观察到变化。这些结果证明，奈非西坦长时间促进fEPSPs，而不用强直性刺激。
下面，对本发明药物发挥的上述作用是否不同于使用强直性刺激所发挥出来的长期加强(LTP)作用的开始机理进行了研究。比较下列三个组第1组单用强直性刺激；第2组用奈非西坦+强直性刺激；第3组用强直性刺激+奈非西坦。结果，即使随后使用强直性刺激，已被奈非西坦加强的fEPSPs也不再加强。同样，即使随后使用奈非西坦，已被强直性刺激加强的fEPSPs也不再被加强。这两种类型fEPSP的加强幅度与强直性刺激的幅度相等。这些结果提示，奈非西坦的作用具有被LTP共享的机理(表18-3)。
表18-3比较强直性刺激与奈非西坦对场兴奋性突触后电位作用之间的相互作用fEPSP(基线EPSP斜率的％)时间 单用 奈非西坦+强直性刺激+(分钟) 强直性刺激 强直性刺激奈非西坦平均±SD 平均±SD 平均±SD-30 102±3 103±5102±4-10 100±0 100±0←nef. 100±00 101±6←tetanus 119±15 102±20←tetanus5 195±19 155±15 197±2210 184±18 173±11 187±2415 190±14 181±18 189±2520 184±26 182±12 195±2725 182±24 188±16 199±2530 189±22 187±23 192±2435 193±18 189±25 192±2340 194±21 182±26 187±2445 188±22 184±19 193±2450 193±19 186±21 197±2555 195±23 182±20 188±2960 196±24 185±18←tetanus 191±24←nef.65 201±26 198±18 191±1770 194±22 178±21 197±2675 190±19 183±18 203±3280 188±22 191±20 213±3385 195±28 185±16 208±2190 199±24 189±24 206±3095 196±21 187±22 206±34100 194±18 192±19 207±31105 200±25 194±26 201±31110 201±21 192±13 201±32115 198±27 191±13 209±30120 197±19 174±22 208±33tetanus强直性刺激(100Hz 1秒)nef.加入奈非西坦(10分钟)强直性刺激n＝7奈非西坦+强直性刺激n＝7强直性刺激+奈非西坦n＝7
由于LTP是研究最集中的记忆的细胞模型(T.V.P.Bliss等，《自然》361，31，1993)，这里观察到的LTP样作用可能是向精神药剂改善记忆和学习的共同机理(M.Sarter等，《药理学科学趋势》12，456，1991)。
实施例8b在有α-银环蛇毒素或美加明的情况下，奈非西坦对突触后电位的作用在有α-银环蛇毒素(100nM)(n＝5)或美加明(3μM)(n＝5)的情况下，将奈非西坦(1μM)对海马切片给药。奈非西坦对突触后电位的长期增强作用在有α-银环蛇毒素或美加明的情况下被抑制，前者是一种选择性α7 nACh受体拮抗剂，后者是一种非选择性神经元nACh受体拮抗剂(表19-1)。
表19-1在有α-银环蛇毒素或美加明的情况下，奈非西坦对突触后电位的作用突触后电位(原始幅度的％)时间α-BuTX美加明(3μM)(分钟)平均±SD 平均±SD-30100±5-10100± 4-5 100± 0 100± 0 ←BuTX或meca.-4 77± 6 81± 6 ←BuTX或meca.-3 63± 5 56± 5 ←BuTX或meca.-2 43± 1 50± 9 ←BuTX或meca.-1 44± 2 47± 4 ←BuTX或meca.0 43± 1 41± 3 ←BuTX或meca.+nefi.1 52± 2 63± 7 ←BuTX或meca.+nefi.2 54± 9 63± 5 ←BuTX或meca.+nefi.3 53± 9 63± 4 ←BuTX或meca.+nefi.4 54± 5 63± 8 ←BuTX或meca.+nefi.5 53±10 65±10 ←BuTX或meca.+nefi.6 55± 4 68± 5 ←BuTX或meca.+nefi.7 55± 6 70± 4 ←BuTX或meca.+nefi.8 59± 8 73± 7 ←BuTX或meca.+nefi.9 64± 3 75± 6 ←BuTX或meca.+nefi.10 65± 7 78± 911 63± 3 95±1012 63± 7 97± 813 65± 6 108± 714 75± 3 122± 815 83± 8 126± 516 133± 5 134± 517 133± 9 145±1018 133± 4 150± 919 140± 5 153± 820 141± 8 153± 6BuTXα-银环蛇毒素(100μM)meca美加明(3μM)nefi奈非西坦(1μM)(n＝5)
实施例19-2α-BuTX对奈非西坦关于场兴奋性突触后电位(fEPSPs)影响的作用fEPSP(基线EPSP斜率的％)奈非西坦(1μM)时间(分钟)平均±SD-30 103±1.5-20 96±6 ←从这点开始直至实验结束，连续加入α-BuTX-15 98±10.5-10 99±7.5←加入奈非西坦(10分钟)-5 98±60 99±10.55 92±4.510 105±5.515 100±5.520 104±325 106±6.730 108±835 108±6.540 102±5.345 104±7.350 108±4.555 102±560 106±5.5n＝3α-BuTX50 nM以类似于上述的方法，并利用海马切片，研究了奈非西坦在有烟碱受体抑制剂的情况下对场兴奋性突触后电位(fEPSPs)的作用。两种类型的神经元烟碱ACh受体是已知的，即α7和α4β2受体。当在有α-BuTX(选择性α7抑制剂)和MCA(选择性α4β2抑制剂)的情况下使用奈非西坦时，完全观察不到它的加强作用(表19-2和19-3)。由此提示奈非西坦的增加作用是以烟碱ACh受体为媒介而发挥的。
表19-3MCA对奈非西坦诱发对场兴奋性突触后电位(fEPSPs)加强作用的影响fEPSP(基线EPSP斜率的％)奈非西坦(1μM)时间(分钟)平均±SD-30 103±3-20 95±2←从这点开始直至实验结束，连续加入MCA-15 97±4-10 100±0←加入奈非西坦(10分钟)-5 98±2.50 102±6.55 96±6.510 91±415 94±320 96±2.525 93±430 94±635 97±1.540 100±545 98±250 99±3.555 101±5.560 103±8n＝5MCA3μM实施例8c在有PKC抑制剂或PKA抑制剂的情况下，奈非西坦对突触后电位的作用在有或没有H-89(1μM)或GF109203X(100nM)的情况下，在奈非西坦(0.01和1μM)处理前后记录突触后电位。每个数值代表奈非西坦处理后10分钟基线的％(n＝5)。正如在卵母细胞表达系统的情况，低浓度(0.1μM)奈非西坦的抑制作用被H89处理所抑制，高浓度奈非西坦的加强作用被GF109203X抑制(表20)。
这说明，奈非西坦经由PKA和PKC活化作用调节海马神经传递，二者是有差异的。
表20在有H89或GF109203X的情况下，奈非西坦处理对海马突触后电位的作用突触后电位(原始幅度的％)奈非西坦 对照 H-89(1μM) GF109203X(100nM)(μM)平均±SD平均±SD 平均±SD0.01 85±5 103±8 50±51 143±2 155±8 108.8±11.6尽管ACh激发性电流研究中所列举的数据是从电鳐属nACh受体得到的，微摩尔浓度奈非西坦也在细胞中通过PKC活化作用诱发了对电流的长期加强作用，在该细胞中，α7和α4β2受体—主要作为神经元nACh受体存在—已被表达(P.B.S.Clarke等，《神经科学杂志》5，1307，1985；E.Wadabe等，《比较神经学杂志》284，314，1989；C.M.Flores等，《分子药理学》41，31，1992；E.Dominguez del Toro等，《比较神经学杂志》349，325，1994)。这说明，奈非西坦对电鳐属nACh受体的作用能够推广到神经元nACh受体。
表21H-89对奈非西坦诱发的场兴奋性突触后电位(fEPSPs)加强作用的影响fEPSP(基线EPSP斜率的％)奈非西坦(1μM)时间(分钟)平均±SD-30 108±3-20 103±4←从这点开始直至实验结束，连续加入H-89-15 105±5-10 100±0←加入奈非西坦(10分钟)-5114±170 124±205 149±2110158±2215164±2120170±2225179±2430175±2335185±2440180±2145182±2250178±2155180±2260184±18n＝5H-891μMH-89N-[2-(对溴肉桂基氨基)乙基]-5-异喹啉磺酰胺·2HCl以类似于上述的方法，并利用海马切片，研究了奈非西坦在有PKC抑制剂或PKA抑制剂的情况下对场兴奋性突触后电位(fEPSPs)的作用。当在有H-89(选择性PKA抑制剂)的情况下使用奈非西坦时，观察到显著的加强作用，而当在有GF109203X(选择性PKC抑制剂)的情况下使用奈非西坦时，从没有观察到加强作用(表21和22)。这提示可归因于奈非西坦的增加作用是以PKC为媒介发挥的。
表22GF109203X对奈非西坦诱发的场兴奋性突触后电位(fEPSPs)加强作用的影响fEPSP(基线EPSP斜率的％)奈非西坦(1μM)时间(分钟)平均±SD-30 102±3-20 100±4←从这点开始直至实验结束，连续加入GF109203X-15 98±5-10 100±0←加入奈非西坦(10分钟)-5 98±7096±10599±1110 99±1215 105±1120 103±1225 103±1430 101±1335 108±1440 106±1145 106±1250 99±1155 106±1260 105±13n＝5GF109203X100nM
表23APV对奈非西坦诱发的场兴奋性突触后电位(fEPSPs)加强作用的影响fEPSP(基线EPSP斜率的％)时间(分钟) 奈非西坦(1μM)平均±SD-30 118±11-20 105±12 ←从这点开始直至实验结束，连续加入APV-15 102±9-10 100±0 ←加入奈非西坦(10分钟)-5105±120 102±95 135±910148±1015172±1120184±625194±1230189±1635194±1340187±1145193±1450196±955199±1060196±11n＝5APV1μMAPV2-氨基-5-膦酰基戊酸盐以类似于上述的方法，并利用海马切片，研究了奈非西坦在有NMDA受体抑制剂的情况下对场兴奋性突触后电位(fEPSPs)的作用。当在有APV(选择性NMDA抑制剂)的情况下使用奈非西坦时，观察到显著的加强作用(表23)。这提示可归因于奈非西坦的增加作用是不以NMDA为媒介发挥的。
表24奈非西坦对脑中兴奋性突触后电位的作用(体内)兴奋性突触后电位(基线峰幅度的％)时间对照奈非西坦(7.5mg/kg)(分钟) 平均±SD 平均±SD-3098±6 99±5-20 102±5105±3-10 100±4 98±30 100±0100±0 ←奈非西坦给药10103±4120±320100±5127±930 98±9151±1540100±3148±850105±5186±2560102±8166±2070103±7181±1580100±10 173±2490 99±6159±2110096±5174±12110 102±7168±17120 100±5173±20130 106±3189±22140 100±2177±15150 109±6185±17160 103±8171±20170 104±4165±1318096±7159±1619095±9165±1920094±11 183±1921099±9192±2522096±8206±2223097±11 175±1924094±13 180±2448090±14 182±2272088±12 170±2096082±16 167±25对照组n＝5奈非西坦组n＝7研究了奈非西坦对脑中兴奋性突触后电位(PS)的作用(体内)。
准备一组小鼠。固定每只小鼠的头部，将电极插入海马区的粒细胞层。记录PS。肌内注射奈非西坦(7.5mg/kg)。奈非西坦给药为兴奋性突触后电位提供了长时间的显著的加强作用。即使在960分钟后仍可证实这种作用。因此，所得体外作用也在使用上述海马切片的体内实验中得到了证实。如上所述，结果清楚地证明，向精神药物奈非西坦能够影响两种与PKA和PKC活化作用有联系的信号转导途径，提供了一条理解向精神药剂的细胞机理的线索。
本发明药物具有长时间促进海马神经传递的作用(LTP样作用)，而无需强直性刺激。由于这种作用，本发明药物是由常压脑积水导致的痴呆的有效治疗药，是阿尔茨海默氏病的有效治疗和预防药。本发明物质可用作一种向精神药物，不用电刺激即可长时间促进海马神经传递，这基于对PKC途径的长期活化作用与对突触前烟碱乙酰胆碱受体的长期活化作用之间的相互作用，还基于伴随增加谷氨酸盐释放的作用。
本发明公开的物质，即在没有电刺激的情况下表现出LTP样作用的物质，是向精神药物的极好候选药物。
该物质—不用电刺激即可长时间促进海马神经传递，这基于对PKC途径的长期活化作用与对突触前烟碱乙酰胆碱受体的长期活化作用之间的相互作用，还基于伴随增加谷氨酸盐释放的作用—是向精神药物的候选药物，用于阿尔茨海默氏病等，也是治疗药的候选药物，用于由常压脑积水导致的痴呆。
权利要求
1.一种向精神药物，含有一种物质作为活性成分，该物质长时间激活蛋白激酶C活化途径。
2.一种向精神药物，含有一种物质作为活性成分，该物质提供了蛋白激酶C的长期活化与烟碱乙酰胆碱受体的长期活化之间的相互作用。
3.一种向精神药物，含有一种物质作为活性成分，该物质长时间激活蛋白激酶C活化途径，从而基于与蛋白激酶C的相互作用激活突触前烟碱乙酰胆碱受体，由此长时间增加谷氨酸盐的释放，用于长时间改善海马神经传递。
4.一种向精神药物，含有一种物质作为活性成分，该物质无需电刺激就能引起LTP样作用。
5.根据权利要求1至3任意一项的向精神药物，它是一种治疗药，用于由慢性硬膜下出血导致的痴呆的治疗。
6.根据权利要求1至3任意一项的向精神药物，它是一种治疗药，用于由脑积水导致的痴呆的治疗。
7.根据权利要求1至6任意一项的向精神药物，其中所述物质是具有下式(1)的2-氧代-1-吡咯烷基烷基羧酸酰胺
[其中R代表氢原子或羟基；R1代表氢原子或甲基；R2代表吡啶基或具有1至3个彼此可以相同或不同的取代基的取代苯基，其中在该苯基上的取代基可以是卤原子，三氟甲基，硝基，乙酰基，C1-4直链或支链烷基，C1-4直链或支链烷氧基，C1-7直链或支链烷基巯基，由-S-(CH2)n-CH(R3)(R4)代表的取代的烷基巯基[其中n代表1或2；R3代表氢原子或甲基；R4代表羟基或由-N(R8)(R9)代表的氨基(其中R8代表氢原子或甲基，R9代表甲基、苄基或取代的苄基，或者R8和R9可以彼此连接，与式中的N共同构成取代的吡咯烷环)]，由-SO2R5代表的磺酰基(其中R5代表氨基或C1-3烷基)，或由-COO(CH2)2-N(R6)(R7)代表的取代的氨基乙氧基羰基(其中R6和R7各自代表氢原子、甲基或乙基)]，或其药学上可接受的酸加成盐。
8.根据权利要求1至6任意一项的向精神药物，其中所述物质选自由下列化合物组成的组(1)2-氧代-1-吡咯烷基乙酸2，6-二甲基N-酰苯胺；(2)4-羟基-2-氧代-1-吡咯烷基乙酸2，6-二乙基N-酰苯胺；(3)4-羟基-2-氧代-1-吡咯烷基乙酸2，6-二甲基N-酰苯胺；(4)2-[2-氧代吡咯烷基]丙酸N-3-吡啶基酰胺；(5)2-氧代-1-吡咯烷基乙酸4-异丙基巯基N-酰苯胺；(6)2-[2-氧代-1-吡咯烷基]-1-丙酸-4-(2-丁基巯基)N-酰苯胺；(7)2-[2-氧代-1-吡咯烷基]丙酸-4-异丙基N-酰苯胺；(8)2-[2-氧代-1-吡咯烷基]丙酸-2，4-二甲基N-酰苯胺；(9)2-[2-氧代-1-吡咯烷基]丙酸-2，4，6-三甲基N-酰苯胺；(10)2-[2-氧代-1-吡咯烷基]丙酸-2-甲氧基-5-甲基N-酰苯胺；(11)2-[2-氧代-1-吡咯烷基]丙酸-2，6-二氯N-酰苯胺；(12)2-吡咯烷酮-乙酰胺；(13)1-茴香酰-2-吡咯烷酮；和(14)4-羟基-2-氧代-1-吡咯烷乙酰胺。
9.根据权利要求1至6任意一项的向精神药物，其中所述物质选自由2-氧代-1-吡咯烷基乙酸2，6-二甲基N-酰苯胺、2-吡咯烷酮-乙酰胺、1-茴香酰-2-吡咯烷酮和4-羟基-2-氧代-1-吡咯烷乙酰胺组成的组。
10.根据权利要求1至6任意一项的向精神药物，其中所述物质是奈非西坦。
11.一种长期大脑神经传递促进剂，含有由下式(1)代表的化合物作为活性成分
[其中R代表氢原子或羟基；R1代表氢原子或甲基；R2代表吡啶基或具有1至3个彼此可以相同或不同的取代基的取代苯基，其中在该苯基上的取代基可以是卤原子，三氟甲基，硝基，乙酰基，C1-4直链或支链烷基，C1-4直链或支链烷氧基，C1-7直链或支链烷基巯基，由-S-(CH2)n-CH(R3)(R4)代表的取代的烷基巯基[其中n代表1或2；R3代表氢原子或甲基；R4代表羟基或由-N(R8)(R9)代表的氨基(其中R8代表氢原子或甲基，R9代表甲基、苄基或取代的苄基，或者R8和R9可以彼此连接，与式中的N共同构成取代的吡咯烷环)]，由-SO2R5代表的磺酰基(其中R5代表氨基或C1-3烷基)，或由-COO(CH2)2-N(R6)(R7)代表的取代的氨基乙氧基羰基(其中R6和R7各自代表氢原子、甲基或乙基)]，或其药学上可接受的酸加成盐。
12.一种大脑神经传递促进剂，它含有一种化合物，该化合物选自由下列化合物(1)至(14)组成的组(1)2-氧代-1-吡咯烷基乙酸2，6-二甲基N-酰苯胺；(2)4-羟基-2-氧代-1-吡咯烷基乙酸2，6-二乙基N-酰苯胺；(3)4-羟基-2-氧代-1-吡咯烷基乙酸2，6-二甲基N-酰苯胺；(4)2-[2-氧代吡咯烷基]丙酸N-3-吡啶基酰胺；(5)2-氧代-1-吡咯烷基乙酸4-异丙基巯基N-酰苯胺；(6)2-[2-氧代-1-吡咯烷基]-1-丙酸4-(2-丁基巯基)N-酰苯胺；(7)2-[2-氧代-1-吡咯烷基]丙酸4-异丙基N-酰苯胺；(8)2-[2-氧代-1-吡咯烷基]丙酸2，4-二甲基-N-酰苯胺；(9)2-[2-氧代-1-吡咯烷基]丙酸2，4，6-甲氧基-5-甲基N-酰苯胺；(10)2-[2-氧代-1-吡咯烷基]丙酸2-甲氧基-5-甲基N-酰苯胺；(11)2-[2-氧代-1-吡咯烷基]丙酸2，6-二氯N-酰苯胺；(12)2-吡咯烷酮-乙酰胺；(13)1-茴香酰-2-吡咯烷酮；和(14)4-羟基-2-氧代-1-吡咯烷-乙酰胺。
13.一种蛋白激酶C活化途径的长期激活剂，它含有奈非西坦作为活性成分。
14.一种无需电刺激的LTP样作用诱导剂，它含有奈非西坦作为活性成分。
15.一种用于谷氨酸盐释放的长期增强剂，基于对蛋白激酶C活化途径的长期活化作用与对突触前烟碱乙酰胆碱受体的长期活化作用之间的相互作用，该长期增强剂含有奈非西坦作为活性成分。
16.一种长期脑神经传递增强剂，基于对蛋白激酶C活化途径的长期活化作用与对突触前烟碱乙酰胆碱受体的长期活化作用，该长期增强剂含有奈非西坦作为活性成分。
17.一种治疗药，用于由慢性大脑硬膜下出血导致的痴呆的治疗，该治疗药基于无需电刺激就能引起LTP样作用，具有对蛋白激酶C活化途径的活化作用并且含有奈非西坦作为活性成分。
18.一种治疗药，它含有奈非西坦作为活性成分并被用于由脑积水导致的痴呆，该治疗药基于无需电刺激就能引起LTP样作用并且具有对蛋白激酶C活化途径的活化作用。
19.一种向精神药物，它含有奈非西坦作为活性成分，该药物基于谷氨酸盐释放量的长时间增加而长时间促进海马神经传递，该增加作用是通过对蛋白激酶C活化途径的活化作用与对突触前烟碱乙酰胆碱受体的长期活化作用之间的相互作用所提供的。
20.一种长期海马神经传递改善剂，它含有奈非西坦作为活性成分，通过蛋白激酶C活化途径的活化作用和突触前烟碱乙酰胆碱受体的活化作用，该改善剂长时间增加谷氨酸盐的释放量。
21.一种用于谷氨酸盐释放的长期增强剂，它含有奈非西坦作为活性成分。
22.一种物质在向精神药物制备中的用途，该物质长时间激活蛋白激酶C活化途径。
23.一种物质在向精神药物制备中的用途，该物质提供了蛋白激酶C的长期活化与烟碱乙酰胆碱受体的长期活化之间的相互作用。
24.一种物质在向精神药物制备中的用途，该物质长时间激活蛋白激酶C活化途径，从而基于与蛋白激酶C的相互作用激活突触前烟碱乙酰胆碱受体，由此长时间增加谷氨酸盐的释放，用于长时间改善海马神经传递。
25.一种物质在向精神药物制备中的用途，该物质无需电刺激就能引起LTP样作用。
26.根据权利要求22至25任意一项的用途，其中该向精神药物是一种治疗药，用于由慢性硬膜下出血导致的痴呆的治疗。
27.根据权利要求22至25任意一项的用途，其中该向精神药物是一种治疗药，用于由脑积水导致的痴呆的治疗。
28.根据权利要求22至27任意一项的用途，其中所述物质是由下式(1)代表的2-氧代-1-吡咯烷基烷基羧酸酰胺
[其中R代表氢原子或羟基；R1代表氢原子或甲基；R2代表吡啶基或具有1至3个彼此可以相同或不同的取代基的取代苯基，其中在该苯基上的取代基可以是卤原子，三氟甲基，硝基，乙酰基，C1-4直链或支链烷基，C1-4直链或支链烷氧基，C1-7直链或支链烷基巯基，由-S-(CH2)n-CH(R3)(R4)代表的取代的烷基巯基[其中n代表1或2；R3代表氢原子或甲基；R4代表羟基或由-N(R8)(R9)代表的氨基(其中R8代表氢原子或甲基，R9代表甲基、苄基或取代的苄基，或者R8和R9可以彼此连接，与式中的N共同构成取代的吡咯烷环)]，由-SO2R5代表的磺酰基(其中R5代表氨基或C1-3烷基)，或由-COO(CH2)2-N(R6)(R7)代表的取代的氨基乙氧基羰基(其中R6和R7各自代表氢原子、甲基或乙基)]，或其药学上可接受的酸加成盐。
29.根据权利要求22至27任意一项的用途，其中所述物质选自由下列化合物组成的组(1)2-氧代-1-吡咯烷基乙酸2，6-二甲基N-酰苯胺；(2)4-羟基-2-氧代-1-吡咯烷基乙酸2，6-二乙基N-酰苯胺；(3)4-羟基-2-氧代-1-吡咯烷基乙酸2，6-二甲基N-酰苯胺；(4)2-[2-氧代吡咯烷基]丙酸N-3-吡啶基酰胺；(5)2-氧代-1-吡咯烷基乙酸4-异丙基巯基N-酰苯胺；(6)2-[2-氧代-1-吡咯烷基]-1-丙酸4-(2-丁基巯基)N-酰苯胺；(7)2-[2-氧代-1-吡咯烷基]丙酸4-异丙基N-酰苯胺；(8)2-[2-氧代-1-吡咯烷基]丙酸2，4-二甲基N-酰苯胺；(9)2-[2-氧代-1-吡咯烷基]丙酸2，4，6-甲氧基-5-甲基N-酰苯胺；(10)2-[2-氧代-1-吡咯烷基]丙酸2-甲氧基-5-甲基N-酰苯胺；(11)2-[2-氧代-1-吡咯烷基]丙酸2，6-二氯N-酰苯胺；(12)2-吡咯烷酮-乙酰胺；(13)1-茴香酰-2-吡咯烷酮；和(14)4-羟基-2-氧代-1-吡咯烷-乙酰胺。
30.根据权利要求22至27任意一项的用途，其中所述物质选自由2-氧代-1-吡咯烷基乙酸2，6-二甲基N-酰苯胺、2-吡咯烷酮-乙酰胺、1-茴香酰-2-吡咯烷酮和4-羟基-2-氧代-1-吡咯烷乙酰胺组成的组。
31.根据权利要求22至27任意一项的用途，其中所述物质是奈非西坦。
32.下式(1)的2-氧代-1-吡咯烷基烷基羧酸酰胺在长期大脑神经传递促进剂制备中的用途
[其中R代表氢原子或羟基；R1代表氢原子或甲基；R2代表吡啶基或具有1至3个彼此可以相同或不同的取代基的取代苯基，其中在该苯基上的取代基可以是卤原子，三氟甲基，硝基，乙酰基，C1-4直链或支链烷基，C1-4直链或支链烷氧基，C1-7直链或支链烷基巯基，由-S-(CH2)n-CH(R3)(R4)代表的取代的烷基巯基[其中n代表1或2；R3代表氢原子或甲基；R4代表羟基或由-N(R8)(R9)代表的氨基(其中R8代表氢原子或甲基，R9代表甲基、苄基或取代的苄基，或者R8和R9可以彼此连接，与式中的N共同构成取代的吡咯烷环)]，由-SO2R5代表的磺酰基(其中R5代表氨基或C1-3烷基)，或由-COO(CH2)2-N(R6)(R7)代表的取代的氨基乙氧基羰基(其中R6和R7各自代表氢原子、甲基或乙基)]，或其药学上可接受的酸加成盐。
33.选自由下列化合物(1)至(14)组成的组的化合物在长期大脑神经传递促进剂制备中的用途(1)2-氧代-1-吡咯烷基乙酸2，6-二甲基N-酰苯胺；(2)4-羟基-2-氧代-1-吡咯烷基乙酸2，6-二乙基N-酰苯胺；(3)4-羟基-2-氧代-1-吡咯烷基乙酸2，6-二甲基N-酰苯胺；(4)2-[2-氧代吡咯烷基]丙酸N-3-吡啶基酰胺；(5)2-氧代-1-吡咯烷基乙酸4-异丙基巯基N-酰苯胺；(6)2-[2-氧代-1-吡咯烷基]-1-丙酸4-(2-丁基巯基)N-酰苯胺；(7)2-[2-氧代-1-吡咯烷基]丙酸4-异丙基N-酰苯胺；(8)2-[2-氧代-1-吡咯烷基]丙酸2，4-二甲基N-酰苯胺；(9)2-[2-氧代-1-吡咯烷基]丙酸2，4，6-甲氧基-5-甲基N-酰苯胺；(10)2-[2-氧代-1-吡咯烷基]丙酸2-甲氧基-5-甲基N-酰苯胺；(11)2-[2-氧代-1-吡咯烷基]丙酸2，6-二氯N-酰苯胺；(12)2-吡咯烷酮-乙酰胺；(13)1-茴香酰-2-吡咯烷酮；和(14)4-羟基-2-氧代-1-吡咯烷-乙酰胺。
34.奈非西坦在蛋白激酶C活化途径的长期激活剂制备中的用途。
35.奈非西坦在无需电刺激的LTO样作用诱导剂制备中的用途。
36.奈非西坦在谷氨酸盐释放的长期增强剂制备中的用途，该增强剂基于对蛋白激酶C活化途径的长期活化作用与对突触前烟碱乙酰胆碱受体的长期活化作用之间的相互作用。
37.奈非西坦在长期大脑神经传递促进剂制备中的用途，该促进剂基于对蛋白激酶C活化途径的长期活化作用和对突触前烟碱乙酰胆碱受体的长期活化作用。
38.奈非西坦在治疗药制备中的用途，该治疗药用于由慢性大脑硬膜下出血导致的痴呆的治疗，基于无需电刺激就能引起LTP样作用，具有对蛋白激酶C活化途径的活化作用。
39.奈非西坦在治疗药制备中的用途，该治疗药用于由脑积水导致的痴呆的治疗，基于无需电刺激就能引起LTP样作用，具有对蛋白激酶C活化途径的活化作用。
40.奈非西坦在向精神药物制备中的用途，该向精神药物的作用是基于对海马神经传递的长期促进作用而发挥的，该促进作用是通过谷氨酸盐释放量的长时间增加而得到的，该增加作用是通过对蛋白激酶C活化途径的活化作用与对突触前烟碱乙酰胆碱受体的长期活化作用之间的相互作用所提供的。
41.奈非西坦在长期海马神经传递促进剂制备中的用途，通过蛋白激酶C活化途径的活化作用和突触前烟碱乙酰胆碱受体的活化作用，该促进剂的作用是基于谷氨酸盐释放量的长时间增加而发挥的。
42.奈非西坦在谷氨酸盐释放的长期增强剂制备中的用途。
43.用于增强认知的治疗方法，其特征在于将一种物质对受治疗者给药，该物质长时间激活蛋白激酶C活化途径。
44.用于增强认知的治疗方法，其特征在于将一种物质对受治疗者给药，该物质提供了蛋白激酶C的长期活化与烟碱乙酰胆碱受体的长期活化之间的相互作用。
45.用于增强认知的治疗方法，其特征在于将一种物质对受治疗者给药，该物质长时间激活蛋白激酶C活化途径，从而基于与蛋白激酶C的相互作用激活突触前烟碱乙酰胆碱受体，由此长时间增加谷氨酸盐的释放，用于长时间改善海马神经传递。
46.用于增强认知的治疗方法，其特征在于将一种物质对受治疗者给药，该物质无需电刺激就能引起LTP样作用。
47.根据权利要求43至46任意一项的方法，其中该增强认知的治疗是针对由慢性硬膜下出血导致的痴呆的治疗的。
48.根据权利要求43至46任意一项的方法，其中该增强认知的治疗是针对由脑积水导致的痴呆的治疗的。
49.根据权利要求43至48任意一项的方法，其中所述物质是下式(1)的2-氧代-1-吡咯烷基烷基羧酸酰胺
[其中R代表氢原子或羟基；R1代表氢原子或甲基；R2代表吡啶基或具有1至3个彼此可以相同或不同的取代基的取代苯基，其中在该苯基上的取代基可以是卤原子，三氟甲基，硝基，乙酰基，C1-4直链或支链烷基，C1-4直链或支链烷氧基，C1-7直链或支链烷基巯基，由-S-(CH2)n-CH(R3)(R4)代表的取代的烷基巯基[其中n代表1或2；R3代表氢原子或甲基；R4代表羟基或由-N(R8)(R9)代表的氨基(其中R8代表氢原子或甲基，R9代表甲基、苄基或取代的苄基，或者R8和R9可以彼此连接，与式中的N共同构成取代的吡咯烷环)]，由-SO2R5代表的磺酰基(其中R5代表氨基或C1-3烷基)，或由-COO(CH2)2-N(R6)(R7)代表的取代的氨基乙氧基羰基(其中R6和R7各自代表氢原子、甲基或乙基)]，或其药学上可接受的酸加成盐。
50.根据权利要求43至48任意一项的方法，其中所述物质选自由下列化合物组成的组(1)2-氧代-1-吡咯烷基乙酸2，6-二甲基N-酰苯胺；(2)4-羟基-2-氧代-1-吡咯烷基乙酸2，6-二乙基N-酰苯胺；(3)4-羟基-2-氧代-1-吡咯烷基乙酸2，6-二甲基N-酰苯胺；(4)2-[2-氧代吡咯烷基]丙酸N-3-吡啶基酰胺；(5)2-氧代-1-吡咯烷基乙酸4-异丙基巯基N-酰苯胺；(6)2-[2-氧代-1-吡咯烷基]-1-丙酸-4-(2-丁基巯基)N-酰苯胺；(7)2-[2-氧代-1-吡咯烷基]丙酸-4-异丙基N-酰苯胺；(8)2-[2-氧代-1-吡咯烷基]丙酸-2，4-二甲基N-酰苯胺；(9)2-[2-氧代-1-吡咯烷基]丙酸-2，4，6-三甲基N-酰苯胺；(10)2-[2-氧代-1-吡咯烷基]丙酸-2-甲氧基-5-甲基N-酰苯胺；(11)2-[2-氧代-1-吡咯烷基]丙酸-2，6-二氯N-酰苯胺；(12)2-吡咯烷酮-乙酰胺；(13)1-茴香酰-2-吡咯烷酮；和(14)4-羟基-2-氧代-1-吡咯烷乙酰胺。
51.根据权利要求43至48任意一项的方法，其中所述物质选自由2-氧代-1-吡咯烷基乙酸2，6-二甲基N-酰苯胺、2-吡咯烷酮-乙酰胺、1-茴香酰-2-吡咯烷酮和4-羟基-2-氧代-1-吡咯烷乙酰胺组成的组。
52.根据权利要求43至48任意一项的方法，其中所述物质是奈非西坦。
53.用于提供长期大脑神经传递促进作用的治疗方法，其特征在于将由下式(1)代表的2-氧代-1-吡咯烷基烷基羧酸酰胺对受治疗者给药
[其中R代表氢原子或羟基；R1代表氢原子或甲基；R2代表吡啶基或具有1至3个彼此可以相同或不同的取代基的取代苯基，其中在该苯基上的取代基可以是卤原子，三氟甲基，硝基，乙酰基，C1-4直链或支链烷基，C1-4直链或支链烷氧基，C1-7直链或支链烷基巯基，由-S-(CH2)n-CH(R3)(R4)代表的取代的烷基巯基[其中n代表1或2；R3代表氢原子或甲基；R4代表羟基或由-N(R8)(R9)代表的氨基(其中R8代表氢原子或甲基，R9代表甲基、苄基或取代的苄基，或者R8和R9可以彼此连接，与式中的N共同构成取代的吡咯烷环)]，由-SO2R5代表的磺酰基(其中R5代表氨基或C1-3烷基)，或由-COO(CH2)2-N(R6)(R7)代表的取代的氨基乙氧基羰基(其中R6和R7各自代表氢原子、甲基或乙基)]，或其药学上可接受的酸加成盐。
54.用于提供长期大脑神经传递促进作用的治疗方法，其特征在于将选自由下列化合物(1)至(14)组成的组的化合物对受治疗者给药(1)2-氧代-1-吡咯烷基乙酸2，6-二甲基N-酰苯胺；(2)4-羟基-2-氧代-1-吡咯烷基乙酸2，6-二乙基N-酰苯胺；(3)4-羟基-2-氧代-1-吡咯烷基乙酸2，6-二甲基N-酰苯胺；(4)2-[2-氧代吡咯烷基]丙酸N-3-吡啶基酰胺；(5)2-氧代-1-吡咯烷基乙酸4-异丙基巯基N-酰苯胺；(6)2-[2-氧代-1-吡咯烷基]-1-丙酸4-(2-丁基巯基)N-酰苯胺；(7)2-[2-氧代-1-吡咯烷基]丙酸4-异丙基N-酰苯胺；(8)2-[2-氧代-1-吡咯烷基]丙酸2，4-二甲基N-酰苯胺；(9)2-[2-氧代-1-吡咯烷基]丙酸2，4，6-甲氧基-5-甲基N-酰苯胺；(10)2-[2-氧代-1-吡咯烷基]丙酸2-甲氧基-5-甲基N-酰苯胺；(11)2-[2-氧代-1-吡咯烷基]丙酸2，6-二氯N-酰苯胺；(12)2-吡咯烷酮-乙酰胺；(13)1-茴香酰-2-吡咯烷酮；和(14)4-羟基-2-氧代-1-吡咯烷-乙酰胺。
55.用于提供蛋白激酶C活化途径的长期活化作用的治疗方法，其特征在于将奈非西坦对受治疗者给药。
56.用于无需电刺激就能引起LTP样作用的治疗方法，其特征在于将奈非西坦对受治疗者给药。
57.用于提供长期增加谷氨酸盐释放的治疗方法，该增加作用基于对蛋白激酶C活化途径的长期活化作用与对突触前烟碱乙酰胆碱受体的长期活化作用之间的相互作用，其特征在于将奈非西坦对受治疗者给药。
58.用于提供大脑神经传递的长期促进作用的治疗方法，该促进作用基于蛋白激酶C活化途径的长期活化作用和突触前烟碱乙酰胆碱受体的长期活化作用。
59.用于治疗由慢性大脑硬膜下出血导致的痴呆的治疗方法，其特征在于该方法包括在没有电刺激的情况下，通过蛋白激酶C活化途径的活化作用而引起LTP样作用，还包括将奈非西坦对受治疗者给药。
60.用于治疗由脑积水导致的痴呆的治疗方法，其特征在于该方法包括在没有电刺激的情况下，引起由蛋白激酶C活化途径的活化作用导致的LTP样作用。
61.用于增强认知的治疗方法，其特征在于该方法包括由谷氨酸盐释放量的长时间增加导致的对海马神经传递的长期促进作用，该增加作用是由对蛋白激酶C活化途径的活化作用与对突触前烟碱乙酰胆碱受体的长期活化作用之间的相互作用所提供的，该方法还包括将奈非西坦对受治疗者给药。
62.用于长期促进海马神经传递的治疗方法，其特征在于该方法包括激活蛋白激酶C活化途径和激活突触前烟碱乙酰胆碱受体，从而长时间增加所释放的谷氨酸盐的量，还包括将奈非西坦对受治疗者给药。
63.用于长时间增加谷氨酸盐量的治疗方法，其特征在于该方法包括将奈非西坦对受治疗者给药。
全文摘要
一种药物,通过对蛋白激酶C活化途径的长期活化作用和对突触前烟碱乙酰胆碱受体(nACh)的长期活化作用之间的相互作用,能够增加谷氨酸的分泌,能够长时间激活脑神经传递。该药物可用作极好的向精神药剂。特别是它可用作因脑积水和慢性硬膜下出血而导致的痴呆的治疗剂。
文档编号C07D207/273GK1270528SQ98809035
公开日2000年10月18日 申请日期1998年9月14日 优先权日1997年9月12日
发明者西崎知之, 吉井光信, 渡部繁田 申请人:第一制药株式会社