专利名称：盐酸阿霉素的结晶的制作方法
技术领域：
本发明涉及盐酸阿霉素的晶析法和有一定特性的盐酸阿霉素结晶集合物。
背景技术：
阿霉素(又称为亚德里亚霉素)可用下式表示， 是链霉菌(Streptomyces peuceticus var caestius)产生的抗生物质。此外，阿霉素也可以从柔毛霉素(又称为道诺霉素)通过化学转化来提供。这种盐酸盐(即盐酸阿霉素)有广阔的抗癌谱，在恶性淋巴瘤、肺癌、消化器癌、乳癌等的化学疗法中有优异的效能。现在，盐酸阿霉素的液剂(注射用水或生理食盐水的溶液)已广泛用于上述各种癌症的临床治疗。
作为这样的液剂用原料，已有粉末状或结晶状的盐酸阿霉素提供，但目前可以得到的商品在对水的溶解性方面未必能令人满意。特别是，当在治疗现场临使用前配制液剂时，能更迅速地溶解于水中的固态盐酸阿霉素的提供是人们所期待的。
另一方面，粉末状或结晶状盐酸阿霉素通常可以通过从有机溶剂系或含有有机溶剂的水性溶剂系中沉淀或晶析来得到，但在残留溶剂的减少或去除方面有难点，要么目的结晶收率低的情况居多。
目前，作为医疗用市售的固态盐酸阿霉素，尽管其使用目的上残留溶剂在允许量以下，但在周围温度(25℃)下在水中搅拌处理时，直至溶解也需要约10分钟。而且，有时也观察到大部分溶解于水中之后还有少量溶残物。作为盐酸阿霉素标准的USP(美国药典)标准品(可购自(财)日本公定书协会，东京都涉谷区涉谷2-12-15)，对水的溶解性是优异的，尽管如此，在溶解处理后有时还能观察到小的溶残物。
发明公开因此，本发明的目的是提供一种伴随晶析的收率提高自不待言、残留溶剂的减少优异、而且能带来水中溶解性高的最终盐酸阿霉素制品的晶析法，以及具备这样的特性的盐酸阿霉素结晶集合物。
本发明等人在对盐酸阿霉素的晶析法进行探讨时发现，与晶析的一般常识(参照诸如特开昭59-118797号公报或美国专利第4,861,870号说明书)不同，在某一定温度以上，在特定的溶剂系中实施晶析，就能达到上述目的。
因此，本发明涉及一种晶析法，其特征在于是一种含有盐酸阿霉素的溶液中盐酸阿霉素的晶析法，其中，含有盐酸阿霉素的溶液是一种含有盐酸阿霉素的不良溶剂和盐酸阿霉素本身的水基溶液，并在40℃以上的温度进行晶析。
又，本发明也涉及盐酸阿霉素的结晶集合物，其特征在于(A)水分在2％(重量)以下，而其它总残留溶剂在1.5％以下，(B)平均粒径，以投影像的圆等效直径计，在15μm以上，和(C)溶解性显示，在25℃搅拌条件下的水中，在约2分钟以下实质上完全溶解。
发明最佳实施形态可以供给按照本发明的晶析法的盐酸阿霉素(以下也称为DOX.HCl)，与其制造法或精制阶段如何无关，只要具有某一定以上的纯度即可。即，本发明的晶析法可以用于旨在得到粗精制DOX·HCl的预备精制阶段和旨在得到最终制品的最终精制阶段。然而，按照本发明的晶析法，如果考虑到降低其残留溶剂的容易性或者能得到水中高溶解性的结晶等的作用、效果，则较好在DOX·HCl的最终精制阶段使用。因此，在主要作为最终精制阶段使用的指导思想下，以下说明本发明，但要理解的是不限定于这些。
可以供给按照本发明的晶析法的含有DOX·HCl的溶液，是含有阿霉素(以下也称为DOX)和DOX的不良溶剂的水基溶液。这样的水基溶液是首先将DOX·HCl溶解在水中，或将DOX溶解在稀盐酸(例如0.001 N HCl)水溶液中，但因情况而异，上述水中也可以含有以下述不良溶剂为主的水混溶性有机溶剂。其次，这样配制的、含有DOX·HCl的水基溶液(以下称溶解溶液)，通常与DOX的不良溶剂混合。这种混合，既可以是含有DOX·HCl的水基溶液与不良溶剂一次混合，也可以是前者少量多次地添加到后者中，或相反，后者少量多次地添加到前者中。
作为不良溶剂，是能与水自由地混合的有机溶剂，只要是能达到本发明之目的者，任何一种都可以，但一般来说，可以列举甲醇、乙醇、异丙醇、乙腈、丙酮以及这些当中一种以上的混合溶剂。这些当中，乙醇、丙酮和乙醇与丙酮的混合溶剂是较好的，其中特别好的是乙醇、乙醇与丙酮的混合溶剂。乙醇与丙酮的混合溶剂较好的是乙醇与丙酮以4∶1～1∶1、尤其2.5∶1的比例混合者。
另一方面，上述溶解溶液中包含有机溶剂时的有机溶剂可以是上述不良溶剂中任何一种。然而，较好的是将乙醇加到水(酸性水)中，尤其好的是此时水与乙醇的比例为7.5∶5～7.5∶15。
这样的溶剂系中，特别好的是上述溶解溶液中的溶剂由较好比例的水和乙醇组成、不良溶剂由较好比例的乙醇和丙酮组成这样的溶剂系组合。
这样的溶解溶液与不良溶剂的组合会因DOX·HCl的含有量而异，但一般来说，溶解溶液与不良溶剂的比例为1∶2～1∶10，较好的是约1∶5。
这样的溶剂系组成的、含有DOX·HCl的溶液，只要是晶析前能使DOX.HCl处于溶解状态即可，DOX·HCl的浓度没有限定。然而，一般来说，DOX.HCl的浓度应在10％(重量/体积)以下、较好在8～4.5％(重量/体积)。
按照本发明，进行晶析的温度必须设定在40℃以上。这个温度，当含有DOX.HCl的水基溶液在40℃以上配制时，可以保持不变或降低若干温度，但通常在5℃～35℃配制该含有DOX·HCl的水基溶液，因而要从这些温度升温到40℃再进行晶析。40℃以上的温度，较好的是45℃～75℃、特别好的是50～65℃。此外，按照本发明，在晶析中的任何时期都可以把含有DOX·HCl的溶液置于上述温度范围内的温度下，但较好的是，贯穿整个晶析过程，都在上述温度范围内搅拌或静置含有DOX·HCl的水基溶液。而且，晶析温度也可以在上述温度范围内变动，但为操作方便起见，可以设定在大致恒定的温度。
晶析所需要的时间，可以根据所使用的溶剂系来选择以所希望收率得到目的DOX·HCl结晶的时间。然而，在上述的较好条件下，一般在1小时以上、较好在2～4小时、因情况而异在2.5～5小时，就可以高收率地得到目的DOX·HCl。
这样，便形成了目的DOX·HCl结晶。这些结晶可以从晶析溶液中分离、收集、干燥。
按照本发明的晶析法得到的上述结晶，是平均粒径约15μm以上的，而且粒径分布也极其狭窄，因而通过采用适当过滤器进行过滤，就可以十分顺利地进行分离、收集，但不限定于此，也可以采用其它本身已知的分离手段。
干燥手段，只要是对DOX·HCl的生物学活性不产生不良影响的手段，任何手段均可选用，但一般来说，较好的是真空(减压)干燥法。此外，在真空干燥之前，也可以在周围温度下进行风干。进行真空干燥时的温度，可以设定在5℃～75℃、较好在40℃～60℃，减压程度可以任意选择。在使用以HPLC法测定的效价为约97％(以干物质计)以上者作为供给晶析的原料的情况下，真空干燥时间达到1小时以上，通常就能得到按美国药典(USP23的DOX·HCl)规格进行的纯度试验(HPLC法)、残留溶剂试验(GC法)和效价试验(HPLC法)合格的制品。
通过按照本发明的晶析法得到的DOX·HCl结晶，在诸如5～10mmHg的减压下、在40℃进行4小时真空干燥的情况下，可以得到结晶总体具有如下特性的结晶集合物(A)水分在2％(重量)以下，而其它总残留溶剂在1.5％以下，(B)平均粒径，以投影像的圆等效直径计，在15μm以上，和(C)溶解性显示，在25℃搅拌条件下的水中，在约2分钟以下实质上完全溶解，要说明的是，本发明中所述“结晶集合物”并非指各结晶通过特定的物理结合力等凝聚之物，而仅指各结晶的集团。
这样的结晶集合物，与以上述可作为美国药典标准品从(财)日本公定书协会购买的DOX·HCl结晶集合物为首的市售品相比，在溶解性显著高这一点上，是可以明确区别于已知DOX·HCl的新型结晶集合物。
因此，所述结晶集合物也是本发明的一种形态。在使用乙醇和丙酮作为本发明的晶析法中的不良溶剂的情况下，可以提供的所述结晶集合物是每单位结晶集合物总重量中水分含量约1％以下，丙酮约0.4％以下，而乙醇约1.0％以下，这样的结晶集合物是本发明的较好形态。
按照本发明的结晶集合物，凡所述溶解性在1.5～2分钟或其以下者，都是更好的形态。
此外，按照本发明的DOX·HCl结晶集团，其特征在于，无论吸湿性与美国药典标准品相比时大致相同或更低，都显示出如上所述的良好溶解性。
因此，按照本发明，公开了可以得到适合于提供DOX·HCl液剂的DOX·HCl结晶集合物的新型晶析法和结晶集合物。
以下用具体实例更具体地说明本发明，但这些实例仅以使对本发明的理解变得容易为目的，而并无使本发明限定于这些实例之意图。
本发明中所述各种特性的测定方法<溶解性试验>
向20ml(内径30mm)的烧杯中加入5ml水，再加水50mg DOX·HCl结晶试样，在25℃用磁力搅拌子(直径6mm×长度10mm)，以约600转/分钟搅拌试样。每30秒用肉眼观察一次溶解状态，同时测定直至完全溶解的时间。
<残留溶剂的测定>
a)水分测定试样10～15mg，用平沼产业公司制AQ-6型微量水分测定装置，按照电量滴定法进行。测定时，发生液中使用HYDRANAL-Coulomat AK/酮用(林纯药工业公司)，而对极液中使用HYDRANAL-Coulomat CG-K/酮用(林纯药工业公司)。
b)不良溶剂测定用如下气相色谱法(顶空法)。气相色谱仪GC-14A(配备氢火焰离子化检定器(FID))(岛津制作所制)上安装J & W公司制DB-WAX柱，在使用流量约1.0ml/分钟氦气的条件下，用顶空法分析试样，算出试样中不良溶剂的量。
<吸湿性>
用如下的杯法。具体地说，吸湿性是向直径6mm、深度6mm的圆筒状杯中加入试样约15～20mg，在一定的温度(25℃)和相对湿度(50～60％RH)下放置15分钟，测定此时的重量变化来评价的。
要说明的是，以下各例中，采用的评价基准是重量增加率为0.40％以上者，吸湿性大(-)；0.20％以上～0.40％以下者，吸湿性中(±)；0.20％以下者，吸湿性小(+)。
<平均粒径>
平均粒径采用以下所示显微镜法(投影像)，以具有与粒子投影面积相同面积的圆的直径表示，即以所谓Heywood直径(圆等效直径)表示。
方法把少量结晶放在载片上，加1～2滴亲油性表面活性剂(倍半油酸脱水山梨糖醇酯)使之分散，用配备摄影装置的偏光显微镜(摄影镜头3.3倍，对物镜头20倍)摄影。在照片上选择代表性的任意结晶10个，测定其长径和短径。以长径×短径计算结晶的(投影)面积，以与此相同面积的圆的直径作为粒径。
实例1～59晶析和结晶的收集预定量的DOX·HCl(效价约960～980μg/mg)添加到必要时加了0.001N盐酸的、以下表Ⅰ中记载的溶解溶剂系中，在室温下(约25℃)溶解，然后用脱脂棉过滤。滤液与不良溶剂一起，上升到预定温度后，搅拌约1小时(200rpm)。滤取析出的结晶，用不良溶剂10ml洗涤后，在40℃、真空(5～10mmHg)下干燥过夜。
各例中使用的DOX·HCl量、溶剂量、混合溶剂情况下的混合比(体积比)、溶剂添加方法(溶→贫溶解溶液添加到不良溶剂中；贫→溶不良溶剂添加到溶解溶液中；贫→溶/数值min和溶→贫/数值min分别指不良溶剂和溶解溶液在该数值时间(分钟)内以少量多次方式添加)、晶析温度(℃)、晶析时的搅拌速度(rpm)、收率(％)、含水率(％)、各不良溶剂的含有率(％)、平均粒径(μm)分别汇总在以下表Ⅰ～Ⅱ中。表中A是丙酮、E是乙醇，AN是乙腈，而IP是异丙醇。晶析温度为25→60者，系指从25℃升温到60℃(约3.5℃/分钟)。表中的空白栏系指没有测定。表Ⅱ中，水分(％)、A(％)、和E(％)分别表示残留溶剂，即表示含水率和不良溶剂含有率。在不良溶剂含有率为乙腈和异丙醇的情况下，特别予以标出。表Ⅰ晶析条件
表Ⅰ晶析条件(续)
表Ⅰ晶析条件(续)
表Ⅱ晶析和干燥后的结果
表Ⅱ晶析和干燥后的结果(续)
表Ⅱ晶析和干燥后的结果(续)
*AN乙腈**IP异丙醇要说明的是，上述实例中，例1～18、58和59是比较例，例19～57是本发明的实施例。<溶解性试验>
对作为比较的DXR·USP标准品(LotJ)(平均粒径28μm)以及例2、46、51、55、56、57和58进行上述溶解性试验，其结果汇总在表Ⅲ中。
表Ⅲ水中的溶解性试样 溶解时间(分)DXR-USP(比较)3～3.5*例2 4～4.5例46 1.5～2例51 1.5～2例55 1.5～2例56 1.5～2例57 1.5～2例58 14.5～15*大部分溶解，但观察到微量的溶残物。
产业上利用的可能性按照本发明的晶析法，可以高效率地得到具有比美国药典标准品作为液剂配制用原料时优异的特性的盐酸阿霉素结晶，尤其这些结晶具有在水中的溶解显著高的特征。因此，本发明可以用于医药品制造业。
权利要求
1．一种晶析法，其特征在于是一种含有盐酸阿霉素的溶液中盐酸阿霉素的晶析法，其中，含有盐酸阿霉素的溶液是一种含有盐酸阿霉素的不良溶剂和盐酸阿霉素本身的水基溶液，并在40℃以上的温度进行晶析。
2．权利要求1记载的晶析法，其中，不良溶剂是从甲醇、乙醇、异丙醇、乙腈和丙酮组成的一组中选择的任何一种或2种以上的混合物。
3．权利要求1记载的晶析法，其中，不良溶剂是乙醇和丙酮中的一种或混合物。
4．权利要求1～3中任何一项记载的晶析法，其中，所述水基溶液中水与不良溶剂的比例为1∶2～1∶10。
5．权利要求1～4中任何一项记载的晶析法，其中，晶析在45℃～75℃进行。
6．权利要求1～5中任何一项记载的晶析法，其中，晶析后进行了干燥处理的盐酸阿霉素结晶集合物(A)有2％(重量)以下的水分，和1.5％(重量)以下的其它残留溶剂，(B)以投影像的圆等效直径计，有15μm以上的平均粒径，和(C)在25℃搅拌条件下的水中，有在约2分钟以下实质上完全溶解的溶解性。
7．盐酸阿霉素的结晶集合物，其特征在于(A)水分在2％(重量)以下，而其它总残留溶剂在1.5％以下，(B)平均粒径，以投影像的圆等效直径计，在15μm以上，和(C)溶解性显示，在25℃搅拌条件下的水中，在约2分钟以下实质上完全溶解。
全文摘要
公开了含有盐酸阿霉素的水基溶液中盐酸阿霉素的晶析法,特别是在40℃以上的条件下进行晶析的方法,以及尤其水中溶解性优异的盐酸阿霉素结晶集合物。
文档编号C07H15/252GK1323312SQ99812230
公开日2001年11月21日 申请日期1999年10月15日 优先权日1998年10月16日
发明者城道修, 中尾琢磨, 吉冈武男 申请人:美露香株式会社