总体上，本发明涉及式(i)至(vi)的取代的桥环脲类似物化合物、其相应的类似物或衍生物，或其药学上可接受的盐，相应的药物组合物，该化合物的制备方法，以及其单独或与其它治疗剂组合作为沉默调节蛋白(sirtuin)调节剂以用于增加细胞寿命，和用于治疗和/或预防多种疾病和障碍的方法或用途，所述疾病和障碍包括，但不限于，例如，与老化或应激相关的疾病或障碍、糖尿病、肥胖症、神经变性疾病、心血管疾病、凝血障碍、炎症、癌症、和/或潮红以及将得益于增加线粒体活性的疾病或障碍。
背景技术：
沉默信息调节剂(silentinformationregulator，sir)基因家族代表存在于范围从古细菌(archaebacteria)至真核生物的生物体的基因组中的高度保守的一组基因。编码的sir蛋白参与从基因沉默的调节至dna修复的各种过程。此家族中充分表征的基因为酿酒酵母sir2(s.cerevisiaesir2)，其包含在含有指定酵母交配型、端粒位置效应及细胞老化的信息的沉默hm基因座中。酵母sir2蛋白属于组蛋白脱乙酰基酶的家族。由sir基因家族成员编码的蛋白显示：250个氨基酸的核心结构域具有高度序列保守。于鼠伤寒沙门氏菌(salmonellatyphimurium)中的sir2同系物cobb起到nad(烟酰胺腺嘌呤二核苷酸)-依赖性adp-核糖基转移酶的作用。
sir2蛋白为使用nad作为协同底物的第iii类脱乙酰基酶。不同于其它脱乙酰基酶，这些中的许多涉及基因沉默，sir2对第i类及第ii类组蛋白脱乙酰基酶抑制剂(例如制滴菌素a(trichostatina，tsa))不具敏感性。
通过sir2进行的乙酰基-赖氨酸的脱乙酰基化与nad水解作用紧密结合，产生烟酰胺与新的乙酰基-adp核糖化合物。sir2的nad-依赖性脱乙酰基酶活性对于可以将其生物学作用与酵母中的细胞代谢作用结合的这一功能而言是必需的。哺乳动物sir2同系物具有nad-依赖性组蛋白脱乙酰基酶活性。
生物化学的研究已显示，sir2可容易地将组蛋白h3与h4的氨基末端尾部脱乙酰基化，导致形成2’/3’-o-乙酰基-adp-核糖(oaadpr)与烟酰胺。具有sir2的额外拷贝的菌株显示rdna沉默增加且寿命增长30％。还已经表明，秀丽隐杆线虫(c.elegans)sir2同系物(sir-2.1)及果蝇(d.melanogaster)dsir2基因的额外拷贝会延长那些生物体的寿命。这暗示了针对老化的sir2-依赖性调节途径在进化早期出现且已经是相当保守的。现今，认为sir2基因已经进化为增强生物体的健康与应激抵抗，以增加其逆境存活(survivingadversity)的机会。
在人中有7种sir2样基因(sirt1-sirt7)，它们共享sir2的保守催化结构域。sirt1为具有与sir2最高程度序列相似性的核蛋白。sirt1通过脱乙酰化作用调节多种细胞靶点，包括肿瘤抑制基因p53、细胞信号传导因子nf-kb和foxo转录因子。
sirt3为sirt1的同系物，其在原核生物与真核生物中具保守性。sirt3蛋白通过位于n-末端的独特结构域而靶向至线粒体嵴(cristae)。sirt3具有nad+-依赖性蛋白脱乙酰基酶活性，且普遍表达，特别是在代谢活性的组织中。在转移至线粒体后，sirt3被线粒体基质加工肽酶(mpp)裂解成更小的活性形式。
70年前已经知晓，热量限制(caloricrestriction)增进哺乳动物的健康并延长寿命。酵母寿命(如后生动物的)也通过类似热量限制(例如低葡萄糖)的介入来增长。发现缺乏sir2基因的酵母与蝇类在热量限制时并不活得更长，这为sir2基因介导限制性热量饮食的有益健康功效提供了证据。而且，降低酵母葡萄糖-响应性camp(腺苷3＇，5＇-单磷酸)-依赖性(pka)途径活性的突变延长了野生型细胞的寿命，但在突变型sir2菌株中则不会延长，这证明sir2可能是热量限制途径的关键下游组分。
除了治疗潜力，sirt1活性的结构和生物物理研究以及经小分子沉默调节蛋白调节剂的活化将用于推进对沉默调节蛋白的生物学功能的了解、进一步了解沉默调节蛋白活化的作用机理以及帮助研发用于鉴定新的沉默调节蛋白调节剂的试验。
本发明涉及克服了现有技术遇到的这些和其它问题。
技术实现要素：
总体上，本发明涉及式(i)至(vi)的取代的桥环脲类似物化合物、其相应的类似物或衍生物，或其药学上可接受的盐，相应的药物组合物，该化合物的制备方法，以及其单独或与其它治疗剂组合，作为沉默调节蛋白调节剂以用于增加细胞寿命，和用于治疗和/或预防多种疾病和障碍的用途，所述疾病和障碍包括，但不限于，例如，与老化或应激相关的疾病或障碍、糖尿病、肥胖症、神经变性疾病、心血管疾病、凝血障碍、炎症、癌症、和/或潮红以及将得益于增加线粒体活性的疾病或障碍。
特别是，本发明分别涉及新的式(i)至(vi)的化合物、相应的类似物(即，在r2位具有氢取代)和包含式(i)至(vi)的化合物的相应的药物组合物。
本发明还分别涉及制备式(i)至(vi)的化合物和相应的类似物(即，在r2位具有氢取代)的方法。
本发明还涉及使用本文所述的沉默调节蛋白调节剂化合物治疗和/或预防多种疾病和障碍的方法或用途，所述疾病和障碍包括，但不限于，例如，与老化或应激相关的疾病或障碍、糖尿病、肥胖症、神经变性疾病、心血管疾病、凝血障碍、炎症、癌症、和/或潮红以及将得益于增加线粒体活性的疾病或障碍，所述疾病和障碍进一步可选自或包括，但不限于牛皮癣、特应性皮炎、痤疮、酒渣鼻、炎性肠病、骨质疏松、脓毒病、关节炎、copd、系统性红斑狼疮和眼科炎症。
发明详述
总体上，本发明涉及式(i)至(vi)的取代的桥环脲类似物化合物、其相应的类似物或其衍生物，或其药学上可接受的盐，相应的药物组合物，该化合物的制备方法和，以及其单独或与其它治疗剂组合，作为沉默调节蛋白调节剂以用于增加细胞寿命，和用于治疗和/或预防多种疾病和障碍的用途，所述疾病和障碍包括，但不限于，例如，与老化或应激相关的疾病或障碍、糖尿病、肥胖症、神经变性疾病、心血管疾病、凝血障碍、炎症、癌症、和/或潮红以及将得益于增加线粒体活性的疾病或障碍。
化合物
具体地，本发明分别涉及新的式(i)至(vi)的化合物、相应的类似物(即，在r2位具有氢取代)和包含式(i)至(vi)的化合物的相应的药物组合物。
国际专利申请号wo09/061879(国际申请日2014年5月13日)公开了新的调节沉默调节蛋白的式(i)取代的桥环脲和相关的类似物化合物：
其药学上可接受的盐，相应的药物组合物，与其它治疗剂的组合，其制备方法和增加细胞寿命、和治疗和/或预防多种疾病和障碍的方法或用途，所述疾病和障碍包括，例如，与老化或应激相关的疾病或障碍、糖尿病、肥胖症、神经变性疾病、心血管疾病、凝血障碍、炎症、癌症、和/或潮红以及将得益于增加线粒体活性的疾病或障碍。
在一方面，本发明提供了新的分别为结构式(i)至(vi)的调节沉默调节蛋白的化合物、相应的类似物(即，在r2位具有氢取代)，其在下文详细描述。
在一方面，本发明涉及式(i)的化合物：
其中：
x1或x2独立地选自-n或-c；
r1为氢、卤素、-cn、碳环基、杂环基、-n-取代的杂环基、芳基、杂芳基、-c(o)ra或-c(o)-nrbrc；
r2为卤素、-直链或支链的c1-c6烷基、-直链或支链的-c1-c6卤代烷基、或-c(o)-nrbrc；
r3为氢、卤素、-羟基、-直链或支链的c1-c6烷基、或-直链或支链的-c1-c6卤代烷基；
r4为氢或-c(o)nrbrc；
其中：
当x2为-n时，r2不存在；或
当x2为-c时，r2如上定义；
如上定义的各个r1、r2、r3或r4任选进一步取代有一个或多个选自以下的取代基：氢、卤素、-oh、-(ch2)xoh、-c≡n、-nrdre、-直链或支链的c1-c6烷基、-直链或支链的-c1-c6卤代烷基、-直链或支链的c1-c6烷氧基、-直链或支链的c1-c6卤代烷氧基、-o-直链或支链的-c1-c6卤代烷基、-c1-c6环烷基、-(ch2)x-环烷基、杂环基、芳基、-杂芳基、-(ch2)x-杂芳基、-o-(ch2)xch(oh)ch2(oh)、或-c(o)orf；
如上定义的各个ra、rb、rc、rd、re或rf独立地选自氢、-直链或支链的c1-c6烷基、-直链或支链的-c1-c6卤代烷基、-c1-c6-环烷基、-(ch2)xc1-c6-环烷基、杂环基、-n-杂环基、芳基、杂芳基、或-(ch2)x杂芳基、-(chrg)x杂芳基；
其中：
rg为直链或支链的c1-c6烷基、-直链或支链的-c1-c6卤代烷基；
如上定义的各个ra、rb、rc、rd、re或rf任选进一步取代有一个或多个选自以下的取代基：氢、卤素、-oh、-c≡n、-直链或支链的c1-c6烷基、-直链或支链的-c1-c6卤代烷基、-直链或支链的c1-c6烷氧基、-o-直链或支链的-c1-c6卤代烷基、-c1-c6环烷基、碳环基、-(ch2)x-碳环基、-杂环基、-o-杂环基、芳基、-杂芳基、-(ch2)x-杂芳基、-o-(ch2)xch(oh)ch2(oh)、-(ch2)x-oh、或-c(o)-oh；
m为1至3的整数；
n为选自1至3的整数；
x为0或1至6的整数；或
其药学上可接受的盐。
在另一方面，本发明涉及如上定义和本申请全文中的本发明化合物(即，结构式(i)至(vi)的化合物、相应的类似物(即，在r2位具有氢取代)，其中条件是：
当n＝1时，m≠1；且
当n＝3时，m≠3。
在另一方面，本发明涉及本发明化合物，其中r2为c(o)-nrbrc；其中rb和rc如以上和本申请全文所定义。
在另一方面，本发明涉及式(i)至(vi)的化合物，其中：
m为1；
n为2或3；且
r4为氢。
在另一方面，本发明涉及式(i)至(vi)的化合物，其中：
m为1；
n为2或3；且
r4为-c(o)nrbrc，其中各个rb和rc如上定义。
在另一方面，本发明涉及式(i)至(vi)的化合物，其中：
m为1；
n为3；且
r4为氢或-c(o)nrbrc，其中rb和rc如以上权利要求1所定义。
在一方面，本发明涉及式(ii)的化合物：
其中：
x1或x2独立地选自-n或-c；
r1为氢、卤素、-cn、碳环基、杂环基、-n-取代的杂环基、芳基或杂芳基。
r2为卤素、-直链或支链的c1-c6烷基、-直链或支链的-c1-c6卤代烷基、或-c(o)-nrbrc；
r3为氢、卤素、-羟基、-直链或支链的c1-c6烷基、或-直链或支链的-c1-c6卤代烷基；
r4为氢或-c(o)nrbrc；
其中：
当x2为-n时，r2不存在；或
当x2为-c时，r2如上定义；
如上定义的各个r1、r2、r3或r4任选进一步取代有一个或多个选自以下的取代基：氢、卤素、-oh、-(ch2)xoh、-c≡n、-nrdre、-直链或支链的c1-c6烷基、-直链或支链的-c1-c6卤代烷基、-直链或支链的c1-c6烷氧基、-直链或支链的c1-c6卤代烷氧基、-o-直链或支链的-c1-c6卤代烷基、-c1-c6环烷基、-(ch2)x-环烷基、杂环基、芳基、-杂芳基、-(ch2)x-杂芳基、-o-(ch2)xch(oh)ch2(oh)、或-c(o)orf；
如上定义的各个ra、rb、rc、rd、re或rf独立地选自氢、-直链或支链的c1-c6烷基、-直链或支链的-c1-c6卤代烷基、-c1-c6-环烷基、-(ch2)xc1-c6-环烷基、杂环基、-n-杂环基、芳基、杂芳基、或-(ch2)x杂芳基、-(chrg)x杂芳基；
其中：
rg为直链或支链的c1-c6烷基、-直链或支链的-c1-c6卤代烷基；
如上定义的各个ra、rb、rc、rd、re或rf任选进一步取代有一个或多个选自以下的取代基：氢、卤素、-oh、-c≡n、-直链或支链的c1-c6烷基、-直链或支链的-c1-c6卤代烷基、-直链或支链的c1-c6烷氧基、-o-直链或支链的-c1-c6卤代烷基、-c1-c6环烷基、碳环基、-(ch2)x-碳环基、-杂环基、-o-杂环基、芳基、-杂芳基、-(ch2)x-杂芳基、-o-(ch2)xch(oh)ch2(oh)、-(ch2)x-oh、或-c(o)-oh；
m为1至3的整数；
n为选自1至3的整数；
x为0或1至6的整数；或
其药学上可接受的盐。
在-方面，本发明涉及式(iii)的化合物：
其中：
x1或x2独立地选自-n或-c；
r1为-c(o)ra或-c(o)-nrbrc；
r2为卤素、-直链或支链的c1-c6烷基、-直链或支链的-c1-c6卤代烷基、或-c(o)-nrbrc；
r3为氢、卤素、-羟基、-直链或支链的c1-c6烷基、或-直链或支链的-c1-c6卤代烷基；
r4为氢或-c(o)nrbrc；
其中：
当x2为-n时，r2不存在；或
当x2为-c时，r2如上定义；
如上定义的各个r1、r2、r3或r4任选进一步取代有一个或多个选自以下的取代基：氢、卤素、-oh、-(ch2)xoh、-c≡n、-nrdre、-直链或支链的c1-c6烷基、-直链或支链的-c1-c6卤代烷基、-直链或支链的c1-c6烷氧基、-直链或支链的c1-c6卤代烷氧基、-o-直链或支链的-c1-c6卤代烷基、-c1-c6环烷基、-(ch2)x-环烷基、杂环基、芳基、-杂芳基、-(ch2)x-杂芳基、-o-(ch2)xch(oh)ch2(oh)、或-c(o)orf；
如上定义的各个ra、rb、rc、rd、re或rf独立地选自氢、-直链或支链的c1-c6烷基、-直链或支链的-c1-c6卤代烷基、-c1-c6-环烷基、-(ch2)xc1-c6-环烷基、杂环基、-n-杂环基、芳基、杂芳基、或-(ch2)x杂芳基、-(chrg)x杂芳基；
其中：
rg为直链或支链的c1-c6烷基、-直链或支链的-c1-c6卤代烷基；
如上定义的各个ra、rb、rc、rd、re或rf任选进一步取代有一个或多个选自以下的取代基：氢、卤素、-oh、-c≡n、-直链或支链的c1-c6烷基、-直链或支链的-c1-c6卤代烷基、-直链或支链的c1-c6烷氧基、-o-直链或支链的-c1-c6卤代烷基、-c1-c6环烷基、碳环基、-(ch2)x-碳环基、-杂环基、-o-杂环基、芳基、-杂芳基、-(ch2)x-杂芳基、-o-(ch2)xch(oh)ch2(oh)、-(ch2)x-oh、或-c(o)-oh；
m为1至3的整数；
n为选自1至3的整数；
x为0或1至6的整数；或
其药学上可接受的盐。
在另一方面，本发明涉及如上定义和本申请全文的本发明化合物(即，结构式(i)至(vi)的化合物、相应的类似物(即，在r2位具有氢取代)，其中条件是：
当n＝1时，m≠1；且
当n＝3时，m≠3。
在另一方面，本发明涉及本文所述的本发明化合物，其中r2为c(o)-nrbrc；其中rb和rc如以上和本申请全文所定义。
在另一方面，本发明涉及式(i)至(vi)的化合物或本文所述的任何化合物，其中：
m为1；
n为2或3；且
r4为氢。
在另一方面，本发明涉及式(i)至(vi)的化合物，其中：
m为1；
n为2或3；且
r4为-c(o)nrbrc，其中各个rb和rc如上定义。
在另一方面，本发明涉及式(iv)的化合物：
其中：
x1或x2独立地选自-n或-c；
其中：
当x2为-n时，r2不存在；或
当x2为-c时，r2如上定义；
r1为氢、卤素、-cn、碳环基、杂环基、-n-取代的杂环基、芳基、杂芳基、-c(o)ra或-c(o)-nrbrc；
r2为卤素、-直链或支链的c1-c6烷基、-直链或支链的-c1-c6卤代烷基、或-c(o)-nrbrc；
r3为氢、卤素、-羟基、-直链或支链的c1-c6烷基、或-直链或支链的-c1-c6卤代烷基；
各个r5和r6独立地选自氢、-直链或支链的c1-c6烷基、-直链或支链的-c1-c6卤代烷基、-c1-c6环烷基、-(ch2)xc1-c6环烷基、杂环基、-n-杂环基、芳基、杂芳基、或-(ch2)x杂芳基、-(chrg)x杂芳基；
其中：
如上定义的各个r1、r2、r3、r5和r6任选进一步取代有一个或多个选自以下的取代基：氢、卤素、-oh、-(ch2)xoh、-c≡n、-nrdre、-直链或支链的c1-c6烷基、-直链或支链的-c1-c6卤代烷基、-直链或支链的c1-c6烷氧基、-直链或支链的c1-c6卤代烷氧基、-o-直链或支链的-c1-c6卤代烷基、-c1-c6环烷基、-(ch2)x-环烷基、杂环基、芳基、-杂芳基、-(ch2)x-杂芳基、-o-(ch2)xch(oh)ch2(oh)、或-c(o)orf；
如上定义的各个ra、rb、rc、rd、re、rf或rg独立地选自氢、-直链或支链的c1-c6烷基、-直链或支链的-c1-c6卤代烷基、-c1-c6-环烷基、-(ch2)xc1-c6-环烷基、杂环基、-n-杂环基、芳基、杂芳基、或-(ch2)x杂芳基；
其中：
如上定义的各个ra、rb、rc、rd、re、rf或rg任选进一步取代有一个或多个选自以下的取代基：氢、卤素、-oh、-(ch2)xoh、-c≡n、nrhri、-直链或支链的c1-c6烷基、-直链或支链的-c1-c6卤代烷基、-直链或支链的c1-c6烷氧基、-直链或支链的-c1-c6卤代烷氧基、-c1-c6环烷基、-(ch2)x-环烷基、杂环基、-杂环基、-o-杂环基、芳基、-杂芳基、-(ch2)x-杂芳基、-o-(ch2)xch(oh)ch2(oh)、-(ch2)x-oh、或-c(o)orj；
其中：
各个rh、ri和rj独立地选自氢、-直链或支链的c1-c6烷基或-直链或支链的-c1-c6卤代烷基；
m为1至3的整数；
n为选自2至3的整数；
x为0或1至6的整数；或
其药学上可接受的盐。
在另一方面，本发明涉及本发明化合物，其中n为2或3且m为1。
在另一方面，本发明涉及式(v)的化合物：
其中：
r1为氢、卤素、-cn、碳环基、杂环基、-n-取代的杂环基、芳基、杂芳基、-c(o)ra或-c(o)-nrbrc；
r2为卤素、-直链或支链的c1-c6烷基、-直链或支链的-c1-c6卤代烷基、或-c(o)-nrbrc；
r3为氢、卤素、-羟基、-直链或支链的c1-c6烷基、或-直链或支链的-c1-c6卤代烷基；
r4为氢或-c(o)-nrbrc；
其中：
如上定义的各个r1、r2、r3或r4任选进一步取代有一个或多个选自以下的取代基：氢、卤素、-oh、-(ch2)xoh、-c≡n、-nrdre、-直链或支链的c1-c6烷基、-直链或支链的-c1-c6卤代烷基、-直链或支链的c1-c6烷氧基、-直链或支链的c1-c6卤代烷氧基、-o-直链或支链的-c1-c6卤代烷基、-c1-c6环烷基、-(ch2)x-环烷基、杂环基、芳基、-杂芳基、-(ch2)x-杂芳基、-o-(ch2)xch(oh)ch2(oh)、或-c(o)orf；
如上定义的各个ra、rb、rc、rd、re或rf独立地选自氢、-直链或支链的c1-c6烷基、-直链或支链的-c1-c6卤代烷基、-c1-c6-环烷基、-(ch2)xc1-c6-环烷基、杂环基、-n-杂环基、芳基、杂芳基、或-(ch2)x杂芳基；
其中：
如上定义的各个ra、rb、rc、rd、re或rf任选进一步取代有一个或多个选自以下的取代基：氢、卤素、-oh、-(ch2)xoh、-c≡n、-nrgrh、-直链或支链的c1-c6烷基、-直链或支链的-c1-c6卤代烷基、-直链或支链的c1-c6烷氧基、-直链或支链的-c1-c6卤代烷氧基、-c1-c6环烷基、-(ch2)x-环烷基、杂环基、-杂环基、-o-杂环基、芳基、-杂芳基、-(ch2)x-杂芳基、-o-(ch2)xch(oh)ch2(oh)、-(ch2)x-oh、或-c(o)ori；
其中：
如上定义的各个rg、rh和ri独立地选自氢、-直链或支链的c1-c6烷基或-直链或支链的-c1-c6卤代烷基；
m为1至3的整数；
n为选自2至3的整数；
x为0或1至6的整数；或
其药学上可接受的盐；
在另一方面，本发明涉及式(iv)的化合物：
其中：
r1为氢、卤素、-cn、碳环基、杂环基、-n-取代的杂环基、芳基、杂芳基、-c(o)ra或-c(o)-nrbrc；
r2为卤素、-直链或支链的c1-c6烷基、-直链或支链的-c1-c6卤代烷基、或-c(o)-nrbrc；
r3为氢、卤素、-羟基、-直链或支链的c1-c6烷基、或-直链或支链的-c1-c6卤代烷基；
各个r5和r6独立地选自氢、-直链或支链的c1-c6烷基、-直链或支链的-c1-c6卤代烷基、-c1-c6环烷基、-(ch2)xc1-c6环烷基、杂环基、-n-杂环基、芳基、杂芳基、或-(ch2)x杂芳基、-(chrg)x杂芳基；
其中：
如上定义的各个r1、r2、r3、r5和r6任选进一步取代有一个或多个选自以下的取代基：氢、卤素、-oh、-(ch2)xoh、-c≡n、-nrdre、-直链或支链的c1-c6烷基、-直链或支链的-c1-c6卤代烷基、-直链或支链的c1-c6烷氧基、-直链或支链的c1-c6卤代烷氧基、-o-直链或支链的-c1-c6卤代烷基、-c1-c6环烷基、-(ch2)x-环烷基、杂环基、芳基、-杂芳基、-(ch2)x-杂芳基、-o-(ch2)xch(oh)ch2(oh)、或-c(o)orf；
如上定义的各个ra、rb、rc、rd、re、rf或rg独立地选自氢、-直链或支链的c1-c6烷基、-直链或支链的-c1-c6卤代烷基、-c1-c6-环烷基、-(ch2)xc1-c6-环烷基、杂环基、-n-杂环基、芳基、杂芳基、或-(ch2)x杂芳基；
其中：
如上定义的各个ra、rb、rc、rd、re、rf或rg任选进一步取代有一个或多个选自以下的取代基：氢、卤素、-oh、-(ch2)xoh、-c≡n、nrhri、-直链或支链的c1-c6烷基、-直链或支链的-c1-c6卤代烷基、-直链或支链的c1-c6烷氧基、-直链或支链的-c1-c6卤代烷氧基、-c1-c6环烷基、-(ch2)x-环烷基、杂环基、-杂环基、-o-杂环基、芳基、-杂芳基、-(ch2)x-杂芳基、-o-(ch2)xch(oh)ch2(oh)、-(ch2)x-oh、或-c(o)orj；
其中：
各个rh、ri和rj独立地选自氢、-直链或支链的c1-c6烷基或-直链或支链的-c1-c6卤代烷基；
m为1至3的整数；
n为选自2至3的整数；
x为0或1至6的整数；或
其药学上可接受的盐；
在另一方面，本发明分别涉及式(i)至(iv)的化合物，其中r1选自：
在另一方面，本发明分别涉及式(i)至(iv)的化合物，r1为
在另一方面，本发明分别涉及式(i)至(iv)的化合物，其中r4选自：
在另一方面，本发明分别涉及式(i)至(iv)的化合物，r4为
在另一方面，本发明涉及本申请从第303页开始的表1中定义的化合物：
在另一方面，本发明涉及化合物，其为：
图表3
在另一方面，本发明涉及作为本发明化合物的相应类似物或衍生物的化合物(即，在r2位具有氢取代)：
图表4-三碳单元和吡啶-无间位取代
术语和定义
部分1
本发明的具体化合物可以以特定的几何异构或立体异构形式存在。本发明包括所有的此类化合物，包括顺式-和反式-异构体、(r)-和(s)-对映异构体、非对映异构体、(d)-异构体、(l)-异构体、其外消旋混合物，和它们的其他混合物，如落入本发明范围内的那些。其他的不对称碳原子可存在于取代基(例如烷基)中。所有此类异构体及其混合物均包括于本发明中。
本文中所述的化合物及其盐也可以相应的水合物(例如，半水合物、单水合物、二水合物、三水合物、四水合物)或溶剂合物存在。用于制备溶剂合物和水合物的适宜溶剂通常可由本领域技术人员选择。
化合物及其盐可以以无定形或结晶(包括共晶体和多晶型)形式存在。
本发明的调节沉默调节蛋白的化合物有利地调节沉默调节蛋白的水平和/或活性，尤其是沉默调节蛋白的脱乙酰基酶活性。
另外地或除了上述性质外，本发明的具体调节沉默调节蛋白的化合物在有效调节沉默调节蛋白(例如，sirt1和/或sirt3蛋白)的脱乙酰化活性的浓度，基本上不具有一个或多个下列活性：抑制pi3-激酶、抑制糖醛还原酶(aldoreductase)、抑制酪氨酸激酶、转活化egfr酪氨酸激酶、冠状动脉扩张或解痉活性。
“烷基”或“烷烃”是完全饱和的直链的或支链的非芳香烃基。典型地，直链的或支链的烷基具有1至大约20个碳原子，优选具有1至大约10个碳原子，除非另有说明。直链的和支链的烷基的实例包括甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、仲丁基、叔丁基、戊基、己基、庚基和辛基。c1-c4直链的或支链的烷基也称为＂低级烷基＂。
在上述实施方案的任一个中，c1-c4烷氧基-取代的基团可包括一个或多个烷氧基取代基(如1、2或3个甲氧基或一个甲氧基和一个乙氧基)。示例性c1-c4烷氧基取代基包括甲氧基、乙氧基、异丙氧基和叔丁氧基。
在上述实施方案的任一个中，羟基-取代的基团可包括一个或多个羟基取代基，如2或3个羟基。
“卤素”是指f、cl、br或i。
“卤素-取代的”或“卤素”取代是指用f、cl、br或i替代一个或多个氢。
在一方面，术语卤代烷基的定义为一个或多个氢原子被卤素原子替代的任何烷基。在上述实施方案的任一个中，“卤素-取代的”基团包括1个卤素取代基至全卤素取代。示例性卤素-取代的c1-c4烷基包括cfh2、cclh2、cbrh2、cf2h、ccl2h、cbr2h、cf3、ccl3、cbr3、ch2ch2f、ch2ch2cl、ch2ch2br、ch2chf2、chfch3、chclch3、chbrch3、cf2chf2、cf2chcl2、cf2chbr2、ch(cf3)2和c(cf3)3。全卤素-取代的c1-c4烷基，例如，包括cf3、ccl3、cbr3、cf2cf3、ccl2cf3和cbr2cf3。
术语“烯基”(“烯烃”)和“炔基”(“炔烃”)指的是与上述的烷基在长度上类似的不饱和的脂肪族基团，且是对上述的烷基的可行取代，但各自包含至少一个双键或叁键。
在上述实施方案的任一个中，“碳环”基团可是指单环碳环实施方案和/或多环碳环实施方案，如稠合的、桥连的或双环的碳环实施方案。本发明的“碳环”基团可进一步是指芳香碳环实施方案和/或非芳香碳环实施方案，或在多环实施方案的情况下，碳环具有一个或多个芳环和/或一个或多个非芳环。多环碳环实施方案可为双环、稠合环或桥连双环。非限制性示例性碳环包括苯基、环己烷、环戊烷、或环己烯、金刚烷胺、环戊烷、环己烷、双环[2.2.1]庚烷、1，5-环辛二烯、1，2，3，4-四氢萘、双环[4.2.0]辛-3-烯、萘、金刚烷、十氢化萘、萘、1，2，3，4-四氢萘、降冰片烷、十氢化萘、螺戊烷、美金刚、比哌立登、金刚乙胺、樟脑、胆固醇、4-苯基环己醇、双环[4.2.0]辛烷、美金刚和4，5，6，7-四氢-1h-茚和双环[4.1.0]庚-3-烯。
在上述实施方案的任一个中，”杂环”基团可是指单环杂环实施方案和/或多环杂环实施方案，如稠合的、桥连的或双环的杂环实施方案。本发明的“杂环”基团可进一步是指芳香杂环实施方案和/或非芳香杂环实施方案，或在多环实施方案的情况下，杂环具有一个或多个芳环和/或一个或多个非芳环。多环杂环实施方案可为双环、稠合环或桥连双环。非限制性示例性杂环包括吡啶基、吡咯烷、哌啶、哌嗪、吡咯烷、吗啉、嘧啶、苯并呋喃、吲哚、喹啉、内酯、内酰胺、苯并二氮杂
“烯基”是指具有指定数量的成员碳原子且在链中具有一个或多个碳-碳双键的不饱和烃链。例如，c2-c6烯基是指具有2至6个成员碳原子的烯基。在具体实施方案中，烯基在链中具有一个碳-碳双键。在其它实施方案中，烯基在链中具有多于一个碳-碳双键。烯基可任选取代有一个或多个本文定义的取代基。烯基可为直链或支链的。代表性支链的烯基具有一个、两个或三个支链。烯基包括乙烯基、丙烯基、丁烯基、戊烯基和己烯基。
“烷氧基”是指通过氧桥连接的烷基部分(即-o-c1-c6烷基，其中c1-c6在本文定义)。这种基团的实例包括甲氧基、乙氧基、丙氧基、丁氧基、戊氧基和己氧基。
“炔基”是指具有指定数量的成员碳原子且在链中具有一个或多个碳-碳叁键的不饱和烃链。例如，c2-c6炔基是指具有2至6个成员原子的炔基。在具体实施方案中炔基在链中具有一个碳-碳叁键。在其它实施方案中，炔基在链中具有多于一个碳-碳叁键。为清楚起见，在链中具有一个或多个碳-碳叁键且在链中具有一个或多个碳-碳双键的不饱和烃链称为炔基。炔基可任选取代有一个或多个本文定义的取代基。代表性支链的炔基具有一个、两个或三个支链。炔基包括乙炔基、丙炔基、丁炔基、戊炔基和己炔基。
术语“芳香碳环”指的是包含至少一个芳香环的芳香性烃环体系。该环可稠合至或连接至其他的芳香碳环上或非芳香碳环上。芳香碳环基团的实例包括碳环芳香基团例如苯基、萘基和蒽基。
“氮杂双环”指的是在环骨架中包含氮原子的双环分子。双环的两个环可以在两个互相键接的原子处稠合，例如吲哚，跨越一系列的原子稠合，例如氮杂双环[2.2.1]庚烷，或在单个原子处连接，例如，螺环。
“双环”或“双环的”指的是二环体系，其中这两个环之间共享一个、两个或三个或多个原子。双环包括稠合双环，其中两个相邻的原子被这两个环各自所共享，例如，十氢化萘、吲哚。双环也包括螺双环，其中两个环共享一个原子，例如，螺[2.2]戊烷、1-氧杂-6-氮杂螺[3.4]辛烷。双环还包括桥连的双环，其中至少三个原子被两个环所共享，例如，降莰烷。
“桥连双环”化合物为双环体系，其中至少三个原子被该体系的两个环共享，即它们包括连接两个桥头原子的一个或多个原子的至少一个桥。桥连的氮杂双环指的是在至少一个环中包含氮原子的桥连的双环分子。
术语“boc”是指叔丁基氧基羰基(常用的胺保护基)。
在此使用的术语“碳环”和“碳环的”指的是饱和的或不饱和的环，其中该环的各个原子是碳。术语碳环包括芳香碳环和非芳香碳环两者。非芳香碳环包括环烷烃环(其中所有的碳原子是饱和的)和环烯烃环(其包含至少一个双键)两者。“碳环”包括5-7元单环和8-12元双环。双环碳环的各个环可选自非芳香和芳香环。碳环包括双环分子，其中一个、两个或三个或多个原子被这两个环所共享。术语“稠合碳环”指的是其中该环的各个环与另一个环共享两个相邻的原子的双环碳环。稠合碳环的各个环可选自非芳香和芳香环。在示例性的实施方案中，芳香环(例如苯基)可以稠合至非芳香或芳香环，例如，环己烷、环戊烷或环己烯。非芳香和芳香双环的任一组合(只要价键允许)包括于碳环的定义中。示例性的“碳环”包括环戊烷、环己烷、双环[2.2.1]庚烷、1，5-环辛二烯、1，2，3，4-四氢萘、双环[4.2.0]辛-3-烯、萘和金刚烷。示例性的稠合碳环包括十氢化萘、萘、1，2，3，4-四氢萘、双环[4.2.0]辛烷、4，5，6，7-四氢-1h-茚和双环[4.1.0]庚-3-烯。“碳环”可在任一个或多个能够带氢原子的位置被取代。
“环烷基”基团为完全饱和(非芳香)的具有指定数量成员碳原子的环状烃环。典型地，环烷基具有3至大约10个碳原子，更典型地3至8个碳原子，除非另有规定。环烷基为单环环体系。例如，c3-c6环烷基是指具有3至6个成员原子的环烷基。环烷基可任选取代有一个或多个本文定义的取代基。环烷基包括环丙基、环丁基、环戊基和环己基。
“环烯基”基团为在环中包含一个或多个双键的环状烃环。例如，c3-c6环烯基是指具有3至6个成员碳原子的环烯基。在具体实施方案中，环烯基在环中具有一个碳-碳双键。在其它实施方案中，环烯基在环中具有多于一个碳-碳双键。环烯基环不为芳香的。环烯基为单环环体系。环烯基可任选取代有一个或多个本文定义的取代基。环烯基包括环丙烯基、环丁烯基、环戊烯基、环己烯基和环己二烯基。
“芳基”是指芳香烃环体系。芳基为单环体系或双环体系。单环芳基环是指苯基。双环芳基环是指萘基和其中苯基稠合至具有5、6或7个成员碳原子的环烷基或环烯基环的环。芳基可任选取代有一个或多个本文定义的取代基。
术语“杂芳基”或“芳香杂环”包括取代的或未取代的芳香单环结构，优选地5至7-元环，更优选地5至6元环，其中环结构包括至少一个杂原子，优选地1-4个杂原子，更优选地1或2个杂原子。术语“杂芳基”还包括具有其中至少一个环为杂芳香环(例如)且另一环可为环烷基、环烯基、环炔基、芳香碳环、杂芳基和/或杂环基的一个或两个环的环体系。杂芳基包括，例如，吡咯、呋喃、噻吩、咪唑、噁唑、噻唑、吡唑、吡啶、吡嗪、哒嗪和嘧啶。
本文中使用的术语“杂环”和“杂环的”指的是非芳香或芳香环，其包含一个或多个选自例如n、o、b和s原子，优选n、o或s的杂原子。术语“杂环”包括“芳香杂环”和“非芳香杂环”两者。杂环包括4-7元单环和8-12元双环。杂环包括双环分子，其中一个、两个或三个或多个原子为两个环所共享。双环杂环的各个环可以选自非芳香和芳香环。术语“稠合杂环”指的是双环杂环，其中每个环与其他环共享两个相邻的原子。稠合杂环的各个环可选自非芳香和芳香环。在示例性的实施方案中，芳香环(例如吡啶基)可以稠合至非芳香或芳香环，例如环己烷、环戊烷、吡咯烷、2，3-二氢呋喃或环己烯。“杂环”基团包括，例如，哌啶、哌嗪、吡咯烷、吗啉、嘧啶、苯并呋喃、吲哚、喹啉、内酯和内酰胺。示例性的“稠合杂环”包括苯并二氮杂环庚三烯、吲哚、喹啉、嘌呤和4，5，6，7-四氢苯并[d]噻唑。“杂环”可在任一个或多个能够带氢原子的位置被取代。
“单环”包括5-7元芳香碳环或杂芳基、3-7元环烷基或环烯基，和5-7元非芳香杂环基。示例性的单环基团包括取代的或未取代的杂环或碳环，例如，噻唑基、噁唑基、噁嗪基、噻嗪基、二硫杂环己烷基、二噁烷基、异噁唑基、异噻唑基、三唑基、呋喃基、四氢呋喃基、二氢呋喃基、吡喃基、四唑基、吡唑基、吡嗪基、哒嗪基、咪唑基、吡啶基、吡咯基、二氢吡咯基、吡咯烷基、哌啶基、哌嗪基、嘧啶基、吗啉基、四氢噻吩基、噻吩基、环己基、环戊基、环丙基、环丁基、环庚基、氮杂环丁烷基、氧杂环丁烷基、硫杂环丙烷基、氧杂环丙烷基、氮杂环丙烷基和硫吗啉基。
＂成员原子＂是指形成链或环的一个或多个原子。当多于一个成员原子存在于链和环中时，各成员原子共价连接至链或环中相邻的成员原子。构成链或环上的取代基的原子不是链或环中的成员原子。
＂任选取代的＂表示基团，如烷基、烯基、炔基、芳基、环烷基、环烯基、杂环烷基、或杂芳基，可为未取代的，或该基团可取代有一个或多个本文定义的取代基。
如在此使用的“取代的”指的是用不是氢的原子或分子替换结构中的氢原子。涉及基团的“取代的”表示其中连接于基团中成员原子的一个或多个氢原子被选自所限定取代基的取代基代替。可取代的原子(例如“可取代的氮”)是在至少一种共振形式中带有氢原子的原子。氢原子可以被取代为另一原子或基团，如ch3或oh基团。例如，哌啶分子中的氮是可取代的(如果该氮原子连接至氢原子)。例如，如果哌啶的氮连接至非氢的原子，则该氮是不可取代的。在任何共振形式不可能带有氢原子的原子是不可取代的。应当理解，术语“取代的”包括隐含的前提，即这种取代遵照取代原子和取代基的允许化合价，并且该取代生成一种稳定化合物(即不会例如通过水解、重排、环化或消除反应而自发地进行转化的化合物，并且该化合物足够稳定以从反应混合物中分离出来)。当一个基团可含有一个或多个取代基时，该基团中的一个或多个(若合适)成员原子可被取代。此外，基团中的单个成员原子可以被多于一个取代基取代，只要这种取代符合该原子允许的化合价。对于每个取代的或任选取代的基团，合适的取代基在本文定义。
本发明预计的取代基与变体的组合仅是形成稳定化合物的那些。本文所使用的术语“稳定的”是指化合物具有允许其制备的足够稳定性，且可使该化合物的完整性维持足够时间以用于本文中所详述的目的。
氘代化合物
本文中所公开的化合物也包括经部分及完全氘代的变体。在一些实施方案中，氘代的变体可用于动力学研究。本领域技术人员可选择所述氘原子存在的部位。
本发明还包括多种氘代形式的式(i)化合物或其药学上可接受的盐。各个可用的连接至碳原子上的氢原子可以独立地被氘原子替换。本领域技术人员将知晓如何合成氘代形式的本发明的式(i)至(ii)化合物。例如，氘代的物质，如氘代的烷基基团可以通过常规技术制备(参见例如：甲基-d3-胺，获自aldrichchemicalco.，milwaukee，wi，目录号489，689-2)。
同位素
本发明还包括同位素-标记的化合物，其与那些式(i)和(ii)的结构相同，但是一个或多个原子被具有原子量或质量数不同于天然最常见的原子量或质量数的原子替换。可以包括在本发明化合物中的同位素的实例包括氢、碳、氮、氧、氟、碘和氯的同位素，例如3h，11c，14c，18f，123i或125i。
包含上述同位素和/或其它原子的其它同位素的本发明化合物和所述化合物的药学上可接受的盐包括在本发明范围内。同位素标记的本发明化合物，例如已经掺入放射性同位素(例如3h或14c)的那些化合物可用于药物和/或底物组织分布测试。氚代的(即3h)和碳-14(即14c)同位素尤其优选，因为其易于制备和检测。11c和18f同位素尤其在pet(正电子成像术)中有用。
纯度
由于本发明化合物可用于药物组合物中，将容易理解它们各自优选以基本上纯的形式提供，例如至少60％纯度，更合适地至少75％纯度和优选至少85％，尤其至少98％纯度(％基于重量-重量比)。所述化合物的不纯制品可以用于制备用于药物组合物的更纯的形式。
盐
在具体实施方案中，式i化合物或其药学上可接受的盐可以含有酸性官能团。在其他一些实施方案中，式i化合物可以含有碱性官能团。因此，本领域技术人员将会理解，可以制备式i化合物的盐。实际上，在本发明的具体实施方案中，式i化合物的盐可能优于各自的游离碱或游离酸，因为例如这些盐给予分子更大的稳定性或溶解度，由此有助于配制成剂型。
由于它们在药物中的用途，式(i)化合物的盐为适当的药学上可接受的盐。合适的药学上可接受的盐包括berge，bighleyandmonkhousej.pharm.sci(1977)66，pp1-19中描述的那些。
本发明也包括本文所述的化合物的盐，特别是药学上可接受的盐。具有足够酸性、足够碱性或该二性的官能团的本发明化合物，可以和许多的无机碱、及无机与有机酸中的任一种反应形成盐。或者，本身带有电荷的化合物(例如具有季氮的化合物)可和适当抗衡离子(例如，卤离子如溴离子、氯离子或氟离子，特别是溴离子)形成盐。
一般用于形成酸加成盐的酸为无机酸，例如氢氯酸、氢溴酸、氢碘酸、硫酸、磷酸等，及有机酸，例如对-甲苯磺酸、甲磺酸、草酸、对-溴苯基-磺酸、碳酸、琥珀酸、柠檬酸、苯甲酸、醋酸等。此类盐的实例包括硫酸盐、焦硫酸盐、硫酸氢盐、亚硫酸盐、亚硫酸氢盐、磷酸盐、磷酸一氢盐、磷酸二氢盐、偏磷酸盐、焦磷酸盐、氯化物、溴化物、碘化物、醋酸盐、丙酸盐、癸酸盐、辛酸盐、丙烯酸盐、甲酸盐、异丁酸盐、己酸盐、庚酸盐、丙炔酸盐、草酸盐、丙二酸盐、琥珀酸盐、辛二酸盐、癸二酸盐、反丁烯二酸盐、顺丁烯二酸盐、丁炔-1，4-二酸盐、己炔-1，6-二酸盐、苯甲酸盐、氯苯甲酸盐、甲基苯甲酸盐、二硝基苯甲酸盐、羟基苯甲酸盐、甲氧基苯甲酸盐、酞酸盐、磺酸盐、二甲苯磺酸盐、苯基乙酸盐、苯基丙酸盐、苯基丁酸盐、柠檬酸盐、乳酸盐、γ-羟基丁酸盐、乙醇酸盐、酒石酸盐、甲磺酸盐、丙磺酸盐、萘-1-磺酸盐、萘-2-磺酸盐、扁桃酸盐等。
碱加成盐包括衍生自无机碱，例如铵或碱金属或碱土金属氢氧化物、碳酸盐、碳酸氢盐等的那些盐。因此此类可用于制备本发明盐的碱包括氢氧化钠、氢氧化钾、氢氧化铵、碳酸钾等。
“对映异构体过量”或“ee”是一种对映异构体相对于另一种对映异构体的过量，以百分比表示。因此，由于两种对映异构体在外消旋混合物中以等量存在，因此对映异构体过量为0(0％ee)。然而，如果将一种对映异构体富集使得它占产物的95％，那么所述的对映异构体过量将为90％ee(富集的对映异构体的量(95％)减去另一种对映异构体的量(5％))。
“对映异构体富集的”是指对映异构体过量大于0的产物。例如，对映异构体富集的是指对映异构体过量大于50％ee，大于75％ee或大于90％ee的产物。
“对映异构体纯的”是指对映异构体过量为99％ee或更大的产物。
“药学上可接受的”是指那些化合物、物质、组合物和剂型，其在合理医学判断的范围内，适合与人和动物组织接触使用，而没有过度的毒性、刺激性或其它问题或并发症，具有相称的合理受益/风险比。
式(i)的化合物或其药学上可接受的盐可以含有一个或多个不对称中心(也称为手性中心)，因此，其可以以单独的对映异构体、非对映异构体或其它立体异构形式或其混合物的形式存在。
手性中心如手性碳原子还可以存在于取代基如烷基中。当手性中心的立体化学存在于式i或在此所示的任何化学结构中时，虽然没有特定指出，但是所述的结构应该包括任何立体异构体以及其所有的混合物。
因此，含有一个或多个手性中心的式(i)化合物或其药学上可接受的盐可以以外消旋混合物、非对映异构体的混合物、对映异构体富集的混合物、非对映异构体富集的混合物、或对映异构体和非对映异构体纯的各个立体异构体的形式使用。
含有一个或多个不对称中心的式(i)化合物或其药学上可接受的盐的各个立体异构体可以通过本领域技术人员已知的方法拆分。例如，这种拆分可以如下方式进行：(1)通过形成非对映异构体盐、复合物或其它衍生物；(2)通过与立体异构体专一性试剂选择性反应，例如通过酶氧化或还原反应；或(3)通过在手性环境下的气-液色谱或液相色谱，例如，在手性载体如硅胶上与结合的手性配体或在手性溶剂存在下。本领域技术人员将会理解，当所需的立体异构体转化为非对映异构体的盐、复合物或衍生物时，需要另外的步骤以释放所需的形式。或者，特定的立体异构体可以通过使用旋光的试剂、底物、催化剂或溶剂通过不对称合成来合成，或通过不对称转化将一种对映异构体转化为另一种对映异构体。
当所公开的化合物或其盐以结构命名或描述时，应当理解该化合物或盐，包括其溶剂合物(特别是水合物)可以以晶体或非晶体的形式存在，或以它们的混合物的形式存在。该化合物或盐，或其溶剂合物(特别是水合物)也可以表现出多晶型现象(即出现不同晶形的性能)。这些不同的晶体形式典型地被称为“多晶型物”。
由此，本发明化合物的盐形式(即其可包括不同的多晶型、其无水形式、溶剂合物或水合物)可显示出特有的多晶型。如本领域常规理解的那样，多晶型现象是指化合物结晶为多于一种不同结晶或“多晶型”物质的能力。多晶型物定义为具有至少两种不同排列的化合物的固体结晶相或者处于固态的化合物分子的多晶型形式。
任何一种指定化合物(包括本发明的那些化合物)的多晶型形式是通过相同的化学式或组成定义的，但是作为两种不同化合物结晶结构的化学结构并不相同。这类化合物区别可以在于各自晶格的堆积、几何排列等。
应理解当以结构命名或描述时，所公开的化合物，或其溶剂合物(特别是，水合物)，还包括其所有多晶型物。多晶型物具有相同的化学组成，但在晶体固态的堆积、几何排列等和其它描述性性质方面不同。
由此，化学和/或物理属性或特性可能因各自不同的多晶型形式而有所不同，这些不同可以包括溶解性、熔点、密度、硬度、晶相、光和电特性、蒸汽压、稳定性等的不同。
当在结晶过程溶剂分子结合到化合物分子的晶格结构中时，也可以形成本发明的结晶盐的溶剂合物和/或水合物。例如，本发明的溶剂合物形式可以包含下文中所述的非水溶剂例如甲醇等。水合物形式为水作为结合到晶格中的溶剂的溶剂合物形式。
对于固态多晶型的无水合物是指在晶格中不含有重复的、结晶溶剂的结晶结构。然而，该晶体物质可为多孔的，并可显示出能可逆的表面水吸附。
术语和定义
部分2
1.定义
用于本文的下列术语及短语应具有于下文所叙述的含义。除非另行定义，否则在本文中使用的所有技术与科学术语具有与本领域技术人员通常理解的相同含义。
本文中术语“药剂(agent)”用于表示化合物、化合物的混合物、生物大分子(例如核酸、抗体、蛋白或其部分(例如肽))、或从生物材料例如细菌、植物、真菌或动物(特别是哺乳动物)细胞或组织制得的提取物。
当涉及化合物时，术语“生物可利用的”为本领域所公知的，且是指化合物形式，其中所给药化合物的量的全部或一部分能够被所给药的受试者或患者吸收、引入或以其它方式在生理学上被利用。
“沉默调节蛋白的生物学活性部分”是指具有生物活性(例如脱乙酰基化能力(“催化活性”))的沉默调节蛋白的一部分。沉默调节蛋白的催化活性部分可包含沉默调节蛋白的核心结构域。具有genbank登录号np_036370的sirt1的催化活性部分(例如包括nad+结合结构域与底物结合结构域)可包括但不限于genbank登录号np_036370的氨基酸240-664或240-505，其由genbank登录号nm_012238的多核苷酸所编码。因此，此区域有时被称作核心结构域。sirt1的其它催化活性部分(有时也被称作核心结构域)包括genbank登录号np_036370的大致氨基酸261至447，其由genbank登录号nm_012238的核苷酸834至1394所编码；genbank登录号np_036370的大致氨基酸242至493，其由genbank登录号nm_012238的核苷酸777至1532所编码；或genbank登录号np_036370的大致氨基酸254至495，其由genbank登录号nm_012238的核苷酸813至1538所编码。sirt1的其他“生物学活性”部分为genbank登录号np_036370的氨基酸62-293或183-225，其包括对于化合物结合位点重要的在核心结构域n-末端的结构域。
术语“陪伴动物”是指猫与狗。用于本文的术语“狗”是指家犬(canisfamiliaris)的任一成员，其中有许多不同品种。术语“猫”是指猫科动物，包括驯养猫及家猫(familyfelidae，genusfelis)的其它成员。
“糖尿病”是指高血糖或酮酸中毒，以及因长期高血糖状态或葡萄糖耐受性降低所引起的慢性、一般性代谢异常。“糖尿病”包含该疾病的i与ii型(非胰岛素依赖性糖尿病或niddm)两种形式。糖尿病的危险因素包括下列因素：男子腰围超过40英寸或女子腰围超过35英寸，血压为130/85mmhg或以上，甘油三酸酯高于150mg/dl，空腹血糖大于100mg/dl，或男子高密度脂蛋白少于40mg/dl或女子高密度脂蛋白少于50mg/dl。
术语“ed50”是本领域公知的有效量的度量。在一些实施方案中，ed50是指产生其最大响应或功效的50％时的药物剂量，或者在50％的测试受试者或制品(例如分离的组织或细胞)中产生预定响应的剂量。术语“ld50”是本领域公知的致死剂量的度量。在一些实施方案中，ld50是指使50％的测试受试者致死的药物剂量。术语“治疗指数”为本领域所公知的术语，是指药物的治疗指数，定义为ld50/ed50。
术语“高胰岛素血症”是指个体血液中胰岛素水平高于正常值的状态。
术语“胰岛素抵抗”是指这样的一种状态，其中相对于在不具有胰岛素抵抗的受试者中的生物响应而言，正常量胰岛素产生低于正常(subnormal)生物响应的状态。
本文所讨论的“胰岛素抵抗病症”是指由胰岛素抵抗所引起或促成的任何疾病或状况。实例包括：糖尿病、肥胖症、代谢综合征、胰岛素抵抗综合征、综合征x、胰岛素抵抗、高血压、血压过高、高血胆固醇、血脂异常、高脂血症、动脉粥样硬化疾病，包括中风、冠状动脉疾病或心肌梗塞、高血糖症、高胰岛素血症和/或高胰岛素原血症、葡萄糖耐受不良、延迟胰岛素释放、糖尿病并发症，包括冠心病、心绞痛、充血性心脏衰竭、中风、痴呆的认知功能、视网膜病、周围神经病、肾病、肾小球肾炎、肾小球硬化症、肾病变综合征、高血压性肾硬化、一些癌症类型(如子宫内膜癌、乳腺癌、前列腺癌与结肠癌)、妊娠并发症、雌性生殖健康变差(例如月经不调、不育、不定期排卵、多囊卵巢性综合征(pcos))、脂肪代谢障碍、胆固醇相关病症，例如胆结石、胆囊炎与胆石病，痛风、阻塞性睡眠呼吸暂停与呼吸问题、骨关节炎，以及骨丢失，例如尤其是骨质疏松症。
术语“家畜动物”是指经驯化的四足动物，其包括那些为肉类与各类副产品而饲养的动物，例如牛类动物，包括牛与牛属(genusbos)的其它成员，猪类动物，包括驯养猪与猪属(genussus)的其它成员，羊类动物，包括绵羊与其它羊属(genusovis)的成员、驯养山羊与山羊属(genuscapra)的其它成员；为特定任务例如用做负重畜牲而饲养的经驯化的四足动物，例如马类动物，包括驯养马与马科马属(familyequidae，genusequus)的其它成员。
术语“哺乳动物”为本领域已知的，且示例性哺乳动物包括人、灵长类、家畜动物(包括牛类、猪类等)、陪伴动物(例如犬类、猫类等)及啮齿类(例如小鼠与大鼠)。
“肥胖”个体或患有肥胖症的个体，一般指具有的体重指数(bmi)为至少25或以上的个体。肥胖可以与或不与胰岛素抵抗相关。
术语“经肠胃外给药”及“经肠胃外进行给药”为本领域公认的，且指非肠给药与局部给药的给药模式，一般经由注射，且包括但不限定于：静脉内、肌肉内、动脉内、鞘内、囊内、眶内、心内、真皮内、腹膜内、经气管、皮下、表皮下、关节内、囊下、蛛网膜下、脊柱内与胸骨内注射及输注给药。
“患者”、“受试者”、“个体”或“宿主”是指人或非人动物。
术语“药学上可接受的载体”为本领域公认的，且是指与携带或运送任何主题组合物或其组分有关的药学上可接受的材料、组合物或载体，例如液体或固体填充剂、稀释剂、赋形剂、溶剂或包封物料。各种载体就其可与主题组合物或其组分相容的意义而言必须为“可接受的”，且对患者是无害的。可用作药学上可接受载体的材料的一些实例包括：(1)糖类，例如乳糖、葡萄糖与蔗糖；(2)淀粉，例如玉米淀粉与马铃薯淀粉；(3)纤维素与其衍生物，例如羧甲基纤维素钠、乙基纤维素和醋酸纤维素；(4)成粉末的西黄耆胶；(5)麦芽；(6)明胶；(7)滑石粉；(8)赋形剂，例如可可脂与栓剂蜡；(9)油类，例如花生油、棉籽油、红花油、芝麻油、橄榄油、玉米油与大豆油；(10)二醇类，例如丙二醇；(11)多元醇类，例如甘油、山梨糖醇、甘露糖醇与聚乙二醇；(12)酯类，例如油酸乙酯与月桂酸乙酯；(13)琼脂；(14)缓冲剂，例如氢氧化镁与氢氧化铝；(15)藻酸；(16)无热源水；(17)等渗盐水；(18)林格氏溶液；(19)乙醇；(20)磷酸盐缓冲溶液；及(21)其它用于医药制剂的无毒性相容物质。
术语“预防”为本领域所公知的，且与涉及在病症(例如局部复发(如疼痛))、疾病(例如癌症)、综合征(例如心力衰竭)或任何其他医学病症使用时，其在本领域中是公知的，包括给药组合物，其与没有接受该组合物的受试者相比，其在受试者中降低了医学病症的症状的频率或延迟了其发作。因此，癌症的预防包括，例如，在接受预防性治疗的患者群中降低了可检测到的癌生长的数量(相对于未治疗的对照人群)，和/或在治疗的人群中延迟了可检测癌生长的出现(与未治疗的对照人群相比)，例如，通过具有统计学和/或临床显著性的量。感染的预防包括，例如，在治疗的人群中降低了诊断的感染的数量(与未治疗的对照人群相比)，和/或在治疗的人群中延迟了感染症状的发作(与未治疗的对照人群相比)。疼痛的预防包括，例如，在治疗的人群中降低了由该受试者觉察到的疼痛感的程度或者延迟了该感觉(与未治疗的对照人群相比)。
术语“预防性”或“治疗性”治疗为本领域所公知的，且指将药物给药至宿主。如果在不希望病症(例如，宿主动物的疾病或其它不希望状态)临床显现之前进行给药，则该治疗为预防性，即其保护宿主不会发展成该不希望病症，而如果在不希望病症显现之后进行给药，则该治疗为治疗性的(即意在减少、改善或维持现有的不希望病症或由其产生的副作用)。
在涉及组合物时，术语“无热源(pyrogen-free)”是指热源含量不会在已给药该组合物的受试者中导致有害作用(例如，刺激、发热、炎症、腹泻、呼吸窘迫、内毒素性休克等)的组合物。例如，该术语既定包括不含或基本上不含诸如脂多糖(lps)等内毒素的组合物。
细胞的“复制寿命”是指由单个“母细胞”所产生的子细胞数量。另一方面，“自然老化(chronologicalaging)”或“自然寿命”是指一群不分裂的细胞当被除去养分时仍保持存活的时间长度。当应用于细胞或生物体时，“增加细胞寿命”或“延长细胞寿命”是指增加由一个细胞所产生的子细胞数量；增加细胞或生物体对抗应激及对抗损伤(例如对dna、蛋白的应激和损伤)的能力；和/或增加细胞或生物体可于特别条件例如应激(如热休克、渗透压力、高能量照射、化学诱导的应激、dna损伤、不合适的盐水平、不合适的氮水平或不充足的营养物水平)下存活更长时间和生存状态存在更长时间的能力。使用本文中所述的方法，寿命可增加至少约10％、20％、30％、40％、50％、60％，或20％至70％、30％至60％、40％至60％或以上。
“调节沉默调节蛋白的化合物”是指增加沉默调节蛋白水平和/或增加沉默调节蛋白的至少一种活性的化合物。在示例性的实施方案中，调节沉默调节蛋白的化合物可使沉默调节蛋白的至少一种生物活性增加至少约10％、25％、50％、75％、100％或以上。沉默调节蛋白的示例性生物活性包括例如组蛋白与p53的脱乙酰基化；延长寿命；增加基因组的稳定性；沉默转录作用；及调控母细胞与子细胞间的经氧化蛋白的分离。
蛋白包括脱乙酰化，例如，乙酰化肽底物。
“沉默调节蛋白”是指沉默调节蛋白的脱乙酰基酶蛋白家族或优选指sir2家族的成员，其包括酵母sir2(genbank登录号p53685)、秀丽隐杆线虫sir-2.1(genbank登录号np_501912)及人sirt1(genbank登录号nm_012238与np_036370(或af083106))与sirt2(genbank登录号nm_012237、nm_030593、np_036369、np_085096与af083107)蛋白。其它家族成员包括称作“hst基因”(sir2的同系物)的四种其它酵母sir2类基因hst1、hst2、hst3与hst4，及五种其它人同系物hsirt3、hsirt4、hsirt5、hsirt6与hsirt7(brachmann等人，(1995)genesdev.9：2888及frye等人(1999)bbrc260：273)。
“sirt1蛋白”是指沉默调节蛋白的脱乙酰基酶的sir2家族的成员。在一些实施方案中，sirt1蛋白包括酵母sir2(genbank登录号p53685)、秀丽隐杆线虫sir-2.1(genbank登录号np_501912)、人sirt1(genbank登录号nm_012238或np_036370(或af083106))、小鼠sirt1(genbank登录号nm_019812或np_062786)及其等同物与片段。在另一个实施方案中，sirt1蛋白包括多肽，其包含由或基本上由示于genbank登录号np_036370、np_501912、np_085096、np_036369或p53685中的氨基酸序列所组成的序列。sirt1蛋白包括含有下列氨基酸序列的全部或一部分的多肽及其功能性片段：示于genbank登录号np_036370、np_501912、np_085096、np_036369或p53685中的氨基酸序列；示于genbank登录号np_036370、np_501912、np_085096、np_036369或p53685中的具有1至约2、3、5、7、10、15、20、30、50、75或更多保守性氨基酸取代的氨基酸序列；与genbank登录号np_036370、np_501912、np_085096、np_036369或p53685至少60％、70％、80％、90％、95％、96％、97％、98％或99％相同的氨基酸序列。本发明中的多肽也包括genbank登录号np_036370、np_501912、np_085096、np_036369或p53685的同源物(直系同源物(orthologs)与旁系同源物(paralogs))、变体或片段。
在此使用的“sirt2蛋白”、“sirt3蛋白”、“sirt4蛋白”、“sirt5蛋白”、“sirt6蛋白”和“sirt7蛋白”指的是其他的哺乳动物(例如人)的沉默调节蛋白的脱乙酰基酶蛋白(其与sirt1蛋白同源，尤其在约275个氨基酸保守催化结构域)。例如，“sirt3蛋白”指的是沉默调节蛋白的脱乙酰基酶蛋白家族的成员(其与sirt1蛋白同源)。在一个实施方案中，sirt3蛋白包括人sirt3(genbank登录号aah01042、np_036371或np_001017524)与小鼠sirt3(genbank登录号np_071878)蛋白，及其等同物与片段。在一些实施方案中，sirt4蛋白包括人sirt4(genbank登录号nm_012240或np_036372)。在一些实施方案中，sirt5蛋白包括人sirt5(genbank登陆编号nm_012241或np_036373)。在一些实施方案中，sirt6蛋白包括人sirt6(genbank登录号nm_016539或np_057623)。在另一个实施方案中，sirt3蛋白包括多肽，其包含由或基本上由示于genbank登录号aah01042、np_036371、np_001017524或np_071878中的氨基酸序列所组成的序列。sirt3蛋白包括含有下列氨基酸序列的全部或一部分的多肽及其功能性片段：示于genbank登录号aah01042、np_036371、np_001017524或np_071878中的氨基酸序列；示于genbank登录号aah01042、np_036371、np_001017524或np_071878中的具有1至约2、3、5、7、10、15、20、30、50、75或更多保守性氨基酸取代的氨基酸序列；与genbank登录号aah01042、np_036371、np_001017524或np_071878至少60％、70％、80％、90％、95％、96％、97％、98％或99％相同的氨基酸序列。本发明中的多肽也包括genbank登录号aah01042、np_036371、np_001017524或np_071878的同源物(直系同源物与旁系同源物)、变体或片段。在一些实施方案中，sirt3蛋白包括以线粒体基质加工肽酶(mpp)和/或线粒体中间物肽酶(mip)裂解而产生的sirt3蛋白片段。
本文中所使用的术语“立体异构体”为本领域所公知的，且指具有相同分子组成且仅在空间上它们的原子的三维排列不同的任意两个或多个异构体。当在文中用于描述化合物或通式化合物时，立体异构体包括该化合物的任一部分或全部化合物。例如，非对映异构体和对映异构体是立体异构体。
术语“全身性给药”和“全身地给药”为本领域所公知的，且指将主题组合物、治疗剂或其它物质肠内给药或肠胃外给药。
本文中使用的术语“互变异构体”为本领域所公知的，且指由互变异构现象造成可能存在的任一可能的结构式变化，其指的是构造异构形式，其中结构可以以两种或多种构造排列形式存在，尤其是在连接至氧的氢的位置方面。当在文中用于描述化合物或通式化合物时，进一步理解“互变异构体”是容易互相转变的且处于平衡状态。例如，酮式和烯醇式互变异构体以一定的比例存在，这取决于给定条件或设定条件下的平衡位置：
术语“治疗剂”为本领域所公知的，且是指可于受试者内局部或全身性起作用的生物学、生理学或药理学活性物质。该术语也是指欲用于诊断、治愈、减轻、治疗或预防疾病的任何物质，或用于增进动物或人的希望的身体或精神发展和/或状况的物质。
术语“治疗功效”为本领域所公知的，且指动物(特别是哺乳动物，且更特别地为人)中由药理学活性物质产生的有益的局部或全身性功效。术语“治疗上有效量”是指，使物质能以任何治疗的合理效益/风险比应用的，产生某种所希望的局部或全身功效的量。此类物质的治疗上有效量将随欲受治疗的受试者与疾病状况、受试者的体重与年龄、疾病状况的严重度、给药方式等而有所变化，其可由本领域技术人员容易地确定。例如，本文所述的一些组合物能以此治疗的合理效益/风险比应用的产生所希望功效的足够量来进行给药。
“治疗”病症或疾病是指治愈以及改善该病症或疾病的至少一种症状。
术语“视力损伤”是指视力减弱，其在进行治疗(例如手术)时往往仅部分可逆或不可逆。特别严重的视力损伤称为“盲”或“视力丧失”，其是指视力完全丧失、视力差于20/200以致无法经由矫正镜片改善，或视野小于20度直径(10度半径)。
缩写和符号
在发明的描述中，化学元素按照元素周期表确定。本文中所使用的缩写和符号按照化学和生物学领域中技术人员对于此类缩写和符号的常规用法。
具体地，在本说明书全篇和实施例中可使用如下缩写：
g(克)；mg(毫克)；
kg(千克)；μg(微克)；
l(升)；ml(毫升)；
μl(微升)；psi(磅/平方英尺)；
m(摩尔)；mm(毫摩尔)；
μm(微摩尔)；nm(纳摩尔)；
pm(皮摩尔)；nm(纳米)；
mm(毫米)；wt(重量)；
n(当量浓度(normal))；cfu(集落形成单位)；
i.v.(静脉内)；hz(赫兹)；
mhz(兆赫兹)；mol(摩尔)；
mmol(毫摩尔)；rt(室温)；
min(分钟)；h(小时)；
b.p.(沸点)；tlc(薄层色谱法)；
tr(保留时间)；rp(反相)；
meoh(甲醇)；i-proh(异丙醇)；
tea(三乙胺)；tfa(三氟乙酸)；
tfaa(三氟乙酸酐)；thf(四氢呋喃)；
dmso(二甲基亚砜)；etoac(乙酸乙酯)；
dme(1，2-二甲氧基乙烷)；dcm(二氯甲烷)；
dce(二氯乙烷)；dmf(n，n-二甲基甲酰胺)；
dmpu(n，n′-二甲基丙烯脲)；cdi(1，1-羰基二咪唑)；
ibcf(氯甲酸异丁酯)；acoh(乙酸)；
hoat(1-羟基-7-氮杂苯并三唑)；
thp(四氢吡喃)；nmm(n-甲基吗啉)；
pd/c(钯碳)；mtbe(叔丁基甲基醚)；
hobt(1-羟基苯并三唑)；mcpba(间氯过苯甲酸)；
edc(1-[3-二甲基氨基)丙基]-3-乙基碳二亚胺盐酸盐)；
boc(叔丁基氧基羰基)；fmoc(9-芴基甲氧基羰基)；
dcc(二环己基碳二亚胺)；cbz(苄基氧基羰基)；
ac(乙酰基)；atm(气氛)；
tmse(2-(三甲基甲硅烷基)乙基)；tms(三甲基甲硅烷基)；
tips(三异丙基甲硅烷基)；tbs(叔丁基二甲基甲硅烷基)；
dmap(4-二甲基氨基吡啶)；bsa(牛血清白蛋白)
nad(烟酰胺腺嘌呤二核苷酸)；
hplc(高压液相色谱法)；
lc/ms(液相色谱法/质谱分析)；
bop(二(2-氧代-3-噁唑烷基)膦酰氯)；
tbaf(四正丁基氟化铵)；
hbtu(o-苯并三唑-1-基-n，n，n’，n’-四甲基脲鎓六氟磷酸盐)。
hepes(4-(2-羟基乙基)-1-哌嗪乙烷磺酸)；
dppa(叠氮磷酸二苯酯)；lah(氢化铝锂)；
fhno3(发烟hno3)；naome(甲醇钠)；
edta(乙二胺四乙酸)；
tmeda(n，n，n′，n′-四甲基-1，2-乙二胺)；
nbs(n-溴代琥珀酰亚胺)；dipea(二异丙基乙基胺)；
dppf(1，1′-二(二苯基膦基)二茂铁)；和
nis(n-碘代琥珀酰亚胺)。
所有引用醚的地方都是指乙醚，盐水是指饱和nacl水溶液。
合成方案和一般制备方法
本发明还分别涉及制备式(i)至(iv)的化合物、其相应的类似物(即，在r2位具有氢取代)，和/或中间体化合物的方法。
式(i)至(iv)的化合物、其相应的类似物(即，在r2位具有氢取代)和/或中间体化合物或其药学上可接受的盐可通过使用下面的方案中说明的合成方法获得或利用有机化学工作者的知识获得。
在这些方案(i)至(vi)中提供的合成方法适合通过应用合适的前体制备具有多种不同的官能团的本发明化合物，它们在需要时适当保护，以达到与本文所述反应相容。需要时，随后进行脱保护以得到一般公开的所述实际化合物。虽然所述方案用文中所限定的化合物说明，但它们是用于制备本发明化合物的方法的例子。
中间体(用于制备本发明化合物的化合物)也可以盐的形式存在。因此，对于中间体，术语“式(数字)的化合物”指的是具有该结构式的化合物或其药学上可接受的盐。
本发明还涉及分别制备式(i)至(iv)化合物、其相应的类似物(即，在r2位具有氢取代)，和/或中间体化合物或其药学上可接受的盐的方法。
根据式(i)至(ii)的化合物或其药学上可接受的盐可分别使用常规的有机合成的方法制备。本发明还涉及使用常规有机合成制备式(i)至(iv)化合物、其相应的类似物(即，在r2位具有氢取代)，和/或中间体化合物或其药学上可接受的盐的方法。
本发明化合物可通过使用下面的方案中说明的合成方法获得或利用熟练的有机化学工作者的知识获得。
合适的合成路线在以下一般反应方案中描述。
化合物制备
根据另一实施方案，本发明提供了制备以上定义的化合物的方法。所述化合物可使用常规技术合成。有利地，这些化合物方便地从易于获得的起始原料合成。
用于合成本文所述的化合物的合成化学转化和方法是本领域已知的且包括，例如，以下所描述的那些：r.larock，comprehensiveorganictransformations(1989)；t.w.greeneandp.g.m.wuts，protectivegroupsinorganicsynthesis，2d.ed.(1991)；l.fieserandm.fieser，fieserandfieser′sreagentsfororganicsynthesis(1994)；和l.paquette，ed.，encyclopediaofreagentsfororganicsynthesis(1995)。
一般步骤
方案i
试剂：(a)thf，nahco3，60℃；(b)fe，i-proh，hoac，80℃；(c)alcl3，lialh4，thf，rt；(d)pocl3，dea，dcm，0℃。
市售氯吡啶(i-1)在碱的存在下(以清除hcl)在非质子溶剂中(例如，thf，dmf，二噁烷)与亲核胺(i-2)反应，提供区域选择性加成产物(i-3)。物质(i-3)的硝基官能团在布朗斯特酸(hcl，hoac)和质子溶剂的存在下使用fe(0)还原，(参见，bechampreduction，orgreact.2，428，1944)。可使用其它金属如sn以实现该还原。原位形成的所得中间体胺物质在升高的温度与酯官能团反应，形成环状酰胺i-4。强的氢化物还原剂(如lialh4)与化合物i-4反应导致酯还原为相应的醇且同时将内酰胺还原为环状胺。这种类型的还原是本领域技术人员众所周知的，参见h.c.brown和s.krishnamurthy，tetrahedron，1979，35，567。醇(i-5)与活化基团(如pocl3)反应，能够形成灵巧的离去基团，提供了双环胺化合物(i-6)。
方案ii
试剂：(a)tea，ch3oh，120℃，300psico，pdcl2(dppf)；(b)nah，thf，3-(吡啶-2-基)-2h-吡啶并[1，2a][1，3，5]三嗪-2，4(3h)-二酮，65℃，然后h2o；(c)dipea，dmf，hatu，烷基胺，rt。
芳基氯(i-6)在压力和升高的温度在醇的存在下与co反应，制备酯(ii-1)。羰基化反应描述于文献(参见，principlesandapplicationsoforganotransitionmetalchemistry.sausalito，ca：universitysciencebooks；1987)且是本领域技术人员众所周知的。胺(ii-1)与酰基化试剂如三光气或羰基二咪唑在非质子溶剂(dcm，chcl3，thf，等)中反应，然后在叔烷基胺碱的存在下用苯胺化合物或烷基胺原位处理。通过原位产生的naoh发生酯官能团的伴随水解，形成脲物质(ii-2)。羧酸(ii-2)在偶合试剂(hatu)的存在下在极性非质子溶剂中与烷基胺反应，得到相应的酰胺(ii-3)。多种酰胺偶合试剂如edc、pybrop等是可商购的。酰胺偶合反应通常在溶剂如dcm或dmf中进行，使用有机碱如et3n或(i-pr)2net。
方案iii
试剂：(a)pd2(dba)3，x-phos，cs2co3，二噁烷/h2o，90℃；(b)tea，三光气，thf；然后2-氨基吡啶，65℃。
化合物i-6的氯官能团使用suzuki偶联化学反应与硼酸偶联，得到iii-1。suzuki样的偶联通常使用钯(0)催化剂如pd(pph3)4与无机碱例如k2co3、na2co3或k3po4，在包含醚溶剂如dme、二噁烷或thf的水性混合物中进行。钯-介导的偶联的方法描述于标准文献，如schlosser″organometallicsinsynthesis″(wileyandsons出版)。化合物iii-1与酰基化试剂如三光气或羰基二咪唑在非质子溶剂(dcm，chcl3，thf等)中反应，得到反应性酰基中间体物质，其用苯胺化合物或烷基胺在叔烷基胺碱的存在下原位处理，形成脲物质(iii-2)。
方案iv
试剂：(a)3-三氟甲基吡咯烷，(1，3-二(2，6-二异丙基苯基)-4，5-二氢咪唑-2-亚基)氯)(3-苯基烯丙基)钯，kot-bu，dme，80℃；(b)tea，三光气，thf；然后2-氨基吡啶，65℃。
脲i-6的氯官能团使用buchwald-hartwig胺化条件选择性地被烷基胺代替，得到(iv-1)。buchwald-hartwig反应通常使用钯(0)催化剂如pd(pph3)4与大量布朗斯特碱例如kot-bu或khmds(包含醚溶剂如dme、二噁烷或thf)进行。钯介导的胺偶联的方法描述于hartwig，j.f.(1998)，transitionmetalcatalyzedsynthesisofarylaminesandarylethersfromarylhalidesandtriflates：scopeandmechanism，angew.chem.int.ed.37：2046-2067。化合物iv-1与酰基化试剂如三光气或羰基二咪唑在非质子溶剂(dcm，chcl3，thf等)中反应，得到反应性酰基中间体物质，其在叔烷基胺碱的存在下原位用苯胺化合物处理，形成脲物质(iv-2)。
方案v
试剂：(a)nbs或ncs，chcl3，60℃；(b)nah，thf，3-(吡啶-2-基)-2h-吡啶并[1，2a][1，3，5]三嗪-2，4(3h)-二酮，65℃，然后h2o；(c)dipea，dmf，hatu，烷基胺，rt。
胺(ii-1)在合适的溶剂中与亲电卤化剂如ncs或nbs反应，以区域选择性方式得到相应的卤化物质v-1。存在许多方法以实现芳环的卤化且是本领域技术人员众所周知的。酯(v-1)与酰基化试剂如三光气或羰基二咪唑在非质子溶剂(dcm，chcl3，thf等)中反应，然后用苯胺化合物或烷基胺在叔烷基胺碱的存在下处理。通过原位产生的naoh发生酯官能团的伴随水解，形成脲物质(v-2)。羧酸(v-2)在偶合试剂(hatu)的存在下在极性非质子溶剂中与烷基胺反应，得到相应的酰胺(v-3)。多种酰胺偶合试剂如edc、pybrop等是可商购的。酰胺偶合反应通常使用有机碱如et3n或(i-pr)2net在溶剂如dcm或dmf中进行。
方案vi
试剂：(a)nbs或ncs，chcl3，60℃；(b)tea，三光气，thf；然后2-氨基吡啶，65℃。
化合物iii-1在合适的溶剂中与亲电卤化剂如ncs或nbs反应，以区域选择性方式得到相应的卤化物质vi-1。存在许多方法以实现芳环的卤化且是本领域技术人员众所周知的。化合物vi-1与酰基化试剂如三光气或羰基二咪唑在非质子溶剂(dcm，chcl3，thf等)中反应，得到反应性酰基中间体物质，其用苯胺化合物或烷基胺在叔烷基胺碱的存在下原位处理以形成脲物质(vi-2)。
方案vii
试剂：(a)nis，chcl3，60℃；(b)三甲基硼氧六环，pd(pph3)4，k2co3，二噁烷/h2o，90℃；
化合物i-6在合适的溶剂中与亲电卤化剂(nis)反应，以区域选择性方式得到相应的卤化物质vii-1。存在许多方法以实现芳环的卤化且是本领域技术人员众所周知的。化合物vii-1的碘官能团使用suzuki偶联化学反应与烷基硼酸偶联，得到vii-2。suzuki样的偶联通常使用钯(0)催化剂如pd(pph3)4与无机碱例如k2co3、na2co3或k3po4在包含醚溶剂如dme、二噁烷或thf的水性混合物中进行。钯-介导的偶联的方法描述于标准文献，如schlosser″organometallicsinsynthesis″(wileyandsons出版)。甲基化物质(vii-2)在方案ii和iii中用作化合物i-6的替代品以制备类似的甲基化产品。
化合物特征和性质
在一个示例性的实施方案中，该治疗性化合物可能穿过细胞的胞质膜。例如，化合物可具有至少约20％、50％、75％、80％、90％或95％的细胞-通透性。
本文所述的化合物也可具有一个或多个下列特性：该化合物可基本上对细胞或受试者无毒性；该化合物可为有机分子或具有2000amu或小于2000amu，1000amu或小于1000amu的小分子；该化合物可于正常大气条件下具有至少约30天、60天、120天、6个月或1年的半衰期；该化合物于溶液中可具有至少约30天、60天、120天、6个月或1年的半衰期；该化合物可于溶液中稳定，较白藜芦醇稳定至少约50％、2倍、5倍、10倍、30倍、50倍或100倍；该化合物可促进dna修复因子ku70的脱乙酰基化作用；该化合物可促进rela/p65的脱乙酰基化作用；该化合物可增加一般转换率，及增强细胞对tnf-所诱发细胞凋亡的敏感性。
在一些实施方案中，调节沉默调节蛋白的化合物在(例如体内)有效调节沉默调节蛋白的脱乙酰基酶活性的浓度下，不具有抑制第i类组蛋白脱乙酰基酶(hdac)、和/或第ii类hdac的任何实质能力。例如，在优选的实施方案中，调节沉默调节蛋白的化合物为以下调节沉默调节蛋白的化合物，其抑制hdaci和/或hdacii的ec50值是对活化沉默调节蛋白的脱乙酰基酶活性的ec50值的至少5倍，且甚至优选至少10倍、100倍或甚至1000倍。用于分析hdaci和/或hdacii活性的方法为本领域所熟知，且进行此类分析的试剂盒可市场上购得。参见例如，biovision，inc.(mountainview，ca；网址biovision.com)及thomasscientific(swedesboro，nj；网址thomassci.com)。
在一些实施方案中，调节沉默调节蛋白的化合物不具有调节沉默调节蛋白同系物的任何实质能力。在一些实施方案中，人沉默调节蛋白的活化剂，在(例如活体内)有效活化人沉默调节蛋白的脱乙酰基酶活性的浓度下，可能不具有活化得自低等真核生物，特别是酵母或人病原体的沉默调节蛋白的任何实质能力。例如，调节沉默调节蛋白的化合物对活化酵母沉默调节蛋白(例如sir2(如念珠菌属、酿酒酵母等))的ec50值是对于活化人沉默调节蛋白(例如sirt1和/或sirt3)脱乙酰基酶活性的ec50值的至少5倍，且甚至更优选至少10倍、100倍或甚至1000倍。在另一实施方案中，得自低等真核生物(特别是酵母或人病原体)的沉默调节蛋白的抑制剂，在(例如活体内)有效抑制得自低等真核生物的沉默调节蛋白的脱乙酰基酶活性的浓度下，不具有抑制得自人的沉默调节蛋白的任何实质能力。例如，沉默调节蛋白的抑制性化合物对抑制酵母沉默调节蛋白(例如sir2(如念珠菌属、酿酒酵母等))的ic50值是对于抑制人沉默调节蛋白(例如sirt1和/或sirt3)的脱乙酰基酶活性的ic50值的至少5倍，且甚至更优选至少10倍、100倍或甚至1000倍。
在一些实施方案中，调节沉默调节蛋白的化合物可具有调节一种或多种沉默调节蛋白同系物，诸如一种或多种人sirt1、sirt2、sirt3、sirt4、sirt5、sirt6或sirt7的能力。在一些实施方案中，调节沉默调节蛋白的化合物具有调节sirt1及sirt3蛋白的能力。
在其它实施方案中，sirt1调节剂在(例如活体内)有效调节人sirt1的脱乙酰基酶活性的浓度下，不具有调节其它沉默调节蛋白同系物，诸如一种或多种人sirt2、sirt3、sirt4、sirt5、sirt6或sirt7的任何实质能力。例如，调节沉默调节蛋白的化合物可选择具有对调节人sirt1脱乙酰基酶活性的ed50值，所对应的活性为调节一种或多种人sirt2、sirt3、sirt3、sirt4、sirt5、sirt6或sirt7的ed50值的至少5倍，且甚至更优选至少10倍、100倍或甚至1000倍的那些化合物。在一些实施方案中，sirt1调节剂不具有调节sirt3蛋白的任何实质能力。
在其它实施方案中，sirt3调节剂在有效调节人sirt3的脱乙酰基酶活性的浓度(例如，在体内)不具有任何调节其它沉默调节蛋白蛋白同源物(例如人sirt1、sirt2、sirt4、sirt5、sirt6或sirt7中的一个或多个)的实质能力。例如，调节沉默调节蛋白的化合物对调节一种或多种人sirt1、sirt2、sirt4、sirt5、sirt6或sirt7的ed50值是对调节人sirt3脱乙酰基酶活性的ed50值的至少5倍，且甚至更优选至少10倍、100倍或甚至1000倍。在一个实施方案中，sirt3调节剂不具有调节sirt1蛋白的任何实质能力。
在一些实施方案中，调节沉默调节蛋白的化合物对沉默调节蛋白的结合亲和力为约10-9m、10-10m、10-11m、10-12m或以下。调节沉默调节蛋白的化合物可减少(活化剂)或增加(抑制剂)沉默调节蛋白对于其底物或nad+(或其它辅因子)的表观km值达至少约2、3、4、5、10、20、30、50或100倍。在一些实施方案中，km值使用本文所述的质谱分析测定。优选的活化化合物减少沉默调节蛋白对于其底物或辅因子的km值，至较由白藜芦醇在相似浓度下所引起的更大的程度，或减少沉默调节蛋白对于其底物或辅因子的km值，相似于由白藜芦醇在较低浓度下所引起的km值。调节沉默调节蛋白的化合物可增加沉默调节蛋白的vmax值至少约2、3、4、5、10、20、30、50或100倍。调节沉默调节蛋白的化合物对调节sirt1和/或sirt3蛋白的脱乙酰基酶活性的ed50值少于约1nm，少于约10nm，少于约100nm，少于约1μm，少于约10μm，少于约100μm，或从约1-10nm，从约10-100nm，从约0.1-1μm，从约1-10μm或从约10-100μm。调节沉默调节蛋白的化合物可调节sirt1和/或sirt3蛋白的脱乙酰基酶活性达至少约5、10、20、30、50或100倍，通过细胞分析或以细胞为基础的分析(cellbasedassay)测定。调节沉默调节蛋白的化合物可诱导沉默调节蛋白的脱乙酰基酶活性，相对于相同浓度的白藜芦醇为至少约10％、30％、50％、80％、2倍、5倍、10倍、50倍或100倍。调节沉默调节蛋白的化合物对调节sirt1和/或sirt3的ed50值是对调节sirt5的ed50值的至少约10倍、20倍、30倍、50倍。
示例性的用途
在一些方面，本发明提供了用于调节沉默调节蛋白的水平和/或活性的方法或用途，及其使用方法。
在一些实施方案中，本发明提供了使用调节沉默调节蛋白的化合物的方法或用途，其中调节沉默调节蛋白的化合物活化沉默调节蛋白，例如增加沉默调节蛋白的水平和/或活性。增加沉默调节蛋白的水平和/或活性的调节沉默调节蛋白的化合物可用于各种治疗应用，包括例如增加细胞寿命，及治疗和/或预防许多种疾病与病症，包括例如与老化或应激有关的疾病或障碍、糖尿病、肥胖、神经变性疾病、心血管疾病、凝血病症、炎症、癌症和/或潮红等。该方法或用途包含将药学上有效量的调节沉默调节蛋白的化合物(例如调节沉默调节蛋白的化合物)给药于对其有需要的患者。
不希望受限于理论，但相信本发明的活化剂可在沉默调节蛋白内的相同部位(例如，活性位置或影响该活性位置的km或vmax的位置)与沉默调节蛋白相互作用。认为此即一些类沉默调节蛋白的活化剂与抑制剂为何能具有实质结构相似性的原因。
在一些实施方案中，本文中所述的调节沉默调节蛋白的化合物可单独使用或与其它化合物组合使用。在一些实施方案中，可将两种或更多种调节沉默调节蛋白的化合物的混合物给药于对其有需要的受试者。
在另一个实施方案中，增加沉默调节蛋白的水平和/或活性的调节沉默调节蛋白的化合物可与一种或多种下列化合物一起给药：白藜芦醇、紫铆花素、非瑟素、白皮杉醇(piceatannol)或槲皮素。
在一个示例性的实施方案中，将增加沉默调节蛋白的水平和/或活性的调节沉默调节蛋白的化合物与烟酸或烟酰胺核糖苷组合给药。在另一个实施方案中，减少沉默调节蛋白的水平和/或活性的调节沉默调节蛋白的化合物可与一种或多种下列化合物一起给药：烟酰胺(nam)、舒拉宁(suranim)；nf023(一种g-蛋白拮抗剂)；nf279(一种嘌呤能受体拮抗剂)；托洛索(trolox)(6-羟基-2，5，7，8-四甲基色满-2-甲酸)；(-)-表没食子儿茶酚(羟基位于3，5，7，3′，4′，5′位)；(-)-表没食子儿茶酚没食子酸酯(羟基位于5，7，3′，4′，5′位，且没食子酸酯位于3位)；氯化花青素(3，5，7，3′，4′-五羟基氯化黄
在另一实施方案中，一种或多种调节沉默调节蛋白的化合物可与一种或多种用于治疗或预防各种疾病包括例如癌症、糖尿病、神经变性疾病、心血管疾病、凝血、炎症、潮红、肥胖、老化、应激等的治疗剂一起进行给药。在多种实施方案中，包含调节沉默调节蛋白的化合物的组合疗法可涉及(1)包含一种或多种调节沉默调节蛋白的化合物与一种或多种治疗剂(例如，一种或多种于本文中所描述的治疗剂)的药物组合物；及(2)共同给药一种或多种调节沉默调节蛋白的化合物与一种或多种治疗剂，其中所述调节沉默调节蛋白的化合物与治疗剂尚未配制在同一组合物中(但是可存在于相同试剂盒或包装，例如泡罩包装或其它多隔室包装内；存在于可由使用者自行分开的相连结的、分别密封的容器(例如锡箔小袋)内；或存在于其中该化合物与其它治疗剂处于分开的容器中的试剂盒内)。当使用分开的制剂时，调节沉默调节蛋白的化合物可与另一治疗剂的给药同时、间歇、交错、在其之前、在其之后，或这些方式的组合进行给药。
在一些实施方案中，使用本文所述的化合物以减轻、预防或治疗疾病或障碍的方法或用途也可包括增加沉默调节蛋白(例如人sirt1、sirt2和/或sirt3，或其同系物)的蛋白水平。增加蛋白水平可通过将编码沉默调节蛋白的一个或多个核酸拷贝引入细胞中而完成。例如，可通过将编码沉默调节蛋白的核酸引入哺乳动物细胞中，而增加哺乳动物细胞中沉默调节蛋白的水平，例如通过将编码示于genbank登录号np_036370中的氨基酸序列的核酸引入，而增加sirt1的水平，和/或通过将编码示于genbank登录号aah01042中的氨基酸序列的核酸引入，而增加sirt3的水平。
经引入细胞中以增加沉默调节蛋白水平的核酸，可编码与沉默调节蛋白(例如sirt1和/或sirt3蛋白)的序列至少约80％、85％、90％、95％、98％或99％相同的蛋白。例如，编码该蛋白的核酸可与编码sirt1(例如genbank登录号nm_012238)和/或sirt3(例如genbank登录号bc001042)蛋白的核酸至少约80％、85％、90％、95％、98％或99％相同。核酸也可为优选于严格杂交条件下与编码野生型沉默调节蛋白(例如sirt1和/或sirt3蛋白)的核酸杂交的核酸。严格杂交条件可包括在0.2×ssc中于65℃杂交并且清洗。当使用编码与野生型沉默调节蛋白不同的蛋白(例如其为野生型沉默调节蛋白的片段的蛋白)的核酸时，该蛋白优选是生物学活性的，例如能够进行脱乙酰基化作用。仅需要在细胞中表达沉默调节蛋白具有生物学活性的部分。例如，与具有genbank登录号np_036370的野生型sirt1不同的蛋白，优选含有其核心结构。该核心结构有时指genbank登录号np_036370的氨基酸62-293，其由genbank登录号nm_012238的核苷酸237至932编码，其包含nad结合以及底物结合结构域。sirt1的核心结构域也可指genbank登录号np_036370的大约氨基酸261至447，其由genbank登录号nm_012238的核苷酸834至1394所编码；指genbank登录号np_036370的大约氨基酸242至493，其由genbank登录号nm_012238的核苷酸777至1532所编码；或指genbank登录号np_036370的大约氨基酸254至495，其由genbank登录号nm_012238的核苷酸813至1538所编码。可根据本领域已知的方法测定蛋白是否保留生物功能，例如脱乙酰基化能力。
在一些实施方案中，使用调节沉默调节蛋白的化合物以减轻、预防或治疗疾病或障碍的方法或用途也可包括降低沉默调节蛋白(例如人sirt1、sirt2和/或sirt3，或其同系物)的蛋白水平。降低沉默调节蛋白水平可根据本领域已知的方法实现。例如，可于细胞中表达靶向沉默调节蛋白的sirna、反义核酸或核酶。也可使用显性阴性(dominantnegative)的沉默调节蛋白的突变体，例如不能进行脱乙酰基化的突变体。例如，可使用经描述于例如luo等人(2001)cell107：137中的sirt1突变体h363y。或者，可使用抑制转录作用的试剂。
用于调节沉默调节蛋白水平的方法或用途也包括调节编码沉默调节蛋白的基因转录作用的方法或用途，稳定化/去稳定化相对应mrna的方法，及本领域已知的其它方法。
老化/应激
在一个方面，本发明提供通过将细胞与本发明的增加沉默调节蛋白的水平和/或活性的调节沉默调节蛋白的化合物接触，而延长细胞寿命、增加细胞增殖能力、减缓细胞老化、促进细胞存活、延迟细胞老化、模拟摄热量限制功效、增加细胞对应激的抗性或防止细胞凋亡的方法。在一个示例性的实施方案中，该方法或用途包含将细胞与调节沉默调节蛋白的化合物接触。
本文所述的方法或用途可用于增加细胞、特别是初生细胞(即得自生物体，例如人的细胞)在细胞培养物中可保持存活的时间量。胚胎干细胞(es)与多潜能细胞(pluripotentcell)及由其分化的细胞，也可用增加沉默调节蛋白的水平和/或活性的调节沉默调节蛋白的化合物来处理，以使细胞或其子代在培养物中保持较长的时间。此类细胞也可用于例如在进行离体修饰(exvivomodification)后移植入受试者中。
在一个方面，可用增加沉默调节蛋白的水平和/或活性的调节沉默调节蛋白的化合物处理要长时间保存的细胞。细胞可存在于悬浮液(例如血细胞、血清、生物学生长培养基等)中，或存在于组织或器官中。例如，可用增加沉默调节蛋白的水平和/或活性的调节沉默调节蛋白的化合物处理收集自个体的供输血的血液，使血细胞保存较长的时间。此外，用于法医目的血液也可使用增加沉默调节蛋白的水平和/或活性的调节沉默调节蛋白的化合物进行保存。其它可经处理以延长其寿命或保护其对抗凋亡的细胞，包括供消耗的细胞例如得自非人哺乳动物的细胞(例如肉类)，或植物细胞(例如蔬菜)。
也可在哺乳动物、植物、昆虫或微生物的发育及生长期施用增加沉默调节蛋白的水平和/或活性的调节沉默调节蛋白的化合物，以例如改变、减缓或加速发育和/或生长过程。
在另一个方面，增加沉默调节蛋白的水平和/或活性的调节沉默调节蛋白的化合物可用于处理用于供移植或细胞疗法的细胞，包括例如固体组织移植物、器官移植物、细胞悬浮液、干细胞、骨髓细胞等。细胞或组织可为自体移植物、同种异基因移植物(allograft)、同种同基因移植物(syngraft)或异种移植物。可将细胞或组织于给药/植入之前、于给药/植入的同时、和/或于给药/植入受试者之后，以调节沉默调节蛋白的化合物进行处理。可将细胞或组织于从供给者个体取出之前、于从供给者个体取出后离体地(exvivo)、或于植入接受体之后进行处理。例如，可用调节沉默调节蛋白的化合物对供给者或接受体个体进行全身性处理，或用增加沉默调节蛋白的水平和/或活性的调节沉默调节蛋白的化合物对细胞/组织的子集(subset)进行局部性处理。在一些实施方案中，可另外地用另一种用于延长移植物存活的治疗剂，例如免疫抑制剂、细胞因子、血管生成因子等处理细胞或组织或供给者/接受者个体。
在其它的实施方案中，可在体内用增加沉默调节蛋白的水平和/或活性的调节沉默调节蛋白的化合物处理细胞，以增加其寿命或防止细胞凋亡。例如，可通过用增加沉默调节蛋白的水平和/或活性的调节沉默调节蛋白的化合物来处理皮肤或表皮细胞，而保护皮肤以防老化(例如，形成皱纹、丧失弹性等)。在一个示例性的实施方案中，将皮肤与包含增加沉默调节蛋白的水平和/或活性的调节沉默调节蛋白的化合物的药物组合物或化妆品组合物接触。可根据本文所述方法或用途处理的示例性皮肤疾病或皮肤病症，包括与炎症、晒伤或自然老化相关或由其引起的病症或疾病。例如，组合物可用于预防或治疗接触性皮炎(包括刺激性接触性皮炎与过敏性接触性皮炎)、特应性皮炎(也称作变应性湿疹)、光化性角化病、角质化病症(包括湿疹)、大疱性表皮松解病(包括天疱疮)、剥脱性皮炎、脂溢性皮炎、红斑(包括多形红斑与结节性红斑)、由日晒或其它光源引起的损伤、盘状红斑性狼疮、皮肌炎、牛皮癣、皮肤癌及自然老化作用。在另一个实施方案中，增加沉默调节蛋白的水平和/或活性的调节沉默调节蛋白的化合物可用于治疗创伤和/或烧伤以促进愈合，包括例如第一度、第二度或第三度烧伤和/或热烧伤、化学烧伤或电烧伤。可将制剂局部地给药至皮肤或粘膜组织。
包含一种或多种增加沉默调节蛋白的水平和/或活性的调节沉默调节蛋白的化合物的局部制剂，也可用作为预防性(例如化学预防性)组合物。当使用于化学预防性方法中时，在特定个体中出现可见病症之前处理易感染的皮肤。
可将调节沉默调节蛋白的化合物局部或全身性地递送至受试者。在一个实施方案中，通过注射、局部制剂等，将调节沉默调节蛋白的化合物局部地给药至受试者的组织或器官。
在另一个实施方案中，增加沉默调节蛋白的水平和/或活性的调节沉默调节蛋白的化合物可用于治疗或预防因受试者中细胞老化所诱发或加重的疾病或障碍；用于减低受试者老化速度(例如在开始老化之后)的方法或用途；用于延长受试者寿命的方法；用于治疗或预防与寿命有关的疾病或障碍的方法或用途；用于治疗或预防与细胞增殖能力有关的疾病或障碍的方法或用途；及用于治疗或预防由细胞损伤或死亡所导致的疾病或障碍的方法或用途。在一些实施方案中，该方法并非通过减低那些缩短受试者寿命的疾病的发生率而起作用。在一些实施方案中，该方法并非通过减低由疾病(例如癌症)所引起的致死率而起作用。
在另一个实施方案中，为了一般性地增加受试者的细胞寿命以及为了保护其细胞对抗应激和/或对抗凋亡的目的，可将增加沉默调节蛋白的水平和/或活性的调节沉默调节蛋白的化合物给药于受试者。可以相信以本文所述的化合物治疗受试者，类似于使受试者经历毒物刺激作用(hormesis)即，对生物体有益且可延长其寿命的温和应激。
可将增加沉默调节蛋白的水平和/或活性的调节沉默调节蛋白的化合物给药于受试者，以预防老化及与老化有关的后果或疾病，例如中风、心脏病、心脏衰竭、关节炎、高血压及阿尔茨海默病。其它可被治疗的病症包括眼疾病，例如与眼睛老化有关的眼科病症，例如白内障、青光眼及黄斑变性。也可将增加沉默调节蛋白的水平和/或活性的调节沉默调节蛋白的化合物给药于受试者，用来治疗与细胞死亡有关的疾病，例如慢性疾病，以保护细胞不死亡的目的。示例性疾病包括那些与神经细胞死亡、神经元功能障碍、或肌肉细胞死亡或功能障碍有关的疾病，例如帕金森病、阿尔茨海默病、多发性硬化、肌萎缩性侧索硬化(amniotropiclateralsclerosis)与肌肉营养不良；aids；暴发性肝炎；与脑退化相关的疾病，例如克-雅病(creutzfeldt-jakobdisease)、色素性视网膜炎与小脑变性；脊髓发育不良例如再生障碍性贫血；缺血性疾病例如心肌梗塞与中风；肝病例如酒精性肝炎、乙型肝炎与丙型肝炎；关节疾病例如骨关节炎；动脉粥样硬化；脱发；由uv光引起的皮肤损伤；扁平苔藓；皮肤萎缩；白内障；以及移植物排斥。细胞死亡也可由手术、药物治疗、化学品接触或放射接触所引起。
也可将增加沉默调节蛋白的水平和/或活性的调节沉默调节蛋白的化合物给药于患有急性疾病，例如器官或组织伤害的受试者，例如患有中风或心肌梗塞的受试者，或罹患脊髓损伤的受试者。增加沉默调节蛋白的水平和/或活性的调节沉默调节蛋白的化合物也可用于修复酒精性肝(alcoholic’liver)。
心血管疾病
在另一个实施方案中，本发明提供一种治疗和/或预防心血管疾病的方法，其通过将增加沉默调节蛋白的水平和/或活性的调节沉默调节蛋白的化合物给药于有需要的受试者。
可使用增加沉默调节蛋白的水平和/或活性的调节沉默调节蛋白的化合物治疗或预防的心血管疾病，包括心肌病或心肌炎，例如特发性心肌病、代谢性心肌病、酒精中毒性心肌病、药物引发的心肌病、缺血性心肌病及高血压性心肌病。也可使用本文所述化合物与方法或用途治疗或预防的疾病为例如主动脉、冠状动脉、颈动脉、脑血管动脉、肾动脉、髂动脉、股动脉及腘动脉(poplitealarteries)等主要血管的粥样硬化病症(大血管疾病)。其它可被治疗或预防的血管疾病包括那些与血小板聚集、视网膜小动脉、肾小球小动脉(glomerulararteriole)、神经滋养血管(vasanervorum)、心小动脉，及眼、肾脏、心脏与中枢及周围神经系统相关的毛细血管床相关的血管疾病。增加沉默调节蛋白的水平和/或活性的调节沉默调节蛋白的化合物也可用于增加个体血浆内的hdl水平。
可以用增加沉默调节蛋白的水平和/或活性的调节沉默调节蛋白的化合物治疗的其它病症包括再狭窄(例如在冠状动脉介入治疗后)，及与高密度及低密度胆固醇异常水平有关的病症。
在一些实施方案中，增加沉默调节蛋白的水平和/或活性的调节沉默调节蛋白的化合物可以作为组合疗法的一部分与另一种心血管药剂一起给药。在一些实施方案中，增加沉默调节蛋白的水平和/或活性的调节沉默调节蛋白的化合物可以作为组合疗法的一部分与抗心率失常药剂一起给药。在另一个实施方案中，增加沉默调节蛋白的水平和/或活性的调节沉默调节蛋白的化合物可以作为组合疗法的一部分与其它心血管药剂一起给药。
细胞死亡/癌症
增加沉默调节蛋白的水平和/或活性的调节沉默调节蛋白的化合物可给药于最近已接受或可能将接受一定剂量辐射或毒素的受试者。在一个实施方案中，接受辐射或毒素的剂量作为工作相关程序或医药程序的一部分，例如作为预防措施(prophylacticmeasure)给药。在一些实施方案中，非故意地接受辐射或毒素的暴露。在这种情况下，优选在暴露后尽快给药所述化合物，以抑制细胞凋亡及后续发展成急性辐射综合征。
调节沉默调节蛋白的化合物还可以用于治疗和/或预防癌症。在一些实施方案中，该增加沉默调节蛋白的水平和/或活性的调节沉默调节蛋白的化合物可用于治疗和/或预防癌症。能量限制已经与年龄相关疾病(例如癌症)的发病率的降低建立起了联系。相应地，沉默调节蛋白的水平和/或活性的增加可有利地用于治疗和/或预防年龄相关疾病(例如癌症)的发病率。可以利用调节沉默调节蛋白的化合物治疗的示例性的癌症为脑部和肾脏的癌症；激素-依赖的癌症，包括乳腺癌、前列腺癌、睾丸癌和卵巢癌；淋巴瘤和白血病。在与实体肿瘤有关的癌症中，可将调节性化合物直接给药于该肿瘤。血液细胞的癌症(例如白血病)可通过将调节性化合物给药至血流中或骨髓中而进行治疗。也可治疗良性细胞生长例如疣。可被治疗的其它疾病包括自身免疫疾病，例如全身性红斑狼疮、硬皮病及关节炎，其中应将自身免疫细胞去除。也可通过给药调节沉默调节蛋白的化合物治疗与病毒感染(例如疱疹、hiv、腺病毒及htlv-1)有关的恶性与良性病症。或者，可自受试者获取细胞，经体外处理以去除一些不希望的细胞(例如癌细胞)，并再给药于相同或不同的受试者。
也可将化学治疗剂与本文所述具有抗癌活性的调节性化合物(例如诱发细胞凋亡的化合物、减短寿命的化合物或使细胞对应激敏感的化合物)共同给药。化学治疗剂本身可与本文所述可诱发细胞死亡或减短寿命或增加对应激敏感的调节沉默调节蛋白的化合物，和/或与其它化学治疗剂组合使用。除了常规化学治疗剂之外，本文所述的调节沉默调节蛋白的化合物也可与反义rna、rnai，或其它抑制会引起不希望细胞增殖的细胞组分表达的多核苷酸一起使用。
包含调节沉默调节蛋白的化合物与常规化学治疗剂的组合疗法可能优于本领域已知的组合疗法，因为该组合可使常规化学治疗剂在较低剂量下起更大功效。在优选的实施方案中，对于化学治疗剂或常规化学治疗剂的组合的有效剂量(ed50)而言，当与调节沉默调节蛋白的化合物组合使用时，所对应的活性为单独的该化学治疗剂的ed50的至少2倍，且甚至更优选5倍、10倍或甚至25倍。反之，对于此类化学治疗剂或此类化学治疗剂的组合的治疗指数(ti)而言，当与本文所述调节沉默调节蛋白的化合物组合使用时，相较于单独的常规化学治疗方案的ti为至少2倍，且甚至更优选地高5倍、10倍或甚至25倍。
神经元疾病/病症
在一些方面，增加沉默调节蛋白的水平和/或活性的调节沉默调节蛋白的化合物可用于治疗患有神经变性疾病，及中枢神经系统(cns)、脊髓或周围神经系统(pns)的创伤或机械性损伤的患者。神经变性疾病通常涉及人脑部质量与体积的减少，其可能由于脑细胞萎缩和/或死亡所致，这比健康人因老化所引起的人脑部质量与体积的减少更显著。神经变性疾病可在执行长期正常脑功能后，由于特定脑区域的渐进性退化(例如神经细胞功能不足及死亡)而逐渐进展。另一方面，神经变性疾病可快速发作(onset)，例如那些与创伤或毒素相有关的神经变性疾病。脑退化的实际发作可能较临床表达早许多年。神经变性疾病的实例包括(但不限定于)阿尔茨海默病(ad)、帕金森病(pd)、亨廷顿病(hd)、肌萎缩性侧索硬化(als；罗杰里格氏病(lougehrig’sdisease))、弥散性路易体病(diffuselewybodydisease)、舞蹈病-棘红细胞增多症、原发性侧索硬化、眼疾病(眼神经炎)、化学疗法诱发的神经病变(例如来自长春新碱、紫杉醇、硼替佐米)、糖尿病诱发的神经病变及佛里德赖希共济失调。增加沉默调节蛋白的水平和/或活性的调节沉默调节蛋白的化合物可用于治疗这些病症及如下文所描述的其它病症。
ad为导致记忆丧失、异常行为、个性改变及思考能力衰退的cns病症。这些丧失与特定类型的脑细胞死亡、及脑细胞间的连结与其支撑网络(例如神经胶质细胞)损坏有关。最早期症状包括丧失最近的记忆、错误判断及个性改变。pd为导致身体运动不受控制、僵硬、颤抖及运动障碍的cns病症，与脑部制备多巴胺的区域中的脑细胞死亡关联。als(运动神经元疾病)为攻击运动神经元(cns中将脑与骨骼肌连结的组分)的cns病症。
hd为另一种引起运动不受控制、智力丧失及情绪失调的神经变性疾病。泰-萨病(tay-sachsdisease)与桑德霍夫病(sandhoffdisease)，是其中gm2神经节苷脂与β-氨基己糖苷酶(hexosaminidase)的相关糖脂类底物累积于神经系统中并引发急性神经变性的糖脂储存疾病(glycolipidstoragediseases)。
已熟知，细胞凋亡在免疫系统的aids病变方面起作用。然而，hiv-1也诱发可以用本发明的调节沉默调节蛋白的化合物治疗的神经学疾病。
神经元丧失(neuronalloss)也为朊病毒病(priondiseases)(例如人克-雅病、牛bse(疯牛病)、绵羊与山羊的瘙痒病及猫的猫类海绵状脑病(fse))的突出特征。增加沉默调节蛋白的水平和/或活性的调节沉默调节蛋白的化合物可用于治疗或预防由这上述朊病毒病引起的神经元丧失。
在另一个实施方案中，增加沉默调节蛋白的水平和/或活性的调节沉默调节蛋白的化合物可用于治疗或预防任何涉及轴突病(axonopathy)的疾病或障碍。远端轴突病为一类由周围神经系统(pns)神经元的某种代谢或毒性错乱所产生的周围神经病。其为神经对代谢或毒性紊乱的最通常响应，而因此可能由代谢性疾病例如糖尿病、肾衰竭、缺乏综合征例如营养不良及酒精中毒，或由毒素或药物的作用所引起。那些患有远端轴突病的患者通常呈现对称性手套-袜样感觉-运动紊乱。在受影响区域也发生深层腱反射及自主神经系统(ans)功能丧失或缩减。
糖尿病性神经病变为与糖尿病有关的神经病症。可能与糖尿病性神经病变有关的较常见病症包括第三神经麻痹；单一神经病变；多发性单神经炎；糖尿病性肌肉萎缩；疼痛性多神经病；自主神经病；及胸腹神经病。
周围神经病变为用于对周围神经系统的神经损伤的医学术语，其可能是由神经疾病或由全身性疾病的副作用所引起。周围神经病变的主要原因包括癫痫发作、营养缺乏及hiv，虽然糖尿病是最可能的原因。
在一个示例性的实施方案中，增加沉默调节蛋白的水平和/或活性的调节沉默调节蛋白的化合物可用于治疗或预防多发性硬化(ms)，包括复发性ms与单症状ms，及其它脱髓鞘病症(demyelinatingcondition)，例如慢性炎性脱髓鞘多神经病(cidp)或与其有关的病症。
在又一个实施方案中，增加沉默调节蛋白的水平和/或活性的调节沉默调节蛋白的化合物也可用于治疗神经创伤，包括由于疾病、损伤(包括手术介入)或环境创伤(例如神经毒素、酒精中毒等)所引起的创伤。
增加沉默调节蛋白的水平和/或活性的调节沉默调节蛋白的化合物也可用于预防、治疗及缓解各种pns病症的症状。术语“周围神经病变”涵括广范围的位于脑与脊髓外部的神经(即周围神经)已经受损的病症。周围神经病变也可指周围神经炎，或者如果涉及许多神经时，可使用术语多神经病或多神经炎。
可以用增加沉默调节蛋白的水平和/或活性的调节沉默调节蛋白的化合物治疗的pns疾病包括：糖尿病、麻疯、夏-马-图三氏病(charcot-marie-toothdisease)、格-巴二氏综合征(guillain-barrésyndrome)和壁神经丛神经病(brachialplexusneuropathy)(颈与第一胸根、神经干、索(cord)及臂神经丛的周围神经组分的疾病)。
在另一个实施方案中，调节沉默调节蛋白的化合物可用于治疗或预防多谷氨酰胺疾病。示例性多谷胺酰胺疾病包括脊髓延髓肌肉萎缩(肯尼迪病)、亨廷顿病(hd)、齿状核红核苍白球丘脑下部核萎缩(dentatorubralpallidoluysianatrophy)(郝乌河综合征(hawriversyndrome))、1型脊髓小脑性共济失调、2型脊髓小脑性共济失调、3型脊髓小脑性共济失调(马-约病(machado-josephdisease))、6型脊髓小脑性共济失调、7型脊髓小脑性共济失调及17型脊髓小脑性共济失调。
在一些实施方案中，本发明提供治疗中枢神经系统细胞以防止因响应于血液流向细胞减低所引起的伤害的方法。通常可被预防的伤害严重度，将大部分取决于血液流向细胞的减低程度及减少的持续时间。在一个实施方案中，可预防凋亡性或坏死细胞死亡。在再一个实施方案中，可预防缺血所介导的伤害，例如细胞毒性水肿或中枢神经系统组织缺氧血症。在各实施方案中，中枢神经系统细胞可为脊髓细胞或脑细胞。
另一方面包括将调节沉默调节蛋白的化合物给药于受试者，以治疗中枢神经系统缺血性病症。有许多中枢神经系统缺血性病症可由本文所述的调节沉默调节蛋白的化合物治疗。在一个实施方案中，缺血性病症为导致任何类型缺血性中枢神经系统损伤，例如凋亡性或坏死性细胞死亡、细胞毒性水肿或中枢神经系统组织缺氧的中风。中风可能影响脑部任何区域，或由任何一般已知会导致中风发生的病因所引起。在该实施方案的另一选择中，中风为脑干中风。在本实施方案的另一选择中，中风为小脑中风。在本实施方案的另一选择中，中风为栓塞性中风(embolicstroke)。在本实施方案的另一选择中，中风为出血性中风。在其它实施方案中，中风为血栓性中风。
在另一方面，可给药调节沉默调节蛋白的化合物，以在中枢神经系统缺血性病症后减少缺血核心的梗塞大小。而且，也可有益地给药调节沉默调节蛋白的化合物，以在中枢神经系统缺血性病症后，减少缺血性半影或过渡区域的大小。
在一个实施方案中，组合药物疗法可包括用于治疗或预防神经变性性病症、或与这些病症有关的继发病症的药物或化合物。因此，组合药物疗法可包括一种或多种沉默调节蛋白的活化剂与一种或多种抗神经变性药物。
凝血病症
在其它方面，增加沉默调节蛋白的水平和/或活性的调节沉默调节蛋白的化合物可用于治疗或预防凝血病症(或止血病症)。如可交换地用于本文，术语“止血”、“凝血”及“血液凝结”是指控制流血，包括血管收缩与凝结的生理特性。凝血协助维持哺乳动物在受伤、炎症、疾病、先天缺陷、功能障碍或其它破坏(disruption)后的循环完整性。而且，血块的形成在受伤的情况中不仅限制出血(止血作用)，也可能在动脉粥样硬化疾病方面，因阻塞重要动脉或静脉而导致严重器官损伤及死亡。因此血栓是在错误时间及地点形成的血液凝块。
于是，本发明提供目的在于抑制血液凝块形成，以预防或治疗凝血病症，例如心肌梗塞、中风、因周围动脉疾病的肢体损失或肺栓塞的抗凝结与抗血栓治疗。
本文可交换地使用的术语“调制止血”及“调节止血”包括诱导(例如刺激或增加)止血，也包括抑制(例如减低或减少)止血。
在一方面，本发明提供通过给药增加沉默调节蛋白的水平和/或活性的调节沉默调节蛋白的化合物，以减低或抑制受试者中止血的方法。本文所公开的组合物或方法或用途可用于治疗或预防血栓形成疾病。本文使用的术语“血栓形成病症”包括以过量或不希望的凝血或止血活性，或凝固性过高的状态为特征的任何病症或疾病。血栓形成疾病包括涉及血小板粘附与血栓形成的疾病或障碍，且可能显示为形成血栓的可能性增加，例如形成血栓数量增加、在低年龄期(earlyage)出现血栓形成、血栓形成的家族性倾向(familialtendencytowardsthrombosis)及在罕见部位(unusualsite)出现血栓形成。
在另一个实施方案中，组合药物疗法可包括用于治疗或预防凝血病症，或与这些病症有关的继发病症的药物或化合物。因此，组合药物疗法可包括一种或多种增加沉默调节蛋白的水平和/或活性的调节沉默调节蛋白的化合物，与一种或多种抗凝结或抗血栓形成药物。
体重控制
在另一方面，增加沉默调节蛋白的水平和/或活性的调节沉默调节蛋白的化合物可用于治疗或预防受试者的体重增加或肥胖。例如，增加沉默调节蛋白的水平和/或活性的调节沉默调节蛋白的化合物可用于例如治疗或预防遗传性肥胖症、饮食性肥胖症、激素相关的肥胖症、与给药药物有关的肥胖症，用于减轻受试者体重或防止受试者体重增加。需要此类治疗的受试者可为其已经肥胖、有可能变成肥胖、过重或有可能变成过重的受试者。可能变成肥胖或过重的受试者，可例如基于家族史、遗传学、饮食、活动程度、药物摄取或其各种不同组合来确定。
在其它的实施方案中，可将增加沉默调节蛋白的水平和/或活性的调节沉默调节蛋白的化合物给药于患有各种可通过促进受试者的体重减轻而治疗或预防的其它疾病与病症。此类疾病包括例如高血压、血压过高、高血胆固醇、血脂异常、ii型糖尿病、胰岛素抵抗、葡萄糖耐受不良、高胰岛素血症、冠心病、心绞痛、充血性心力衰竭、中风、胆结石、胆囊炎与胆石病、痛风、骨关节炎、阻碍性睡眠呼吸暂停与呼吸问题、一些类型癌症(例如子宫内膜癌、乳腺癌、前列腺癌与结肠癌)、妊娠并发症、雌性生殖健康变差(例如月经不规则、不孕、不规则排卵)、膀胱控制问题(例如压迫性尿失禁)；尿酸肾石病；精神性病症(例如忧郁、进食障碍病(eatingdisorders)、体象障碍与自尊降低)。最后，患有aids的患者会对于aids的组合疗法响应，而发展成脂肪营养障碍或胰岛素抵抗。
在另一个实施方案中，增加沉默调节蛋白的水平和/或活性的调节沉默调节蛋白的化合物可用于在体外或体内抑制脂肪形成或脂肪细胞分化。此类方法可用于治疗或预防肥胖症。
在其它实施方案中，增加沉默调节蛋白的水平和/或活性的调节沉默调节蛋白的化合物可用于减低食欲和/或增加饱食感，因此引起体重减轻或避免体重增加。需要此类治疗的受试者可为已经过重、肥胖的受试者，或有可能变成过重或肥胖的受试者。该方法包含将一定剂量(例如呈丸剂(pill)的形式)每日或每二日或一周一次给药于受试者。该剂量可为“食欲减低剂量”。
在一个示例性的实施方案中，增加沉默调节蛋白的水平和/或活性的调节沉默调节蛋白的化合物，可以以治疗或预防体重增加或肥胖症的组合疗法进行给药。例如，可将一种或多种增加沉默调节蛋白的水平和/或活性的调节沉默调节蛋白的化合物与一种或多种抗肥胖剂组合给药。
在另一个实施方案中，可给药增加沉默调节蛋白的水平和/或活性的调节沉默调节蛋白的化合物，以减低由药物引发的体重增加。例如，增加沉默调节蛋白的水平和/或活性的调节沉默调节蛋白的化合物，能够与可以刺激食欲或引起体重增加(尤其是由于除了保留水分以外的因素引起的体重增加)的药物通过组合疗法进行给药。
代谢病症/糖尿病
在另一方面，增加沉默调节蛋白的水平和/或活性的调节沉默调节蛋白的化合物可用于治疗或预防代谢病症，例如胰岛素抵抗、前期糖尿病、ii型糖尿病、和/或其并发症。增加沉默调节蛋白的水平和/或活性的调节沉默调节蛋白的化合物的给药可增加受试者的胰岛素敏感性和/或减低胰岛素水平。需要此类治疗的受试者可为具有胰岛素抵抗或ii型糖尿病的其它前驱症状(precursorsymptom)、具有ii型糖尿病或有可能发展任何这些病症的受试者。例如，该受试者可为具有胰岛素抵抗，例如具有高胰岛素循环水平和/或相关联病症，例如高血脂症、脂肪生成障碍、高胆固醇血症、葡萄糖耐受不良、高血糖水平、综合征x的其它表征、高血压、动脉粥样硬化及脂肪代谢障碍的受试者。
在一个示例性的实施方案中，增加沉默调节蛋白的水平和/或活性的调节沉默调节蛋白的化合物可以以治疗或预防代谢病症的组合疗法进行给药。例如，可将一种或多种增加沉默调节蛋白的水平和/或活性的调节沉默调节蛋白的化合物与一种或多种抗糖尿病剂组合给药。
炎性疾病
在另一方面，增加沉默调节蛋白的水平和/或活性的调节沉默调节蛋白的化合物可用于治疗或预防与炎症有关的疾病或障碍。可于引发炎症发作前、发作时或发作之后给药增加沉默调节蛋白的水平和/或活性的调节沉默调节蛋白的化合物。当预防性使用时，该化合物优选在任何炎症反应或症状之前给药。该化合物的给药可预防或减弱炎症反应或症状。
在另一个实施方案中，增加沉默调节蛋白的水平和/或活性的调节沉默调节蛋白的化合物可用于治疗或预防变态反应及呼吸病症，包括哮喘、支气管炎、肺纤维化、过敏性鼻炎、氧气毒性、肺气肿、慢性支气管炎、急性呼吸窘迫综合征及任何慢性闭塞性肺病(copd)。该化合物可用于治疗肝炎感染，包括乙型肝炎及丙型肝炎。
此外，增加沉默调节蛋白的水平和/或活性的调节沉默调节蛋白的化合物可用于治疗自身免疫疾病，和/或与自身免疫疾病有关的炎症，例如关节炎，包括类风湿性关节炎、牛皮癣关节炎和强直性脊柱炎，以及器官-组织自身免疫疾病(例如雷诺氏综合征(raynaud′ssyndrome))、溃疡性结肠炎、节段性回肠炎、口腔粘膜炎、硬皮病、重症肌无力、移植排斥、内毒素休克、脓毒病、牛皮癣、湿疹、皮炎、多发性硬化、自身免疫甲状腺炎、葡萄膜炎、全身性红斑狼疮、阿狄森病(addison′sdisease)、自身免疫多腺疾病(也称为自身免疫多腺综合征)及格雷夫斯病。
在一些具体实施方案中，一种或多种增加沉默调节蛋白的水平和/或活性的调节沉默调节蛋白的化合物可单独使用，或与用于治疗或预防炎症的其它化合物组合使用。
潮红
另一方面，增加沉默调节蛋白的水平和/或活性的调节沉默调节蛋白的化合物可用于减低作为病症的症状的潮红和/或热潮红(hotflash)的发生率或严重性。例如，主题方法(subjectmethod)包括使用增加沉默调节蛋白的水平和/或活性的调节沉默调节蛋白的化合物，单独或与其它药剂组合使用，以减低癌症患者的潮红和/或热潮红的发生率或严重性。在其它实施方案中，该方法提供使用增加沉默调节蛋白的水平和/或活性的调节沉默调节蛋白的化合物以减低绝经及绝经后妇女的潮红和/或热潮红的发生率或严重性。
另一方面，增加沉默调节蛋白的水平和/或活性的调节沉默调节蛋白的化合物可用作减低作为另一种药物疗法的副作用的潮红和/或热潮红(例如，药物诱发的潮红)的发生率或严重度的疗法。在一些实施方案中，用于治疗和/或预防药物诱发的潮红的方法包括将含有至少一种诱发潮红的化合物与至少一种增加沉默调节蛋白的水平和/或活性的调节沉默调节蛋白的化合物的制剂给药于有需要的患者。在其它实施方案中，用于治疗药物所诱发的潮红的方法包括，分别给药一种或多种诱发潮红的化合物与一种或多种调节沉默调节蛋白的化合物，例如其中调节沉默调节蛋白的化合物与潮红诱发药物未经配制于同一组合物中。当使用分开的制剂时，可将调节沉默调节蛋白的化合物(1)在与潮红诱发药物的给药的同时给药，(2)与潮红诱发药物一起周期性地给药，(3)与潮红诱发药物错开给药，(4)在潮红诱发药物给药之前给药，(5)于潮红诱发剂给药之后给药，及(6)以其各种不同组合进行给药。示例性潮红诱发药物包括例如烟酸、雷洛昔芬(faloxifene)、抗忧郁剂、抗精神病药、化学治疗剂、钙通道阻断剂及抗生素。
在一个实施方案中，增加沉默调节蛋白的水平和/或活性的调节沉默调节蛋白的化合物可用于减少血管扩张剂或抗血脂药(包括抗胆固醇血症药物与抗脂肪肝药)的潮红副作用。在一个示例性的实施方案中，增加沉默调节蛋白的水平和/或活性的调节沉默调节蛋白的化合物可用于减少与给药烟酸有关的潮红。
在另一个实施方案中，本发明提供治疗和/或预防高血脂症并减低潮红副作用的方法。在另一代表性的实施方案中，该方法包括使用增加沉默调节蛋白的水平和/或活性的调节沉默调节蛋白的化合物，以减少雷洛昔芬的潮红副作用。在另一代表性的实施方案中，该方法包括使用增加沉默调节蛋白的水平和/或活性的调节沉默调节蛋白的化合物，以减少抗忧郁药或抗精神病药的潮红副作用。举例而言，增加沉默调节蛋白的水平和/或活性的调节沉默调节蛋白的化合物可与5-羟色胺再吸收抑制剂，或5ht2受体拮抗剂共同使用(分开或一起给药)。
在一些实施方案中，增加沉默调节蛋白的水平和/或活性的调节沉默调节蛋白的化合物可用作5-羟色胺再吸收抑制剂(sri)的治疗的一部分以减少潮红。在另一代表性的实施方案中，增加沉默调节蛋白的水平和/或活性的调节沉默调节蛋白的化合物可用于减少化学治疗剂如环磷酰胺及他莫昔芬的潮红副作用。
在另一个实施方案中，增加沉默调节蛋白的水平和/或活性的调节沉默调节蛋白的化合物可用于减少钙通道阻断剂如氨氯地平的潮红副作用。
在另一个实施方案中，增加沉默调节蛋白的水平和/或活性的调节沉默调节蛋白的化合物可用于减少抗生素的潮红副作用。例如，增加沉默调节蛋白的水平和/或活性的调节沉默调节蛋白的化合物可与左氧氟沙星组合使用。
眼科病症
本发明的一方面为用于抑制、减低或治疗视力损伤的方法，该方法通过将治疗剂量的选自本文所公开化合物的沉默调节蛋白的调节剂或其药学上可接受的盐、前药或代谢衍生物给药于患者。
在本发明的一些方面，视力损伤是由于对视神经或中枢神经系统的伤害所引起。在具体的实施方案中，视神经伤害由高眼内压(例如由青光眼引起的高眼内压)所引起。在其它具体的实施方案中，视神经伤害由神经肿胀(其往往与感染或免疫(例如自身免疫)反应(如在视神经炎中)有关)所引起。
在本发明的一些方面，视力损伤由视网膜的伤害所引起。在具体的实施方案中，视网膜的伤害由流向眼睛的血流中的障碍(例如，动脉粥样硬化、血管炎)所引起。在具体的实施方案中，视网膜的伤害是由黄斑破坏(disruptionofmacula)(例如，渗出性或非渗出性黄斑变性)所引起。
示例性视网膜的疾病包括渗出性年龄相关的黄斑变性、非渗出性年龄相关的黄斑变性、视网膜电子假体和rpe移植年龄相关的黄斑变性、急性多病灶板状色素上皮病、急性视网膜坏死、先天性黄斑变性、视网膜分支动脉闭塞、视网膜分支静脉闭塞、癌症关联和相关的自身免疫视网膜病、视网膜中央动脉阻塞、视网膜中央静脉阻塞、中心性浆液性脉络膜视网膜病变(centralserouschorioretinopathy)、伊尔斯病(ealesdisease)、黄斑前膜(epimacularmembrane)、点阵变性、巨动脉瘤、糖尿病性黄斑水肿、艾尔温-盖斯黄斑水肿(irvine-gassmacularedema)、黄斑裂孔(macularhole)、视网膜下新血管膜、弥散性单侧亚急性视神经视网膜炎、非假晶状体囊样黄斑水肿(nonpseudophakiccystoidmacularedema)、眼假组织胞浆菌病综合征(presumedocularhistoplasmosissyndrome)、渗出性视网膜脱离、手术后视网膜脱离、增殖性视网膜脱离、孔源性视网膜脱离、牵引性(tractional)视网膜脱离、色素性视网膜炎、cmv视网膜炎、成视网膜细胞瘤、早熟性视网膜病、散弹状视网膜病(birdshotretinopathy)、背景性糖尿病性视网膜病、增殖性糖尿病性视网膜病、血红蛋白病性视网膜病、普尔沙视网膜病(purtscherretinopathy)、瓦尔萨尔瓦视网膜病(valsalvaretinopathy)、青年性视网膜劈裂症(juvenileretinoschisis)、老年性视网膜劈裂症、泰尔松综合征(tersonsyndrome)及白点综合征(whitedotsyndromes)。
其它示例性疾病包括眼细菌感染(例如，结膜炎、角膜炎、结核病、梅毒、淋病)、病毒感染(例如眼单纯疱疹病毒(ocularherpessimplexvirus)、水痘带状疱疹病毒、巨细胞病毒视网膜炎、人免疫缺陷病毒(hiv))以及继发于hiv或其它hiv-关联及其它免疫缺陷-关联性眼疾病的进行性外部视网膜坏死。此外，眼疾病包括真菌感染(例如念珠菌性脉络膜炎(candidachoroiditis)、组织胞浆菌病)、原生动物感染(例如弓形体病)及其它例如眼弓蛔虫病与肉样瘤病(sarcoidosis)。
本发明的一方面为用于抑制、减低或治疗以化学治疗药物(例如，神经毒性药物、升高眼内压力的药物例如类固醇)治疗的受试者视力损伤的方法，其通过将治疗剂量的本文所公开的沉默调节蛋白的调节剂给药于有此类治疗需要的受试者。
本发明的另一方面为用于抑制、减低或治疗在进行手术包括眼或其它于俯卧位(proneposition)的手术，例如脊髓手术时的受试者视力损伤的方法，其通过将治疗剂量的本文所公开的沉默调节蛋白的调节剂给药于有此类治疗需要的受试者。眼手术包括白内障、虹膜切开术和晶状体置换。
本发明的另一方面为治疗(包括抑制与预防性治疗)年龄相关的眼疾病，包括白内障、干眼症、年龄相关的黄斑变性(amd)、视网膜损害等的方法，其通过将治疗剂量的本文所公开的沉默调节蛋白的调节剂给药于有此类治疗需要的受试者。
本发明的另一方面为预防或治疗由应激、化学伤害或照射所引起的眼睛损伤的方法，其通过将治疗剂量的本文所公开的沉默调节蛋白的调节剂给药于有此类治疗需要的受试者。对眼睛的照射或电磁性损伤可包括由crt或暴露于阳光或uv所引起的那些损伤。
在一些实施方案中，组合药物疗法可包括用于治疗或预防眼科病症，或与这些病症有关的继发病症的药物或化合物。因此，组合药物疗法可包括一种或多种沉默调节蛋白的活化剂与一种或多种用于治疗眼科病症的治疗剂。
在一些实施方案中，可将沉默调节蛋白的调节剂与用于减低眼内压力的疗法结合进行给药。在另一个实施方案中，可将沉默调节蛋白的调节剂与用于治疗和/或预防青光眼的疗法结合进行给药。在另一实施方案中，可将沉默调节蛋白的调节剂与用于治疗和/或预防视神经炎的疗法结合进行给药。在一些实施方案中，可将沉默调节蛋白的调节剂与用于治疗和/或预防cmv视网膜病的疗法结合进行给药。在另一个实施方案中，可将沉默调节蛋白的调节剂与用于治疗和/或预防多发性硬化的疗法结合进行给药。
线粒体有关的疾病与病症
在一些实施方案中，本发明提供用于治疗因线粒体活性增加而获益的疾病或障碍的方法或用途。该方法或用途包含将治疗上有效量的调节沉默调节蛋白的化合物给药于需要的受试者。线粒体活性增加是指在维持线粒体的总量(例如线粒体的质量)的同时增加线粒体的活性、增加线粒体的数量并因此增加线粒体的活性(例如，通过刺激线粒体的生物生成(biogenesis))，或其组合。在一些实施方案中，因线粒体活性增加而获益的疾病或障碍，包括与线粒体功能障碍有关的疾病或障碍。
在一些实施方案中，用于治疗因线粒体活性增加而获益的疾病或障碍的方法或用途可包括确定患有线粒体功能障碍的受试者。用于诊断线粒体功能障碍的方法或用途可包括分子遗传学、病理学和/或生物化学分析。与线粒体功能障碍有关的疾病或障碍包括这样的疾病和病症，其中线粒体的呼吸链活性不足导致哺乳动物中此类疾病或障碍的病理生理学的发展。因线粒体活性增加而获益的疾病或障碍一般包括例如，由自由基介导的氧化损伤导致的组织变性的疾病、细胞不适当地进行凋亡的疾病，及细胞无法进行凋亡的疾病。
在一些实施方案中，本发明提供用于治疗因线粒体活性增加而获益的疾病或障碍的方法或用途，该方法或用途包括将一种或多种调节沉默调节蛋白的化合物与另一种治疗剂(例如可用于治疗线粒体功能障碍的药剂，或可用于减少与涉及线粒体功能障碍的疾病或障碍有关的症状的药剂)组合给药于有需要的受试者。
在示例性的实施方案中，本发明提供用于治疗因线粒体活性增加而获益的疾病或障碍的方法或用途，通过将治疗上有效量的调节沉默调节蛋白的化合物给药于受试者。示例性疾病或障碍包括例如神经肌肉病症(例如佛里德赖希共济失调(friedreich’sataxia)、肌肉营养不良、多发性硬化等)、神经元不稳定性病症(例如癫痫发作、偏头痛等)、发育迟缓、神经变性病症(例如阿尔茨海默病、帕金森病、肌萎缩性侧索硬化等)、缺血、肾小管性酸中毒、年龄相关的神经变性与认知衰退、化学疗法疲劳、年龄相关或化学疗法诱发的绝经或月经周期或排卵不规则、线粒体性肌病、线粒体损害(例如钙累积、兴奋性中毒、接触一氧化氮、缺氧等)及线粒体失调。
肌肉营养不良指一类涉及肌肉神经组织构造与功能恶化的疾病，其往往导致骨骼肌萎缩及心肌功能障碍，例如杜兴氏肌肉营养不良(duchennemusculardystrophy)。在一些实施方案中，调节沉默调节蛋白的化合物可用于减低肌肉功能能力的衰退速率，及用于增强患有肌肉营养不良患者肌肉的功能状态。
在一些实施方案中，调节沉默调节蛋白的化合物可用于治疗线粒体性肌病。线粒体性肌病范围从外眼部肌肉的轻微缓慢进行性衰弱，到严重致命的婴儿期肌病与多系统脑脊髓病(encephalomyopathy)。一些综合征已经确定，它们之间有些重叠。影响肌肉的已确立的综合征包括进行性外眼肌麻痹、卡-塞综合征(keams-sayresyndrome)(具有眼肌麻痹、色素性视网膜病、心脏传导缺陷、小脑共济失调与感觉神经性耳聋)、melas综合征(线粒体性脑脊髓病、乳酸性酸中毒与类中风事件(stroke-likeepisodes))、merff综合征(肌阵挛型癫痫、不整齐的红纤维(raggedredfibers))、肢带分配衰弱(limb-girdledistributionweakness)及婴儿肌病(良性、重度与致死)。
在一些实施方案中，调节沉默调节蛋白的化合物可用于治疗患有对线粒体的毒性损害，例如由于钙累积、兴奋性中毒、一氧化氮接触、药物诱导的毒性损害或缺氧引起的毒性损害的患者。
在一些实施方案中，调节沉默调节蛋白的化合物可用于治疗与线粒体失调(mitochondrialderegulation)有关的疾病或障碍。
肌肉性能
在其它实施方案中，本发明提供用于增强肌肉性能的方法或用途，其通过给药治疗上有效量的调节沉默调节蛋白的化合物。例如，调节沉默调节蛋白的化合物可用于改善身体耐久力(例如，进行身体工作例如运动、体力劳动、运动活动等)、抑制或延迟身体疲劳、增加血液氧水平、增进健康个体的能量、加强工作能力与持久性、减少肌肉疲劳、减低压力、增强心脏与心血管功能、改善性能力、增加肌肉atp水平和/或减少血液中的乳酸。在一些实施方案中，该方法或用途包括给药一定量的线粒体活性增加、增进线粒体的生物生成和/或增加线粒体质量的调节沉默调节蛋白的化合物。
运动性能是指运动员的肌肉在参与运动活动时所呈现的能力。所增强的运动效能、强度、速度及持久力，是通过肌肉收缩强度的增加、肌肉收缩幅度的增加、在刺激与收缩之间的肌肉反应时间的缩短而进行测量。运动员指以任何程度参与运动，以及寻求能在其机能上达到增进强度、速度与耐久力水平的个人，例如健身者(bodybuilder)、自行车运动员、长跑运动员、短跑运动员等。所增强的运动效能由能克服肌肉疲劳的能力、保持较长时间活力的能力及具有更有效锻炼的能力显示。
在运动员肌肉性能的场所(arena)，期望产生允许在长期的更高耐性程度下进行比赛或训练的状况。
预期本发明的方法或用途也有效于治疗肌肉相关的病理病症，包括急性肌肉减少症(acutesarcopenia)，例如肌肉萎缩和/或与烧伤、卧床、肢体固定术或胸部、腹部和/或整形外科大手术有关的恶病质。
在一些实施方案中，本发明提供包含沉默调节蛋白的调节剂的新型饮食组合物，其制备方法及使用该组合物以改善运动效能的方法。于是，本发明向涉及广泛定义的运动，包括需要耐力的运动与需要重复性肌肉运动的劳动的人们提供具有改善身体耐力和/或抑制身体疲劳的作用的治疗组合物、食品与饮料。此类饮食组合物可另外包含电解质、咖啡因、维生素、碳水化合物等。
其它用途
增加沉默调节蛋白的水平和/或活性的调节沉默调节蛋白的化合物可用于治疗或预防病毒感染(例如流感病毒、疱疹病毒或乳头状瘤病毒感染)或作为抗真菌剂。在一些实施方案中，增加沉默调节蛋白的水平和/或活性的调节沉默调节蛋白的化合物，可以作为组合药物疗法的一部分与另一种用于治疗病毒性疾病的治疗剂一起给药。在另一个实施方案中，增加沉默调节蛋白的水平和/或活性的调节沉默调节蛋白的化合物，可作为组合药物疗法的一部分与另一种抗真菌剂一起给药。
可如本文所述进行治疗的受试者包括真核生物，例如哺乳动物例如人、羊类、牛类、马类、猪类、犬类、猫类、非人灵长类、小鼠及大鼠。可处理的细胞包括真核细胞，例如得自前述受试者的细胞，或植物细胞、酵母细胞及原核细胞例如细菌细胞。例如，可将调节性化合物给药于农场动物，以改善其能更长期承受农场条件的能力。
增加沉默调节蛋白的水平和/或活性的调节沉默调节蛋白的化合物也可用于增加植物寿命、应激抗性及对于细胞凋亡的抗性。在一个实施方案中，将化合物施予植物(例如定期)，或施予真菌。在另一些实施方案中，植物经遗传修饰以产生化合物。在另一个实施方案中，将植物与果实在采收与运送前先以化合物处理，以增加在运送期间对于损伤的抗性。也可将植物种子与本文所述的化合物接触，以例如使其防腐(preserve)。
在其它实施方案中，增加沉默调节蛋白的水平和/或活性的调节沉默调节蛋白的化合物可用于调节酵母细胞的寿命。其中希望延长酵母细胞寿命的情况包括其中使用酵母的任何工艺过程，例如啤酒、酸奶与烘焙物品(例如面包)的制备。使用具有延长寿命的酵母，可以使用更少酵母，或使酵母具有活性的时间更长。也可将用于重组制备蛋白的酵母或其它哺乳动物细胞进行如本文所述的处理。
增加沉默调节蛋白的水平和/或活性的调节沉默调节蛋白的化合物也可用于增加昆虫寿命、应激抗性及对于细胞凋亡的抗性。在此实施方案中，化合物将被施用至有用的昆虫，例如蜜蜂及其它涉及植物授粉的昆虫。在一个具体的实施方案中，化合物将被施用至涉及生产蜂蜜的蜜蜂。一般而言，本文所述的方法或用途可应用至任何生物体，例如具有商业重要性的真核生物。例如，可将本文所述的化合物应用至鱼类(水产养殖)及鸟类(例如鸡与家禽)。
也可使用较高剂量的增加沉默调节蛋白的水平和/或活性的调节沉默调节蛋白的化合物作为杀虫剂，这是通过干扰发育期间沉默基因的调节以及细胞凋亡的调节进行的。在该实施方案中，可通过本领域已知的方法将该化合物施用至植物，并确保该化合物对于昆虫幼虫(且不是对于植物)为生物可利用的。
至少就生殖与寿命间的联系的观点而言，可施用增加沉默调节蛋白的水平和/或活性的调节沉默调节蛋白的化合物，来影响诸如昆虫、动物及微生物等生物体的生殖。
其它实施方案
在一方面，本发明涉及在细胞中增加沉默调节蛋白-1活性的方法，包括将细胞与式(i)的化合物或其药学上可接受的盐或相应的药物组合物分别接触的步骤。
在一方面，本发明涉及用于治疗胰岛素抵抗、代谢综合征、糖尿病或它们的并发症，或用于增加胰岛素敏感性的方法，包括向需要的受试者分别给药化合物或其药学上可接受的盐或相应的药物组合物。
在一方面，本发明涉及用于治疗代谢功能障碍的方法，包括向需要的受试者分别给药化合物或其药学上可接受的盐或相应的药物组合物。
在一方面，本发明涉及治疗由减少的sirt1表达或活性引起的疾病或障碍的方法，其包括向需要的受试者分别给药化合物或其药学上可接受的盐或相应的药物组合物。
在一方面，本发明涉及方法，其中所述由减少的sirt1表达或活性引起的疾病或障碍选自，但不限于老化或应激、糖尿病、代谢功能障碍、神经变性疾病、心血管疾病、癌症或炎性疾病。
在一方面，本发明涉及方法，其中与老化或应激相关的疾病、糖尿病、代谢功能障碍、神经变性疾病、心血管疾病、癌症或炎性疾病选自牛皮癣、特应性皮炎、痤疮、酒渣鼻、炎性肠病、骨质疏松、脓毒病、关节炎、copd、系统性红斑狼疮和眼科炎症。
在一方面，本发明涉及方法，其中与老化或应激相关的疾病、糖尿病、代谢功能障碍、神经变性疾病、心血管疾病、癌症或炎性疾病选自牛皮癣、特应性皮炎、痤疮、酒渣鼻、炎性肠病、骨质疏松、脓毒病、关节炎、copd、系统性红斑狼疮和眼科炎症。
在一方面，本发明涉及治疗牛皮癣的方法，其包括向需要的受试者分别给药化合物或其药学上可接受的盐或相应的药物组合物。
在一方面，本发明涉及分别给药化合物或其药学上可接受的盐或相应的药物组合物，以用于治疗患有或易患胰岛素抵抗、代谢综合征、糖尿病或它们的并发症的受试者，或用于增加受试者的胰岛素敏感性。
在一方面，本发明涉及化合物或其药学上可接受的盐或相应的药物组合物在制备用于治疗胰岛素抵抗、代谢综合征、糖尿病或它们的并发症，或用于增加受试者的胰岛素敏感性的药物中的用途。
测试
在本文中所涵盖的其它方法或用途包括用于鉴定调节沉默调节蛋白的化合物或试剂的筛选方法。所述试剂可为核酸，例如适体(aptamer)。分析可以基于细胞或不含细胞的形式进行。例如，分析可包含在沉默调节蛋白可被已知调节沉默调节蛋白的试剂所调节的条件下，将沉默调节蛋白与测试剂温育(或接触)，并相对于缺乏测试剂，在该测试剂存在下监控或测定沉默调节蛋白的调节水平。沉默调节蛋白的调节水平可通过测定其将底物脱乙酰基化的能力而确定。示例性底物为可购自biomol(plymouthmeeting，pa)的乙酰化肽类。优选底物包括p53的肽类，例如那些包含乙酰化k382的肽类。尤其优选的底物为fluordelys-sirt1(biomol)，即乙酰化肽arg-his-lys-lys。其它底物为得自人组蛋白h3与h4的肽类或乙酰化氨基酸。底物可为荧光的(fluorogenic)。所述沉默调节蛋白可为sirt1、sir2、sirt3或其部分。例如，重组sirt1可得自biomol。反应可进行约30分钟，并例如以烟酰胺终止。可使用hdac荧光活性分析/药物发现试剂盒(drugdiscoverykit)(ak-500，biomolresearchlaboratories)测定乙酰化水平。类似的分析经描述于bitterman等人(2002)j.biol.chem.277：45099中。可将分析中的沉默调节蛋白的调节程度，与在一种或多种本文所述化合物(其可作为阳性或阴性对照组)(分开或同时)存在下的沉默调节蛋白的调节程度进行比较。用于分析的沉默调节蛋白可为全长沉默调节蛋白或其部分。因为在本文中已显示活化化合物表现出与sirt1的n-末端作用，故用于分析的蛋白包括沉默调节蛋白的n-末端部分，例如sirt1的大致为氨基酸1-176或1-255；sir2的大致为氨基酸1-174或1-252部分。
在一个实施方案中，筛选试验包括(i)在无测试剂存在下在适合沉默调节蛋白将底物脱乙酰化的条件下，使沉默调节蛋白与测试剂及乙酰化底物接触；及(ii)测定底物的乙酰化水平，其中在该测试剂存在下底物的乙酰化程度相对于无该测试剂存在下较低则表示：该测试剂刺激由沉默调节蛋白进行的脱乙酰化作用，而在该测试剂存在下底物的乙酰化程度，相对于无该测试剂存在下较高则表示：该测试剂抑制由沉默调节蛋白进行的脱乙酰化作用。
在另一实施方案中，该筛选试验可检测沉默调节蛋白介导的nad依赖性脱乙酰化的2’/3’-o-乙酰基-adp-核糖产物的形成。该o-乙酰基-adp-核糖产物以与沉默调节蛋白脱乙酰化反应的脱乙酰化肽产物等摩尔量形成。相应地，该筛选试验可包括(i)在无测试剂存在下在适合沉默调节蛋白将底物脱乙酰化的条件下，使沉默调节蛋白与测试剂及乙酰化底物接触；及(ii)测定o-乙酰基-adp-核糖形成的量，其中o-乙酰基-adp-核糖形成在测试剂存在下相对于不存在该测试剂时的量增加表示：该测试剂刺激由沉默调节蛋白进行的脱乙酰化作用，而o-乙酰基-adp-核糖形成在测试剂存在下相对于不存在该测试剂时的量降低表示：该测试剂抑制由沉默调节蛋白进行的脱乙酰化作用。
用于鉴定于体内调节(例如刺激)沉默调节蛋白的试剂的方法或用途可包括(i)在第i类与第ii类hdac的抑制剂存在下，在适合沉默调节蛋白在无测试剂存在下将底物脱乙酰化的条件下，使细胞与测试剂及能够进入细胞的底物接触；及(ii)测定底物的乙酰化程度，其中在该测试剂存在下底物的乙酰化程度相对于无该测试剂存在下较低则表示：该测试剂刺激由沉默调节蛋白进行的脱乙酰化作用，而在该测试剂存在下底物的乙酰化程度相对于无该测试剂存在下较高则表示：该测试剂抑制由沉默调节蛋白进行的脱乙酰化作用。优选底物为乙酰化肽，其也优选为荧光的，如本文中进一步描述的。该方法可进一步包含将细胞裂解(lysing)，以测定底物的乙酰化程度。可将底物以范围介于约1μm至约10mm，优选地约10μm至1mm，甚至更优选约100μm至1mm，例如约200μm的浓度加至细胞中。优选底物为乙酰化赖氨酸，例如ε-乙酰基赖氨酸(fluordelys，fdl)或fluordelys-sirt1。第i类与第ii类hdac的优选抑制剂为制滴菌素a(trichostatina)(tsa)，其可以范围介于约0.01μm至100μm，优选约0.1μm至10μm，例如1μm的浓度使用。细胞与测试化合物及底物的温育可进行约10分钟至5小时，优选约1-3小时。因为tsa抑制所有第i类与第ii类hdac，且一些底物例如fluordelys对于sirt2为较差的底物，对于sirt3-7为甚至更差的底物，故此类分析可用于鉴定体内sirt1的调节剂。
方法
本发明还涉及使用本文所述的沉默调节蛋白调节剂化合物治疗和/或预防多种疾病和障碍的方法或用途，所述疾病和障碍包括，但不限于，例如，与老化或应激相关的疾病或障碍、糖尿病、肥胖症、神经变性疾病、心血管疾病、凝血障碍、炎症、癌症、和/或潮红以及将得益于增加线粒体活性的疾病或障碍，所述疾病和障碍进一步可选自或包括，但不限于牛皮癣、特应性皮炎、痤疮、酒渣鼻、炎性肠病、骨质疏松、脓毒病、关节炎、copd、系统性红斑狼疮和眼科炎症。
在另一个方面，本发明提供了使用调节沉默调节蛋白的化合物、或包含调节沉默调节蛋白的化合物的组合物的方法或用途。在一些实施方案中，提高沉默调节蛋白的水平和/或活性的调节沉默调节蛋白的化合物可以用于多种治疗应用，包括，例如，提高细胞寿命，治疗和/或预防多种疾病和病症，包括，例如，与老化或应激反应有关的疾病或障碍，糖尿病，肥胖症，神经变性疾病，化学疗法诱导的神经病，与缺血状况有关的神经病，眼睛疾病和/或病症，心血管疾病，凝血病症，炎症，和/或潮红，等等。提高沉默调节蛋白的水平和/或活性的调节沉默调节蛋白的化合物也可以用于治疗患者的受益于线粒体活性提高的疾病或障碍，用于增强肌肉性能，用于提高肌肉atp水平，或用于治疗或预防与缺氧或缺血有关的肌肉组织损伤。在其它实施方案中，降低沉默调节蛋白的水平和/或活性的调节沉默调节蛋白的化合物可以用于多种治疗应用，包括，例如，提高细胞对应激反应的敏感性，提高细胞凋亡，治疗癌症，刺激食欲，和/或刺激体重增加，等等。如下面进一步所描述，该方法或用途包括向有此需要的受试者给药药学上有效量的调节沉默调节蛋白的化合物。
在一些方面，调节沉默调节蛋白的化合物可以单独给药，或与其它化合物(包括其它调节沉默调节蛋白的化合物或其它治疗剂)组合给药。
在另一方面，本发明涉及增加细胞中沉默调节蛋白-1活性的方法，其包括将细胞与本发明式(i)至(iv)的化合物、其相应的类似物或其衍生物(即，在r2位具有氢取代)或药学上可接受的盐接触的步骤。
在另一方面，本发明涉及在细胞中增加沉默调节蛋白-1活性的方法，包括将细胞与本文限定的本发明的药物组合物接触的步骤。
在另一方面，本发明涉及用于治疗胰岛素抵抗、代谢综合征、糖尿病或它们的并发症，或用于增加胰岛素敏感性的方法，其包括向需要的受试者给药本发明的式(i)至(iv)的化合物、其相应的类似物或衍生物(即，在r2位具有氢取代)。
在另一方面，本发明涉及治疗患有或易患胰岛素抵抗、代谢综合征、糖尿病或它们的并发症的受试者，或用于增加受试者的胰岛素敏感性的方法，包括向需要的受试者给药本发明的药物组合物。
在另一方面，本发明涉及用于治疗胰岛素抵抗、代谢综合征、糖尿病或它们的并发症，或用于增加胰岛素敏感性的方法，包括向需要的受试者给药本发明的药物组合物。
在另一方面，本发明涉及增加细胞中沉默调节蛋白-1活性的方法，其包括将细胞与式(i)至(iv)的化合物、其相应的类似物或其衍生物(即，在r2位具有氢取代)或药学上可接受的盐接触的步骤。
在另一方面，本发明涉及增加细胞中沉默调节蛋白-1活性的方法，其包括将细胞与本发明的药物组合物接触的步骤。
在另一方面，本发明涉及用于治疗代谢功能障碍的方法，其包括向需要的受试者给药式(i)至(iv)的化合物、其相应的类似物或其衍生物(即，在r2位具有氢取代)或药学上可接受的盐。
在另一方面，本发明涉及用于治疗代谢功能障碍的方法，包括向需要的受试者给药本发明的药物组合物。
在另一方面，本发明涉及治疗由减少的sirt1表达或活性引起的疾病或障碍的方法，其包括向需要的受试者给药式(i)至(iv)的化合物、其相应的类似物或其衍生物(即，在r2位具有氢取代)或药学上可接受的盐。
在另一方面，本发明涉及方法，其中由减少的sirt1表达或活性引起的疾病或障碍选自，但不限于老化或应激、糖尿病、代谢功能障碍、神经变性疾病、心血管疾病、癌症或炎性疾病。
在另一方面，本发明涉及方法，其中与老化或应激相关的疾病、糖尿病、代谢功能障碍、神经变性疾病、心血管疾病、癌症或炎性疾病选自牛皮癣、特应性皮炎、痤疮、酒渣鼻、炎性肠病、骨质疏松、脓毒病、关节炎、copd、系统性红斑狼疮和眼科炎症。
在另一方面，本发明涉及治疗牛皮癣的方法，其包括向需要的受试者给药式(i)至(iv)的化合物、其相应的类似物或其衍生物(即，在r2位具有氢取代)或药学上可接受的盐。
在另一方面，本发明涉及治疗牛皮癣的方法，其包括向需要的受试者给药本发明的药物组合物。
药物组合物和制剂
通常，本发明涉及式(i)至(iv)的取代的桥环脲类似物化合物、其相应的类似物或其衍生物(即，在r2位具有氢取代)，或其药学上可接受的盐，相应的药物组合物，该化合物的制备方法，以及其单独或与其它治疗剂组合，作为沉默调节蛋白调节剂以用于增加细胞寿命，和用于治疗和/或预防多种疾病和障碍的用途，所述疾病和障碍包括，但不限于，例如，与老化或应激相关的疾病或障碍、糖尿病、肥胖症、神经变性疾病、心血管疾病、凝血障碍、炎症、癌症、和/或潮红以及将得益于增加线粒体活性的疾病或障碍。
特别是，本发明分别涉及新的式(i)至(iv)的化合物、其相应的类似物或其衍生物(即，在r2位具有氢取代)或药学上可接受的盐和包含式(i)至(iv)的化合物的相应的药物组合物。
在另一方面，本发明涉及包含药学上可接受的载体或稀释剂和式(i)至(iv)的化合物、其相应的类似物或其衍生物(即，在r2位具有氢取代)或药学上可接受的盐的药物组合物。
在另一方面，本发明涉及本发明的药物组合物，还包含其它活性剂。
在另一方面，本发明涉及包含式(i)至(iv)的化合物、其相应的类似物或其衍生物(即，在r2位具有氢取代)或药学上可接受的盐和至少一种药学上可接受的载体的药物组合物。
本文所述的化合物可以通过常规方法，使用一种或多种生理学上或药学上可接受的载体或赋形剂配制。例如，该化合物及其药学上可接受的盐与溶剂合物可经配制成用于通过例如注射(例如subq、im、ip)、吸入或吹入(通过口或鼻)或口服、口腔、舌下、经皮、鼻、肠胃外或直肠给药的制剂。在一些实施方案中，该化合物可局部地，在标靶细胞存在的部位，即在特定组织、器官或体液(例如血液、脑脊髓液等)中进行给药。
该化合物可配制成用于各种给药方式，包括全身及局部或区域性给药的制剂。技术与制剂一般可见于remington’spharmaceuticalsciences，meadepublishingco.，easton，pa。对于肠胃外给药，以注射为优选，包括肌肉内、静脉内、腹膜内及皮下。对于注射，可将所述化合物配制成液态溶液，优选用生理学上相容的缓冲液，例如汉克氏溶液或林格氏溶液。此外可将所述化合物配制成固体形式，并于使用前立即再溶解或悬浮。也可包括冷冻干燥形式。
对于口服给药，药物组合物可采用例如通过常规方法，用药学上可接受的赋形剂例如粘合剂(例如，预凝胶化的玉米淀粉、聚乙烯基吡咯烷酮或羟丙基甲基纤维素)；填充剂(例如乳糖、微晶纤维素或磷酸氢钙)；润滑剂(例如硬脂酸镁、滑石或硅石)；崩解剂(例如马铃薯淀粉或淀粉羟基乙酸钠)；或湿润剂(例如月桂基硫酸钠)制备的片剂、锭剂或胶囊的形式。片剂可通过本领域已熟知的方法包衣。用于口服给药的液体制剂可采用例如溶液、糖浆或悬浮液的形式，或它们可制成干燥产物，在使用前以水或其它适宜载体配制。此类液体制剂可通过常规方法，用药学上可接受的添加剂例如悬浮剂(例如，山梨糖醇糖浆、纤维素衍生物或氢化食用脂类)；乳化剂(例如卵磷脂或金合欢胶)；非水载体(例如扁桃油、酯油类、乙醇或分馏植物油)；及防腐剂(例如对-羟基苯甲酸甲基酯或对-羟基苯甲酸酯丙基酯或山梨酸)制备。如果适当，该制剂也可含有缓冲盐、调味剂、着色剂与甜味剂。用于口服给药的制剂可适宜地配制，以使活性化合物受控的释放。
对于通过吸入(例如肺递送)给药，可方便地将化合物以从经加压包装或喷雾器中使用适宜的推进剂例如二氯二氟甲烷、三氯氟甲烷、二氯四氟乙烷、二氧化碳或其它适合气体的气溶胶喷雾制剂形式来递送。在经加压气溶胶的情况下，剂量单位可通过提供用于递送已计量的量的阀来确定。可配制用于吸入器或吹入器的例如明胶胶囊或药筒(cartridge)，其含所述有化合物与适宜粉末基质例如乳糖或淀粉的粉末混合物。
该化合物可经配制成用于通过注射，例如通过推注或持续输注的肠胃外给药。用于注射的配制剂可以单位剂量形式提供，例如，以安瓿或多剂量容器(添加防腐剂)提供。组合物可采用诸如在油性或含水载体中的悬浮液、溶液或乳液的形式，且可含有配制剂，例如悬浮剂、稳定剂和/或分散剂。或者，活性成分可以是粉末形式，在使用前可以用适宜载体，例如灭菌无热源水构成。
该化合物也可配制成直肠组合物，例如栓剂或保留灌肠剂，例如含有常规的栓剂基质如可可脂或其它甘油酯类。
除了先前所述的制剂外，化合物也可配制成储存制剂(depotpreparation)。此类储存制剂可通过植入(例如以皮下或肌肉内)，或经由肌肉内注射给药。因此，例如，可将化合物用适宜的聚合或疏水性材料(例如在可接受油中的乳液)或离子交换树脂配制，或呈微溶性衍生物，例如呈微溶性盐。受控释放配制剂也包括贴剂。
在一些实施方案中，本文所述的化合物可配制成用于递送至中枢神经系统(cns)(见综述，begley，pharmacology&therapeutics104：29-45(2004))。用于药物递送至cns的常规方法包括：神经外科策略(例如脑内注射或脑室内输注)；试剂的分子操作(例如包含与药剂组合的转运肽的嵌合融合蛋白的生成，所述转运肽对内皮细胞表面分子具有亲合力，而所述药剂本身不能穿越bbb)，以尝试开发bbb的内源性运送途径之一；设计用于增加试剂的脂溶度的药理策略(例如，将水溶性试剂缀合(conjugation)至脂质或胆固醇载体)；及通过高渗破坏短暂破坏bbb完整性(源自将甘露糖醇溶液输注入颈动脉中或使用生物活性剂例如血管紧张肽)。
脂质体为另一种容易可注射的药物递送系统。于是，在本发明方法中也可将活性化合物以脂质体递送系统的形式给药。脂质体为本领域技术人员已熟知的。脂质体可由各种磷脂例如胆固醇、磷酯酰胆碱的硬脂胺形成。可用于本发明方法的脂质体包含所有类型脂质体，包括但不限定于小单层囊泡、大单层囊泡及多层囊泡。
另一种制备本文所述的化合物的制剂(尤其是溶液)的方法是通过使用环糊精。环糊精是指α-、β-或γ-环糊精。环糊精详细描述于pitha等人，u.s专利4,727,064中。环糊精为葡萄糖的环状寡聚物；这些化合物与任何药物形成包合复合物(inclusioncomplex)，所述药物的分子能适合于环糊精分子的亲脂搜寻空腔(lipophile-seekingcavity)中。
快速崩解或溶解剂型可用于医药活性剂的快速吸收，尤其是口腔与舌下吸收。快速溶解(fastmelt)剂型对具有吞咽常见的固体剂型例如囊片(caplet)与片剂困难的患者(例如老年人及幼儿患者)有益。此外，快速溶解剂型克服了与例如咀嚼剂型有关的缺点，其中活性剂在患者口中保持的时间长度，在确定味觉掩盖量及患者可能感受到活性剂的喉咙粗砂质感的程度方面起重要作用。
药物组合物(包括化妆品制剂)可包含约0.00001％至100％，例如0.001至10％或0.1％至5％(按重量计)的一种或多种本文所述的化合物。在其他实施方案中，该药物组合物包含：(i)0.05至1000mg的本发明化合物或其药学上可接受的盐，和(ii)0.1至2克的一种或多种药学上可接受的赋形剂。
在一些实施方案中，将本文所述的化合物混入含有一般适用于局部药物给药的局部给药载体，且包含本领域已知的任何此类物质的局部制剂中。可选择局部给药载体以使组合物呈所希望的形式，例如呈软膏、洗剂、乳膏、微乳剂、凝胶、油、溶液等，且其可由天然存在或合成来源的材料组成。优选所选择的载体不会有害地影响活性剂或局部制剂的其它组分。用于本文的适宜局部给药载体实例包括水、醇类及其它无毒性有机溶剂、甘油、矿物油、硅酮、凡士林、胶冻剂、脂肪酸、植物油、对羟基苯甲酸酯、蜡类等。
制剂可为无色无味的软膏、洗剂、乳膏、微乳剂及凝胶。
该化合物可混入一般为半固体制剂的软膏中，其通常以凡士林或其它石油衍生物为基质。所使用的本领域技术人员所了解的具体软膏基质是能够提供最佳药物递送，且优选可提供其它所希望特征以及例如软化性或类似特性的基质。与其它载体或赋形剂一样，软膏基质应为惰性、稳定、无刺激性且非致敏性的。
该化合物可混入洗剂中，其一般为要无摩擦施用于皮肤表面的制剂，且通常为其中固体颗粒(包括活性剂)存在于水或醇类基质中的液态或半液态制剂。洗剂通常为固体的悬浮液，且可包括水包油型的液体油性乳液。
该化合物可混入乳膏中，其一般为粘稠性液体或半固态乳液，为水包油或油包水型。乳剂基质为可水洗，且含有油相、乳化剂与水相。油相一般由凡士林与脂肪醇，例如鲸蜡醇或硬脂醇所组成；水相通常(虽然不必然)在体积上超过油相，且一般含有湿润剂。乳膏制剂中的乳化剂如于前述reminton的文献中所说明的，一般为非离子型、阴离子型、阳离子型或两性表面活性剂。
该化合物可混入微乳剂中，其一般为两种不相混溶的液体(例如油与水)经由表面活性剂分子的界面膜稳定化的热动力学上稳定、各向同性的澄清的分散体(encyclopediaofpharmaceuticaltechnology(newyork：marceldekker，1992)，第9卷)。
该化合物可混入凝胶制剂中，其一般为由小的无机粒子组成的悬浮液(二相系统)，或基本上均匀分布于整个载体液体(单相凝胶)中的大的有机分子所组成的半固体系统。虽然凝胶一般使用含水载体液体，也可使用醇类与油类作为载体液体。
在制剂中也可包括其它活性剂，例如其它消炎剂、镇痛剂、抗微生物剂、抗真菌剂、抗生素、维生素、抗氧化剂及一般存在于防晒制剂中的阳光阻断剂，包括但不限定于邻氨基苯甲酸酯、二苯甲酮(尤其是二苯甲酮-3)、樟脑衍生物、肉桂酸酯(例如甲氧基肉桂酸辛酯)、二苯甲酰基甲烷(例如丁基甲氧基二苯甲酰基甲烷)、对-氨基苯甲酸(paba)及其衍生物，及水杨酸酯(例如水杨酸辛酯)。
在一些局部制剂中，活性剂以该制剂的大约0.25重量％至75重量％，优选地为该制剂的大约0.25重量％至30重量％，更优选地为该制剂的大约0.5重量％至15重量％，且最优选地为该制剂的大约1.0重量％至10重量％的范围存在。
眼疾病可通过例如全身性、局部眼内注射化合物，或通过安插可释放化合物的持续释放装置而治疗或预防。可将化合物在药学上可接受的眼载体中进行递送，以使该化合物能保持与眼表面接触足够的时间以让该化合物穿透角膜与眼睛的内部区域，例如前室、后室、玻璃体、房水、玻璃体液、角膜、虹膜/睫状体(ciliary)、晶状体、脉络膜/视网膜及巩膜。药学上可接受的眼载体可例如为软膏、植物油或包封材料。另一方面，可将本发明化合物直接注射入玻璃体液与房水中。在另一选择中，该化合物可全身性给药(例如通过静脉内输注或注射)用于眼的治疗。
本文所述的化合物可储存于无氧环境中。例如，可将组合物配制于供口服给药的不透气胶囊中，例如购自pfizer，inc.的capsugel中。
可将例如本文中所述的化合物体外处理的细胞，根据用于将移植物给药于患者的方法或用途进行给药，其可伴随例如给药免疫抑制药物例如环孢菌素a。关于药物配制的一般原理，读者可参考celltherapy：stemcelltransplantation，genetherapyandcellularimmunotherapy，g.morstyn和w.sheridan编，剑桥大学出版社，1996；及hematopoieticstemcelltherapy，e.d.ball，j.lister和p.law，churchilllivingstone，2000。
化合物的毒性与治疗功效可通过用细胞培养物或实验动物的标准药学方法测定。ld50为对于50％群体致死的剂量。ed50为对于50％群体治疗上有效的剂量。毒性与治疗功效间的剂量比值(ld50/ed50)为治疗指数。优选具有高治疗指数的化合物。虽然可使用具有毒副作用的化合物，但应小心设计将此类化合物靶向至受感染组织位置的递送系统，以使得可以将对于未受感染细胞可能的伤害减至最低，并由此减少副作用。
得自细胞培养试验及动物研究的数据，可用于配制在人中使用的剂量范围。此类化合物的剂量可在其包括具有较小或无毒性的ed50值的循环浓度范围内。该剂量可在此范围内根据所使用的剂型及所利用的给药途径而有所变化。对于任何化合物，可最初由细胞培养试验评估治疗上有效的剂量。可用动物模型调配剂量，以达到包括如在细胞培养中所测定的ic50值(即，达到对症状的一半最大抑制作用的测试化合物浓度)的循环血浆浓度范围。此类信息可用于更准确地测定人的有效剂量。可例如通过高效液相色谱法测量血浆中的浓度。
试剂盒
本发明也提供试剂盒，例如用于治疗目的试剂盒，或用于调节细胞寿命或调节细胞凋亡的试剂盒。试剂盒可包括一种或多种例如以预先测量的剂量的本文中所述的化合物。试剂盒可任选地包括用于将细胞与所述化合物接触的装置及使用说明书。该装置包括注射器、支架及其它用于将化合物导入患者(例如患者的血管)中，或将其涂覆于患者皮肤的装置。
在另一个实施方案中，本发明提供一种物质组合物，其包含本发明化合物与另一种治疗剂(用于组合疗法及组合组合物中的那些相同的治疗剂)，存在于独立的剂型中，但彼此互相关联。本文使用的术语“互相关联”是指，将独立的剂型包装在一起，或者相互依附，从而使得可以容易地明白这些独立的剂型欲被销售，且欲以相同方案的一部分给药。优选将该化合物和其他药剂一起包装于泡罩包装或其它多室包装中，或作为可由使用者自行分开(例如，通过在两个容器间的刻划线处撕开)的连结的、分开密封的容器(例如锡箔小袋等)中。
在另一个实施方案中，本发明提供试剂盒，其包含存在于独立的容器中的a)本发明化合物；及b)另一种治疗剂，例如那些描述于说明书其它部分的治疗剂。
除非另有说明，本发明方法的实施将利用本领域技术人员所知的细胞生物学、细胞培养、分子生物学、转基因生物学、微生物学、重组dna及免疫学的常规技术。这些技术在文献中有详尽的解释。参见，例如：molecularcloningalaboratorymanual，第2版，sambrook、fritsch和maniatis编著(coldspspringharborlaboratorypress：1989)；dnacloning，第i与ii卷(d.n.glover编著，1985)；oligonucleotidesynthesis(m.j.gait编著，1984)；mullis等人u.s.专利no：4,683,195；nucleicacidhybridization(b.d.hames&s.j.higgins编著1984)；transcriptionandtranslation(b.d.hames&s.j.higgins编著，1984)；cultureofanimalcells(r.i.freshney，alanr.liss，inc.，1987)；immobilizedcellsandenzymes(irlpress，1986)；b.perbal，practicalguidetomolecularcloning(1984)；专题论文，methodsinenzymology(academicpress，inc.，n.y.)；genetransfervectorsformammaliancells(j.h.millerh和m.p.calos编著，1987，coldspringharborlaboratory)；methodsinenzymology，卷154和155(wu等人编著)，immunochemicalmethodsincellandmolecularbiology(mayer和walker编著，academicpress，london，伦敦，1987)；handbookofexperimentalimmunology，卷i-iv(d.m.weir和c.c.blackwell编著，1986)；manipulatingthemouseembryo(coldspringharborlaboratorypress，coldspringharbor，n.y.，1986)。下面的实施例对本发明进行阐述，且不是用于以任何方式限制本发明的范围。
下面的实施例对本发明进行阐述，且不是用于以任何方式限制本发明的范围。
实施例
下面的实施例对本发明进行阐述，且不是用于以任何方式限制本发明的范围，而是指导本领域技术人员制备和使用本发明化合物、组合物和方法或用途。虽然描述了本发明的具体实施方案，但是本领域技术人员将会理解，在不脱离本发明的精神和范围的情况下，可以进行各种改变和改进。
如文中这些方法、方案和实施例中所用的符号以及常规术语都是与当代的科学文献例如thejournaloftheamericanchemicalsociety或thejournalofbiologicalchemistry中所用的相一致。标准的单字母或三字母缩写通常用于命名氨基酸残基，除非另外指出，假定其为l-构型。除非另外指出，所有的起始原料可从商业的供应厂商获得并不需进一步纯化即可使用。
醚指的是乙醚；盐水指的是饱和的nacl水溶液。除非另外指出，所有的温度以℃(摄氏度)表示。除非另外指出，所有的反应都是在惰性气氛下于室温进行，并且除非另外指出，所有溶剂为能得到的最高纯度。
使用的仪器
具有pda的lcms：
watersallaince2695-2996/quattromicro
agilent-1200/sqd
具有uv检测器的制备型lc(制备型hplc)：
waters-2545/2998pda和2487uv
shimadzu-lc-20ap/20av-uv
gilson-333，334/115-uv
手性hplc：
watersalliance-2695/2998&2996
sfc纯化体系：
thar-sfc-80
waterssfc-200
nmr(400mhz)：
varian-400mhz
1h-nmr列表使用2014acd实验室软件生成。
1hnmr(下文也称为″nmr″)谱在varian-400mhz波谱仪上记录。化学位移以百万分率(ppm，δ单位)表示。偶合常数是以赫兹(hz)为单位。裂分模式描述了表观的多重性，并以如下表示：s(单峰)、d(双峰)、t(三重峰)、q(四重峰)、quint(五重峰)、m(多重峰)、br(宽峰)。
使用的lcms方法
获取方法条件：rnd-abc-6-min
柱：xbridgebehc18(50mmx4.6mm，2.5μm)
流动相：a：5mm碳酸氢铵水溶液(ph-10，具有氨)：acn
时间(分钟)/％acn：0/5，0.5/5，1/15，3.3/98，5.2/98，5.5/5，6.0/5
柱温：35℃，流速1.3ml/min
ms参数：
质量范围：100-1000
扫描时间：0.5sec
扫描之间的延迟：0.1sec
运行时间：6.0min
获取方法条件：rnd-fa-4.5-min
柱：acquitybehc18(50mmx2.1mm，1.7um)
流动相：a：0.1％fa水溶液；b：acn中的0.1％fa
时间(分钟)/％b：0/3，0.4/3，3.2/98，3.8/98，4.2/3，4.5/3
柱温：35℃，流速：0.6ml/min
ms参数：
质量范围：100-1000
扫描时间：0.5sec
扫描之间的延迟：0.1sec
运行时间：4.5min
获取方法条件：rnd-fa-4.5-min
柱：acquitybehc18(50mmx2.1mm，1.7um)
流动相：a：0.1％fa水溶液；b：acn中的0.1％fa
时间(分钟)/％b：0/3，0.4/3，3.2/98，3.8/98，4.2/3，4.5/3
柱温：35℃，流速：0.6ml/min
ms参数：
质量范围：100-1000
电压(fragmentor)：100
步长：0.1
运行时间：4.5min
获取方法条件：rnd-abc-6.5-min
柱：xbridgebehc18(50mmx4.6mm，2.5μm)
流动相：a：5mm碳酸氢铵水溶液(ph-10，具有氨)：acn
时间(分钟)/％acn：0/5，0.5/5，1/15，3.3/98，6.0/98，6.1/5，6.5/5
柱温：35℃，流速1.3ml/min
ms参数：
质量范围：100-1000
电压：100
步长：0.1
运行时间：6.5min
获取方法条件：rnd-abc-10-min
柱：xbridgebehc18(50mmx4.6mm，2.5μm)
流动相：a：5mm碳酸氢铵水溶液(ph-10，具有氨)：acn
时间(分钟)/％acn：0/5，0.5/5，1.5/15，7/98，9.0/98，9.5/5，10/5
柱温：35℃，流速1.3ml/min
ms参数：
质量范围：100-1000
电压：100
步长：0.1
运行时间：10.0min
中间体
(s)-2-((6-氯-3-硝基吡啶-2-基)氨基)戊二酸二甲酯的合成
向40.0g(207mmol)2，6-二氯-3-硝基吡啶、87.7g(414mmol)l-谷氨酸二甲基酯盐酸盐和69.6g(829mmol)nahco3的混合物中添加600ml四氢呋喃。将混合物在40℃搅拌24h，用hplc监测2，6-二氯-3-硝基吡啶的消失。反应完成后，将该固体过滤掉并用乙酸乙酯(3x100ml)洗涤。将合并的滤液和洗涤液真空浓缩，然后将该残余物通过硅胶柱色谱纯化，用10/1(v/v)己烷/乙酸乙酯洗脱，得到60g(87％)该产物，其为黄色固体，lcms(m/z)332.1[m+h]+.
合成(s)-3-(6-氯-2-氧代-1，2，3，4-四氢吡啶并[2，3-b]吡嗪-3-基)丙酸甲酯
向20g(60.2mmol)的(s)-2-((6-氯-3-硝基吡啶-2-基)氨基)戊二酸二甲酯和16.8g(301mmol)的铁粉的混合物中加入375ml2-丙醇，然后加入125ml水。向该搅拌的混合物中加入5.5g(90.3mmol)乙酸，然后将该反应回流搅拌1h。将该反应用hplc监测起始原料的消失。反应完成后，将该固体过滤掉并用2-丙醇(3x50ml)洗涤。将合并的滤液和洗涤液浓缩至干，然后将该残余物真空干燥，得到15g(81％)产物，其为暗黄色固体。这可直接用于下一步而无需进一步纯化，lcms(m/z)270.1[m+h]+.
合成(s)-3-(6-氯-1，2，3，4-四氢吡啶并[2，3-b]吡嗪-3-基)丙-1-醇
在氮气下，向17.78g(133.3mmol)的alcl3在260ml四氢呋喃(thf)中的溶液中以一定速率滴加200ml2mlialh4的thf溶液以控制气体的释放。得到铝烷(alh3)的thf溶液。在单独的烧瓶中，在氮气下制备26.0g(96.4mmol)的(s)-3-(6-氯-2-氧代-1，2，3，4-四氢吡啶并[2，3-b]吡嗪-3-基)丙酸甲酯在460mlthf中的溶液，然后用干冰/丙酮浴冷却。向其滴加该铝烷溶液，同时搅拌，持续2h。当滴加完成后，移去该冷却浴，并将该反应温热至室温。1.5h后，lcms分析显示该反应完成。接下来，将17.6gnaoh在65ml水中的溶液缓慢加入以控制氢气的释放。将该混悬液搅拌18h，然后将该固体过滤掉。将该沉淀物用乙酸乙酯洗涤，然后将该滤液和洗涤液真空浓缩。将该产物用硅胶柱色谱纯化，用ch2cl2洗脱，然后用0-10％梯度的甲醇/ch2cl2洗脱，得到15.21g(69％)的橘黄色固体，lcms(m/z)228.1[m+h]+.
合成(9s)-2-氯-7，8，9，10-四氢-6h-5，9-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环辛四烯
向12g(52.7mmol)的(s)-3-(6-氯-1，2，3，4-四氢吡啶并[2，3-b]吡嗪-3-基)丙-1-醇中加入160ml48％(w/w)hbr水溶液，然后将该反应在90℃搅拌18h。将该反应用hplc监测起始醇的消失。反应完成后，将其冷却至室温，然后加入1.2mnahco3水溶液直至ph＝8。将该混合物用乙酸乙酯(3x100ml)萃取，然后将有机相用盐水(1x100ml)洗涤，用na2so4干燥，过滤并将滤液浓缩至干。将该残余物用硅胶柱色谱纯化，用2/1(v/v)己烷/乙酸乙酯洗脱，得到6.0g(55％)产物，其为淡黄色固体，lcms(m/z)210.1[m+h]+.
合成2-(2-(三氟甲基)吡啶-4-基)-7，8，9，10-四氢-6h-5，9-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环辛四烯
在室温向2-氯-7，8，9，10-四氢-6h-5，9-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环辛四烯(3g，14.31mmol)、4-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧杂硼杂环戊烷-2-基)-2-(三氟甲基)吡啶(3.91g，14.31mmol)和碳酸铯(4.66g，14.31mmol)在1，4-二噁烷(60ml)和水(6ml)中的溶液中，将反应物质用氩气脱气20min。然后，将固体乙酸钯(ii)(3.21g，14.31mmol)和x-phos(6.82g，14.31mmol)一次性添加至反应物质。将反应混合物在105℃搅拌3-4hrs。该反应物质通过硅藻土床过滤且浓缩。将粗物质吸收且溶于乙酸乙酯且用碳酸氢钠溶液和水洗涤。有机相用硫酸钠干燥且浓缩以得到残余物。残余物用正戊烷研磨(3x50ml)。所得固体通过布氏漏斗过滤，用正戊烷冲洗，且收集所需产物(4g，86％)，lcms(m/z)321.3(m+h)+.
合成(9s)-2-(5-(三氟甲基)吡啶-3-基)-7，8，9，10-四氢-6h-5，9-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环辛四烯
将(9s)-2-氯-7，8，9，10-四氢-6h-5，9-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环辛四烯(3g，14.31mmol)、(5-(三氟甲基)吡啶-3-基)硼酸(5.46g，28.6mmol)和cs2co3(13.99g，42.9mmol)在四氢呋喃(thf)(60ml)、水(4ml)中的溶液在氮气下在25℃搅拌，用氩气吹洗20分钟。然后添加乙酸钯(ii)(0.080g，0.358mmol)和x-phos(227mg)。将反应混合物在110℃搅拌16小时。然后，将反应混合物浓缩且残余物溶于dcm(100ml)。溶液用水和盐水洗涤，用na2so4干燥，过滤且浓缩。将粗产物添加至硅胶柱且用hex/etoac(1∶1)洗脱。将收集的级分蒸发以得到灰白色固体(3.6g，11.1mmol76％)，lcms(m/z)321.2[m+h]+.
合成(9s)-2-(2-甲基吡啶-4-基)-7，8，9，10-四氢-6h-5，9-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，41二氮杂环辛四烯
将(9s)-2-氯-7，8，9，10-四氢-6h-5，9-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环辛四烯(10g，47.7mmol)、(2-甲基吡啶-4-基)硼酸(8.49g，62.0mmol)和磷酸钾(30.4g，143mmol)在1-丁醇(300ml)、水(100ml)中的溶液在氮气下在25℃搅拌，用氩气吹洗20分钟，然后添加x-phos(2.274g，4.77mmol)、pd2(dba)3(2.184g，2.385mmol)。将反应混合物在120℃搅拌16小时。在浓缩之前将残余物溶于dcm(700ml)。溶液用水和盐水洗涤，用na2so4干燥，过滤且浓缩以得到棕色半固体粗产物。粗产物通过用己烷洗涤而纯化以得到灰白色固体产物(9g，32.4mmol，67.9％产率)，lcms(m/z)：267.3(m+h)+.
合成(9s)-2-((r)-2-(三氟甲基)吡咯烷-1-基)-7，8，9，10-四氢-6h-5，9-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环辛四烯
在氮气氛下在室温向(9s)-2-氯-7，8，9，10-四氢-6h-5，9-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环辛四烯(0.5g，2.385mmol)、(r)-2-(三氟甲基)吡咯烷(0.663g，4.77mmol)和kotbu(0.535g，4.77mmol)在1，2-二甲氧基乙烷(dme)(10ml)中的悬浮液中添加固体[1，3-二(2，6-二异丙基苯基)-4，5-二氢咪唑-2-亚基]氯][3-苯基烯丙基]钯(ii)(1.549g，2.385mmol)且在80℃搅拌16h。将反应物质冷却至室温且通过硅藻土过滤且在减压下蒸发溶剂以得到粗残余物。粗残余物用etoac(100ml)稀释且用水(50mlx2)洗涤，然后用盐水溶液洗涤且用无水硫酸钠干燥，过滤且蒸发以得到粗产物。粗产物通过快速柱色谱法纯化(硅胶：100-200目，用1∶1hex/etoac洗脱)以得到(9s)-2-((2r)-2-(三氟甲基)环戊基)-6，7，8，9，10，10a-六氢-4ah-5，9-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环辛四烯(500mg，1.596mmol，64.6％产率)，其为浅绿色固体(tlc：rf0.3，洗脱液：80％etoac在己烷中)，lcms(m/z)313.2[m+h]+.
合成(9s)-2-((s)-2-(三氟甲基)吡咯烷-1-基)-7，8，9，10-四氢-6h-5，9-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环辛四烯
将(9s)-2-氯-7，8，9，10-四氢-6h-5，9-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环辛四烯(0.5g，2.385mmol)、(s)-2-(三氟甲基)吡咯烷(0.663g，4.77mmol)和kotbu(0.535g，4.77mmol)在1，2-二甲氧基乙烷(dme)(10ml)中的悬浮液搅拌且在室温用氩气脱气15mins。然后，将[1，3-二(2，6-二异丙基苯基)-4，5-二氢咪唑-2-亚基]氯][3-苯基烯丙基]钯(ii)(1.549g，2.385mmol)添加至反应混合物。然后反应混合物在80℃搅拌16hr。完成后，将反应物质通过硅藻土过滤且浓缩至干。所得残余物用etoac稀释且用水洗涤，然后用盐水溶液洗涤且用硫酸钠干燥，过滤且蒸发。将粗产物添加至硅胶柱，用hex/etoac(1∶1)洗脱。将收集的级分蒸发以得到(9s)-2-((s)-2-(三氟甲基)吡咯烷-1-基)-7，8，9，10-四氢-6h-5，9-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环辛四烯(0.6g，1.868mmol，78％产率)，其为灰白色固体，lcms(m/z)313.3[m+h]+.
合成(9s)-2-(3-(三氟甲基)吡咯烷-1-基)-7，8，9，10-四氢-6h-5，9-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环辛四烯
将kotbu(0.321g，2.86mmol)添加至(9s)-2-氯-7，8，9，10-四氢-6h-5，9-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环辛四烯(0.3g，1.431mmol)和3-(三氟甲基)吡咯烷(0.398g，2.86mmol)在1，2-二甲氧基乙烷(dme)(10ml)中的搅拌溶液中。将反应混合物搅拌且在室温用氩气脱气15mins.，然后将(1，3-二(2，6-二异丙基苯基)-4，5-二氢咪唑-2-亚基)氯)(3-苯基烯丙基)钯(2)(0.037g，0.057mmol)添加至反应混合物。将反应在80℃搅拌16h。将反应冷却至室温，通过硅藻土过滤且在减压下蒸发。反应混合物在水(20ml)和etoac(50ml)之间分配。将有机层分离且用无水na2so4干燥，过滤且将滤液蒸发以得到粗物质，其为棕色固体(tlc洗脱液：80％etoac：rf-0.4；uv活性)。该粗物质通过柱色谱纯化，使用(100-200目)硅胶且用己烷中的50％etoac洗脱以得到(85∶15)混合物且进一步通过sfc纯化以得到纯的(9s)-2-(3-(三氟甲基)吡咯烷-1-基)-7，8，9，10-四氢-6h-5，9-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环辛四烯(0.151g，0.473mmol，33.1％产率)，其为灰白色固体。
分析sfc条件：峰-ii柱/尺寸：
chiralpakad-h(250x4.6)mm，5u
制备型sfc条件
lcms(m/z)313.3[m+h]+.
1hnmr(400mhz，dmso-d6)：δ6.87(d，j＝8.1hz，1h)，6.49(d，j＝4.9hz，1h)，5.58(d，j＝8.1hz，1h)，3.60(dd，j＝10.8，8.4hz，1h)，3.47(s，1h)，3.39(dd，j＝10.6，5.8hz，2h)，3.30(s，2h)，3.14-2.98(m，2h)，2.90(d，j＝4.5hz，1h)，2.50(qd，j＝3.2，2.2，1.6hz，1h)，2.31-2.13(m，1h)，2.05(d，j＝7.1hz，1h)，1.72(dt，j＝7.0，3.0hz，2h)，1.44(s，1h)，1.16(d，j＝14.4hz，1h)。
合成(9s)-2-(3-(三氟甲基)吡咯烷-1-基)-7，8，9，10-四氢-6h-5，9-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环辛四烯
在室温将(1，3-二(2，6-二异丙基苯基)-4，5-二氢咪唑-2-亚基)氯)(3-苯基烯丙基)钯(0.062g，0.095mmol)添加至(9s)-2-氯-7，8，9，10-四氢-6h-5，9-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环辛四烯(0.5g，2.385mmol)、3-(三氟甲基)吡咯烷(0.663g，4.77mmol)和kotbu(0.535g，4.77mmol)在1，2-二甲氧基乙烷(20ml)中的脱气悬浮液中。反应混合物进一步脱气10分钟且在80℃搅拌16h。将反应混合物冷却至室温且通过硅藻土垫过滤。将滤液蒸发以得到棕色残余物。残余物在水(15ml)和etoac(2x25ml)之间分配。有机层用水洗涤，然后用盐水溶液洗涤且用无水硫酸钠干燥，过滤且将滤液蒸发以得到粗物质(tlc洗脱液：80％etoac/己烷，rf值：0.4，uv活性)。该粗物质通过柱色谱使用硅胶纯化(100-200目)，且产物通过石油醚中的50％乙酸乙酯洗脱以得到对映异构体的(30∶70)混合物，其进一步通过sfc纯化得到(9s)-2-(3-(三氟甲基)吡咯烷-1-基)-7，8，9，10-四氢-6h-5，9-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环辛四烯(0.125g，0.393mmol，16.46％产率)，其为棕色固体。
分析sfc条件：峰i(主要)
chiralpakad-h(250x4.6)mm，5u
制备型sfc条件
lcms(m/z)313.31[m+h]+.
1hnmr(400mhz，cdcl3)：δ7.03(dd，j＝8.2，0.6hz，1h)，5.67(d，j＝8.2hz，1h)，4.91(s，1h)，3.71(dd，j＝10.8，8.5hz，1h)，3.62(s，1h)，3.52(dd，j＝10.8，7.2hz，2h)，3.43(dt，j＝9.6，7.5hz，1h)，3.24-3.08(m，3h)，2.99(d，j＝8.2hz，1h)，2.83(d，j＝12.0hz，1h)，2.27-2.08(m，2h)，1.91-1.75(m，2h)，1.65(d，j＝5.0hz，2h)，1.26(t，j＝6.6hz，1h)。
合成(9s)-2-(3-(三氟甲基)哌啶-1-基)-7，8，9，10-四氢-6h-5，9-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环辛四烯.
将(9s)-2-氯-7，8，9，10-四氢-6h-5，9-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环辛四烯(0.750g，3.58mmol)、3-(三氟甲基)哌啶(1.096g，7.15mmol)和kotbu(1.204g，10.73mmol)在1，2-二甲氧基乙烷(dme)(30ml)中的悬浮液搅拌且在室温用氩气脱气15mins.，然后将(1，3-二(2，6-二异丙基苯基)-4，5-二氢咪唑-2-亚基)氯)(3-苯基烯丙基)钯(2)(0.093g，0.143mmol)添加至反应混合物。然后将反应混合物在80℃搅拌16h。将反应物质通过硅藻土过滤且在减压下完全蒸发。反应混合物用etoac(50ml)稀释，用水洗涤，然后用盐水溶液洗涤，用硫酸钠干燥，过滤且蒸发。将粗产物添加至硅胶柱且用hex/etoac(1∶1)洗脱。将收集的级分蒸发且所得残余物通过手性sfc分离纯化以得到纯的(9s)-2-(3-(三氟甲基)哌啶-1-基)-7，8，9，10-四氢-6h-5，9-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环辛四烯(0.450g，1.371mmol，38.3％产率)，其为灰白色固体，(tlc：rf值：0.4，80％etoac/己烷)。
分析sfc条件：峰-i
制备型sfc条件
lcms(m/z)327.3[m+h]+.
1hnmr(400mhz，dmso-d6)：δ6.89(dd，j＝8.2，0.7hz，1h)，6.56(d，j＝4.6hz，1h)，5.89(d，j＝8.3hz，1h)，4.58-4.33(m，1h)，3.97(d，j＝12.8hz，1h)，3.48(s，1h)，3.17-2.98(m，2h)，2.92(d，j＝4.4hz，1h)，2.76-2.57(m，2h)，2.50(p，j＝1.9hz，2h)，1.96(d，j＝10.6hz，1h)，1.74(dd，j＝9.4，3.3hz，3h)，1.61-1.32(m，3h)，1.25-1.08(m，1h)。
合成(9s)-2-(3-(三氟甲基)哌啶-1-基)-7，8，9，10-四氢-6h-5，9-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环辛四烯
将kotbu(0.803g，7.15mmol)添加至(9s)-2-氯-7，8，9，10-四氢-6h-5，9-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环辛四烯(0.750g，3.58mmol)和3-(三氟甲基)哌啶(1.096g，7.15mmol)在1，2-二甲氧基乙烷(dme)(20ml)中的搅拌溶液中。将反应搅拌且在室温用氩气脱气15mins.，然后将(1，3-二(2，6-二异丙基苯基)-4，5-二氢咪唑-2-亚基)氯)(3-苯基烯丙基)钯(2)(0.093g，0.143mmol)添加至反应混合物。将反应混合物在80℃搅拌16h。将反应冷却至室温，通过硅藻土过滤且完全蒸发，且在水(20ml)和etoac(50ml)之间分配。将有机层分离且用无水na2so4干燥，过滤且将滤液蒸发以得到粗物质，其为棕色固体(tlc洗脱液：80％etoac：rf-0.4；uv活性)。该粗物质通过柱色谱纯化，使用(100-200目)硅胶，且用己烷中的50％etoac洗脱以得到(69∶31)混合物，且进一步通过sfc纯化以得到纯的(9s)-2-(3-(三氟甲基)哌啶-1-基)-7，8，9，10-四氢-6h-5，9-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环辛四烯(450mg，1.310mmol，36.6％产率)，其为淡黄色固体。
分析sfc条件：峰-ii
制备型sfc条件
lcms(m/z)327.2[m+h]+.
1hnmr(400mhz，dmso-d6)：δppm6.89(d，j＝8.11hz，1h)，6.55(brd，j＝3.95hz，1h)，5.89(d，j＝8.33hz，1h)，4.49(dt，j＝12.44，1.78hz，1h)，3.96(d，j＝13.15hz，1h)，3.48(brs，1h)，3.15-2.96(m，2h)，2.94-2.80(m，1h)，2.74-2.56(m，2h)，2.55-2.41(m，2h)，2.12-1.84(m，1h)，1.82-1.64(m，3h)，1.58-1.32(m，3h)，1.32-1.08(m，1h)。
合成(9s)-3-氯-2-(3-(三氟甲基)苯基)-7，8，9，10-四氢-6h-5，9-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环辛四烯
向在氮气下在0℃搅拌的(9s)-2-(3-(三氟甲基)苯基)-7，8，9，10-四氢-6h-5，9-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环辛四烯(2g，6.26mmol)在氯仿(20ml)中的溶液中添加ncs(1.004g，7.52mmol)。将反应混合物在室温搅拌2小时。反应混合物用水淬灭且用2x25mldcm萃取，有机层用na2so4干燥且在减压下浓缩以得到粗化合物。粗产物通过快速柱色谱法纯化，使用100-200硅胶且用石油醚中的70％乙酸乙酯洗脱以得到纯的化合物(9s)-3-氯-2-(3-(三氟甲基)苯基)-7，8，9，10-四氢-6h-5，9-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环辛四烯(800mg，1.859mmol，29.7％产率)，其为淡黄色半固体，lcms(m/z)：354.22[m+h]+.
合成(9s)-2-(3-(三氟甲基)苯基)-7，8，9，10-四氢-6h-5，9-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环辛四烯
将固体(9s)-2-氯-7，8，9，10-四氢-6h-5，9-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环辛四烯(5g，23.85mmol)、(3-(三氟甲基)苯基)硼酸(6.79g，35.8mmol)和磷酸三钾(15.19g，71.5mmol)在1，4-二噁烷(160ml)和水(40ml)中的溶液搅拌，且用氩气脱气10分钟，然后再次添加固体x-phos(0.689g，4.77mmol)和pd2(dba)3(2.184g，2.385mmol)，该反应混合物脱气5分钟且在110℃搅拌16小时。有机相用水50ml、饱和盐水100ml洗涤且用na2so4干燥且真空蒸发以得到粗产物，其为棕色固体。粗产物用乙醚和戊烷洗涤且过滤，用乙醚洗涤以得到纯的化合物(9s)-2-(3-(三氟甲基)苯基)-7，8，9，10-四氢-6h-5，9-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环辛四烯(4.8g，13.81mmol，57.9％产率)，lcms(m/z)：320.11[m+h]+.
合成(9s)-3-氯-n-(6-(((r)-2，2-二甲基-1，3-二氧杂环戊烷-4-基)甲氧基)吡啶-2-基)-2-(3-(三氟甲基)苯基)-8，9-二氢-6h-5，9-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环辛四烯-10(7h)-甲酰胺
在28℃将三光气(377mg，1.272mmol)添加至(9s)-3-氯-2-(3-(三氟甲基)苯基)-7，8，9，10-四氢-6h-5，9-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环辛四烯(450mg，1.272mmol)和tea(0.886ml，6.36mmol)在四氢呋喃(thf)(50ml)中的搅拌溶液中。将反应混合物搅拌30分钟且添加(r)-6-((2，2-二甲基-1，3-二氧杂环戊烷-4-基)甲氧基)吡啶-2-胺(571mg，2.54mmol)。将反应混合物在70℃搅拌10h。将反应混合物冷却至室温且在水(5ml)和etoac(15ml)之间分配。分离etoac层且用无水na2so4干燥，过滤。将滤液蒸发以得到粗物质。将粗物质通过grace使用c-18reserval柱纯化，流动相a：0.1％甲酸水溶液；b：meoh，该产物用0.1％甲酸水溶液中的91％meoh洗脱。蒸发溶剂且用饱和nahco3碱化。水层用dcm萃取，dcm层用无水na2so4干燥，过滤且将滤液蒸发以得到(9s)-3-氯-n-(6-(((r)-2，2-二甲基-1，3-二氧杂环戊烷-4-基)甲氧基)吡啶-2-基)-2-(3-(三氟甲基)苯基)-8，9-二氢-6h-5，9-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环辛四烯-10(7h)-甲酰胺(250mg，0.391mmol，30.8％产率)，其为黄色固体，lcms(m/z)：604.14[m+h]+.
合成(9s)-2-氯-3-碘-7，8，9，10-四氢-6h-5，9-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环辛四烯
在氮气下在0℃将nis(2.58g，11.45mmol)添加至(9s)-2-氯-7，8，9，10-四氢-6h-5，9-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环辛四烯(2.0g，9.54mmol)在氯仿(40ml)中的搅拌溶液中，且将反应混合物在65℃搅拌16hr。将反应混合物冷却至室温，在减压下完全蒸发溶剂以得到粗产物。粗产物通过柱色谱使用中性氧化铝纯化且用己烷中的20％etoac(梯度系统)洗脱以得到所需产物(9s)-2-氯-3-碘-7，8，9，10-四氢-6h-5，9-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环辛四烯(1.65g，4.53mmol，47.5％产率)，其为淡黄色固体，lcms(m/z)：335.90[m+h]+.
合成(9s)-2-氯-3-甲基-7，8，9，10-四氢-6h-5，9-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环辛四烯
将(9s)-2-氯-3-碘-7，8，9，10-四氢-6h-5，9-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环辛四烯(1.65g，4.92mmol)、三甲基硼氧六环(1.639ml，4.92mmol)和碳酸钾(2.039g，14.75mmol)在1，4-二噁烷(15ml)和水(1.5ml)中的悬浮液搅拌且在室温用氩气脱气15mins，将四(三苯基膦)钯(0)(0.568g，0.492mmol)添加至反应混合物。然后将反应混合物在90℃搅拌48hr。将反应混合物冷却至室温，且通过硅藻土过滤且用etoac(30ml)洗涤。提取滤液且浓缩且用etoac(50ml)溶解。etoac层用水(15ml)洗涤，然后用盐水溶液(15ml)洗涤，且用na2so4干燥，过滤且浓缩以得到粗产物。粗产物通过柱色谱使用中性氧化铝纯化且用己烷中的20％etoac(梯度系统)洗脱以得到所需产物(9s)-2-氯-3-甲基-7，8，9，10-四氢-6h-5，9-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环辛四烯(0.800g，3.55mmol，72.1％产率)，其为淡黄色固体(tlc洗脱液∶己烷中的50％etoac：rf-0.3.；uv活性)。lcms(m/z)：224.90[m+h]+.
合成(9s)-3-甲基-2-(2-甲基吡啶-4-基)-7，8，9，10-四氢-6h-5，9-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环辛四烯
将(9s)-2-氯-3-甲基-7，8，9，10-四氢-6h-5，9-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环辛四烯(800mg，3.58mmol)、(2-甲基吡啶-4-基)硼酸(612mg，4.47mmol)和磷酸三钾(2277mg，10.73mmol)在1，4-二噁烷(20ml)和水(4ml)中的悬浮液搅拌且在室温用氩气脱气15mins。将pd2(dba)3(164mg，0.179mmol)和x-phos(170mg，0.358mmol)添加至反应混合物。然后将反应混合物在90℃搅拌16hr。该反应通过tlc监测。将反应混合物冷却至室温且通过硅藻土过滤且用etoac洗涤。提取滤液且浓缩且用etoac溶解。etoac层用水洗涤，然后用盐水溶液洗涤且用na2so4干燥，过滤且浓缩以得到粗产物。粗产物通过醚(20ml)洗涤液纯化以得到所需产物(9s)-3-甲基-2-(2-甲基吡啶-4-基)-7，8，9，10-四氢-6h-5，9-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环辛四烯(600mg，2.121mmol，59.3％产率)，其为灰白色固体，lcms(m/z)：281.16[m+h]+.
合成2，6-二氯-4-甲基-3-硝基吡啶
向冷却至0℃的2，6-二氯-4-甲基吡啶(5g，30.9mmol)在三氟乙酸酐(24.98ml，177mmol)中的悬浮液中滴加硝酸(2.90ml，64.8mmol)。所得溶液在室温搅拌18小时。将反应混合物缓慢添加至偏亚硫酸氢钠(5.87g，30.9mmol)在水(40ml)中的冷却的溶液中且在室温搅拌2小时。使用8nnaoh(25ml)溶液将反应混合物中和至ph7且用dcm(100ml)萃取两次。合并的有机层用盐水洗涤，用na2so4干燥，过滤且在减压下浓缩以得到2，6-二氯-4-甲基-3-硝基吡啶(6.2g，29.4mmol，95％产率)，其为灰白色固体，lcms(m/z)：206.98[m+h]+.
合成(s)-2-((6-氯-4-甲基-3-硝基吡啶-2-基)氨基)戊二酸二甲酯
步骤：在0℃在氮气下将(s)-2-氨基戊二酸二甲酯盐酸盐(147g，696mmol)添加至2，6-二氯-4-甲基-3-硝基吡啶(120g，580mmol)和碳酸氢钠(146g，1739mmol)在四氢呋喃(thf)(2.5l)中的悬浮液中。将反应混合物在65℃搅拌24小时。该反应通过tlc监测。将反应混合物过滤且用etoac洗涤(2x30ml)。将滤液真空浓缩以得到粗物质。该粗物质通过柱色谱使用硅胶(100-200目)纯化，且产物用石油醚中的10％etoac洗脱以得到(s)-2-((6-氯-4-甲基-3-硝基吡啶-2-基)氨基)戊二酸二甲酯(50g，135mmol，23.31％产率)，其为黄色固体，lcms(m/z)：345.1[m+h]+.
合成(s)-3-(6-氯-8-甲基-2-氧代-1，2，3，4-四氢吡啶并[2，3-b]吡嗪-3-基)丙酸甲酯
在室温将铁(40.4g，723mmol)添加至(s)-2-((6-氯-4-甲基-3-硝基吡啶-2-基)氨基)戊二酸二甲酯(50g，145mmol)在异丙醇(450ml)和水(90ml)中的搅拌溶液中。将反应混合物加热至40℃且添加乙酸(12.42ml，217mmol)。将反应混合物在80℃搅拌2小时。该反应通过tlc监测。将反应混合物冷却至室温，且用饱和nahco3碱化，通过硅藻土垫过滤且用dcm(3x50ml)洗涤。将滤液分离且用盐水溶液洗涤，用无水na2so4干燥，过滤且滤液在减压下浓缩以得到粗产物。粗产物通过用醚(20ml)洗涤纯化以得到所需产物(s)-3-(6-氯-8-甲基-2-氧代-1，2，3，4-四氢吡啶并[2，3-b]吡嗪-3-基)丙酸甲酯(29g，101mmol，69.8％产率)，其为灰白色固体，lcms(m/z)：284.06[m+h]+.
合成(s)-3-(6-氯-8-甲基-1，2，3，4-四氢吡啶并[2，3-b]吡嗪-3-基)丙-1-醇
步骤：在氮气下在控制气体逸出的速率下将2m氢化铝锂(256ml，511mmol)滴加至氯化铝(19.08g，143mmol)在四氢呋喃(thf)(290ml)中的搅拌溶液中。将反应混合物在室温搅拌30分钟。在-78℃在氮气下经30分钟将反应混合物(铝烷alh3)滴加至(s)-3-(6-氯-8-甲基-2-氧代-1，2，3，4-四氢吡啶并[2，3-b]吡嗪-3-基)丙酸甲酯(29g，102mmol)在四氢呋喃(thf)(450ml)中的搅拌溶液中。将反应温热至环境温度保持16小时。该反应通过tlc监测。反应混合物用10％naoh溶液在0℃淬灭且搅拌16hr且通过硅藻土垫过滤且用(300ml)dcm洗涤。dcm层用无水na2so4干燥，过滤且将滤液蒸发以得到粗产物。粗产物用醚(2x50ml)洗涤纯化，以得到(s)-3-(6-氯-8-甲基-1，2，3，4-四氢吡啶并[2，3-b]吡嗪-3-基)丙-1-醇(22g，69.8mmol，68.3％产率)，其为灰白色黄色固体，lcms(m/z)：242.0[m+h]+.
合成(9s)-2-氯-4-甲基-7，8，9，10-四氢-6h-5，9-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环辛四烯
在28℃向(s)-3-(6-氯-8-甲基-1，2，3，4-四氢吡啶并[2，3-b]吡嗪-3-基)丙-1-醇(21g，87mmol)的搅拌溶液中添加hbr(11.79ml，217mmol)且在100℃搅拌12hr。该反应通过tlc监测。将反应混合物冷却至28℃，且倒入冰水(50ml)中。水层用饱和naihco3溶液(120ml)中和。水层用etoac(2x50ml)萃取。etoac层用无水na2so4干燥，过滤且将滤液蒸发得到粗物质。该粗物质通过柱色谱使用中性氧化铝纯化且产物用石油醚中的50％etoac洗脱以得到化合物。该化合物用正戊烷洗涤以得到纯的(9s)-2-氯-4-甲基-7，8，9，10-四氢-6h-5，9-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环辛四烯(13g，57.8mmol，66.5％产率)，其为白色固体，lcms(m/z)：224.09[m+h]+.
合成(9s)-4-甲基-2-(2-甲基吡啶-4-基)-7，8，9，10-四氢-6h-5，9-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环辛四烯
向(9s)-2-氯-4-甲基-7，8，9，10-四氢-6h-5，9-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环辛四烯(500mg，2.235mmol)、(2-甲基吡啶-4-基)硼酸(459mg，3.35mmol)和k3po4(1423mg，6.71mmol)在1，4-二噁烷(40ml)、水(10ml)中的脱气溶液中添加x-phos(213mg，0.447mmol)、pd2(dba)3(205mg，0.224mmol)。将反应混合物在110℃搅拌12小时。将反应混合物冷却至28℃且在水(15ml)和etoac(2x15ml)之间分配。分离etoac层且用无水na2so4干燥，过滤。将滤液蒸发以得到粗物质。将粗物质通过用乙醚(15ml)洗涤而纯化以得到纯的(9s)-4-甲基-2-(2-甲基吡啶-4-基)-7，8，9，10-四氢-6h-5，9-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环辛四烯(550mg，1.920mmol，86％产率)，其为黄色固体，lcms(m/z)：281.05[m+h]+.
合成(9s)-3-氯-2-(2-甲基吡啶-4-基)-7，8，9，10-四氢-6h-5，9-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环辛四烯
经10分钟向在氮气下在0℃搅拌的(9s)-2-(2-甲基吡啶-4-基)-7，8，9，10-四氢-6h-5，9-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环辛四烯(2.0g，7.51mmol)在氯仿(20ml)中的溶液中分批添加ncs(1.504g，11.26mmol)。将反应混合物在0℃搅拌4小时。反应物质用冰冷却的水(20ml)淬灭且用dcm(3x30ml)萃取。将有机相分离且用水(2x20ml)和盐水溶液(2x20ml)洗涤，然后有机相用无水硫酸钠干燥，将其过滤且滤液在减压下蒸发以得到粗产物。粗产物(n35964-5-a1&n35964-7-a1)通过柱色谱使用中性氧化铝纯化且用己烷中的50％etoac洗脱(梯度系统)以得到所需产物(9s)-3-氯-2-(2-甲基吡啶-4-基)-7，8，9，10-四氢-6h-5，9-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环辛四烯(1.2g，3.60mmol，47.9％产率)，其为淡黄色固体，lcms(m/z)：300.17[m+h]+.
合成(9s)-3-氯-2-(3-(三氟甲基)苯基)-8，9-二氢-6h-5，9-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环辛四烯-10(7h)-甲酸苯基酯
向在氮气下在0℃搅拌的氯甲酸苯酯(0.195ml，1.555mmol)和吡啶(0.149ml，1.837mmol)在二氯甲烷(dcm)(35ml)中的溶液中添加(9s)-3-氯-2-(3-(三氟甲基)苯基)-7，8，9，10-四氢-6h-5，9-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环辛四烯(500mg，1.413mmol)。将反应混合物在室温搅拌2h。该反应通过tlc监测。反应混合物用饱和碳酸氢钠溶液淬灭且用dcm(200ml)萃取两次。合并的dcm层用水(80ml)洗涤且用na2so4干燥，过滤且在高真空浓缩以得到粗产物。将粗产物添加至硅胶(100-200目)柱且用30％hex/etoac洗脱，收集的级分在减压下蒸馏以得到化合物。该化合物用戊烷洗涤以得到纯的化合物(9s)-3-氯-2-(3-(三氟甲基)苯基)-8，9-二氢-6h-5，9-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环辛四烯-10(7h)-甲酸苯基酯(500mg，1.044mmol，73.9％产率)，其为白色固体，lcms(m/z)：474.30[m+h]+.
合成(9s)-3-氯-n-(6-(((s)-2，2-二甲基-1，3-二氧杂环戊烷-4-基)甲氧基)吡啶-2-基)-2-(3-(三氟甲基)苯基)-8，9-二氢-6h-5，9-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环辛四烯-10(7h)-甲酰胺
在28℃将三光气(377mg，1.272mmol)添加至(9s)-3-氯-2-(3-(三氟甲基)苯基)-7，8，9，10-四氢-6h-5，9-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环辛四烯(450mg，1.272mmol)和tea(0.886ml，6.36mmol)在四氢呋喃(thf)(50ml)中的搅拌溶液中。将反应混合物搅拌30分钟且添加(s)-6-((2，2-二甲基-1，3-二氧杂环戊烷-4-基)甲氧基)吡啶-2-胺(571mg，2.54mmol)。将反应混合物在70℃搅拌10h。将反应混合物冷却至室温且在水(15ml)和etoac(25ml)之间分配。分离etoac层且用无水na2so4干燥，过滤。将滤液蒸发以得到粗物质。将粗物质通过grace使用c-18reserval柱纯化，流动相a：0.1％甲酸水溶液；b：meoh，该产物用0.1％甲酸水溶液中的91％meoh洗脱。蒸发溶剂且用饱和nahco3碱化。水层用dcm萃取，dcm层用无水na2so4干燥，过滤，且滤液蒸发以得到(9s)-3-氯-n-(6-(((s)-2，2-二甲基-1，3-二氧杂环戊烷-4-基)甲氧基)吡啶-2-基)-2-(3-(三氟甲基)苯基)-8，9-二氢-6h-5，9-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环辛四烯-10(7h)-甲酰胺(270mg，0.430mmol，33.8％产率)，其为黄色固体，lcms(m/z)：606.11[m+h]+.
合成(9s)-3-氯-n-(6-(((s)-2，2-二甲基-1，3-二氧杂环戊烷-4-基)甲氧基)吡嗪-2-基)-2-(3-(三氟甲基)苯基)-8，9-二氢-6h-5，9-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环辛四烯-10(7h)-甲酰胺
在氮气下在室温将tea(1.064ml，7.63mmol)和三光气(377mg，1.272mmol)添加至(9s)-3-氯-2-(3-(三氟甲基)苯基)-7，8，9，10-四氢-6h-5，9-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环辛四烯(450mg，1.272mmol)在四氢呋喃(thf)(50ml)中的搅拌溶液中。将反应混合物在室温搅拌30分钟。添加(s)-64(2，2-二甲基-1，3-二氧杂环戊烷-4-基)甲氧基)吡嗪-2-胺(573mg，2.54mmol)且将反应混合物在65℃搅拌16hr。将反应混合物冷却至室温，在减压下完全蒸发溶剂且在水(10ml)和etoac(50ml)之间分配。将有机层分离，用无水na2so4干燥，过滤且将滤液蒸发以得到粗产物。粗产物通过柱色谱使用中性氧化铝纯化且用己烷中的50％etoac洗脱(梯度系统)以得到所需产物(9s)-3-氯-n-(6-(((s)-2，2-二甲基-1，3-二氧杂环戊烷-4-基)甲氧基)吡嗪-2-基)-2-(3-(三氟甲基)苯基)-8，9-二氢-6h-5，9-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环辛四烯-10(7h)-甲酰胺(200mg，0.271mmol，21.27％产率)，其为灰白色固体，lcms(m/z)：605.2[m+h]+.
合成(9s)-3-氯-n-(2-(((s)-2，2-二甲基-1，3-二氧杂环戊烷-4-基)甲氧基)嘧啶-5-基)-2-(3-(三氟甲基)苯基)-8，9-二氢-6h-5，9-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环辛四烯-10(7h)-甲酰胺
在氮气下在室温将tea(1.064ml，7.63mmol)和三光气(377mg，1.272mmol)添加至(9s)-3-氯-2-(3-(三氟甲基)苯基)-7，8，9，10-四氢-6h-5，9-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环辛四烯(450mg，1.272mmol)在四氢呋喃(thf)(45ml)中的搅拌溶液中。将反应混合物在室温搅拌30分钟。添加(s)-2-((2，2-二甲基-1，3-二氧杂环戊烷-4-基)甲氧基)嘧啶-5-胺(860mg，3.82mmol)且将反应混合物在65℃搅拌16hr。将反应混合物冷却至室温，在减压下完全蒸发溶剂且在水(30ml)和etoac(100ml)之间分配。将有机层分离，用无水na2so4干燥，过滤且将滤液蒸发以得到粗产物。粗产物通过柱色谱使用中性氧化铝纯化且用己烷中的20％etoac(梯度系统)洗脱以得到所需产物(9s)-3-氯-n-(2-(((s)-2，2-二甲基-1，3-二氧杂环戊烷-4-基)甲氧基)嘧啶-5-基)-2-(3-(三氟甲基)苯基)-8，9-二氢-6h-5，9-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环辛四烯-10(7h)-甲酰胺(200mg，0.317mmol，24.91％产率)，其为淡黄色固体，lcms(m/z)：605.19[m+h]+.
合成(9s)-3-氯-n-(6-(((s)-2，2-二甲基-1，3-二氧杂环戊烷-4-基)甲氧基)嘧啶-4-基)-2-(3-(三氟甲基)苯基)-8，9-二氢-6h-5，9-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环辛四烯-10(7h)-甲酰胺
向(9s)-3-氯-2-(3-(三氟甲基)苯基)-7，8，9，10-四氢-6h-5，9-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环辛四烯(0.4g，1.131mmol)和tea(0.788ml，5.65mmol)在四氢呋喃(thf)(50ml)中的溶液中添加三光气(0.336g，1.131mmol)且在氮气下在室温搅拌1h。向该反应混合物添加(s)-6-((2，2-二甲基-1，3-二氧杂环戊烷-4-基)甲氧基)嘧啶-4-胺(0.382g，1.696mmol)。将反应混合物在65℃搅拌16h且该反应进程通过tlc和lcms监测。将反应混合物冷却至室温，倒入水中(50ml)且用etoac(2x50ml)萃取。有机层用水和盐水洗涤。将有机层通过na2so4过滤且浓缩以得到粗化合物。该粗化合物通过中性氧化铝纯化且在己烷中的50％乙酸乙酯中洗脱以得到(9s)-3-氯-n-(6-(((s)-2，2-二甲基-1，3-二氧杂环戊烷-4-基)甲氧基)嘧啶-4-基)-2-(3-(三氟甲基)苯基)-8，9-二氢-6h-5，9-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环辛四烯-10(7h)-甲酰胺(0.3g，0.486mmol，43.0％产率)，其为灰白色固体，lcms(m/z)：605.55[m+h]+.
合成(9s)-3-氯-n-(2-(((r)-2，2-二甲基-1，3-二氧杂环戊烷-4-基)甲氧基)嘧啶-5-基)-2-(3-(三氟甲基)苯基)-8，9-二氢-6h-5，9-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环辛四烯-10(7h)-甲酰胺
在室温将三光气(417mg，1.405mmol)添加至(9s)-3-氯-2-(3-(三氟甲基)苯基)-6，7，8，9，10，10a-六氢-4ah-5，9-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环辛四烯(500mg，1.405mmol)和tea(1.175ml，8.43mmol)在四氢呋喃(thf)(50ml)中的搅拌溶液中。将反应混合物搅拌1h且添加(r)-2-((2，2-二甲基-1，3-二氧杂环戊烷-4-基)甲氧基)嘧啶-5-胺(791mg，3.51mmol)。将反应混合物在65℃搅拌16h。反应通过tlc监测。该反应混合物在减压下蒸发且用水(50ml)稀释且用乙酸乙酯(2x75ml)萃取，然后用盐水溶液(50ml)萃取，且分离层，用无水na2so4干燥，过滤且浓缩以得到粗产物。粗产物送至中性氧化铝柱通过己烷中的50-60％乙酸乙酯洗脱。收集的级分在减压下蒸发以得到纯的化合物(9s)-3-氯-n-(2-(((r)-2，2-二甲基-1，3-二氧杂环戊烷-4-基)甲氧基)嘧啶-5-基)-2-(3-(三氟甲基)苯基)-8，9-二氢-6h-5，9-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环辛四烯-10(7h)-甲酰胺(350mg，0.544mmol，38.7％产率)，其为灰白色固体，lcms(m/z)：605.23[m+h]+.
合成(9s)-3-氯-n-(6-(((r)-2，2-二甲基-1，3-二氧杂环戊烷-4-基)甲氧基)嘧啶-4-基)-2-(3-(三氟甲基)苯基)-8，9-二氢-6h-5，9-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环辛四烯-10(7h)-甲酰胺
在室温将三光气(252mg，0.848mmol)和三乙胺(1.182ml，8.48mmol)相继添加至(9s)-3-氯-2-(3-(三氟甲基)苯基)-7，8，9，10-四氢-6h-5，9-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环辛四烯(500mg，1.413mmol)在四氢呋喃(thf)(15ml)中的搅拌溶液中且搅拌30分钟。然后在室温将(r)-6-((2，2-二甲基-1，3-二氧杂环戊烷-4-基)甲氧基)嘧啶-4-胺(637mg，2.83mmol)添加至反应混合物且在80℃搅拌15.5h。将反应混合物冷却至室温，用水(40ml)稀释，用乙酸乙酯(2x60ml)萃取且用盐水溶液(30ml)洗涤。将有机层分离，用na2so4干燥，过滤且浓缩以得到粗化合物。该粗化合物通过柱色谱使用硅胶(100-200目)纯化，石油醚中的30％乙酸乙酯作为洗脱液以得到(9s)-3-氯-n-(6-(((r)-2，2-二甲基-1，3-二氧杂环戊烷-4-基)甲氧基)嘧啶-4-基)-2-(3-(三氟甲基)苯基)-8，9-二氢-6h-5，9-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环辛四烯-10(7h)-甲酰胺(200mg，0.324mmol，22.92％产率)，其为棕色胶状固体，lcms(m/z)：606.99[m+h]+.
合成(9s)-3-氯-n-(5-(((s)-2，2-二甲基-1，3-二氧杂环戊烷-4-基)甲氧基)嘧啶-2-基)-2-(3-(三氟甲基)苯基)-8，9-二氢-6h-5，9-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环辛四烯-10(7h)-甲酰胺
在氮气下在28℃将三光气(419mg，1.413mmol)添加至(9s)-3-氯-2-(3-(三氟甲基)苯基)-7，8，9，10-四氢-6h-5，9-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环辛四烯(500mg，1.413mmol)和tea(1.182ml，8.48mmol)在四氢呋喃(thf)(50ml)中的搅拌溶液中。将反应混合物在室温搅拌30分钟。且添加(s)-5-((2，2-二甲基-1，3-二氧杂环戊烷-4-基)甲氧基)嘧啶-2-胺(955mg，4.24mmol)。将反应混合物在65℃搅拌16hr。将反应混合物冷却至28℃，该反应混合物在水(20ml)和etoac(2x25ml)之间分配。将有机层分离且用无水na2so4干燥，过滤且将滤液蒸发以得到粗物质。将粗物质通过grace使用c-18reserval柱纯化，流动相a：0.1％甲酸水溶液；b：acn，该产物用0.1％甲酸水溶液中的50％acn洗脱。蒸发溶剂且用饱和nahco3碱化。将沉淀的固体过滤，且干燥以得到(9s)-3-氯-n-(5-(((s)-2，2-二甲基-1，3-二氧杂环戊烷-4-基)甲氧基)嘧啶-2-基)-2-(3-(三氟甲基)苯基)-8，9-二氢-6h-5，9-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环辛四烯-10(7h)-甲酰胺(120mg，0.191mmol，13.48％产率)，其为灰白色固体，lcms(m/z)：605.23[m+h]+.
合成(9s)-3-氯-n-(5-(((r)-2，2-二甲基-1，3-二氧杂环戊烷-4-基)甲氧基)嘧啶-2-基)-2-(3-(三氟甲基)苯基)-8，9-二氢-6h-5，9-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环辛四烯-10(7h)-甲酰胺
在氮气下将三光气(0.419g，1.413mmol)添加至(9s)-3-氯-2-(3-(三氟甲基)苯基)-7，8，9，10-四氢-6h-5，9-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环辛四烯(0.5g，1.413mmol)、tea(0.985ml，7.07mmol))在四氢呋喃(thf)(15ml)中的溶液中，在室温搅拌1h。向该反应混合物添加(r)-5-((2，2-二甲基-1，3-二氧杂环戊烷-4-基)甲氧基)嘧啶-2-胺(0.637g，2.83mmol)。将反应混合物在65℃搅拌16h且该反应进程通过tlc和lcms监测。将反应混合物冷却至室温，倒入冰水(50ml)中且用etoac萃取(2x100ml)。合并的有机层用水(50ml)、盐水溶液(50ml)洗涤，用na2so4干燥，过滤且蒸发以得到粗化合物。该粗化合物通过柱色谱使用中性氧化铝纯化且在己烷中的50％etoac洗脱以得到(9s)-3-氯-n-(5-(((r)-2，2-二甲基-1，3-二氧杂环戊烷-4-基)甲氧基)嘧啶-2-基)-2-(3-(三氟甲基)苯基)-8，9-二氢-6h-5，9-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环辛四烯-10(7h)-甲酰胺(0.52g，0.387mmol，27.4％产率)，其为淡黄色固体，lcms(m/z)：605.20[m+h]+.
合成(9s)-3-氯-n-(5-(((r)-2，2-二甲基-1，3-二氧杂环戊烷-4-基)甲氧基)吡嗪-2-基)-2-(3-(三氟甲基)苯基)-8，9-二氢-6h-5，9-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环辛四烯-10(7h)-甲酰胺
在25℃将(9s)-3-氯-2-(3-(三氟甲基)苯基)-7，8，9，10-四氢-6h-5，9-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环辛四烯(600mg，1.696mmol)和三光气(302mg，1.018mmol)相继添加至(r)-5-((2，2-二甲基-1，3-二氧杂环戊烷-4-基)甲氧基)吡嗪-2-胺(458mg，2.035mmol)和tea(1.182ml，8.48mmol)在四氢呋喃(thf)(20ml)中的溶液中，在70℃搅拌16h。反应进程通过lcms和tlc监测。将反应混合物冷却至28℃且在水(20ml)和etoac(2x50ml)之间分配。将有机层分离且用无水na2so4干燥，过滤且将滤液蒸发以得到粗物质。将样品装载至二氯甲烷中且在硅胶5g上使用0-15％甲醇-二氯甲烷经80min纯化。将合适的级分合并且真空蒸发以得到所需产物220mg，其为灰白色固体，lcms(m/z)：605.17[m+h]+.
合成(9s)-3-氯-n-(5-(((s)-2，2-二甲基-1，3-二氧杂环戊烷-4-基)甲氧基)吡嗪-2-基)-2-(3-(三氟甲基)苯基)-8，9-二氢-6h-5，9-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环辛四烯-10(7h)-甲酰胺
向在氮气下在室温搅拌的(s)-5-((2，2-二甲基-1，3-二氧杂环戊烷-4-基)甲氧基)吡嗪-2-胺(637mg，2.83mmol)在四氢呋喃(thf)(20ml)中的溶液中添加三光气(419mg，1.413mmol)和三乙胺(1.182ml，8.48mmol)，向其中添加(s)-5-((2，2-二甲基-1，3-二氧杂环戊烷-4-基)甲氧基)吡嗪-2-胺(637mg，2.83mmol)且将反应混合物在65℃搅拌16小时。反应混合物用冰水淬灭且用2x25ml乙酸乙酯萃取，合并的有机层用na2so4干燥且在减压下浓缩以得到粗化合物。粗产物通过快速柱色谱法纯化(100-200硅胶)，以dcm中的2％甲醇洗脱以得到纯的化合物(9s)-3-氯-n-(5-(((s)-2，2-二甲基-1，3-二氧杂环戊烷-4-基)甲氧基)吡嗪-2-基)-2-(3-(三氟甲基)苯基)-8，9-二氢-6h-5，9-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环辛四烯-10(7h)-甲酰胺(200mg，0.308mmol，21.82％产率)，其为浅棕色固体，lcms(m/z)：605.1[m+h]+.
合成(9s)-3-氯-n-(5-(((s)-2，2-二甲基-1，3-二氧杂环戊烷-4-基)甲氧基)吡啶-2-基)-2-(3-(三氟甲基)苯基)-8，9-二氢-6h-5，9-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环辛四烯-10(7h)-甲酰胺
将在氮气下在0℃搅拌的(9s)-3-氯-2-(3-(三氟甲基)苯基)-7，8，9，10-四氢-6h-5，9-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环辛四烯(1g，2.83mmol)溶于四氢呋喃(thf)(30ml)中的溶液中添加三光气(0.839g，2.83mmol)、dipea(2.468ml，14.13mmol)。将反应混合物在室温搅拌16h。向其中添加(s)-5-((2，2-二甲基-1，3-二氧杂环戊烷-4-基)甲氧基)吡啶-2-胺(1.268g，5.65mmol)且在封闭管中在80℃搅拌16h。将反应混合物恢复至室温且用200ml水淬灭且用3x200ml乙酸乙酯萃取，合并的有机层用na2so4干燥且在减压下浓缩以得到粗化合物。粗产物通过快速柱色谱法纯化以得到(9s)-3-氯-n-(5-(((s)-2，2-二甲基-1，3-二氧杂环戊烷-4-基)甲氧基)吡啶-2-基)-2-(3-(三氟甲基)苯基)-8，9-二氢-6h-5，9-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环辛四烯-10(7h)-甲酰胺(300mg，0.486mmol，17.18％产率)，其为灰白色固体。lcms(m/z)：604.20[m+h]+.
合成(9s)-3-氯-n-(5-(((r)-2，2-二甲基-1，3-二氧杂环戊烷-4-基)甲氧基)吡啶-2-基)-2-(3-(三氟甲基)苯基)-8，9-二氢-6h-5，9-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环辛四烯-10(7h)-甲酰胺
在室温将tea(1.970ml，14.13mmol)和三光气(0.839g，2.83mmol)相继添加至(9s)-3-氯-2-(3-(三氟甲基)苯基)-7，8，9，10-四氢-6h-5，9-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环辛四烯(1g，2.83mmol)在四氢呋喃(thf)(20ml)中的溶液中且在室温搅拌6h，添加(r)-5-((2，2-二甲基-1，3-二氧杂环戊烷-4-基)甲氧基)吡啶-2-胺(0.697g，3.11mmol)且在80℃加热10h。将反应混合物冷却至28℃且在水(25ml)和etoac(40mlx2)之间分配。分离有机层且用无水na2so4干燥，过滤且将滤液蒸发以得到粗产物，然后其通过柱色谱纯化(使用100-200硅胶，用己烷中的80％乙酸乙酯洗脱)以得到(9s)-3-氯-n-(5-(((r)-2，2-二甲基-1，3-二氧杂环戊烷-4-基)甲氧基)吡啶-2-基)-2-(3-(三氟甲基)苯基)-8，9-二氢-6h-5，9-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环辛四烯-10(7h)-甲酰胺(350mg，0.562mmol，19.88％产率)，其为灰白色固体，lcms(m/z)：604.24[m+h]+.
合成(9s)-3-氯-n-(4-(((s)-2，2-二甲基-1，3-二氧杂环戊烷-4-基)甲氧基)嘧啶-2-基)-2-(3-(三氟甲基)苯基)-8，9-二氢-6h-5，9-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环辛四烯-10(7h)-甲酰胺
在25℃将dipea(2.52ml，14.13mmol)和三光气(0.503g，1.696mmol)相继添加至(9s)-3-氯-2-(3-(三氟甲基)苯基)-7，8，9，10-四氢-6h-5，9-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环辛四烯(1.0g，2.83mmol)和(s)-4-((2，2-二甲基-1，3-二氧杂环戊烷-4-基)甲氧基)嘧啶-2-胺(0.828g，3.67mmol)在四氢呋喃(thf)(50ml)中的溶液中，在70℃搅拌16h。反应进程通过lcms和tlc监测。将反应混合物冷却至28℃且在水(100ml)和etoac(2x100ml)之间分配。将有机层分离且用无水na2so4干燥，过滤且将滤液蒸发以得到粗物质。将样品装载至二氯甲烷中且在硅胶(si)5g上使用0-15％甲醇-二氯甲烷经80min纯化。将合适的级分合并且真空蒸发以得到所需产物300mg，其为灰白色固体，lcms(m/z)：605.21[m+h]+.
合成(9s)-3-氯-n-(4-(((r)-2，2-二甲基-1，3-二氧杂环戊烷-4-基)甲氧基)嘧啶-2-基)-2-(3-(三氟甲基)苯基)-8，9-二氢-6h-5，9-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环辛四烯-10(7h)-甲酰胺
在室温将tea(1.970ml，14.13mmol)和三光气(0.839g，2.83mmol)相继添加至(9s)-3-氯-2-(3-(三氟甲基)苯基)-7，8，9，10-四氢-6h-5，9-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环辛四烯(1g，2.83mmol)在四氢呋喃(thf)(30ml)中的溶液中且在室温搅拌6h，且添加(r)-4-((2，2-二甲基-1，3-二氧杂环戊烷-4-基)甲氧基)嘧啶-2-胺(0.700g，3.11mmol)且在80℃加热10h。将反应混合物冷却至28℃且在水(25ml)和etoac(40mlx2)之间分配。分离有机层且用无水na2so4干燥，过滤且将滤液蒸发以得到(9s)-3-氯-n-(4-(((r)-2，2-二甲基-1，3-二氧杂环戊烷-4-基)甲氧基)嘧啶-2-基)-2-(3-(三氟甲基)苯基)-8，9-二氢-6h-5，9-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环辛四烯-10(7h)-甲酰胺(300mg，0.411mmol，14.52％产率)，其为胶状物，lcms(m/z)：605.26[m+h]+.
合成(9s)-3-氯-n-(5-(((r)-2，2-二甲基-1，3-二氧杂环戊烷-4-基)甲氧基)吡啶-3-基)-2-(3-(三氟甲基)苯基)-8，9-二氢-6h-5，9-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环辛四烯-10(7h)-甲酰胺
在25℃将dipea(329mg，2.54mmol)和三光气(252mg，0.848mmol)相继添加至(9s)-3-氯-2-(3-(三氟甲基)苯基)-7，8，9，10-四氢-6h-5，9-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环辛四烯(300mg，0.848mmol)在四氢呋喃(thf)(50ml)中的溶液中，搅拌3h且添加(r)-5-((2，2-二甲基-1，3-二氧杂环戊烷-4-基)甲氧基)吡啶-3-胺(380mg，1.696mmol)且在70℃搅拌16h。将反应混合物冷却至28℃且在水(20ml)和etoac(50ml)之间分配。将有机层分离且用无水na2so4干燥，过滤且将滤液蒸发以得到粗物质。粗物质通过柱色谱纯化(100-200目)用石油醚中的30％etoac洗脱以得到(9s)-3-氯-n-(5-(((r)-2，2-二甲基-1，3-二氧杂环戊烷-4-基)甲氧基)吡啶-3-基)-2-(3-(三氟甲基)苯基)-8，9-二氢-6h-5，9-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环辛四烯-10(7h)-甲酰胺(250mg，0.414mmol，48.8％产率)，其为淡黄色固体，lcms(m/z)：604.00[m+h]+.
合成(9s)-3-氯-n-(5-(((s)-2，2-二甲基-1，3-二氧杂环戊烷-4-基)甲氧基)吡啶-3-基)-2-(3-(三氟甲基)苯基)-8，9-二氢-6h-5，9-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环辛四烯-10(7h)-甲酰胺
在28℃将三光气(419mg，1.413mmol)添加至(9s)-3-氯-2-(3-(三氟甲基)苯基)-7，8，9，10-四氢-6h-5，9-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环辛四烯(500mg，1.413mmol)和tea(0.985ml，7.07mmol)在四氢呋喃(thf)(20ml)中的搅拌溶液中。将反应混合物搅拌30分钟且添加(s)-5-((2，2-二甲基-1，3-二氧杂环戊烷-4-基)甲氧基)吡啶-3-胺(634mg，2.83mmol)。将反应混合物在70℃搅拌15.5h。将反应混合物冷却至室温且在水(30ml)和etoac(100ml)之间分配。分离etoac层且用无水na2so4干燥，过滤。将滤液蒸发以得到粗物质。将样品装载至二氯甲烷中且在硅胶(si)5g上使用0-50％乙酸乙酯/石油醚经80mins纯化。将合适的级分合并且真空蒸发以得到所需产物250mg，其为灰白色固体。lcms(m/z)：604.22[m+h]+.
合成(9s)-3-氯-n-(6-(((r)-2，2-二甲基-1，3-二氧杂环戊烷-4-基)甲氧基)吡啶-3-基)-2-(3-(三氟甲基)苯基)-8，9-二氢-6h-5，9-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环辛四烯-10(7h)-甲酰胺
向在氮气下在室温搅拌的固体(9s)-3-氯-2-(3-(三氟甲基)苯基)-7，8，9，10-四氢-6h-5，9-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环辛四烯(600mg，1.696mmol)在四氢呋喃(thf)(20ml)中的溶液中添加tea(1.182ml，8.48mmol)和固体三光气(302mg，1.018mmol)，搅拌6hrs，且添加(r)-6-((2，2-二甲基-1，3-二氧杂环戊烷-4-基)甲氧基)吡啶-3-胺(571mg，2.54mmol)。将反应混合物在80℃搅拌16小时。反应混合物通过tlc监测。将有机相蒸发，添加水50ml且用乙酸乙酯萃取且用饱和盐水100ml洗涤用na2so4干燥且真空蒸发以得到粗产物。残余物通过combiflash(100％acn反相柱)纯化。收集级分且蒸发以得到纯的化合物(9s)-3-氯-n-(6-(((r)-2，2-二甲基-1，3-二氧杂环戊烷-4-基)甲氧基)吡啶-3-基)-2-(3-(三氟甲基)苯基)-8，9-二氢-6h-5，9-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环辛四烯-10(7h)-甲酰胺(180mg，0.273mmol，16.12％产率)，lcms(m/z)：604.09[m+h]+.
合成(9s)-3-氯-n-(6-(((s)-2，2-二甲基-1，3-二氧杂环戊烷-4-基)甲氧基)吡啶-3-基)-2-(3-(三氟甲基)苯基)-8，9-二氢-6h-5，9-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环辛四烯-10(7h)-甲酰胺
在25℃将dipea(877mg，6.78mmol)和三光气(671mg，2.261mmol)相继添加至(s)-6-((2，2-二甲基-1，3-二氧杂环戊烷-4-基)甲氧基)吡啶-3-胺(1014mg，4.52mmol)在四氢呋喃(thf)(25ml)中的溶液中，搅拌1h且添加(9s)-3-氯-2-(3-(三氟甲基)苯基)-7，8，9，10-四氢-6h-5，9-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环辛四烯(800mg，2.261mmol)且在70℃加热18小时。将反应混合物冷却至28℃且在水(20ml)和etoac(50ml)之间分配。将有机层分离且用无水na2so4干燥，过滤且将滤液蒸发以得到粗物质(tlc洗脱液：dcm中的5％甲醇，rf：0.3；uv活性)。该粗化合物通过柱色谱纯化(c-18：用1％甲酸水溶液中的80％acn洗脱)以得到460mg，其中lcms：73％。进一步通过快速柱色谱法纯化(硅胶：100-200目)，用己烷中的50％etoac洗脱以得到(9s)-3-氯-n-(6-(((s)-2，2-二甲基-1，3-二氧杂环戊烷-4-基)甲氧基)吡啶-3-基)-2-(3-(三氟甲基)苯基)-8，9-二氢-6h-5，9-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环辛四烯-10(7h)-甲酰胺(300mg，0.490mmol，21.65％产率)，其为褐色粘性物质，lcms(m/z)：604.0(m+h)+.
合成(9s)-3-氯-n-(4-(((s)-2，2-二甲基-1，3-二氧杂环戊烷-4-基)甲氧基)吡啶-2-基)-2-(3-(三氟甲基)苯基)-8，9-二氢-6h-5，9-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环辛四烯-10(7h)-甲酰胺
向在氮气下在室温搅拌的固体(9s)-3-氯-2-(3-(三氟甲基)苯基)-7，8，9，10-四氢-6h-5，9-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环辛四烯(600mg，1.696mmol)在四氢呋喃(thf)(20ml)中的溶液中添加tea(1.182ml，8.48mmol)和固体三光气(302mg，1.018mmol)，搅拌16hrs且添加(s)-4-((2，2-二甲基-1，3-二氧杂环戊烷-4-基)甲氧基)吡啶-2-胺(571mg，2.54mmol)。将反应混合物在65℃搅拌16小时。反应混合物通过tlc监测。将有机相蒸发，添加水50ml且用乙酸乙酯萃取且用饱和盐水100ml洗涤，用na2so4干燥且真空蒸发以得到粗产物。粗产物通过快速色谱法纯化，收集级分以得到化合物，其用乙醚和戊烷洗涤且过滤用戊烷洗涤以得到纯的化合物(9s)-3-氯-n-(4-(((s)-2，2-二甲基-1，3-二氧杂环戊烷-4-基)甲氧基)吡啶-2-基)-2-(3-(三氟甲基)苯基)-8，9-二氢-6h-5，9-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环辛四烯-10(7h)-甲酰胺(216mg，0.319mmol，18.79％产率)，lcms(m/z)：604.11[m+h]+.
合成(9s)-3-氯-n-(6-(((s)-2，2-二甲基-1，3-二氧杂环戊烷-4-基)甲氧基)吡啶-2-基)-2-(3-(三氟甲基)苯基)-8，9-二氢-6h-5，9-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环辛四烯-10(7h)-甲酰胺
步骤：在28℃将三光气(377mg，1.272mmol)添加至(9s)-3-氯-2-(3-(三氟甲基)苯基)-7，8，9，10-四氢-6h-5，9-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环辛四烯(450mg，1.272mmol)和tea(0.886ml，6.36mmol)在四氢呋喃(thf)(10.0ml)中的搅拌溶液中。将反应混合物搅拌30分钟且添加(s)-2-((2，2-二甲基-1，3-二氧杂环戊烷-4-基)甲氧基)吡啶-4-胺(571mg，2.54mmol)。将反应混合物在70℃搅拌10h。将反应混合物冷却至室温且在水(5ml)和etoac(15ml)之间分配。分离etoac层且用无水na2so4干燥，过滤。将滤液蒸发以得到粗物质。将粗物质通过色谱法纯化(grace使用c-18reserval柱，流动相a：0.1％甲酸水溶液；b：meoh，洗脱液a中的91％b)。合并的级分浓缩且用饱和nahco3碱化。水层用dcm萃取，dcm层用无水na2so4干燥，过滤且将滤液蒸发以得到(9s)-3-氯-n-(6-(((s)-2，2-二甲基-1，3-二氧杂环戊烷-4-基)甲氧基)吡啶-2-基)-2-(3-(三氟甲基)苯基)-8，9-二氢-6h-5，9-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环辛四烯-10(7h)-甲酰胺(300.0mg，0.489mmol，38.5％产率)，其为灰白色固体，lcms(m/z)：604.13[m+h]+.
合成(9s)-3-氯-n-(2-(((r)-2，2-二甲基-1，3-二氧杂环戊烷-4-基)甲氧基)吡啶-4-基)-2-(3-(三氟甲基)苯基)-8，9-二氢-6h-5，9-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环辛四烯-10(7h)-甲酰胺
向在氮气下在室温搅拌的固体(9s)-3-氯-2-(3-(三氟甲基)苯基)-7，8，9，10-四氢-6h-5，9-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环辛四烯(600mg，1.696mmol)在四氢呋喃(thf)(50ml)中的溶液中添加tea(0.236ml，1.696mmol)和固体三光气(503mg，1.696mmol)，搅拌30分钟且添加(r)-2-((2，2-二甲基-1，3-二氧杂环戊烷-4-基)甲氧基)吡啶-4-胺(380mg，1.696mmol)。将反应混合物在65℃搅拌16小时。反应混合物通过tlc监测。将有机相蒸发，添加水50ml且用乙酸乙酯萃取且用饱和盐水100ml洗涤，用na2so4干燥且真空蒸发以得到粗产物。将粗产物添加至硅胶柱且用dcm/meoh洗脱。收集级分以再次得到一些纯的化合物，通过combiflash纯化(100％acn；120g反相柱)。收集级分以得到纯的化合物(9s)-3-氯-n-(2-(((r)-2，2-二甲基-1，3-二氧杂环戊烷-4-基)甲氧基)吡啶-4-基)-2-(3-(三氟甲基)苯基)-8，9-二氢-6h-5，9-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环辛四烯-10(7h)-甲酰胺(450mg，0.732mmol，43.2％产率)，lcms(m/z)：604.02[m+h]+.
合成(9s)-3-氯-n-(2-(((r)-2，2-二甲基-1，3-二氧杂环戊烷-4-基)甲氧基)嘧啶-4-基)-2-(3-(三氟甲基)苯基)-8，9-二氢-6h-5，9-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环辛四烯-10(7h)-甲酰胺
在28℃将三光气(377mg，1.272mmol)添加至(9s)-3-氯-2-(3-(三氟甲基)苯基)-7，8，9，10-四氢-6h-5，9-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环辛四烯(450mg，1.272mmol)和tea(1.064ml，7.63mmol)在四氢呋喃(thf)(30ml)中的搅拌溶液中。将反应混合物搅拌2h且添加(r)-2-((2，2-二甲基-1，3-二氧杂环戊烷-4-基)甲氧基)嘧啶-4-胺(573mg，2.54mmol)。将反应混合物在65℃搅拌16hr。tlc洗脱液：100％乙酸乙酯，rf：0.3，uv活性。将反应混合物冷却至室温，在减压下完全蒸发溶剂且在水(10ml)和etoac(2x50ml)之间分配。将有机层分离，用无水na2so4干燥，过滤且将滤液蒸发以得到粗物质，其为棕色固体。粗物质用dcm稀释且用中性氧化铝吸收且用石油醚中的35-40％etoac洗脱。收集级分且浓缩以得到(9s)-3-氯-n-(2-(((r)-2，2-二甲基-1，3-二氧杂环戊烷-4-基)甲氧基)嘧啶-4-基)-2-(3-(三氟甲基)苯基)-8，9-二氢-6h-5，9-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环辛四烯-10(7h)-甲酰胺(220mg，0.244mmol，19.18％产率)，其为棕色固体，lcms(m/z)：605.00[m+h]+.
合成(9s)-3-氯-n-(2-(((s)-2，2-二甲基-1，3-二氧杂环戊烷-4-基)甲氧基)嘧啶-4-基)-2-(3-(三氟甲基)苯基)-8，9-二氢-6h-5，9-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环辛四烯-10(7h)-甲酰胺
将(9s)-3-氯-2-(3-(三氟甲基)苯基)-7，8，9，10-四氢-6h-5，9-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环辛四烯(400mg，1.131mmol)、三光气(336mg，1.131mmol)和三乙胺(0.788ml，5.65mmol)在四氢呋喃(thf)(20ml)中的溶液在氮气下在室温搅拌30min。向该反应混合物添加(s)-2-((2，2-二甲基-1，3-二氧杂环戊烷-4-基)甲氧基)嘧啶-4-胺(509mg，2.261mmol)。将反应混合物在70℃搅拌16h且该反应进程通过tlc监测。将反应混合物冷却至室温，倒入水(10ml)中且用etoac萃取(3x20ml)。合并的有机层用水(20ml)、盐水溶液(20ml)洗涤，用na2so4干燥，过滤且蒸发以得到粗化合物。tlc洗脱液：100％etoac/己烷，rf：0.3，uv活性。该粗化合物通过柱色谱使用中性氧化铝纯化且用石油醚中的20％etoac洗脱以得到纯的(9s)-3-氯-n-(2-(((s)-2，2-二甲基-1，3-二氧杂环戊烷-4-基)甲氧基)嘧啶-4-基)-2-(3-(三氟甲基)苯基)-8，9-二氢-6h-5，9-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环辛四烯-10(7h)-甲酰胺(300mg，0.395mmol，34.9％产率)，其为灰白色固体，lcms(m/z)：605.23[m+h]+.
合成(9s)-7，8，9，10-四氢-6h-5，9-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环辛四烯-2-甲酸甲酯
在高压釜中在室温向(9s)-2-氯-7，8，9，10-四氢-6h-5，9-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环辛四烯(50g，238mmol)在甲醇(500ml)中的悬浮液中添加tea(100ml，715mmol)和pdcl2(dppf)-ch2cl2加合物(9.74g，11.92mmol)。填充co(100psi)气体。将其脱气且再次添加co(300-350psi)气体。将反应混合物加热至130℃保持16小时。该反应进程通过tlc监测。tlc指示起始原料消耗。冷却该反应物质至室温，通过硅藻土过滤，用甲醇(500ml)洗涤该硅藻土床。将滤液浓缩以得到黑色粘稠化合物。向其中添加甲醇(200ml)且搅拌15分钟且过滤该固体且干燥以得到(9s)-7，8，9，10-四氢-6h-5，9-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环辛四烯-2-甲酸甲酯(30g，108mmol，45.1％产率))(n36489-30-a2)，其为灰白色固体，lcms(m/z)：234.07(m+h)+.
合成(9s)-7，8，9，10-四氢-6h-5，9-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环辛四烯-2-甲酸
向(9s)-7，8，9，10-四氢-6h-5，9-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环辛四烯-2-甲酸甲酯(3g，12.86mmol)在四氢呋喃(thf)(20ml)中的溶液添加水(20ml)。将反应混合物冷却至0℃且添加lioh(0.462g，19.29mmol)在水(10ml)中的溶液。将反应在28℃搅拌2h且该反应进程通过tlc监测。在减压下蒸发溶剂，用水稀释且在0℃用1nhcl酸化(ph；4-5)。将固体过滤，用水洗涤且真空干燥以得到(9s)-7，8，9，10-四氢-6h-5，9-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环辛四烯-2-甲酸(2.0g，8.54mmol，66.4％产率)，其为灰白色固体，lcms(m/z)：220.00[m+h]+.
合成(9s)-n-((r)-1，1，1-三氟丙-2-基)-7，8，9，10-四氢-6h-5，9-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环辛四烯-2-甲酰胺
向(9s)-7，8，9，10-四氢-6h-5，9-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环辛四烯-2-甲酸(2.0g，9.12mmol)、hatu(5.20g，13.68mmol)在n，n-二甲基甲酰胺(dmf)(20ml)中的搅拌溶液中添加dipea(6.37ml，36.5mmol)。在0℃将(r)-1，1，1-三氟丙-2-胺(1.032g，9.12mmol)添加至反应混合物。将反应混合物在28℃搅拌16hr且该反应进程通过tlc监测。反应混合物倒入水中(40ml)且用etoac萃取(3x30ml)。合并的有机层用盐水溶液洗涤用无水na2so4干燥，过滤且蒸发以得到粗化合物。该粗化合物通过柱色谱使用中性氧化铝纯化且洗脱液为石油醚中的30％etoac以得到(9s)-n-((r)-1，1，1-三氟丙-2-基)-7，8，9，10-四氢-6h-5，9-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环辛四烯-2-甲酰胺(1.8g，5.59mmol，61.3％产率)，其为灰白色固体，lcms(m/z)：314.85[m+h]+.
合成(9s)-n10-(5-(((s)-2，2-二甲基-1，3-二氧杂环戊烷-4-基)甲氧基)吡嗪-2-基)-n2-((r)-1，1，1-三氟丙-2-基)-8，9-二氢-6h-5，9-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环辛四烯-2，10(7h)-二甲酰胺
在氮气下在28℃将(9s)-n-((r)-1，1，1-三氟丙-2-基)-7，8，9，10-四氢-6h-5，9-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环辛四烯-2-甲酰胺(300mg，0.954mmol)、三光气(283mg，0.954mmol)和三乙胺(0.665ml，4.77mmol)在四氢呋喃(thf)(20ml)中的搅拌溶液中在室温搅拌30分钟。将(s)-5-((2，2-二甲基-1，3-二氧杂环戊烷-4-基)甲氧基)吡嗪-2-胺(322mg，1.432mmol)添加至反应混合物。将反应混合物在70℃搅拌16hr且该反应进程通过tlc监测。将反应混合物冷却至室温，在水(30ml)和etoac(3x30ml)之间分配。将有机层分离且用无水na2so4干燥，过滤且将滤液蒸发以得到粗物质。将粗物质通过grace使用c-18reserval柱纯化，流动相a：0.1％甲酸水溶液；b：meoh，该产物用65％meoh和0.1％甲酸水溶液洗脱。蒸发溶剂且用饱和nahco3碱化。将沉淀的固体过滤，且干燥以得到(9s)-n10-(5-(((s)-2，2-二甲基-1，3-二氧杂环戊烷-4-基)甲氧基)吡嗪-2-基)-n2-((r)-1，1，1-三氟丙-2-基)-8，9-二氢-6h-5，9-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环辛四烯-2，10(7h)-二甲酰胺(200mg，0.349mmol，36.6％产率)，其为灰白色固体，lcms(m/z)：566.35[m+h]+.
合成(9s)-10-((5-((s)-2，3-二羟基丙氧基)吡啶-2-基)氨基甲酰基)-7，8，9，10-四氢-6h-5，9-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环辛四烯-2-甲酸
在0℃向(9s)-10-((5-(((r)-2，2-二甲基-1，3-二氧杂环戊烷-4-基)甲氧基)吡啶-2-基)氨基甲酰基)-7，8，9，10-四氢-6h-5，9-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环辛四烯-2-甲酸甲酯(400mg，0.827mmol)在四氢呋喃(thf)(10ml)、水(10ml)中的搅拌溶液中添加lioh(29.7mg，1.241mmol)在水(1ml)中的溶液。将反应混合物在28℃搅拌2h且该反应进程通过tlc监测。该反应溶剂在减压下蒸发，用水稀释且在0℃且用1nhcl酸化(ph；2-3)，用dcm萃取(3x40ml)。合并的有机层用水、盐水溶液洗涤用na2so4干燥，过滤且蒸发以得到粗化合物。将粗物质通过grace使用c-18reserval柱纯化，流动相a：0.1％甲酸水溶液；b：meoh，该产物用50％meoh和0.1％甲酸水溶液洗脱。蒸发溶剂且用饱和nahco3碱化。将沉淀的固体过滤且干燥以得到(9s)-10-((5-((s)-2，3-二羟基丙氧基)吡啶-2-基)氨基甲酰基)-7，8，9，10-四氢-6h-5，9-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环辛四烯-2-甲酸(350mg，0.802mmol，97％产率)，其为灰白色固体，lcms(m/z)：430.46[m+h]+.
合成(9s)-n10-(4-(((s)-2，2-二甲基-1，3-二氧杂环戊烷-4-基)甲氧基)吡啶-2-基)-n2-((r)-1，1，1-三氟丙-2-基)-8，9-二氢-6h-5，9-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环辛四烯-2，10(7h)-二甲酰胺
向在氮气下在28℃搅拌的(9s)-10-((4-(((s)-2，2-二甲基-1，3-二氧杂环戊烷-4-基)甲氧基)吡啶-2-基)氨基甲酰基)-7，8，9，10-四氢-6h-5，9-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环辛四烯-2-甲酸(500mg，1.065mmol)和(r)-1，1，1-三氟丙-2-胺(241mg，2.130mmol)在四氢呋喃(thf)(10ml)中的溶液中添加hatu(486mg，1.278mmol)和dipea(0.372ml，2.130mmol)且将反应混合物在28℃搅拌16小时。反应混合物用冰水淬灭且用3x50ml乙酸乙酯萃取，合并的有机层用100ml盐水溶液洗涤且用na2so4干燥且在减压下浓缩以得到粗化合物。该粗化合物通过柱色谱纯化(100-200硅胶)使用石油醚中的80％etoac的梯度混合物作为洗脱液，以得到(9s)-n10-(4-(((s)-2，2-二甲基-1，3-二氧杂环戊烷-4-基)甲氧基)吡啶-2-基)-n2-((r)-1，1，1-三氟丙-2-基)-8，9-二氢-6h-5，9-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环辛四烯-2，10(7h)-二甲酰胺(200mg，0.341mmol，32.0％产率)，其为灰白色固体，lcms(m/z)：565.15[m+h]+.
合成(9s)-10-((4-(((s)-2，2-二甲基-1，3-二氧杂环戊烷-4-基)甲氧基)吡啶-2-基)氨基甲酰基)-7，8，9，10-四氢-6h-5，9-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环辛四烯-2-甲酸
向(9s)-10-((4-(((s)-2，2-二甲基-1，3-二氧杂环戊烷-4-基)甲氧基)吡啶-2-基)氨基甲酰基)-7，8，9，10-四氢-6h-5，9-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环辛四烯-2-甲酸甲酯(1.0g，2.068mmol)在四氢呋喃(thf)(35ml)和水(35.0ml)中的溶液中添加lioh(0.074g，3.10mmol)。将反应混合物在室温搅拌1小时。反应混合物在减压下浓缩以得到化合物(9s)-10-((4-(((s)-2，2-二甲基-1，3-二氧杂环戊烷-4-基)甲氧基)吡啶-2-基)氨基甲酰基)-7，8，9，10-四氢-6h-5，9-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环辛四烯-2-甲酸(900mg，1.876mmol，91％产率)，其为灰白色固体，lcms(m/z)：470.16(m+h)+.
合成(9s)-10-((4-(((s)-2，2-二甲基-1，3-二氧杂环戊烷-4-基)甲氧基)吡啶-2-基)氨基甲酰基)-7，8，9，10-四氢-6h-5，9-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环辛四烯-2-甲酸甲酯
向在氮气下在0℃搅拌的(9s)-7，8，9，10-四氢-6h-5，9-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环辛四烯-2-甲酸甲酯(1.0g，4.29mmol)、三光气(0.763g，2.57mmol)在四氢呋喃(thf)(30ml)中的溶液中添加dipea(3.74ml，21.43mmol)。然后将反应混合物在28℃搅拌30分钟且添加(s)-4-((2，2-二甲基-1，3-二氧杂环戊烷-4-基)甲氧基)吡啶-2-胺(1.442g，6.43mmol)，然后将反应混合物在80℃搅拌15.5hr。该反应通过lcms和tlc监测。反应混合物倒入冷却水(50ml)中且用乙酸乙酯萃取(2x100ml)。有机层用无水na2so4干燥且真空浓缩以得到粗产物，lcms(m/z)：484.14(m+h)+.
合成(9s)-10-((4-溴吡啶-2-基)氨基甲酰基)-7，8，9，10-四氢-6h-5，9-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环辛四烯-2-甲酸甲酯
向在氮气下在0℃搅拌的(9s)-7，8，9，10-四氢-6h-5，9-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环辛四烯-2-甲酸甲酯(1.0g，4.29mmol)、tea(3.59ml，25.7mmol)在四氢呋喃(thf)(30ml)中的溶液中添加三光气(1.272g，4.29mmol)。然后将反应混合物在30℃搅拌30分钟且添加4-溴吡啶-2-胺(2.225g，12.86mmol)，然后将反应混合物在80℃搅拌15.5hr。该反应通过lcms和tlc监测。反应混合物倒入冷却水(20ml)中且用乙酸乙酯萃取(2x50ml)。有机层用无水na2so4干燥且真空浓缩以得到粗产物，lcms(m/z)：431.9(m+h)+.
合成(9s)-10-(吡啶-2-基氨基甲酰基)-7，8，9，10-四氢-6h-5，9-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环辛四烯-2-甲酸甲酯；和(9s)-10-(吡啶-2-基氨基甲酰基)-7，8，9，10-四氢-6h-5，9-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环辛四烯-2-甲酸
向在氮气下在室温搅拌的nah(8.57g，214mmol)在四氢呋喃(thf)(100ml)中的悬浮液中添加固体(9s)-7，8，9，10-四氢-6h-5，9-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环辛四烯-2-甲酸甲酯(10g，42.9mmol)，在室温15分钟后添加3-(吡啶-2-基)-2h-吡啶并[1，2-a][1，3，5]三嗪-2，4(3h)-二酮(15.45g，64.3mmol)。所得反应混合物在80℃搅拌4小时。该反应进程通过tlc监测。tlc指示起始原料消耗。该反应物质冷却至室温，用乙酸乙酯(100ml)稀释，在冰冷的水(250ml)中淬灭。分离有机层且用na2so4干燥，过滤且浓缩以得到(9s)-10-(吡啶-2-基氨基甲酰基)-7，8，9，10-四氢-6h-5，9-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环辛四烯-2-甲酸甲酯(10g，11.35mmol，26.5％产率)，其为棕色固体化合物。lcms(m/z)：354.16(m+h)+。水层用2nhcl酸化至ph5至6。将水层真空浓缩以得到灰白色固体化合物。将其溶于dcm(1.0l)中的10％甲醇中且过滤无机物。将滤液浓缩且干燥以得到(9s)-10-(吡啶-2-基氨基甲酰基)-7，8，9，10-四氢-6h-5，9-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环辛四烯-2-甲酸(3g，5.46mmol，12.75％产率)，其为浅棕色固体。lcms(m/z)：340.0(m+h)+.
合成(9s)-3-氯-7，8，9，10-四氢-6h-5，9-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环辛四烯-2-甲酸甲酯
向在氮气下在0℃搅拌的(9s)-7，8，9，10-四氢-6h-5，9-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环辛四烯-2-甲酸甲酯(2.2g，9.43mmol)在氯仿(25ml)中的悬浮液中，在0℃经2分钟分批添加1-氯吡咯烷-2，5-二酮(1.637g，12.26mmol)。在0℃30分钟后将反应混合物在室温搅拌3小时。该反应进程通过tlc监测。tlc指示两个非极性点和少量未反应的sm。反应物质用50ml水稀释，用(2x100ml)dcm萃取。合并的有机层用na2so4干燥，过滤且浓缩以得到粗物质。粗物质通过combiflash使用硅胶柱(40g，50％etoac在己烷中)纯化。将含纯的化合物的级分合并且浓缩以得到所需化合物(9s)-3-氯-7，8，9，10-四氢-6h-5，9-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环辛四烯-2-甲酸甲酯(1g，3.29mmol，34.9％产率)，其为淡棕色粘性液体，lcms(m/z)：267.96(m+h)+.
合成(9s)-10-(异噁唑-3-基氨基甲酰基)-7，8，9，10-四氢-6h-5，9-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环辛四烯-2-甲酸甲酯
向在氮气下在0℃搅拌的(9s)-7，8，9，10-四氢-6h-5，9-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环辛四烯-2-甲酸甲酯(600mg，2.57mmol)、三光气(458mg，1.543mmol)在四氢呋喃(thf)(10ml)中的溶液中添加dipea(2.246ml，12.86mmol)。然后将反应混合物在30℃搅拌30分钟且添加异噁唑-3-胺(324mg，3.86mmol)，然后将反应混合物在80℃搅拌15.5hr。该反应通过lcms和tlc监测。反应混合物倒入冷却水(50ml)且用乙酸乙酯萃取(2x50ml)。有机层用无水na2so4干燥且真空浓缩以得到粗产物，lcms(m/z)：344.17(m+h)+.
合成(9s)-10-(异噁唑-3-基氨基甲酰基)-7，8，9，10-四氢-6h-5，9-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环辛四烯-2-甲酸
向(9s)-10-(异噁唑-3-基氨基甲酰基)-7，8，9，10-四氢-6h-5，9-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环辛四烯-2-甲酸甲酯(0.5g，1.456mmol)在四氢呋喃(thf)(25ml)和水(25.00ml)中的溶液中添加lioh(0.052g，2.184mmol)。将反应混合物在室温搅拌1小时。反应混合物在减压下浓缩以去除所有thf，然后用2n.hcl酸化至ph＝4。然后沉淀的固体过滤且干燥以得到化合物(9s)-10-(异噁唑-3-基氨基甲酰基)-7，8，9，10-四氢-6h-5，9-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环辛四烯-2-甲酸(450mg，1.346mmol，92％产率)，其为灰白色固体，lcms(m/z)：330.05(m+h)+.
合成(9s)-10-((6-甲基-1h-吡唑并[3，4-b]吡啶-3-基)氨基甲酰基)-7，8，9，10-四氢-6h-5，9-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环辛四烯-2-甲酸甲酯
向在氮气下在0℃搅拌的(9s)-7，8，9，10-四氢-6h-5，9-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环辛四烯-2-甲酸甲酯(2g，8.57mmol)的溶液中添加三光气(2.54g，8.57mmol)和tea(7.17ml，51.4mmol)。然后将反应混合物在30℃搅拌30分钟且添加6-甲基-1h-吡唑并[3，4-b]吡啶-3-胺(507mg，3.42mmol)，然后将反应混合物在90℃搅拌16小时。该反应通过lcms和tlc监测。反应混合物倒入冷却水(30ml)中且用乙酸乙酯萃取(2x50ml)。有机层用无水na2so4干燥且真空浓缩以得到粗化合物。该粗化合物通过柱色谱纯化(100-200硅胶)，使用在dcm中的10％甲醇的梯度混合物作为洗脱液以得到化合物(9s)-10-((6-甲基-1h-吡唑并[3，4-b]吡啶-3-基)氨基甲酰基)-7，8，9，10-四氢-6h-5，9-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环辛四烯-2-甲酸甲酯(1.5g，2.338mmol，27.3％产率)，其为浅棕色固体，lcms(m/z)：408.00(m+h)+.
合成(9s)-10-((6-甲基-1h-吡唑并[3，4-b]吡啶-3-基)氨基甲酰基)-7，8，9，10-四氢-6h-5，9-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环辛四烯-2-甲酸
向(9s)-10-((6-甲基-1h-吡唑并[3，4-b]吡啶-3-基)氨基甲酰基)-7，8，9，10-四氢-6h-5，9-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环辛四烯-2-甲酸甲酯(1.5g，3.68mmol)在四氢呋喃(thf)(10ml)和水(10.00ml)中的溶液中添加lioh(0.132g，5.52mmol)。将反应混合物在室温搅拌2小时。反应混合物在减压下浓缩以得到以下化合物的li盐，(9s)-10-((6-甲基-1h-吡唑并[3，4-b]吡啶-3-基)氨基甲酰基)-7，8，9，10-四氢-6h-5，9-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环辛四烯-2-甲酸(1.2g，3.03mmol，82％产率)，其为淡棕色固体，lcms(m/z)：394.1(m+h)+.
合成(9s)-3-氯-10-(吡啶-2-基氨基甲酰基)-7，8，9，10-四氢-6h-5，9-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环辛四烯-2-甲酸
在室温向nah(0.448g，18.68mmol)在四氢呋喃(thf)(80ml)中的搅拌溶液中经1分钟分批添加(9s)-3-氯-7，8，9，10-四氢-6h-5，9-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环辛四烯-2-甲酸甲酯(1g，3.74mmol)，在室温15分钟后添加3-(吡啶-2-基)-2h-吡啶并[1，2-a][1，3，5]三嗪-2，4(3h)-二酮(1.077g，4.48mmol)。所得反应混合物在室温搅拌1小时。然后在70℃保持3hr。该反应进程通过tlc监测。tlc指示非极性点、极性点的形成和sm的完全消耗。反应物质用100ml冰冷却的水稀释，水层用etoac(100ml)洗涤，水层的ph用1nhcl调节至4，水层在减压下浓缩以得到粗产物，所得的粗固体用dcm中的10％meoh萃取且浓缩有机层以得到(9s)-3-氯-10-(吡啶-2-基氨基甲酰基)-7，8，9，10-四氢-6h-5，9-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环辛四烯-2-甲酸(500mg，0.744mmol，19.91％产率)，lcms(m/z)：374.20(m+h)+.
合成(9s)-3-氯-10-(吡啶-2-基氨基甲酰基)-7，8，9，10-四氢-6h-5，9-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环辛四烯-2-甲酸
在室温向nah(224mg，5.60mmol)在四氢呋喃(thf)(30ml)中的搅拌溶液中经1分钟分批添加(9s)-3-氯-7，8，9，10-四氢-6h-5，9-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环辛四烯-2-甲酸甲酯(500mg，1.868mmol)，在室温15分钟后添加3-(吡啶-2-基)-2h-吡啶并[1，2-a][1，3，5]三嗪-2，4(3h)-二酮(538mg，2.241mmol)。所得反应混合物在室温搅拌1小时。然后在70℃保持3hr。该反应进程通过tlc监测。tlc指示非极性点、极性点的形成和sm的完全消耗。反应物质用100ml冰冷却的水稀释，水层用etoac(100ml)洗涤，水层的ph用1nhcl调节至4，水层在减压下浓缩以得到粗产物，所得的粗固体用dcm中的10％meoh萃取且浓缩有机层以得到(9s)-3-氯-10-(吡啶-2-基氨基甲酰基)-7，8，9，10-四氢-6h-5，9-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环辛四烯-2-甲酸(300mg，0.525mmol，28.1％产率)n35384-85-a1，棕色，lcms(m/z)：374.08(m+h)+.
合成(9s)-3-氯-7，8，9，10-四氢-6h-5，9-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环辛四烯-2-甲酸
在室温向(9s)-3-氯-7，8，9，10-四氢-6h-5，9-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环辛四烯-2-甲酸甲酯(2.0g，7.47mmol)在四氢呋喃(thf)(35ml)和水(35.0ml)中的溶液中添加lioh(0.268g，11.21mmol)且搅拌16hrs(tlc洗脱液：乙酸乙酯中的10％meoh，rf：0.2；uv活性)。反应混合物用水稀释(100ml)，用乙酸乙酯萃取(2x100ml)以去除所有杂质。水层用hcl水溶液(5ml)酸化且在减压下浓缩以得到(9s)-3-氯-7，8，9，10-四氢-6h-5，9-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环辛四烯-2-甲酸(1.02g，3.32mmol，44.4％产率)，其为浅棕色固体。lcms(m/z)：253.91[m+h]+.
合成(9s)-3-氯-n-((r)-1，1，1-三氟丙-2-基)-7，8，9，10-四氢-6h-5，9-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环辛四烯-2-甲酰胺
在氮气下在室温向(9s)-3-氯-7，8，9，10-四氢-6h-5，9-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环辛四烯-2-甲酸(1.02g，4.02mmol)在n，n-二甲基甲酰胺(dmf)(5ml)中的溶液中，添加hatu(1.835g，4.82mmol)、dipea(1.404ml，8.04mmol)和(r)-1，1，1-三氟丙-2-胺(0.682g，6.03mmol)且在室温搅拌16h。反应混合物用冰水稀释且用2x100ml乙酸乙酯萃取。合并的有机层用盐水洗涤，用na2so4干燥且在减压下浓缩以得到粗化合物。粗产物通过快速柱色谱法纯化(100-200硅胶，用5％ch2cl2/meoh洗脱)以得到(9s)-3-氯-n-((r)-1，1，1-三氟丙-2-基)-7，8，9，10-四氢-6h-5，9-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环辛四烯-2-甲酰胺(800mg，1.991mmol，49.5％产率)，其为灰白色固体，lcms(m/z)：348.96[m+h]+.
合成(9s)-10-(吡啶-2-基氨基甲酰基)-7，8，9，10-四氢-6h-5，9-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环辛四烯-2-甲酸
在室温向(9s)-10-(吡啶-2-基氨基甲酰基)-7，8，9，10-四氢-6h-5，9-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环辛四烯-2-甲酸甲酯(10g，28.3mmol)在四氢呋喃(thf)(100ml)、水(100ml)中的溶液中添加氢氧化锂(1.355g，56.6mmol)。将反应混合物在室温搅拌3小时。该反应进程通过tlc监测。tlc指示起始原料消耗。反应物质用乙酸乙酯(100ml)稀释，分离有机层。水层用1nhcl酸化至ph-5-6。将水层浓缩以得到浅棕色固体。向其中添加dcm中的10％甲醇(500ml)且搅拌15分钟且过滤无机物。将滤液浓缩以得到(9s)-10-(吡啶-2-基氨基甲酰基)-7，8，9，10-四氢-6h-5，9-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环辛四烯-2-甲酸(6g，17.47mmol，61.7％产率)，其为浅棕色固体。lcms(m/z)：340.15(m+h)+.
合成(9s)-10-((4-溴吡啶-2-基)氨基甲酰基)-7，8，9，10-四氢-6h-5，9-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环辛四烯-2-甲酸
向(9s)-10-((4-溴吡啶-2-基)氨基甲酰基)-7，8，9，10-四氢-6h-5，9-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环辛四烯-2-甲酸甲酯(0.800g，1.851mmol)在四氢呋喃(thf)(35ml)和水(35.0ml)中的溶液中添加lioh(0.066g，2.78mmol)。将反应混合物在室温搅拌1小时。反应混合物在减压下浓缩以得到产物的li盐。然后该盐用水(20ml)稀释用乙酸乙酯(2x50ml)彻底清洗，然后水层用hcl水溶液酸化以得到(9s)-10-((4-溴吡啶-2-基)氨基甲酰基)-7，8，9，10-四氢-6h-5，9-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环辛四烯-2-甲酸(600mg，1.357mmol，73.3％产率)，其为灰白色固体，lcms(m/z)：419.90[m+h]+.
合成(9s)-n10-(4-溴吡啶-2-基)-n2-((r)-1，1，1-三氟丙-2-基)-8，9-二氢-6h-5，9-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环辛四烯-2，10(7h)-二甲酰胺
向在氮气下在28℃搅拌的(9s)-10-((4-溴吡啶-2-基)氨基甲酰基)-7，8，9，10-四氢-6h-5，9-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环辛四烯-2-甲酸(480mg，1.148mmol)和(r)-1，1，1-三氟丙-2-胺(195mg，1.721mmol)在n，n-二甲基甲酰胺(dmf)(15ml)中的溶液中添加hatu(524mg，1.377mmol)和dipea(0.401ml，2.295mmol)且将反应混合物在28℃搅拌16小时。反应混合物用冰水淬灭且用3x20ml乙酸乙酯萃取，合并的有机层用20ml盐水溶液洗涤且用na2so4干燥且在减压下浓缩以得到粗化合物。粗化合物通过柱色谱使用100-200硅胶纯化且使用洗脱液80-100％的乙酸乙酯/己烷。将收集的级分蒸馏以得到(9s)-n10-(4-溴吡啶-2-基)-n2-((r)-1，1，1-三氟丙-2-基)-8，9-二氢-6h-5，9-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环辛四烯-2，10(7h)-二甲酰胺(500mg，0.960mmol，84％产率)，其为灰白色固体，lcms(m/z)：565.9[m+h]+.
合成(9s)-n2-(2，2-二氟丙基)-n10-(4-(((s)-2，2-二甲基-1，3-二氧杂环戊烷-4-基)甲氧基)吡啶-2-基)-8，9-二氢-6h-5，9-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环辛四烯-2，10(7h)-二甲酰胺
向在氮气下在20℃搅拌的(9s)-10-((4-(((s)-2，2-二甲基-1，3-二氧杂环戊烷-4-基)甲氧基)吡啶-2-基)氨基甲酰基)-7，8，9，10-四氢-6h-5，9-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环辛四烯-2-甲酸(500mg，1.065mmol)在四氢呋喃(thf)(10ml)中的溶液中添加hatu(486mg，1.278mmol)和dipea(0.372ml，2.130mmol)且将反应混合物在28℃搅拌16小时。反应混合物用冰水稀释且用3x50ml乙酸乙酯萃取，合并的有机层用100ml盐水溶液洗涤且用na2so4干燥且在减压下浓缩以得到粗化合物。粗化合物通过柱色谱使用100-200目硅胶纯化且用80％至纯的乙酸乙酯洗脱，lcms(m/z)：547.35[m+h]+.
合成：
(9s)-n2-(2，2-二氟环丙基)-n10-(4-(((s)-2，2-二甲基-1，3-二氧杂环戊烷-4-基)甲氧基)吡啶-2-基)-8，9-二氢-6h-5，9-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环辛四烯-2，10(7h)-二甲酰胺(峰-1)；和
(9s)-n2-(2，2-二氟环丙基)-n10-(4-(((s)-2，2-二甲基-1，3-二氧杂环戊烷-4-基)甲氧基)吡啶-2-基)-8，9-二氢-6h-5，9-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环辛四烯-2，10(7h)-二甲酰胺(峰-2)
向(9s)-10-((4-(((s)-2，2-二甲基-1，3-二氧杂环戊烷-4-基)甲氧基)吡啶-2-基)氨基甲酰基)-7，8，9，10-四氢-6h-5，9-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环辛四烯-2-甲酸(2.5g，5.32mmol)在acn(10ml)中的搅拌溶液中添加hatu(4.05g，10.65mmol)和dmap(1.301g，10.65mmol)。反应混合物在封闭管中在室温搅拌15min，然后添加2，2-二氟环丙烷胺盐酸盐(1.380g，10.65mmol)，反应混合物在90℃搅拌16小时。该反应进程通过tlc监测。将反应混合物冷却至室温，水(50ml)且用乙酸乙酯萃取(2x50ml)，分离有机层，用na2so4干燥，在减压下浓缩以得到粗物质。所得粗物质通过柱使用硅胶纯化(100-200目/石油醚中的1-80％etoh作为洗脱液)，收集的级分在压力下浓缩以得到纯的化合物700mg。所得纯的化合物通过sfc纯化。
sfc纯化后得到(9s)-n2-(2，2-二氟环丙基)-n10-(4-(((s)-2，2-二甲基-1，3-二氧杂环戊烷-4-基)甲氧基)吡啶-2-基)-8，9-二氢-6h-5，9-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环辛四烯-2，10(7h)-二甲酰胺(峰-1)(230mg，0.414mmol，7.77％产率)和(9s)-n2-(2，2-二氟环丙基)-n10-(4-(((s)-2，2-二甲基-1，3-二氧杂环戊烷-4-基)甲氧基)吡啶-2-基)-8，9-二氢-6h-5，9-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环辛四烯-2，10(7h)-二甲酰胺(峰-2)(250mg，0.454mmol，8.53％产率)。
溶解：甲醇
总进样数：70
仪器详情：make/model：tharsfc-200-new-2
lcms(m/z)：545.02[m+h]+.(峰1)
lcms(m/z)：545.89[m+h]+.(峰2)
合成(9s)-n10-(5-(((r)-2，2-二甲基-1，3-二氧杂环戊烷-4-基)甲氧基)吡啶-2-基)-4-甲基-n2-((r)-1，1，1-三氟丙-2-基)-8，9-二氢-6h-5，9-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环辛四烯-2，10(7h)-二甲酰胺
在0℃向(9s)-10-((5-(((r)-2，2-二甲基-1，3-二氧杂环戊烷-4-基)甲氧基)吡啶-2-基)氨基甲酰基)-4-甲基-7，8，9，10-四氢-6h-5，9-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环辛四烯-2-甲酸(400mg，0.827mmol)在n，n-二甲基甲酰胺(dmf)(8ml)中的搅拌溶液中添加dipea(0.722ml，4.14mmol)、hatu(472mg，1.241mmol)和(r)-1，1，1-三氟丙-2-胺(140mg，1.241mmol)。将反应混合物在27℃搅拌3小时。反应混合物用冷却水(100ml)稀释且搅拌15min。将沉淀的固体通过布氏漏斗过滤，用水洗涤且在减压下干燥以得到粗化合物。该粗化合物通过柱色谱纯化(中性氧化铝，洗脱液：在己烷中的65-70％乙酸乙酯)。收集的级分减压浓缩以得到所需产物(9s)-n10-(5-(((r)-2，2-二甲基-1，3-二氧杂环戊烷-4-基)甲氧基)吡啶-2-基)-4-甲基-n2-((r)-1，1，1-三氟丙-2-基)-8，9-二氢-6h-5，9-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环辛四烯-2，10(7h)-二甲酰胺(350mg，0.580mmol，70.1％产率)，其为棕色固体，lcms(m/z)：579.22[m+h]+.
合成(9s)-10-((5-(((r)-2，2-二甲基-1，3-二氧杂环戊烷-4-基)甲氧基)吡啶-2-基)氨基甲酰基)-4-甲基-7，8，9，10-四氢-6h-5，9-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环辛四烯-2-甲酸
在0℃向(9s)-10-((5-(((r)-2，2-二甲基-1，3-二氧杂环戊烷-4-基)甲氧基)吡啶-2-基)氨基甲酰基)-4-甲基-7，8，9，10-四氢-6h-5，9-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环辛四烯-2-甲酸甲酯(450mg，0.904mmol)在四氢呋喃(thf)(20ml)和水(3.0ml)中的搅拌溶液中添加lioh.h2o(21.66mg，0.904mmol)。将反应混合物在27℃搅拌6小时。反应混合物溶剂在减压下完全蒸发且在0℃用柠檬酸溶液酸化。水层用二氯甲烷萃取(2x50ml)。将有机层分离，用无水na2so4干燥，过滤且将滤液蒸发以得到粗物质，其为棕色固体。该粗化合物用乙醚和戊烷研磨，lcms(m/z)：484.28[m+h]+.
合成(9s)-10-((5-(((r)-2，2-二甲基-1，3-二氧杂环戊烷-4-基)甲氧基)吡啶-2-基)氨基甲酰基)-4-甲基-7，8，9，10-四氢-6h-5，9-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环辛四烯-2-甲酸甲酯
在氮气下在28℃向(9s)-4-甲基-7，8，9，10-四氢-6h-5，9-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环辛四烯-2-甲酸甲酯(600mg，2.426mmol)在四氢呋喃(thf)(45ml)中的搅拌溶液中添加tea(2.029ml，14.56mmol)和三光气(720mg，2.426mmol)。将反应混合物在室温搅拌30分钟，然后将(r)-5-((2，2-二甲基-1，3-二氧杂环戊烷-4-基)甲氧基)吡啶-2-胺(1088mg，4.85mmol)添加至反应混合物。将反应混合物在65℃搅拌16hr。将反应混合物冷却至室温，在减压下完全蒸发溶剂且在水(30ml)和etoac(2x40ml)之间分配。将有机层分离，用无水na2so4干燥，过滤且将滤液蒸发以得到粗物质，其为棕色固体。tlc洗脱液：100％etoac/己烷，rf：0.3，uv活性。该粗化合物通过grace使用c-18reserval柱纯化，流动相a：0.1％甲酸水溶液；b：acn，该产物用70-75％acn/0.1％甲酸水溶液洗脱。蒸发溶剂且用饱和nahco3碱化。水层用dcm萃取。dcm层用无水na2so4干燥，过滤且蒸发以得到纯的(9s)-10-((5-(((r)-2，2-二甲基-1，3-二氧杂环戊烷-4-基)甲氧基)吡啶-2-基)氨基甲酰基)-4-甲基-7，8，9，10-四氢-6h-5，9-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环辛四烯-2-甲酸甲酯(500mg，0.936mmol，38.6％产率)，其为灰白色固体，lcms(m/z)：498.48[m+h]+.
合成(9s)-4-甲基-7，8，9，10-四氢-6h-5，9-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环辛四烯-2-甲酸甲酯
将(9s)-2-氯-4-甲基-7，8，9，10-四氢-6h-5，9-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环辛四烯(6g，26.8mmol)在甲醇(100ml)中的搅拌溶液脱气30分钟，然后添加三乙胺(18.69ml，134mmol)和pdcl2(dppf)-ch2cl2加合物(1.095g，1.341mmol)且填充300psico气体。在钢罐中将反应混合物在115℃搅拌16h。该反应通过tlc监测。反应混合物在减压下浓缩以得到粗化合物。将粗产物溶于dcm(50ml)，且用水洗涤(10ml)。dcm层用无水na28o4干燥，过滤，且滤液蒸发以得到(9s)-4-甲基-7，8，9，10-四氢-6h-5，9-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环辛四烯-2-甲酸甲酯(7g，23.76mmol，89％产率)，其为棕色固体，lcms(m/z)：248.11[m+h]+.
合成(9s)-n10-(4-(((s)-2，2-二甲基-1，3-二氧杂环戊烷-4-基)甲氧基)吡啶-2-基)-4-甲基-n2-((r)-1，1，1-三氟丙-2-基)-8，9-二氢-6h-5，9-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环辛四烯-2，10(7h)-二甲酰胺
在0℃向(9s)-10-((4-(((s)-2，2-二甲基-1，3-二氧杂环戊烷-4-基)甲氧基)吡啶-2-基)氨基甲酰基)-4-甲基-7，8，9，10-四氢-6h-5，9-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环辛四烯-2-甲酸(450mg，0.931mmol)在n，n-二甲基甲酰胺(dmf)(8ml)中的搅拌溶液中添加dipea(0.813ml，4.65mmol)、hatu(531mg，1.396mmol)和(r)-1，1，1-三氟丙-2-胺(158mg，1.396mmol)。将反应混合物在27℃搅拌3小时。反应混合物用冷却水(100ml)稀释且搅拌15分钟。将沉淀的固体通过布氏漏斗过滤，用水洗涤且在减压下干燥以得到粗化合物。该化合物用醚研磨以得到(9s)-n10-(4-(((s)-2，2-二甲基-1，3-二氧杂环戊烷-4-基)甲氧基)吡啶-2-基)-4-甲基-n2-((r)-1，1，1-三氟丙-2-基)-8，9-二氢-6h-5，9-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环辛四烯-2，10(7h)-二甲酰胺(330mg，0.481mmol，51.7％产率)，其为灰白色固体，lcms(m/z)：579.32[m+h]+.
合成(9s)-10-((4-(((s)-2，2-二甲基-1，3-二氧杂环戊烷-4-基)甲氧基)吡啶-2-基)氨基甲酰基)-4-甲基-7，8，9，10-四氢-6h-5，9-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环辛四烯-2-甲酸
在0℃向(9s)-10-((4-(((s)-2，2-二甲基-1，3-二氧杂环戊烷-4-基)甲氧基)吡啶-2-基)氨基甲酰基)-4-甲基-7，8，9，10-四氢-6h-5，9-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环辛四烯-2-甲酸甲酯(550mg，1.105mmol)在四氢呋喃(thf)(20.0ml)和水(5.00ml)中的搅拌溶液中添加lioh.h2o(39.7mg，1.658mmol)。将反应混合物在27℃搅拌6小时。反应混合物溶剂在减压下完全蒸发且用柠檬酸溶液在0℃酸化。水层用二氯甲烷萃取(2x50ml)。将有机层分离，用无水na2so4干燥，过滤且将滤液蒸发以得到粗物质。该粗化合物用乙醚和戊烷研磨以得到(9s)-10-((4-(((s)-2，2-二甲基-1，3-二氧杂环戊烷-4-基)甲氧基)吡啶-2-基)氨基甲酰基)-4-甲基-7，8，9，10-四氢-6h-5，9-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环辛四烯-2-甲酸(450mg，0.892mmol，81％产率)，其为灰白色固体，lcms(m/z)：484.30[m+h]+.
合成(9s)-10-((4-(((s)-2，2-二甲基-1，3-二氧杂环戊烷-4-基)甲氧基)吡啶-2-基)氨基甲酰基)-4-甲基-7，8，9，10-四氢-6h-5，9-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环辛四烯-2-甲酸甲酯
在氮气下在28℃向(9s)-4-甲基-7，8，9，10-四氢-6h-5，9-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环辛四烯-2-甲酸甲酯(800mg，3.24mmol)在四氢呋喃(thf)(55ml)中的搅拌溶液中添加tea(2.71ml，19.41mmol)和三光气(960mg，3.24mmol)。将反应混合物在室温搅拌30分钟，然后将(s)-4-((2，2-二甲基-1，3-二氧杂环戊烷-4-基)甲氧基)吡啶-2-胺(2176mg，9.71mmol)添加至反应混合物。将反应混合物在65℃搅拌16hr。将反应混合物冷却至室温，在减压下完全蒸发溶剂且在水(30ml)和etoac(2x40ml)之间分配。将有机层分离，用无水na2so4干燥，过滤且将滤液蒸发以得到粗物质，其为棕色固体。tlc洗脱液：100％etoac/己烷，rf：0.2，uv活性。该粗化合物通过grace使用c-18reserval柱纯化，流动相a：0.1％甲酸水溶液；b：acn，该产物用65-70％acn/0.1％甲酸水溶液洗脱。蒸发溶剂且用饱和nahco3碱化。水层用dcm萃取。dcm层用无水na2so4干燥，过滤且蒸发以得到纯的(9s)-10-((4-(((s)-2，2-二甲基-1，3-二氧杂环戊烷-4-基)甲氧基)吡啶-2-基)氨基甲酰基)-4-甲基-7，8，9，10-四氢-6h-5，9-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环辛四烯-2-甲酸甲酯(650mg，1.125mmol，34.8％产率)，其为灰白色固体，lcms(m/z)：498.48[m+h]+.
合成(r)-6-((2，2-二甲基-1，3-二氧杂环戊烷-4-基)甲氧基)吡啶-2-胺
在氮气下在0℃向nah(11.67g，292mmol)在n-甲基-2-吡咯烷酮(nmp)(100ml)中的搅拌悬浮液中经10分钟在0℃滴加(r)-(2，2-二甲基-1，3-二氧杂环戊烷-4-基)甲醇(25.7g，194mmol)在n-甲基-2-吡咯烷酮(nmp)(100ml)中的溶液。10分钟后经10分钟在0℃滴加6-氯吡啶-2-胺(25g，194mmol)在n-甲基-2-吡咯烷酮(nmp)(100ml)中的溶液。反应混合物在100℃加热36小时。tlc指示少量起始原料和产物。
将反应混合物倒入冰冷却的水(600ml)中，水层用etoac萃取(2x500ml)。有机层用水洗涤(3x300ml)以去除过量nmp。有机层用na2so4干燥，过滤且在减压下浓缩以得到粗产物。粗产物通过柱色谱使用100-200硅胶纯化，洗脱液为(石油醚中的12-15％etoac)以得到(r)-6-((2，2-二甲基-1，3-二氧杂环戊烷-4-基)甲氧基)吡啶-2-胺(10g，44.6mmol，22.93％产率)，其为黄色粘稠液体。
合成(s)-6-((2，2-二甲基-1，3-二氧杂环戊烷-4-基)甲氧基)吡啶-2-胺
在氮气下在0℃向nah(62.2g，1556mmol)在n-甲基-2-吡咯烷酮(nmp)(800ml)中的搅拌悬浮液中，经2h滴加(s)-(2，2-二甲基-1，3-二氧杂环戊烷-4-基)甲醇(206g，1556mmol)在n-甲基-2-吡咯烷酮(nmp)(300ml)中的溶液。再搅拌10分钟后在0℃经30分钟滴加6-氯吡啶-2-胺(200g，1556mmol)在n-甲基-2-吡咯烷酮(nmp)(300ml)中的溶液。将反应混合物在120℃搅拌48小时。tlc指示起始原料消失。将反应混合物倒入冰冷却的水(2000ml)中，水层用etoac萃取(3x1000ml)。合并的有机层用水洗涤(3x1000ml)以去除过量nmp。有机层用na2so4干燥，过滤且在减压下浓缩以得到粗产物。粗产物通过柱色谱使用100-200硅胶纯化(洗脱液石油醚中的12-15％etoac)以得到所需纯的产物(s)-6-((2，2-二甲基-1，3-二氧杂环戊烷-4-基)甲氧基)吡啶-2-胺(75g，325mmol，20.92％产率)，其为黄色粘性液体。lcms(m/z)：225[m+h]+.
合成(r)-4-((2，2-二甲基-1，3-二氧杂环戊烷-4-基)甲氧基)吡啶-2-胺
在封闭管中向(r)-(2，2-二甲基-1，3-二氧杂环戊烷-4-基)甲醇(3.000g，22.70mmol)、4-氯吡啶-2-胺(1.459g，11.35mmol)和钠(0.522g，22.70mmol)的悬浮液。将反应混合物在140℃搅拌16h。然后，将反应混合物冷却至室温，溶于meoh且倒入冰水中且用etoac萃取。有机相用盐水溶液洗涤且用硫酸钠干燥，过滤且蒸发以得到粗化合物。该粗化合物通过柱色谱使用硅胶纯化且用2-3％meoh/dcm洗脱以得到纯的化合物(1.1g，21％)，lcms(m/z)225.2[m+h]+.
合成(s)-4-((2，2-二甲基-1，3-二氧杂环戊烷-4-基)甲氧基)吡啶-2-胺
在封闭管中向(s)-(2，2-二甲基-1，3-二氧杂环戊烷-4-基)甲醇(3.000g，22.70mmol)、4-氯吡啶-2-胺(1.459g，11.35mmol)和钠(0.522g，22.70mmol)的悬浮液。将反应混合物在140℃搅拌16h，然后冷却至室温，溶于meoh且倒入冰水中且用etoac萃取。有机相用盐水溶液洗涤且用硫酸钠干燥，过滤且蒸发。粗物质通过硅胶柱色谱法纯化，用2-3％meoh/dcm洗脱以得到所需产物(1.2g，22％)，lcms(m/z)225.2[m+h]+.
合成(r)-6-((2，2-二甲基-1，3-二氧杂环戊烷-4-基)甲氧基)吡嗪-2-胺
向在氮气下在0℃搅拌的6-氯吡嗪-2-胺(5g，38.6mmol)、氢化钠(2.316g，57.9mmol)和(r)-(2，2-二甲基-1，3-二氧杂环戊烷-4-基)甲醇(5.61g，42.5mmol)在四氢呋喃(thf)(50ml)中的溶液中添加反应混合物，在80℃搅拌16h。反应混合物用冰冷却的水淬灭且萃取至乙酸乙酯中。有机层用na2so4干燥。溶剂在减压下蒸发以得到粗产物。将粗产物添加至硅胶柱且用dcm/meoh洗脱。将具有产物的级分合并且在减压下蒸发以得到所需产物(2.8g，11.9mmol，31％)，lcms(m/z)225.9[m+h]+.
合成(s)-6-((2，2-二甲基-1，3-二氧杂环戊烷-4-基)甲氧基)吡嗪-2-胺
将6-氯吡嗪-2-胺(0.980g，7.57mmol)，(s)-(2，2-二甲基-1，3-二氧杂环戊烷-4-基)甲醇(2g，15.13mmol)和钠(0.348g，15.13mmol)加入密封管且在130℃加热16hr，然后反应混合物用甲醇和冰冷却的水(100ml)淬灭且用乙酸乙酯萃取(5x50ml)。合并的有机层用水洗涤，饱和盐水溶液，用无水硫酸钠干燥，过滤且浓缩以得到产物(1g，4.26mmol，28.2％产率)，lcms(m/z)265.1[m+h]+.
合成(s)-2-((2，2-二甲基-1，3-二氧杂环戊烷-4-基)甲氧基)嘧啶-4-胺
向在氮气下在室温搅拌的(s)-(2，2-二甲基-1，3-二氧杂环戊烷-4-基)甲醇(10.20g，77mmol)和nah(4.63g，116mmol)在四氢呋喃(thf)(50ml)中的悬浮液中经15min分批添加2-氯嘧啶-4-胺(5g，38.6mmol)。将反应混合物在70℃搅拌16小时。然后，反应混合物用nahco3水溶液淬灭，然后用etoac萃取，na2so4干燥且蒸发。将粗产物添加至硅胶柱且用50％hex/etoac洗脱。将收集的级分蒸发以得到所需产物(3g，11.84mmol，30.7％产率)，其为灰白色固体，lcms(m/z)226.2[m+h]+.
合成(r)-2-((2，2-二甲基-1，3-二氧杂环戊烷-4-基)甲氧基)嘧啶-4-胺
在室温经1分钟向氢化钠(0.817g，34.1mmol)在四氢呋喃(thf)(30ml)中的溶液中添加(r)-(2，2-二甲基-1，3-二氧杂环戊烷-4-基)甲醇(3g，22.70mmol)在thf(5ml)中的溶液且在室温搅拌15min，然后在室温分批添加2-氯嘧啶-4-胺(2.059g，15.89mmol)。将反应混合物在65℃搅拌16h。反应混合物倒入水中且用etoac萃取(3x100ml)。然后合并的有机层用水、盐水溶液洗涤，用硫酸钠干燥且蒸发以得到4.0g粗化合物。该粗化合物通过柱色谱使用100-200目硅胶纯化且用2-3％meoh/dcm洗脱以得到纯的化合物(2.5g，10.42mmol，46％)，lcms(m/z)226.2[m+h]+.
合成(s)-2-((2，2-二甲基-1，3-二氧杂环戊烷-4-基)甲氧基)吡啶-4-胺
向2-氯吡啶-4-胺(1.459g，11.35mmol)、(s)-(2，2-二甲基-1，3-二氧杂环戊烷-4-基)甲醇(3.0g，22.70mmol)的悬浮液中添加钠(0.522g，22.70mmol)。将反应混合物在140℃搅拌16hr且反应进程通过监测。
将反应混合物溶于meoh，倒入冰水中且用etoac萃取(3x100ml)。然后合并的有机层用水、盐水溶液洗涤，用硫酸钠干燥且蒸发以得到4.0g粗化合物。该粗化合物通过柱色谱使用100-200目硅胶纯化且用2-3％meoh/dcm洗脱以得到(s)-2-((2，2-二甲基-1，3-二氧杂环戊烷-4-基)甲氧基)吡啶-4-胺(2.5g，10.73mmol，47.3％产率)，lcms(m/z)225.3[m+h]+.
合成(r)-2-((2，2-二甲基-1，3-二氧杂环戊烷-4-基)甲氧基)吡啶-4-胺
在封闭管中在室温向2-氯吡啶-4-胺(4g，31.1mmol)，(r)-(2，2-二甲基-1，3-二氧杂环戊烷-4-基)甲醇(2.056g，15.56mmol)和钠(0.715g，31.1mmol)的溶液。将反应混合物在140℃搅拌48小时。将反应混合物冷却至室温且用meoh然后用水淬灭。然后反应物质用etoac萃取。然后有机层用水洗涤，然后用盐水溶液洗涤且用硫酸钠干燥且过滤且完全蒸馏。将粗产物添加至硅胶柱且用hex/etoac(1∶1)洗脱，将收集的级分蒸发以得到所需产物(2.250g，9.93mmol，31.9％产率)，lcms(m/z)225.0[m+h]+.
合成(1-甲基-1h-吡唑-4-基)氨基甲酸苯基酯
在0℃将氯甲酸苯酯(2.90g，18.53mmol)添加至吡啶(3.12ml，38.6mmol)在二氯甲烷(dcm)(50ml)中的搅拌溶液中且搅拌15min，然后在相同温度添加1-甲基-1h-吡唑-4-胺(1.5g，15.45mmol)。将反应混合物在室温搅拌4h。起始原料消耗后(tlc监测)，添加冰冷却的水，分离有机层，用水和盐水洗涤。将有机层通过硫酸钠过滤且浓缩以得到粗化合物。该粗化合物通过柱色谱使用60-120(硅胶)纯化且在己烷中的50％乙酸乙酯中洗脱以得到所需产物(1.6g，6.41mmol，42％产率)，其为浅棕色固体，lcms(m/z)218.1(m+h)+.
合成吡啶-3-基氨基甲酸苯基酯
向在氮气下在室温搅拌的氯甲酸苯酯(2.163g，13.81mmol)和吡啶(1.375ml，17.00mmol)在二氯甲烷(dcm)(30ml)中的溶液中添加吡啶-3-胺(1.0g，10.63mmol)。将反应混合物在室温搅拌30min。反应混合物用饱和碳酸氢钠溶液淬灭。分离有机层且水层用dcm萃取(50ml)。合并的dcm层用水洗涤且用硫酸钠干燥，过滤且在高真空浓缩以得到粗产物。将粗产物添加至硅胶柱且用20％etoac/己烷洗脱。将收集的级分蒸发以得到所需产物(1.3g，6.01mmol，57％)，其为白色固体，lcms(m/z)215.1(m+h)+.
合成嘧啶-2-基氨基甲酸苯基酯
向在氮气下在室温搅拌的氯甲酸苯酯(2.140g，13.67mmol)，和吡啶(1.361ml，16.82mmol)在二氯甲烷(dcm)(10ml)中的溶液中添加嘧啶-2-胺(1.0g，10.51mmol)。将反应混合物在室温搅拌30min。反应混合物用饱和碳酸氢钠溶液淬灭。分离有机层且水层用dcm萃取(50ml)。合并的dcm层用水洗涤且用硫酸钠干燥，过滤且在高真空浓缩以得到粗产物。将其添加至硅胶柱且用20％etoac/己烷洗脱。将收集的级分蒸发以得到所需产物(1.6g，6.49mmol，61.7％)，lcms(m/z)216.3(m+h)+.
合成(5-氟吡啶-2-基)氨基甲酸苯基酯
向在氮气下在室温搅拌的氯甲酸苯酯(1.397g，8.92mmol)和吡啶(0.721ml，8.92mmol)在二氯甲烷(dcm)(40ml)中的溶液中添加5-氟吡啶-2-胺(1.0g，8.92mmol)。将反应混合物在室温搅拌30min。反应混合物用饱和碳酸氢钠溶液淬灭。分离有机层且水层用dcm萃取(20ml)。合并的有机层用水洗涤，然后用盐水溶液洗涤且用硫酸钠干燥，过滤且真空浓缩以得到所需产物(1.4g，5.94mmol，67％)，lcms(m/z)233.2(m+h)+.
合成(2-甲基-2h-吲唑-5-基)氨基甲酸苯基酯
向在氮气下在室温搅拌的氯甲酸苯酯(1.064g，6.79mmol)和吡啶(0.550ml，6.79mmol)在二氯甲烷(dcm)(40ml)中的溶液中添加2-甲基-2h-吲唑-5-胺(1g，6.79mmol)。将反应混合物在室温搅拌30min。反应混合物用饱和碳酸氢钠溶液淬灭。分离有机层，水层用dcm萃取(20ml)。合并的有机层用水洗涤，然后用盐水溶液洗涤且用硫酸钠干燥且真空浓缩以得到(2-甲基-2h-吲唑-5-基)氨基甲酸苯基酯(1.3g，4.82mmol，70.9％产率)，lcms(m/z)268.1(m+h)+.
合成哒嗪-3-基氨基甲酸苯基酯
经5min向在氮气下在25℃搅拌的氯甲酸苯酯(1.070g，6.83mmol)、吡啶(0.665g，8.41mmol)在二氯甲烷(10ml)中的溶液中添加哒嗪-3-胺(0.5g，5.26mmol)在二氯甲烷(5ml)中的悬浮液。将反应混合物在25℃搅拌1小时。然后，有机相用水3ml、饱和盐水3ml洗涤，用硫酸钠干燥且真空浓缩以得到粗产物，其为白色固体。该化合物用己烷洗涤，在减压下干燥，lcms(m/z)216.2(m+h)+.
合成嘧啶-4-基氨基甲酸苯基酯
经5min向在氮气下在25℃搅拌的氯甲酸苯酯(1.070g，6.83mmol)、吡啶(0.665g，8.41mmol)在dcm(15ml)中的溶液中滴加嘧啶-4-胺(0.5g，5.26mmol)在dcm(5ml)中的悬浮液。将反应混合物在25℃搅拌1小时。有机相用水3ml、盐水3ml洗涤，用硫酸钠干燥且真空浓缩以得到粗产物，其为灰白色固体。该粗化合物用己烷洗涤，然后在减压下干燥以得到所需产物(500mg，1.95mmol，37％)，lcms(m/z)215.9(m+h)+.
合成3-((6-氨基吡啶-2-基)氧基)丙-1-醇
在0℃将丙烷-1，3-二醇(1.358g，17.84mmol)添加至nah(1.070g，44.6mmol)在n-甲基-2-吡咯烷酮(nmp)(5ml)中的搅拌溶液中且搅拌1h，然后添加6-氟吡啶-2-胺(1.0g，8.92mmol)且在80℃搅拌2h。反应物质冷却至室温，缓慢添加至冰冷却的水中且用乙酸乙酯稀释。分离的有机层用水和盐水洗涤。有机层用na2so4干燥，过滤且浓缩以得到粗化合物。该粗化合物通过使用100-200硅胶纯化且在100％乙酸乙酯中洗脱以得到3-((6-氨基吡啶-2-基)氧基)丙-1-醇(0.4g，1.760mmol，19.73％产率)，其为棕色粘性物，lcms(m/z)：169.22[m+h]+.
合成6-(3-((四氢-2h-吡喃-2-基)氧基)丙氧基)吡啶-2-胺
在0℃将3-((四氢-2h-吡喃-2-基)氧基)丙-1-醇(4.2g，26.2mmol)在1，4-二噁烷(20ml)添加至nah(1.307g，32.7mmol)在1，4-二噁烷(20ml)中的溶液中，且将反应混合物在28℃搅拌30分钟。在0℃将6-氯吡啶-2-胺(2.8g，21.78mmol)在1，4-二噁烷(20ml)中的溶液添加至该反应混合物，且将反应混合物在100℃搅拌10hr。反应混合物在水(20ml)和dcm(2x25ml)之间分配。dcm层用饱和nahco3溶液洗涤，分离且用无水na2so4干燥，过滤且将滤液蒸发，得到粗的6-(3-((四氢-2h-吡喃-2-基)氧基)丙氧基)吡啶-2-胺(5.5g，18.12mmol，83％产率)，其为棕色油状物，lcms(m/z)：253.2[m+h]+.
合成3-((四氢-2h-吡喃-2-基)氧基)丙-1-醇
在0℃将对甲苯磺酸一水合物(0.678g，3.57mmol)添加至丙烷-1，3-二醇(5.43g，71.3mmol)和3，4-二氢-2h-吡喃(3g，35.7mmol)在二氯甲烷(dcm)(50ml)中的搅拌溶液中。将反应混合物在28℃搅拌2h。反应混合物在水(20ml)和dcm(2x25ml)之间分配。dcm层用饱和nahco3溶液洗涤，分离且用无水na2so4干燥，过滤且将滤液蒸发，得到粗的3-((四氢-2h-吡喃-2-基)氧基)丙-1-醇(4.2g，26.2mmol，73.5％产率)，其为无色油状物。
合成(s)-3-溴-5-((2，2-二甲基-1，3-二氧杂环戊烷-4-基)甲氧基)吡啶
将碳酸铯(37.0g，114mmol)加入多颈圆底烧瓶中。然后烧瓶冷却至0℃且经3分钟缓慢添加n-甲基-2-吡咯烷酮(nmp)(100ml)。所得反应混合物在氮气下搅拌15分钟。然后在0℃经5分钟滴加(s)-(2，2-二甲基-1，3-二氧杂环戊烷-4-基)甲醇(10g，76mmol)。该悬浮液在室温搅拌1h。添加3-溴-5-氟吡啶(7.62ml，73.9mmol)后悬浮液变为淡黄色溶液。所得溶液在75℃搅拌24小时。反应进程通过tlc监测，使用己烷中的40％etoac。24h后tlc指示sm消耗和新的点形成。将反应物质冷却至室温，用水(500ml)稀释。水层用乙酸乙酯萃取(2x300ml)。有机层用盐水(250ml)洗涤，用na2so4干燥，过滤，在减压下浓缩以得到棕色油状物。粗产物通过柱色谱经100-200目尺寸硅胶纯化。柱用etoac/己烷的梯度液洗脱。所需化合物用己烷中的20％etoac洗脱。含纯的化合物的级分在减压下浓缩以得到(s)-3-溴-5-((2，2-二甲基-1，3-二氧杂环戊烷-4-基)甲氧基)吡啶(10g，34.0mmol，44.9％产率)，其为淡黄色粘性油状物，lcms(m/z)：289.99[m+h]+.
合成(r)-5-((2，2-二甲基-1，3-二氧杂环戊烷-4-基)甲氧基)吡啶-3-胺
将(r)-3-溴-5-((2，2-二甲基-1，3-二氧杂环戊烷-4-基)甲氧基)吡啶(50g，174mmol)、氨水(25ml，1155mmol)加入封闭管中。然后在0℃添加硫酸铜(ii)(5.54g，34.7mmol)。所得蓝色溶液加热至120℃保持2小时。反应进程通过tlc监测，使用dcm中的10％meoh，24h后tlc指示新的点形成和sm消耗。完成后，反应物质冷却至室温。将该反应物质用20％naoh调节为ph10，用nacl饱和，用乙酸乙酯萃取(30ml*2)。合并的有机层用盐水洗涤(20ml)，用na2so4干燥，过滤且在减压下浓缩以得到粗物质棕色固体，其用乙醚研磨且搅拌4小时，然后过滤以得到(r)-5-((2，2-二甲基-1，3-二氧杂环戊烷-4-基)甲氧基)吡啶-3-胺(35.4g，146mmol，84％产率)，其为浅棕色固体，lcms(m/z)：225.29[m+h]+.
合成(s)-5-((2，2-二甲基-1，3-二氧杂环戊烷-4-基)甲氧基)吡啶-3-胺
(s)-3-溴-5-((2，2-二甲基-1，3-二氧杂环戊烷-4-基)甲氧基)吡啶(10g，34.7mmol)、氨水(100ml，4621mmol)加入封闭管中。所得棕色溶液加热至120℃保持24小时。反应进程通过tlc监测，使用dcm中的10％meoh，24h后tlc指示新的点形成和sm消耗。完成后，反应物质冷却至室温。将该反应物质用20％naoh调节为ph10，用nacl饱和，用乙酸乙酯萃取(30ml*2)。合并的有机层用盐水洗涤(20ml)，用na2so4干燥，过滤且在减压下浓缩以得到(s)-5-((2，2-二甲基-1，3-二氧杂环戊烷-4-基)甲氧基)吡啶-3-胺(6g，25.8mmol，74.2％产率)，其为浅棕色固体，lcms(m/z)：225.10[m+h]+.
合成(r)-6-((2，2-二甲基-1，3-二氧杂环戊烷-4-基)甲氧基)嘧啶-4-胺
在氮气下在0℃向nah(11.35g，473mmol)在thf(100ml)中的悬浮液中滴加(r)-(2，2-二甲基-1，3-二氧杂环戊烷-4-基)甲醇(25g，189mmol)在thf(150ml)中的溶液。所得悬浮液在室温搅拌1h。在室温将6-氯嘧啶-4-胺(19.61g，151mmol)分批添加至反应混合物且所得悬浮液加热至90℃保持48小时。反应完成后(tlc监测，其显示一点点起始物质和观察到新的极性点)，将反应混合物倒入冰水(500ml)中且水层用etoac萃取(2x1000ml)。合并的有机物用na2so4干燥，过滤且在减压下浓缩以得到浅棕色固体(粗物质)。粗物质通过硅胶柱纯化(100-200，dcm中的3％meoh)。将含纯的化合物的级分合并且浓缩以得到所需产物(r)-6-((2，2-二甲基-1，3-二氧杂环戊烷-4-基)甲氧基)嘧啶-4-胺(13g，53.9mmol，28.5％产率)，其为灰白色固体且还得到不纯的化合物(10g)。lcms(m/z)：226.17(m+h)+.
合成(s)-6-((2，2-二甲基-1，3-二氧杂环戊烷-4-基)甲氧基)嘧啶-4-胺
在氮气下在0℃向nah(9.08g，378mmol)在thf(150ml)中的悬浮液中滴加(s)-(2，2-二甲基-1，3-二氧杂环戊烷-4-基)甲醇(20g，151mmol)在thf(200ml)中的溶液，且所得悬浮液在室温搅拌1h。在室温将6-氯嘧啶-4-胺(15.68g，121mmol)分批添加至反应物质且所得悬浮液加热至90℃保持48小时。反应完成后(tlc监测，起始原料完全消耗且观察到新的极性点)，将反应物质倒入冰水(200ml)中且用乙酸乙酯萃取(2x400ml)。合并的有机物用na2so4干燥，过滤且在减压下浓缩以得到浅棕色固体。所得固体在乙醚(200ml)中搅拌30分钟过滤且真空干燥以得到(s)-6-((2，2-二甲基-1，3-二氧杂环戊烷-4-基)甲氧基)嘧啶-4-胺(13g，57.3mmol，37.9％产率)，其为浅棕色固体，lcms(m/z)：225.96[m+h]+.
合成(r)-4-((2，2-二甲基-1，3-二氧杂环戊烷-4-基)甲氧基)嘧啶-2-胺
在氮气下在0℃向nah(9.08g，378mmol)在thf(150ml)中的悬浮液中滴加(r)-(2，2-二甲基-1，3-二氧杂环戊烷-4-基)甲醇(20g，151mmol)在thf(250ml)中的溶液。所得悬浮液在室温搅拌1h。在室温将4-氯嘧啶-2-胺(15.68g，121mmol)分批添加至反应混合物且所得悬浮液加热至90℃保持48小时。反应完成后(tlc监测，起始物质完全消耗且观察到新的极性点)，将反应混合物倒入冰水(250ml)中且水层用etoac萃取(2x300ml)。合并的有机物用na2so4干燥，过滤且在减压下浓缩以得到淡黄色液体(粗物质)。所得粗物质通过柱(100-200硅胶)使用0-50％etoac-石油醚纯化以得到(r)-4-((2，2-二甲基-1，3-二氧杂环戊烷-4-基)甲氧基)嘧啶-2-胺(13g，57.0mmol，37.7％产率)，其为淡黄色固体，lcms(m/z)：226.20[m+h]+.
合成(s)-4-((2，2-二甲基-1，3-二氧杂环戊烷-4-基)甲氧基)嘧啶-2-胺
在氮气下在0℃向nah(8.25g，189mmol)在1，4-二噁烷(200ml)中的悬浮液中滴加(s)-(2，2-二甲基-1，3-二氧杂环戊烷-4-基)甲醇(10g，76mmol)在1，4-二噁烷(50ml)中的溶液。所得悬浮液在室温搅拌1h。在室温将4-氯嘧啶-2-胺(7.84g，60.5mmol)分批添加至反应混合物且所得悬浮液加热至90℃保持48小时。将反应混合物冷却至28℃且在水(200ml)和etoac(200ml)之间分配。将有机层分离且用无水na2so4干燥，过滤且将滤液蒸发以得到粗物质(tlc洗脱液：纯的乙酸乙酯，rf0.3；uv活性)。该粗化合物通过柱色谱纯化(100-200目硅胶，用在己烷中的60％乙酸乙酯洗脱)以得到(s)-4-((2，2-二甲基-1，3-二氧杂环戊烷-4-基)甲氧基)嘧啶-2-胺(8.0g，35.4mmol，46.8％产率)，其为淡黄色固体lcms(m/z)226.30(m+h)+.
合成(r)-5-((2，2-二甲基-1，3-二氧杂环戊烷-4-基)甲氧基)吡嗪-2-胺
在封闭管中向(r)-2-氯-5-((2，2-二甲基-1，3-二氧杂环戊烷-4-基)甲氧基)吡嗪(12g，49.0mmol)在四氢呋喃(thf)(20ml)中的搅拌溶液中添加氢氧化铵(300ml，1926mmol)和硫酸铜(ii)(1.566g，9.81mmol)。反应混合物在120℃搅拌18小时。该反应进程通过tlc监测，tlc指示极性点的形成以及未反应的sm。反应混合物用水稀释(300ml)，用etoac萃取(3x200ml)，将有机层合并且用水(100ml)、盐水溶液(100ml)洗涤，有机层用无水na2so4干燥，过滤且在减压下浓缩以得到(r)-5-((2，2-二甲基-1，3-二氧杂环戊烷-4-基)甲氧基)吡嗪-2-胺(10g，3.97mmol，8.09％产率)，其为黄色油状粗化合物，lcms(m/z)：226.13(m+h)+.
合成(s)-2-氯-5-((2，2-二甲基-1，3-二氧杂环戊烷-4-基)甲氧基)吡嗪
向在氮气下在0℃搅拌的(s)-(2，2-二甲基-1，3-二氧杂环戊烷-4-基)甲醇(8.87g，67.1mmol)在n，n-二甲基甲酰胺(dmf)(50ml)中的悬浮液中添加碳酸铯(32.8g，101mmol)，所得反应混合物在0℃搅拌1小时。向其中添加2，5-二氯吡嗪(10g，67.1mmol)。所得反应混合物在100℃搅拌6小时。该反应进程通过tlc监测。tlc指示起始原料消耗以形成新的极性点，具有0.3rf。该反应物质冷却至室温，添加水(100ml)且用乙酸乙酯萃取(100ml)。有机层用水洗涤(100mlx2)。有机层用na2so4干燥且过滤且浓缩以得到粗物质，其为浅棕色液体。将粗产物添加至硅胶(60-120)柱且用hex/etoac洗脱。收集级分：该产物在己烷中的30％etoac中洗脱。浓缩该产物级分以得到(s)-2-氯-5-((2，2-二甲基-1，3-二氧杂环戊烷-4-基)甲氧基)吡嗪(12g，47.7mmol，71.0％产率)，其为浅棕色液体，lcms(m/z)：244.90[m+h]+.
合成(s)-5-((2，2-二甲基-1，3-二氧杂环戊烷-4-基)甲氧基)吡嗪-2-胺
在室温向在室温搅拌的(s)-2-氯-5-((2，2-二甲基-1，3-二氧杂环戊烷-4-基)甲氧基)吡嗪(10g，40.9mmol)在四氢呋喃(thf)(10ml)中的溶液中添加氢氧化铵(63.7ml，409mmol)和硫酸铜(ii)(3.26g，20.44mmol)。将反应混合物在封闭管中在130℃搅拌2天。该反应进程通过tlc监测。tlc指示起始原料消耗。冷却该反应物质至室温，用水稀释(100ml)，用乙酸乙酯萃取(250mlx2)。有机层用na2so4干燥，过滤且浓缩以得到粗化合物，其为棕色粘性化合物。将粗产物添加至硅胶柱且用dcm/etoac洗脱。收集级分：该产物在石油醚中的50％etoac中洗脱。浓缩该产物级分以得到(s)-5-((2，2-二甲基-1，3-二氧杂环戊烷-4-基)甲氧基)吡嗪-2-胺(2g，8.77mmol，21.46％产率)(n35119-51-a2)，其为浅棕色固体。nmr：在cdcl3中，符合，lcms(m/z)：226.09[m+h]+.
合成(r)-6-((2，2-二甲基-1，3-二氧杂环戊烷-4-基)甲氧基)吡啶-3-胺
在0℃将(r)-(2，2-二甲基-1，3-二氧杂环戊烷-4-基)甲醇(27.8g，210mmol)添加至kotbu(45.8g，408mmol)在nmp(200ml)中的搅拌溶液中，然后在室温搅拌1h且冷却至0℃，添加6-氯吡啶-3-胺(15g，117mmol)且加热至110℃保持144h。反应混合物冷却至室温且在水(500mlx2)和etoac(200mlx4)之间分配。分离有机层且用无水na2so4干燥，过滤且将滤液蒸发以得到粗物质且通过柱色谱法纯化(使用100-200硅胶，用己烷中的50％乙酸乙酯柱洗脱)以得到(r)-6-((2，2-二甲基-1，3-二氧杂环戊烷-4-基)甲氧基)吡啶-3-胺(8g，35.1mmol，30.1％产率)，其为棕色油状物，lcms(m/z)：225.16[m+h]+.
合成(s)-6-((2，2-二甲基-1，3-二氧杂环戊烷-4-基)甲氧基)吡啶-3-胺
在0℃将(s)-(2，2-二甲基-1，3-二氧杂环戊烷-4-基)甲醇(18.50g，140mmol)添加至kotbu(30.5g，272mmol)在nmp(600ml)中的搅拌溶液中，然后在室温搅拌1h且冷却至0℃，添加6-氯吡啶-3-胺(10.0g，78mmol)且加热至110℃保持88h。反应混合物冷却至室温且在水(50mlx2)和etoac(100mlx2)之间分配。分离有机层且用无水na2so4干燥，过滤且将滤液蒸发以得到粗化合物，其为胶状物。(tlc：洗脱液：100％乙酸乙酯，rf0.5；uv活性：)。粗产物通过快速柱色谱法纯化(硅胶：100-200目)用己烷中的50％etoac洗脱以得到(s)-6-((2，2-二甲基-1，3-二氧杂环戊烷-4-基)甲氧基)吡啶-3-胺(10.0g，41.7mmol，53.6％产率)，其为深色粘性物质，lcms(m/z)225.0(m+h)+.
合成(r)-5-((2，2-二甲基-1，3-二氧杂环戊烷-4-基)甲氧基)吡啶-2-胺
在0℃将(r)-(2，2-二甲基-1，3-二氧杂环戊烷-4-基)甲醇(30.7g，232mmol)添加至kotbu(70.1g，624mmol)在nmp(800ml)中的搅拌溶液中，然后在室温搅拌1h且冷却至0℃，然后添加5-氟吡啶-2-胺(20g，178mmol)且加热至110℃保持114h。反应混合物冷却至室温且在水(500mlx2)和etoac(500mlx4)之间分配。分离有机层且用无水na2so4干燥，过滤且将滤液蒸发以得到粗化合物，然后其通过柱色谱纯化(使用100-200硅胶，用己烷中的80％乙酸乙酯洗脱)以得到(r)-5-((2，2-二甲基-1，3-二氧杂环戊烷-4-基)甲氧基)吡啶-2-胺(10g，40.1mmol，22.50％产率)，其为棕色油状物，lcms：225.0(m+h)。
合成(s)-5-((2，2-二甲基-1，3-二氧杂环戊烷-4-基)甲氧基)吡啶-2-胺
在0℃将nah(12.84g，268mmol)添加至(s)-(2，2-二甲基-1，3-二氧杂环戊烷-4-基)甲醇(31.8g，241mmol)在二甲基亚砜(dmso)(100ml)中的搅拌溶液中，然后在室温搅拌1h且冷却至0℃，添加5-氟吡啶-2-胺(15.0g，134mmol)且加热至110℃保持60h。反应混合物冷却至室温且在水(50ml)和etoac(100ml)之间分配。分离有机层且用无水na2so4干燥，过滤且将滤液蒸发以得到粗化合物(tlc：洗脱液：100％乙酸乙酯，rf0.5；uv活性)，粗产物通过快速柱色谱法纯化(硅胶：100-200目)用己烷中的50％etoac洗脱以得到(s)-5-((2，2-二甲基-1，3-二氧杂环戊烷-4-基)甲氧基)吡啶-2-胺(7.2g，32.1mmol，23.99％产率)，其为淡黄色粘性物质，lcms(m/z)：225.1(m+h)+.
合成(r)-2-((2，2-二甲基-1，3-二氧杂环戊烷-4-基)甲氧基)嘧啶-5-胺
在0℃将四氢呋喃(75ml)添加至nah(5.56g，232mmol)，在0℃将(r)-(2，2-二甲基-1，3-二氧杂环戊烷-4-基)甲醇(12.46ml，100mmol)在四氢呋喃(50ml)中的溶液添加至反应混合物，且将反应混合物在28℃搅拌1h。添加2-氯嘧啶-5-胺(10g，77mmol)在四氢呋喃(25ml)中的溶液且在70℃搅拌16hr。反应混合物用冷却水(30ml)淬灭且用乙酸乙酯萃取(3x80ml)。有机层用水(2x50ml)和饱和盐水溶液(50ml)洗涤，用无水na2so4干燥，过滤且浓缩。该粗化合物通过柱色谱纯化(中性氧化铝)，产物用己烷中的40-45％乙酸乙酯洗脱以得到(r)-2-((2，2-二甲基-1，3-二氧杂环戊烷-4-基)甲氧基)嘧啶-5-胺(6.5g，28.3mmol，36.6％产率)，其为淡黄色固体，lcms(m/z)：226.0[m+h]+.
合成(s)-2-((2，2-二甲基-1，3-二氧杂环戊烷-4-基)甲氧基)嘧啶-5-胺
在0℃向nah(6.17g，154mmol)在thf(100ml)中的悬浮液中添加(s)-(2，2-二甲基-1，3-二氧杂环戊烷-4-基)甲醇(13.26g，100mmol)在thf(50ml)中的溶液，且将反应混合物在25℃搅拌1h。在0℃向其添加2-氯嘧啶-5-胺(10g，77mmol)在thf(50ml)且缓慢加热至80℃且在80℃搅拌16hr。反应完成后，反应混合物用氯化铵(10ml)淬灭且用乙酸乙酯萃取(3x20ml)。分离有机层，用盐水洗涤且用na2so4干燥，将其过滤且在减压下浓缩以得到粗产物。该粗物质用乙醚研磨以得到(s)-2-((2，2-二甲基-1，3-二氧杂环戊烷-4-基)甲氧基)嘧啶-5-胺(5.0g，19.77mmol，25.6％产率)，其为棕色固体，lcms(m/z)：226.1[m+h]+.
合成(s)-2-氯-5-((2，2-二甲基-1，3-二氧杂环戊烷-4-基)甲基)吡嗪
在0℃向碳酸铯(492g，1510mmol)在dmf(1000ml)中的搅拌溶液中添加(s)-(2，2-二甲基-1，3-二氧杂环戊烷-4-基)甲醇(133g，1007mmol)。所得反应混合物在室温搅拌30分钟。然后在0℃添加2，5-二氯吡嗪(150g，1007mmol)在dmf(500ml)中的溶液且所得反应混合物在100℃搅拌4h。(tlc体系：石油醚中的20％乙酸乙酯，rf：0.5，uv活性)。反应混合物用冰冷却的水(500ml)稀释，用etoac萃取(3x300ml)。合并的有机层用水(2x200ml)和盐水溶液(100ml)洗涤，用无水na2so4干燥，过滤且在减压下浓缩以得到粗化合物。该粗化合物通过快速柱色谱法纯化(硅胶：100-200目，洗脱液：10％etoac在己烷中)以得到所需产物(s)-2-氯-5-((2，2-二甲基-1，3-二氧杂环戊烷-4-基)甲氧基)吡嗪(200g，768mmol，76％产率)，其为黄色液体。lcms(m/z)：245.1[m+h]+.
合成(s)-5-((2，2-二甲基-1，3-二氧杂环戊烷-4-基)甲氧基)吡嗪-2-胺
在封闭管中向(s)-2-氯-5-((2，2-二甲基-1，3-二氧杂环戊烷-4-基)甲氧基)吡嗪(120g，490mmol)在thf(30ml)中的搅拌溶液中添加氢氧化铵(1000ml，6420mmol)和硫酸铜(ii)(15.66g，98mmol)且所得反应混合物在120℃搅拌48h(tlc体系：石油醚中的50％乙酸乙酯，rf：0.4，uv活性)。反应混合物用水稀释(300ml)，用etoac萃取(3x500ml)。合并的有机层用水(200ml)和盐水溶液(200ml)洗涤，用无水na2so4干燥，过滤且在减压下浓缩以得到粗化合物。粗物质通过快速柱色谱法纯化(使用100-200目硅胶且用己烷中的40％etoac洗脱该化合物)以得到所需产物(s)-5-((2，2-二甲基-1，3-二氧杂环戊烷-4-基)甲氧基)吡嗪-2-胺(65g，280mmol，57.2％产率)，其为黄色晶体固体。lcms(m/z)：226.13[m+h]+.
合成(r)-2-氯-5-((2，2-二甲基-1，3-二氧杂环戊烷-4-基)甲氧基)吡嗪
在0℃向碳酸铯(32.8g，101mmol)在dmf(100ml)中的搅拌悬浮液中添加(r)-(2，2-二甲基-1，3-二氧杂环戊烷-4-基)甲醇(8.87g，67.1mmol)且在室温搅拌30分钟。然后添加2，5-二氯吡嗪(10g，67.1mmol)且所得反应混合物在100℃搅拌4h。(tlc体系：己烷中的20％乙酸乙酯，rf：0.5，uv活性)。反应混合物用冰冷却的水(200ml)稀释，用etoac萃取(3x100ml)。合并的有机层用水(2x50ml)和盐水溶液(50ml)洗涤，用无水na2so4干燥，过滤且在减压下浓缩以得到(r)-2-氯-5-((2，2-二甲基-1，3-二氧杂环戊烷-4-基)甲氧基)吡嗪(12g，43.8mmol，65.3％产率)，其为黄色油状化合物。lcms(m/z)：244.99[m+h]+.
合成(r)-5-((2，2-二甲基-1，3-二氧杂环戊烷-4-基)甲氧基)吡嗪-2-胺
在封闭管中向(r)-2-氯-5-((2，2-二甲基-1，3-二氧杂环戊烷-4-基)甲氧基)吡嗪(8g，32.7mmol)在四氢呋喃(10ml)中的搅拌溶液中添加氢氧化铵(400ml，2568mmol)和硫酸铜(ii)(1.044g，6.54mmol)且将反应混合物在120℃搅拌48h。(tlc体系：己烷中的50％乙酸乙酯，rf：0.4，uv活性)。反应混合物用水稀释(200ml)，用etoac萃取(3x50ml)。合并的有机层用水(50ml)、盐水溶液(50ml)洗涤，用无水na2so4干燥，过滤且在减压下浓缩以得到粗化合物。粗物质通过快速柱色谱法纯化(使用100-200目硅胶且用己烷中的40％etoac洗脱该化合物)，将纯的级分收集且在减压下浓缩以得到(r)-5-((2，2-二甲基-1，3-二氧杂环戊烷-4-基)甲氧基)吡嗪-2-胺(2g，8.65mmol，26.4％产率)，其为黄色晶体固体。lcms(m/z)：226.10[m+h]+.
合成(s)-2-氯-5-((2，2-二甲基-1，3-二氧杂环戊烷-4-基)甲氧基)嘧啶
在0℃向2-氯嘧啶-5-醇(13g，100mmol)在thf(100ml)中的搅拌溶液中添加(s)-(2，2-二甲基-1，3-二氧杂环戊烷-4-基)甲醇(13.16g，100mmol)、三苯基膦(32.7g，124mmol)，然后添加dead(19.71ml，124mmol)且反应在室温搅拌4h。(tlc洗脱体系：石油醚中的30％etoac；rf-0.5；uv活性)。反应混合物用水(50ml)淬灭且萃取至etoac(2x75ml)中。将有机层分离且用无水na2so4干燥，过滤且将滤液蒸发以得到粗产物。将粗物质通过色谱法纯化(硅胶，洗脱液：20％etoac在己烷中)以得到(s)-2-氯-5-((2，2-二甲基-1，3-二氧杂环戊烷-4-基)甲氧基)嘧啶(20g，79mmol，79％产率)，其为灰白色固体。lcms(m/z)：245.10；[m+h]+.
合成(s)-5-((2，2-二甲基-1，3-二氧杂环戊烷-4-基)甲氧基)嘧啶-2-胺
在封闭管中将(s)-2-氯-5-((2，2-二甲基-1，3-二氧杂环戊烷-4-基)甲氧基)嘧啶(10g，40.9mmol)和氨水(66.3ml，1226mmol)的混合物在120℃加热24h。(tlc洗脱体系：100％etoac；rf-0.2；uv活性)。将反应混合物冷却至室温，用水(50ml)淬灭且萃取至etoac(2x75ml)中。将有机层分离，用无水硫酸钠干燥，过滤且将滤液蒸发以得到粗产物，其为黄色固体。该粗化合物用正戊烷(50ml)研磨以得到(s)-5-((2，2-二甲基-1，3-二氧杂环戊烷-4-基)甲氧基)嘧啶-2-胺(6.6g，28.6mmol，70.0％产率)，其为灰白色固体。lcms(m/z)：226.17；[m+h]+.
合成(r)-2-氯-5-((2，2-二甲基-1，3-二氧杂环戊烷-4-基)甲氧基)嘧啶
在0℃向2-氯嘧啶-5-醇(20g，153mmol)在thf(100ml)中的搅拌溶液中添加(r)-(2，2-二甲基-1，3-二氧杂环戊烷-4-基)甲醇(24.30g，184mmol)、三苯基膦(50.2g，192mmol)，然后添加dead(30.3ml，192mmol)且将反应在室温搅拌12h。(tlc洗脱体系：石油醚中的70％etoac；rf-0.5；uv活性)。反应混合物用水(100ml)淬灭且萃取至etoac(200ml)中。将有机层分离且用无水na2so4干燥，过滤且将滤液蒸发以得到粗产物。将粗物质通过色谱法纯化(硅胶，洗脱液：35％etoac在己烷中)以得到(r)-2-氯-5-((2，2-二甲基-1，3-二氧杂环戊烷-4-基)甲氧基)嘧啶(23g，91mmol，59.5％产率)，其为白色固体。lcms(m/z)：245.06；[m+h]+.
合成(r)-5-((2，2-二甲基-1，3-二氧杂环戊烷-4-基)甲氧基)嘧啶-2-胺
在封闭管中将(r)-2-氯-5-((2，2-二甲基-1，3-二氧杂环戊烷-4-基)甲氧基)嘧啶(5g，20.44mmol)和氨水(50ml，924mmol)的混合物120℃加热48h。(tlc洗脱体系：100％etoac；rf-0.2；uv活性)。将反应混合物冷却至室温，用水(50ml)淬灭且萃取至dcm(2x75ml)中。将有机层分离，用无水na2so4干燥，过滤且将滤液蒸发以得到(r)-5-((2，2-二甲基-1，3-二氧杂环戊烷-4-基)甲氧基)嘧啶-2-胺(2.7g，11.5mmol，57.5％产率)，其为淡黄色固体。lcms(m/z)：226.02；[m+h]+.
化合物实施例
实施例1
合成(9s)-n-(吡啶-2-基)-2-((s)-2-(三氟甲基)吡咯烷-1-基)-8，9-二氢-6h-5，9-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环辛四烯-10(7h)-甲酰胺
将nah(0.254g，10.57mmol)添加至(9s)-2-((s)-2-(三氟甲基)吡咯烷-1-基)-7，8，9，10-四氢-6h-5，9-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环辛四烯(0.550g，1.761mmol)在四氢呋喃(thf)(30ml)中的在氮气下在室温搅拌的搅拌溶液中。将反应混合物在室温搅拌30分钟。然后在室温添加3-(吡啶-2-基)-2h-吡啶并[1，2-a][1，3，5]三嗪-2，4(3h)-二酮(0.635g，2.64mmol)。然后反应混合物在65℃搅拌24小时。将反应混合物冷却至28℃且在水(10ml)和etoac(25ml)之间分配。将有机层分离且用无水na2so4干燥，过滤且将滤液蒸发以得到粗物质，其为棕色固体(tlc洗脱液：100％etoac：rf-0.3；uv活性)。该粗物质通过柱色谱纯化，使用(100-200目)硅胶，且用己烷中的75-80％etoac洗脱以得到纯的(9s)-n-(吡啶-2-基)-2-((s)-2-(三氟甲基)吡咯烷-1-基)-8，9-二氢-6h-5，9-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环辛四烯-10(7h)-甲酰胺(0.275g，0.631mmol，35.8％产率)，其为灰白色固体，lcms(m/z)：433.2[m+h]+.
1hnmr(400mhz，dmso-d6)：δppm13.60(s，1h)，8.20-8.29(m，1h)，8.09(dt，j＝8.33，0.88hz，1h)，7.72-7.81(m，1h)，7.37(d，j＝8.55hz，1h)，7.05(ddd，j＝7.29，4.88，0.99hz，1h)，6.45(d，j＝8.55hz，1h)，5.11-5.19(m，1h)，4.74(brs，1h)，3.91(dt，j＝10.19，5.21hz，1h)，3.50-3.62(m，1h)，3.27(d，j＝1.75hz，1h)，3.11-3.22(m，1h)，3.01-3.08(m，1h)，2.81(brd，j＝13.37hz，1h)，2.07-2.28(m，4h)，1.94-2.02(m，1h)，1.81-1.92(m，1h)，1.21-1.40(m，2h)
实施例2
合成(9s)-n-(5-氟吡啶-3-基)-2-(2-(三氟甲基)吡啶-4-基)-8，9-二氢-6h-5，9-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环辛四烯-10(7h)-甲酰胺
在30℃向(9s)-2-(2-(三氟甲基)吡啶-4-基)-7，8，9，10-四氢-6h-5，9-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环辛四烯(500mg，1.561mmol)在thf(15ml)中的搅拌溶液中添加三乙胺(0.653ml，4.68mmol)和三光气(232mg，0.780mmol)且在室温搅拌1h。然后在30℃添加5-氟吡啶-3-胺(525mg，4.68mmol)且反应在70℃加热16h。thf在减压下蒸发且所得残余物用水稀释且用ch2cl2(3x50ml)萃取。合并的有机层用水、盐水洗涤，用na2so4干燥且溶剂在减压下蒸发以得到粗化合物且将其通过快速柱色谱法纯化(硅胶：100-200目，洗脱液：dcm中的3％meoh)以得到(9s)-n-(5-氟吡啶-3-基)-2-(2-(三氟甲基)吡啶-4-基)-8，9-二氢-6h-5，9-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环辛四烯-10(7h)-甲酰胺(200mg，0.4366mmol，35％产率)，其为灰白色固体(tlc：rf＝0.3，etoac中的10％meoh)，lcms(m/z)：459.25[m+h]+.
1hnmr(400mhz，dmso-d6)：δppm13.19(s，1h)，8.93(d，j＝5.04hz，1h)，8.47(s，1h)，8.37(s，1h)，8.33-8.21(m，2h)，8.03(d，j＝11.18hz，1h)，7.88(d，j＝8.11hz，1h)，7.78(d，j＝8.11hz，1h)，4.83(s，1h)，3.43(d，j＝12.06hz，1h)，3.25(s，2h)，2.90(d，j＝13.81hz，1h)，2.11-1.84(m，2h)，1.33(s，2h)。
实施例3
合成(9s)-n-(嘧啶-5-基)-2-(5-(三氟甲基)吡啶-3-基)-8，9-二氢-6h-5，9-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环辛四烯-10(7h)-甲酰胺
在0℃向(9s)-2-(5-(三氟甲基)吡啶-3-基)-7，8，9，10-四氢-6h-5，9-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环辛四烯(0.6g，1.873mmol)、三乙胺(0.783ml，5.62mmol)在thf(12ml)中的溶液中添加三光气(0.278g，0.937mmol)且在室温搅拌30分钟。然后添加嘧啶-5-胺且将反应混合物在65℃搅拌16h。去除溶剂在减压下以得到粗物质且用二氯甲烷稀释，用水和盐水溶液洗涤且用无水na2so4干燥，在减压下蒸发有机层以得到粗产物。该粗产物混合物通过快速柱色谱法纯化(硅胶：100-200目，用ch2cl2中的2％meoh洗脱)以得到(9s)-n-(嘧啶-5-基)-2-(5-(三氟甲基)吡啶-3-基)-8，9-二氢-6h-5，9-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环辛四烯-10(7h)-甲酰胺(459mg，1.016mmol，54.2％产率)，其为白色固体(tlc：己烷中的80％etoac，rf＝0.5)，lcms(m/z)：442.2[m+h]+.
1hnmr(400mhz，dmso-d6)：δppm13.19(s，1h)，9.48(d，j＝2.19hz，1h)，9.08(s，1h)，8.96(s，1h)，8.88(s，1h)，8.71(s，1h)，7.85(d，j＝8.11hz，1h)，7.77(d，j＝7.89hz，1h)，4.84(s，1h)，3.43(dd，j＝13.59，1.97hz，1h)，3.33(s，2h)，2.90(d，j＝13.81hz，2h)，1.95(d，j＝10.30hz，2h)，1.33(m，2h)。
实施例4
合成(9s)-2-(2-甲基吡啶-4-基)-n-(吡啶-2-基)-8，9-二氢-6h-5，9-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环辛四烯-10(7h)-甲酰胺
将nah(0.297g，12.39mmol)添加至在氮气下在室温搅拌的(9s)-2-(2-甲基吡啶-4-基)-7，8，9，10-四氢-6h-5，9-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环辛四烯(0.550g，2.065mmol)在四氢呋喃(thf)(30ml)中的搅拌溶液中。然后将反应混合物在室温搅拌30分钟。在室温添加3-(吡啶-2-基)-2h-吡啶并[1，2-a][1，3，5]三嗪-2，4(3h)-二酮(0.744g，3.10mmol)。然后将反应混合物在65℃搅拌24小时。将反应混合物冷却至28℃且在水(20ml)和etoac(50ml)之间分配。将有机层分离且用无水na2so4干燥，过滤且将滤液蒸发以得到粗物质，其为棕色固体(tlc洗脱液：己烷中的70％etoac：rf＝0.3；uv活性)。该粗物质通过柱色谱纯化，使用(100-200目)硅胶且用己烷中的50-60％etoac洗脱以得到纯的(9s)-2-(2-甲基吡啶-4-基)-n-(吡啶-2-基)-8，9-二氢-6h-5，9-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环辛四烯-10(7h)-甲酰胺(0.292g，0.751mmol，36.4％产率)，其为淡黄色固体，lcms(m/z)：387[m+h]+.
1hnmr(400mhz，dmso-d6)：δppm13.99(s，1h)，8.59(d，j＝5.48hz，1h)，8.41-8.45(m，1h)，8.27(s，1h)，8.18(d，j＝8.33hz，1h)，7.97(brd，j＝3.73hz，1h)，7.82-7.86(m，2h)，7.71(d，j＝7.89hz，1h)，7.11-7.16(m，1h)，4.86(brs，1h)，3.40(brd，j＝13.37hz，1h)，3.29(s，2h)，2.91(brd，j＝13.15hz，1h)，2.64(s，3h)，1.93-2.05(m，2h)，1.32(brs，2h)
实施例5
合成(9s)-n-(5-氟吡啶-3-基)-2-(2-甲基吡啶-4-基)-8，9-二氢-6h-5，9-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环辛四烯-10(7h)-甲酰胺
向在氮气下在室温搅拌的(9s)-2-(2-甲基吡啶-4-基)-7，8，9，10-四氢-6h-5，9-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环辛四烯(0.6g，2.253mmol)在四氢呋喃(thf)(30ml)中的溶液中添加三乙胺(1.884ml，13.52mmol)和三光气(0.669g，2.253mmol)。然后反应混合物在室温搅拌30分钟。然后，在室温添加5-氟吡啶-3-胺(0.758g，6.76mmol)。且将反应混合物在65℃搅拌16小时。将反应混合物冷却至室温。反应混合物在减压下浓缩，然后在水(20ml)和二氯甲烷(50ml)之间分配。将有机层分离且用无水na2so4干燥，过滤且将滤液蒸发以得到粗物质，其为棕色固体(tlc洗脱液：100％etoac：rf-0.4；uv活性)。该粗物质通过柱色谱纯化，使用(100-200目)硅胶且用100％etoac洗脱以得到纯的(9s)-n-(5-氟吡啶-3-基)-2-(2-甲基吡啶-4-基)-8，9-二氢-6h-5，9-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环辛四烯-10(7h)-甲酰胺(0.314g，0.770mmol，34.2％产率)，其为淡黄色固体，lcms(m/z)：405.3[m+h]+.
1hnmr(400mhz，dmso-d6)：δ13.71(s，1h)，8.74-8.55(m，1h)，8.44(d，j＝1.7hz，1h)，8.29(d，j＝2.6hz，1h)，8.18-7.99(m，1h)，7.81(d，j＝1.7hz，1h)，7.73(d，j＝2.8hz，3h)，4.82(s，1h)，3.39(d，j＝1.9hz，1h)，3.30(s，2h)，2.92(s，1h)，2.57(s，3h)，2.01(s，2h)，1.32(s，2h)。
实施例6
合成(9s)-n-(哒嗪-3-基)-2-(2-(三氟甲基)吡啶-4-基)-8，9-二氢-6h-5，9-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环辛四烯-10(7h)-甲酰胺
在25℃在氮气下向(9s)-2-(2-(三氟甲基)吡啶-4-基)-7，8，9，10-四氢-6h-5，9-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环辛四烯(0.4g，1.249mmol)、哒嗪-3-基氨基甲酸苯基酯(0.806g，3.75mmol)在thf(8ml)中的搅拌溶液中添加dmap(0.458g，3.75mmol)。反应混合物在80℃加热16h。使之冷却至室温且真空去除溶剂以得到粗物质，用ch2cl2稀释且用水、盐水溶液洗涤，用无水na2so4干燥。有机层真空浓缩以得到粗化合物。该粗产物混合物通过快速柱色谱法纯化(硅胶：100-200目，洗脱液：ch2cl2中的4％meoh)以得到(9s)-n-(哒嗪-3-基)-2-(2-(三氟甲基)吡啶-4-基)-8，9-二氢-6h-5，9-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环辛四烯-10(7h)-甲酰胺(320mg，0.711mmol，56.9％产率)，其为白色固体(tlc：己烷中的80％etoacrf：0.6)，lcms(m/z)：442.2[m+h]+.
1hnmr(400mhz，dmso-d6)：δ14.27(s，1h)，8.98(dd，j＝4.7，1.5hz，1h)，8.90(d，j＝5.1hz，1h)，8.59-8.48(m，2h)，8.38(dd，j＝9.0，1.5hz，1h)，8.01(d，j＝8.1hz，1h)，7.79(d，j＝8.1hz，1h)，7.71(dd，j＝9.0，4.7hz，1h)，5.25-4.49(m，1h)，3.42(dd，j＝13.7，1.9hz，1h)，3.30(s，2h)，2.94(dt，j＝13.8，2.5hz，1h)，2.02(m，2h)，1.34(q，j＝5.2，4.4hz，2h)。
实施例7
合成(9s)-n-(吡啶-2-基)-2-(2-(三氟甲基)吡啶-4-基)-8，9-二氢-6h-5，9-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环辛四烯-10(7h)-甲酰胺
在室温向(9s)-2-(2-(三氟甲基)吡啶-4-基)-7，8，9，10-四氢-6h-5，9-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环辛四烯(0.250g，0.780mmol)在thf(5ml)中的溶液中一次性添加氢化钠(0.156g，3.90mmol)。将反应混合物在室温搅拌30分钟。然后添加3-(吡啶-2-基)-2h-吡啶并[1，2-a][1，3，5]三嗪-2，4(3h)-二酮(0.562g，2.341mmol)且在65℃搅拌反应混合物16h。使之冷却至室温且将其用冰冷却的水淬灭，用乙酸乙酯萃取(3x50ml)。合并的有机层用水洗涤，饱和盐水溶液，用硫酸钠干燥且在减压下浓缩以得到粗产物。该粗产物混合物通过快速柱色谱法纯化(硅胶：100-200目，洗脱液：ch2cl2中的2％meoh)以得到(9s)-n-(吡啶-2-基)-2-(2-(三氟甲基)吡啶-4-基)-8，9-二氢-6h-5，9-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环辛四烯-10(7h)-甲酰胺(302mg，0.681mmol，87％产率)，其为白色固体(tlc：己烷中的70％etoac，rf：0.5)，lcms(m/z)：441.3[m+h]+.
1hnmr(400mhz，dmso-d6)：δ13.85(s，1h)，8.94(d，j＝5.2hz，1h)，8.64(dd，j＝1.7，0.9hz，1h)，8.55-8.50(m，1h)，8.34(ddd，j＝4.8，2.0，0.9hz，1h)，8.15(dt，j＝8.3，1.0hz，1h)，7.98(d，j＝8.1hz，1h)，7.86-7.79(m，1h)，7.77(d，j＝8.0hz，1h)，7.12(ddd，j＝7.3，4.9，1.0hz，1h)，4.87(t，j＝2.6hz，1h)，3.41(dd，j＝13.6，1.9hz，1h)，3.30(s，2h)，2.92(d，j＝14.0hz，1h)，2.09-1.86(m，2h)，1.34(d，j＝8.5hz，2h)。
实施例8
合成(9s)-n-(吡啶-2-基)-2-(3-(三氟甲基)吡咯烷-1-基)-8，9-二氢-6h-5，9-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环辛四烯-10(7h)-甲酰胺
将nah(0.277g，11.53mmol)添加至(9s)-2-(3-(三氟甲基)吡咯烷-1-基)-7，8，9，10-四氢-6h-5，9-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环辛四烯(0.6g，1.921mmol)在四氢呋喃(thf)(20ml)中的溶液中且搅拌30分钟。然后在室温添加3-(吡啶-2-基)-2h-吡啶并[1，2-a][1，3，5]三嗪-2，4(3h)-二酮(0.692g，2.88mmol)。然后反应混合物在65℃搅拌24h。将反应混合物冷却至室温且在水(20ml)和etoac(50ml)之间分配。将有机层分离且用无水na2so4干燥，过滤且将滤液蒸发以得到粗物质，其为棕色固体(tlc洗脱液：己烷中的70％etoac：rf-0.3；uv活性)。该粗物质通过柱色谱纯化，使用(100-200目)硅胶，且用己烷中的50-60％etoac洗脱以得到立体异构体(9∶1)的混合物，其通过sfc进一步纯化得到纯的(9s)-n-(吡啶-2-基)-2-(3-(三氟甲基)吡咯烷-1-基)-8，9-二氢-6h-5，9-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环辛四烯-10(7h)-甲酰胺(0.422g，0.973mmol，50.6％产率)，其为灰白色固体，lcms(m/z)：433.3[m+h]+.
1hnmr(400mhz，dmso-d6)：δ13.81(s，1h)，8.23-8.18(m，1h)，8.11(dt，j＝8.3，1.0hz，1h)，7.76(ddd，j＝8.5，7.4，1.9hz，1h)，7.32(d，j＝8.5hz，1h)，7.04(ddd，j＝7.3，4.9，1.0hz，1h)，6.24(d，j＝8.5hz，1h)，4.71(s，1h)，3.96(d，j＝8.5hz，1h)，3.78(d，j＝7.0hz，1h)，3.74(s，1h)，3.66(d，j＝4.1hz，2h)，3.59-3.38(m，1h)，3.26(d，j＝1.9hz，1h)，3.12(dd，j＝12.7，3.5hz，1h)，3.05(s，1h)，2.80(d，j＝13.4hz，1h)，2.41-2.29(m，1h)，2.15(dd，j＝12.7，8.1hz，1h)，1.96(s，1h)，1.83(s，2h)，1.31(s，2h)。
实施例9
合成(9s)-n-(嘧啶-4-基)-2-(2-(三氟甲基)吡啶-4-基)-8，9-二氢-6h-5，9-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环辛四烯-10(7h)-甲酰胺
向在氮气下在25℃搅拌的(9s)-2-(2-(三氟甲基)吡啶-4-基)-7，8，9，10-四氢-6h-5，9-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环辛四烯(0.5g，1.561mmol)、三乙胺(0.653ml，4.68mmol)在thf(10ml)中的溶液中一次性添加碳酸二(三氯甲基)酯(0.232g，0.780mmol)。将反应混合物在25℃搅拌30分钟。然后一次性添加嘧啶-4-胺(0.445g，4.68mmol)，反应在65℃搅拌16h。使之冷却至室温且溶剂真空去除，粗物质用dcm稀释，用水、盐水溶液洗涤，用硫酸钠干燥且真空浓缩以得到粗化合物。该粗产物混合物通过制备型hplc纯化以得到(9s)-n-(嘧啶-4-基)-2-(2-(三氟甲基)吡啶-4-基)-8，9-二氢-6h-5，9-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环辛四烯-10(7h)-甲酰胺(199mg，0.446mmol，28.6％产率)，其为白色固体(tlc：己烷中的70％etoac，rf：0.6)，lcms(m/z)：442.3[m+h]+.
1hnmr(400mhz，dmso-d6)：δ14.18(s，1h)，8.97(d，j＝5.1hz，1h)，8.85(d，j＝1.2hz，1h)，8.69(d，j＝5.8hz，1h)，8.60(dd，j＝1.9，0.8hz，1h)，8.50(dd，j＝5.1，1.7hz，1h)，8.12(dd，j＝5.8，1.3hz，1h)，8.02(d，j＝8.1hz，1h)，7.80(d，j＝8.1hz，1h)，4.93-4.73(m，1h)，3.42(dd，j＝13.7，1.9hz，1h)，3.32(d，j＝8.2hz，2h)，2.93(dt，j＝13.9，2.5hz，1h)，2.12-1.83(m，2h)，1.33(d，j＝7.8hz，2h)。
实施例10
合成(9s)-n-(嘧啶-5-基)-2-(2-(三氟甲基)吡啶-4-基)-8，9-二氢-6h-5，9-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环辛四烯-10(7h)-甲酰胺
在25℃在氮气氛下向(9s)-2-(2-(三氟甲基)吡啶-4-基)-7，8，9，10-四氢-6h-5，9-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环辛四烯(0.5g，1.561mmol)、三乙胺(0.653ml，4.68mmol)在thf(10ml)中的溶液中添加碳酸二(三氯甲基)酯(0.232g，0.780mmol)且在室温搅拌30分钟。然后添加嘧啶-5-胺(0.445g，4.68mmol)且将反应混合物在65℃加热16h。使之冷却至室温且溶剂在旋转蒸发器上去除，粗物质用ch2cl2稀释(20ml)且用水(5ml)、盐水溶液(5ml)洗涤，然后用硫酸钠干燥。有机溶剂在减压下蒸发以得到粗产物。该粗产物混合物通过制备型hplc纯化(甲酸，acn25％)以得到(9s)-n-(嘧啶-5-基)-2-(2-(三氟甲基)吡啶-4-基)-8，9-二氢-6h-5，9-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环辛四烯-10(7h)-甲酰胺(250mg，0.56mmol，45％产率)，其为灰白色固体(tlc：己烷中的80％etoac，rf：0.5)，lcms(m/z)：442.3[m+h]+.
1hnmr(400mhz，dmso-d6)：δ13.07(s，1h)，9.08-8.72(m，4h)，8.38(dd，j＝1.7，0.9hz，1h)，8.28(dd，j＝5.2，1.6hz，1h)，7.90(d，j＝8.0hz，1h)，7.79(d，j＝8.0hz，1h)，4.85(t，j＝2.7hz，1h)，3.43(dd，j＝13.7，1.9hz，1h)，3.33(d，j＝10.1hz，2h)，2.91(d，j＝13.7hz，1h)，2.15-1.79(m，2h)，1.33(s，2h)。
实施例11
合成(9s)-n-(吡啶-2-基)-2-(3-(三氟甲基)哌啶-1-基)-8，9-二氢-6h-5，9-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环辛四烯-10(7h)-甲酰胺
将nah(0.110g，4.60mmol)添加至在氮气下在室温搅拌的(9s)-2-(3-(三氟甲基)哌啶-1-基)-7，8，9，10-四氢-6h-5，9-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环辛四烯(源自中间sfc分离的峰-ii，0.250g，0.766mmol)在四氢呋喃(thf)(20ml)中的搅拌溶液中。将反应混合物在室温搅拌30分钟。然后在室温添加3-(吡啶-2-基)-2h-吡啶并[1，2-a][1，3，5]三嗪-2，4(3h)-二酮(0.276g，1.149mmol)。然后反应混合物在65℃搅拌24小时。反应冷却至室温且在水(10ml)和etoac(50ml)之间分配。将有机层分离且用无水na2so4干燥，过滤且将滤液蒸发以得到粗物质，其为棕色固体(tlc洗脱液：己烷中的70％etoac：rf-0.3；uv活性)。该粗物质通过柱色谱纯化，使用(100-200目)硅胶且用己烷中的50-60％etoac洗脱以得到纯的(9s)-n-(吡啶-2-基)-2-(3-(三氟甲基)哌啶-1-基)-8，9-二氢-6h-5，9-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环辛四烯-10(7h)-甲酰胺(0.2g，0.439mmol，57.3％产率)，其为灰白色固体，lcms(m/z)：447.2[m+h]+.
1hnmr(400mhz，dmso-d6)：δ13.50(s，1h)，8.32-8.18(m，1h)，8.16-8.03(m，1h)，7.76(ddd，j＝8.8，7.4，2.0hz，1h)，7.35(d，j＝8.6hz，1h)，7.05(dd，j＝7.8，4.5hz，1h)，6.60(d，j＝8.7hz，1h)，4.72(d，j＝2.7hz，1h)，4.27(s，2h)，3.31-3.24(m，1h)，3.22-2.89(m，4h)，2.80(d，j＝13.3hz，1h)，2.51(s，1h)，1.99(t，j＝12.7hz，2h)，1.85(d，j＝11.6hz，2h)，1.75-1.43(m，2h)，1.25(s，2h)。
实施例12
合成(9s)-2-(2-甲基吡啶-4-基)-n-(嘧啶-4-基)-8，9-二氢-6h-5，9-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环辛四烯-10(7h)-甲酰胺
在25℃向(9s)-2-(2-甲基吡啶-4-基)-7，8，9，10-四氢-6h-5，9-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环辛四烯(0.350g，1.314mmol)、dmap(0.482g，3.94mmol)在thf(7ml)中的搅拌溶液中添加嘧啶-4-基氨基甲酸苯基酯(0.848g，3.94mmol)。将反应混合物在80℃搅拌16h。真空去除溶剂且粗物质用ch2cl2稀释(20ml)且用水(5ml)、饱和盐水溶液(5ml)洗涤，且用na2so4干燥。有机溶剂在减压下蒸发以得到粗产物。该粗产物混合物通过快速柱色谱法纯化(硅胶：100-200目，用ch2cl2中的3％meoh洗脱)以得到(9s)-2-(2-甲基吡啶-4-基)-n-(嘧啶-4-基)-8，9-二氢-6h-5，9-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环辛四烯-10(7h)-甲酰胺(207mg，0.529mmol，40.3％产率)，其为白色固体(tlc：dcm中的10％meoh，rf：0.7)，lcms(m/z)：388.3[m+h]+.
1hnmr(400mhz，dmso-d6)：δ14.32(s，1h)，8.95(d，j＝1.3hz，1h)，8.69(d，j＝5.8hz，1h)，8.61(d，j＝5.3hz，1h)，8.17(d，j＝1.7hz，1h)，8.15(dd，j＝5.8，1.3hz，1h)，7.95(dd，j＝5.3，1.8hz，1h)，7.86(d，j＝8.1hz，1h)，7.74(d，j＝8.1hz，1h)，4.90-4.67(m，1h)，3.40(dd，j＝13.7，1.9hz，1h)，3.28(s，2h)，3.00-2.81(m，1h)，2.64(s，3h)，2.13-1.71(m，2h)，1.41-1.14(m，2h)。
实施例13
合成(9s)-2-(2-甲基吡啶-4-基)-n-(吡嗪-2-基)-8，9-二氢-6h-5，9-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环辛四烯-10(7h)-甲酰胺
向在氮气下在室温搅拌的(9s)-2-(2-甲基吡啶-4-基)-7，8，9，10-四氢-6h-5，9-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环辛四烯(0.700g，2.63mmol)在四氢呋喃(thf)(30ml)中的溶液中添加三乙胺(2.198ml，15.77mmol)和三光气(0.780g，2.63mmol)。然后将反应混合物在室温搅拌30分钟。在室温添加吡嗪-2-胺(0.750g，7.88mmol)。然后将反应混合物在65℃搅拌24小时。将反应混合物浓缩至干，然后在水(20ml)和二氯甲烷(50ml)之间分配。将有机层分离且用无水na2so4干燥，过滤且将滤液蒸发以得到粗物质，其为棕色固体。该粗物质通过柱色谱纯化，使用(100-200目)硅胶以得到纯的(9s)-2-(2-甲基吡啶-4-基)-n-(吡嗪-2-基)-8，9-二氢-6h-5，9-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环辛四烯-10(7h)-甲酰胺，其为淡黄色固体，lcms(m/z)：388.3[m+h]+.
1hnmr(400mhz，cdcl3)：δ14.27(s，1h)，9.59(d，j＝0.9hz，1h)，8.67-8.60(m，1h)，8.32(d，j＝1.0hz，2h)，8.10(dt，j＝1.9，0.7hz，1h)，7.74-7.67(m，1h)，7.62-7.50(m，2h)，5.06-5.00(m，1h)，3.51-3.27(m，3h)，3.03(d，j＝13.6hz，1h)，2.74(s，3h)，2.26(s，1h)，2.08-1.84(m，1h)，1.43(d，j＝6.2hz，2h)。
实施例14
合成(9s)-2-(2-甲基吡啶-4-基)-n-(哒嗪-3-基)-8，9-二氢-6h-5，9-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环辛四烯-10(7h)-甲酰胺
在25℃向(9s)-2-(2-甲基吡啶-4-基)-7，8，9，10-四氢-6h-5，9-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环辛四烯(0.150g，0.563mmol)、哒嗪-3-基氨基甲酸苯基酯(0.364g，1.690mmol)在thf(3ml)中的搅拌溶液在添加dmap(0.206g，1.690mmol)。将反应混合物在80℃搅拌16h。溶剂在减压下去除，粗化合物用dcm稀释(10ml)，用水(3ml)、饱和盐水溶液(3ml)洗涤，用na2so4干燥且在减压下浓缩以得到粗产物。该粗产物混合物通过快速柱色谱法纯化(硅胶：100-200目，洗脱液：ch2cl2中的2％meoh)以得到(9s)-2-(2-甲基吡啶-4-基)-n-(哒嗪-3-基)-8，9-二氢-6h-5，9-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环辛四烯-10(7h)-甲酰胺(271mg，0.692mmol，123％产率)，其为白色固体(tlc：ch2cl2中的10％meoh，rf：0.6)，lcms(m/z)：388.3[m+h]+.
1hnmr(400mhz，cdcl3)：δ14.66(s，1h)，8.94(dd，j＝4.7，1.5hz，1h)，8.66(dd，j＝5.2，0.8hz，1h)，8.50(dd，j＝9.1，1.5hz，1h)，8.29(d，j＝1.8hz，1h)，7.74(dd，j＝5.4，1.8hz，1h)，7.57(d，j＝4.3hz，2h)，7.46(dd，j＝9.0，4.7hz，1h)，5.00(p，j＝2.6hz，1h)，3.50-3.22(m，3h)，3.12-2.96(m，1h)，2.82(s，3h)，2.39-2.10(m，1h)，1.95(tdd，j＝14.2，5.5，3.0hz，1h)，1.58-1.33(m，2h)。
实施例15
合成(9s)-n-(2-甲基-2h-吲唑-5-基)-2-(2-甲基吡啶-4-基)-8，9-二氢-6h-5，9-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环辛四烯-10(7h)-甲酰胺
在氮气氛下在室温将dmap(0.550g，4.51mmol)添加至(9s)-2-(2-甲基吡啶-4-基)-7，8，9，10-四氢-6h-5，9-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环辛四烯(0.4g，1.502mmol)和(2-甲基-2h-吲唑-5-基)氨基甲酸苯基酯(0.803g，3.00mmol)在四氢呋喃(thf)(30ml)中的搅拌溶液中。将反应在70℃搅拌48小时。反应冷却至室温且在减压下浓缩。将etoac添加至反应物质且搅拌10分钟，然后过滤且固体用etoac洗涤。提取滤液且浓缩以得到粗物质，其为棕色固体(tlc洗脱液：80％etoac：rf-0.4；uv活性)。该粗物质通过柱色谱使用中性氧化铝纯化且用己烷中的60％etoac洗脱以得到纯的(9s)-n-(2-甲基-2h-吲唑-5-基)-2-(2-甲基吡啶-4-基)-8，9-二氢-6h-5，9-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环辛四烯-10(7h)-甲酰胺(0.18g，0.406mmol，27.1％产率)，其为灰白色固体，lcms(m/z)：440.4[m+h]+.
1hnmr(400mhz，cdcl3)：δ13.44(s，1h)，8.66(d，j＝5.2hz，1h)，8.18(dd，j＝1.9，0.8hz，1h)，7.82(d，j＝0.9hz，1h)，7.69(d，j＝1.6hz，1h)，7.63(d，j＝9.1hz，1h)，7.60-7.50(m，2h)，7.40(d，j＝7.9hz，1h)，7.27-7.19(m，1h)，5.05(t，j＝2.7hz，1h)，4.20(s，3h)，3.50-3.23(m，3h)，3.01(d，j＝13.5hz，1h)，2.67(s，3h)，2.28(s，1h)，1.93(s，1h)，1.58(s，2h)。
实施例16
合成(9s)-2-(2-甲基吡啶-4-基)-n-(嘧啶-5-基)-8，9-二氢-6h-5，9-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环辛四烯-10(7h)-甲酰胺
将(9s)-2-(2-甲基吡啶-4-基)-7，8，9，10-四氢-6h-5，9-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环辛四烯(0.6g，2.253mmol)、三乙胺(0.942ml，6.76mmol)和碳酸二(三氯甲基)酯(0.334g，1.126mmol)在thf(12ml)中的溶液在氮气下在室温搅拌30分钟。然后一次性添加嘧啶-5-胺(0.643g，6.76mmol)。将反应混合物在65℃搅拌16h。去除溶剂在减压下且所得粗物质用ch2cl2稀释(35ml)，用水(5ml)、饱和盐水溶液(5ml)洗涤，用无水na2so4干燥且在减压下浓缩以得到粗产物。该粗产物混合物通过快速柱色谱法纯化(硅胶：100-200目，洗脱液：ch2cl2中的3％meoh)以得到半纯的化合物。该半纯的化合物再通过制备型hplc纯化(30％acn/水)以得到(9s)-2-(2-甲基吡啶-4-基)-n-(嘧啶-5-基)-8，9-二氢-6h-5，9-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环辛四烯-10(7h)-甲酰胺(261mg，0.667mmol，29.6％产率)，其为白色固体(tlc：ch2cl2中的10％meoh，rf：0.4)，lcms(m/z)：388[m+h]+.
1hnmr(400mhz，cdcl3)：δ13.81(s，1h)，9.03(s，2h)，8.94(s，1h)，8.69(dd，j＝5.2，0.9hz，1h)，7.75-7.55(m，2h)，7.55-7.46(m，1h)，7.43(d，j＝8.0hz，1h)，5.08-4.89(m，1h)，3.49-3.17(m，3h)，3.02(d，j＝13.7hz，1h)，2.69(s，3h)，2.36-2.13(m，1h)，2.06-1.79(m，1h)，1.59-1.32(m，2h)。
实施例17
合成(9s)-n-(吡嗪-2-基)-2-(2-(三氟甲基)吡啶-4-基)-8，9-二氢-6h-5，9-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环辛四烯-10(7h)-甲酰胺
在室温向(9s)-2-(2-(三氟甲基)吡啶-4-基)-7，8，9，10-四氢-6h-5，9-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环辛四烯(0.9g，2.81mmol)在thf(18ml)中的搅拌溶液中添加碳酸二(三氯甲基)酯(0.417g，1.405mmol)且搅拌30分钟。然后添加吡嗪-2-胺和et3n(2.94ml，21.8mmol)。将反应混合物在65℃搅拌16h。有机溶剂在减压下去除且加入ch2cl2(30ml)。有机层用水(5ml)、饱和盐水溶液(5ml)洗涤，用无水na2so4干燥且在减压下浓缩以得到粗产物。该粗产物混合物通过快速柱色谱法纯化(硅胶：100-200目，洗脱液：dcm中的4％meoh)以得到(9s)-n-(吡嗪-2-基)-2-(2-(三氟甲基)吡啶-4-基)-8，9-二氢-6h-5，9-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环辛四烯-10(7h)-甲酰胺(476mg，1.059mmol，37.7％产率)，其为白色固体(tlc：己烷中的80％etoac，rf：0.5)，lcms(m/z)：442.2[m+h]+.
1hnmr(400mhz，cdcl3)：δ14.06(s，1h)，9.56(d，j＝1.4hz，1h)，8.87(d，j＝5.1hz，1h)，8.46(dd，j＝1.8，0.9hz，1h)，8.37-8.23(m，2h)，8.14(dd，j＝5.1，1.7hz，1h)，7.63(d，j＝8.0hz，1h)，7.56(s，1h)，5.15-4.92(m，1h)，3.52-3.26(m，3h)，3.03(d，j＝14.0hz，1h)，2.26(s，1h)，2.05-1.88(m，1h)，1.53-1.29(m，2h)。
实施例18
合成(9s)-n-(嘧啶-2-基)-2-(3-(三氟甲基)哌啶-1-基)-8，9-二氢-6h-5，9-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环辛四烯-10(7h)-甲酰胺
向(9s)-2-(3-(三氟甲基)哌啶-1-基)-7，8，9，10-四氢-6h-5，9-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环辛四烯(源自中间sfc分离的峰1，500mg，1.532mmol)在四氢呋喃(500ml)中的溶液中，添加dmap(562mg，4.60mmol)和2-(嘧啶-2-基)乙酸苯基酯(985mg，4.60mmol)。将反应混合物在65℃搅拌28小时。反应混合物用水(50ml)稀释且用etoac萃取(2x75ml)。合并的有机层用水且用饱和盐水溶液洗涤且用无水na2so4干燥，过滤且浓缩以得到粗物质，其为白色固体(tlc洗脱液：dcm中的10％meoh：rf-0.4；uv活性)。粗产物通过柱色谱纯化(中性氧化铝)且产物用己烷中的25％乙酸乙酯洗脱以得到(9s)-n-(嘧啶-2-基)-2-(3-(三氟甲基)哌啶-1-基)-8，9-二氢-6h-5，9-亚甲基-吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环辛四烯-10(7h)-甲酰胺(320mg，0.711mmol，46.4％产率)，其为灰白色固体。lcms(m/z)448.3[m+h]+.
1hnmr(400mhz，dmso-d6)：δ13.80(s，1h)，8.62(d，j＝4.8hz，2h)，7.36(d，j＝8.6hz，1h)，7.15(t，j＝4.8hz，1h)，6.61(d，j＝8.6hz，1h)，4.69(s，1h)，4.30(d，j＝12.7hz，1h)，4.20(d，j＝13.0hz，1h)，3.26(d，j＝1.9hz，1h)，3.20-2.89(m，4h)，2.79(d，j＝13.4hz，1h)，2.55(d，j＝10.8hz，1h)，1.99(d，j＝12.6hz，2h)，1.82(h，j＝6.1hz，2h)，1.72-1.44(m，2h)，1.42-1.15(m，2h)。
实施例19
合成(9s)-n-(4，5-二甲基噻唑-2-基)-2-(2-甲基吡啶-4-基)-8，9-二氢-6h-5，9-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环辛四烯-10(7h)-甲酰胺
在30℃向(9s)-2-(2-甲基吡啶-4-基)-7，8，9，10-四氢-6h-5，9-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环辛四烯(600mg，2.253mmol)在thf(15ml)中的溶液中添加三乙胺(0.942ml，6.76mmol)和三光气(334mg，1.126mmol)且搅拌1h。然后在30℃添加4，5-二甲基噻唑-2-胺盐酸盐(556mg，3.38mmol)且反应在70℃加热16h。溶剂在减压下蒸发，残余物用水(40ml)稀释且用dcm萃取(2x40ml)。合并的有机层用水、盐水洗涤，用无水硫酸钠干燥且在减压下蒸发溶剂以得到粗化合物。该粗产物混合物通过快速柱色谱法和制备型hplc纯化以得到(9s)-n-(4，5-二甲基噻唑-2-基)-2-(2-甲基吡啶-4-基)-8，9-二氢-6h-5，9-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环辛四烯-10(7h)-甲酰胺(275mg，0.655mmol，42％产率)，其为淡黄色固体(tlc：etoac中的10％meoh，rf：0.3)，lcms(m/z)：421.27[m+h]+.
1hnmr(400mhz，cdcl3)：δppm14.79(s，2h)，8.64(d，j＝5.26hz，2h)，8.02(s，1h)，7.64(dd，j＝5.26，1.53hz，1h)，7.54(q，j＝8.11hz，1h)，4.99(s，1h)，3.42-3.18(m，3h)，3.12-2.89(m，1h)，2.79(s，3h)，2.28(s，3h)，2.22(s，3h)，2.00-1.75(m，1h)，1.52-1.35(m，2h)。
实施例20
合成(9s)-n-(6-甲氧基吡嗪-2-基)-2-(2-甲基吡啶-4-基)-8，9-二氢-6h-5，9-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环辛四烯-10(7h)-甲酰胺
向在氮气下在室温搅拌的(9s)-2-(2-甲基吡啶-4-基)-7，8，9，10-四氢-6h-5，9-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环辛四烯(0.6g，2.253mmol)在四氢呋喃(thf)(30ml)中的溶液中添加三乙胺(1.884ml，13.52mmol)和三光气(0.669g，2.253mmol)。然后反应混合物在室温搅拌30分钟。在室温添加6-甲氧基吡嗪-2-胺(0.846g，6.76mmol)。然后将反应混合物在65℃搅拌16小时。将反应混合物冷却至室温且在减压下浓缩且在水(20ml)和etoac(50ml)之间分配。将有机层分离且用无水na2so4干燥，过滤且将滤液蒸发以得到粗物质，其为棕色固体(tlc洗脱液：100％etoac：rf-0.3；uv活性)。该粗物质通过柱色谱使用中性氧化铝纯化且用己烷中的50％etoac洗脱以得到纯的(9s)-n-(6-甲氧基吡嗪-2-基)-2-(2-甲基吡啶-4-基)-8，9-二氢-6h-5，9-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环辛四烯-10(7h)-甲酰胺(0.220g，0.526mmol，23.34％产率)，其为灰白色固体，lcms(m/z)：418.3[m+h]+.
1hnmr(400mhz，cdcl3)：δ13.64(s，1h)，9.45-8.78(m，1h)，8.60(dd，j＝5.3，0.8hz，1h)，7.96(d，j＝0.5hz，1h)，7.80(ddd，j＝5.3，1.7，0.7hz，1h)，7.62(dt，j＝1.8，0.7hz，1h)，7.59(s，1h，7.57(s，1h)，7.46(d，j＝8.0hz，1h)，5.04(t，j＝2.6hz，1h)，3.84(s，3h)，3.57-3.26(m，3h)，3.15-2.91(m，1h)，2.64(s，3h)，2.28(d，j＝14.3hz，1h)，2.12-1.85(m，1h)，1.43(s，2h)
实施例21
合成((9s)-n-(6-甲基吡嗪-2-基)-2-(2-甲基吡啶-4-基)-8，9-二氢-6h-5，9-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环辛四烯-10(7h)-甲酰胺：
在25℃将三光气(0.279g，0.939mmol)添加至(9s)-2-(2-甲基吡啶-4-基)-7，8，9，10-四氢-6h-5，9-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环辛四烯(0.25g，0.939mmol)在四氢呋喃(50ml)中的搅拌溶液中。在70℃添加三乙胺(0.654ml，4.69mmol)，然后添加6-甲基吡嗪-2-胺(0.410g，3.75mmol)。将反应混合物搅拌15h。将反应混合物冷却至28℃且在水(50ml)和二氯甲烷(50ml)之间分配。分离的有机层用水和盐水洗涤。有机层用硫酸钠干燥，过滤且将滤液蒸发以得到粗化合物(tlc洗脱液：etoac中的10％meoh；rf＝0.4；uv活性)。该粗化合物通过使用中性氧化铝纯化且在100％乙酸乙酯中洗脱以得到(9s)-n-(6-甲基吡嗪-2-基)-2-(2-甲基吡啶-4-基)-8，9-二氢-6h-5，9-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环辛四烯-10(7h)-甲酰胺(0.11g，0.272mmol，29.0％产率)，其为黄色固体，lcms(m/z)：402.26[m+h]+.
1hnmr(cdcl3，400mhz)：δ14.02(s，1h)，9.37(s，1h)，8.68(d，j＝5.26hz，1h)，8.13-8.26(m，1h)，7.98(dd，j＝5.26，1.75hz，1h)，7.69-7.80(m，1h)，7.49-7.63(m，2h)，5.03(t，j＝2.19hz，1h)，3.30-3.47(m，2h)，3.03(brd，j＝13.81hz，1h)，2.69(s，2h)，2.49-2.59(m，2h)，2.15-2.30(m，1h)，1.84-1.99(m，1h)，1.24-1.66(m，3h)。
实施例22
合成(9s)-n-(嘧啶-2-基)-2-(3-(三氟甲基)哌啶-1-基)-8，9-二氢-6h-5，9-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环辛四烯-10(7h)-甲酰胺
向(9s)-2-(3-(三氟甲基)哌啶-1-基)-7，8，9，10-四氢-6h-5，9-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环辛四烯(源自中间sfc分离的峰ii，0.600g，1.838mmol)在四氢呋喃(thf)(30ml)中的溶液中添加dmap(0.674g，5.52mmol)和嘧啶-2-基氨基甲酸苯基酯(1.187g，5.52mmol)且在65℃搅拌36小时。反应冷却至室温，然后在减压下浓缩。残余物在水(10ml)和etoac(50ml)之间分配。将有机层分离且用无水na2so4干燥，过滤且将滤液蒸发以得到粗物质，其为棕色固体(tlc洗脱液：己烷中的80％etoac：rf-0.3；uv活性)。该粗物质通过柱色谱使用中性氧化铝纯化且用己烷中的35-40％etoac洗脱以得到纯的(9s)-n-(嘧啶-2-基)-2-(3-(三氟甲基)哌啶-1-基)-8，9-二氢-6h-5，9-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环辛四烯-10(7h)-甲酰胺(0.375g，0.834mmol，45.4％产率)，其为灰白色固体，lcms(m/z)：448.3[m+h]+.
1hnmr(400mhz，cdcl3)：δ13.97(s，1h)，8.59(d，j＝4.8hz，2h)，7.31(d，j＝8.6hz，1h)，6.93(t，j＝4.8hz，1h)，6.40(d，j＝8.6hz，1h)，4.93(q，j＝2.6hz，1h)，4.44-4.07(m，2h)，3.31(d，j＝1.9hz，1h)，3.19(d，j＝3.4hz，2h)，3.10-2.81(m，3h)，2.44(dtt，j＝15.6，7.7，3.9hz，1h)，2.29(d，j＝13.4hz，1h)，2.17-2.07(m，1h)，1.93(dt，j＝13.2，3.3hz，1h)，1.85(ddd，j＝13.8，5.3，3.1hz，2h)，1.77-1.68(m，1h)，1.55-1.43(m，1h)，1.31(d，j＝14.0hz，1h)。
实施例23
合成(9s)-n-(吡啶-2-基)-2-(3-(三氟甲基)哌啶-1-基)-8，9-二氢-6h-5，9-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环辛四烯-10(7h)-甲酰胺
将nah(0.154g，6.43mmol)添加至在氮气下在0℃搅拌的(9s)-2-(3-(三氟甲基)哌啶-1-基)-7，8，9，10-四氢-6h-5，9-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环辛四烯(源自中间sfc分离的峰-i，0.350g，1.072mmol)在四氢呋喃(25ml)中的溶液中。将反应混合物在30℃搅拌30分钟且添加3-(吡啶-2-基)-2h-吡啶并[1，2-a][1，3，5]三嗪-2，4(3h)-二酮(0.386g，1.609mmol)。将反应混合物在65℃搅拌24hrs。将反应混合物冷却至室温且用甲醇(5ml)淬灭。反应混合物用水稀释且用etoac萃取(2x100ml)。有机层用水洗涤然后用盐水溶液洗涤且用na2so4干燥，过滤且在减压下浓缩以得到粗物质，其为棕色固体。将粗物质通过柱色谱法使用中性氧化铝纯化且用己烷中的60％乙酸乙酯洗脱以得到纯的(9s)-n-(吡啶-2-基)-2-(3-(三氟甲基)哌啶-1-基)-8，9-二氢-6h-5，9-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环辛四烯-10(7h)-甲酰胺(0.320g，0.708mmol，66.0％产率)，其为灰白色固体，lcms(m/z)：447.34[m+h]+.
1hnmr(400mhz，cdcl3)：δ13.58(s，1h)，8.46-8.04(m，2h)，7.65(ddd，j＝8.9，7.3，1.9hz，1h)，7.35-7.10(m，1h)，6.94(ddd，j＝7.3，4.9，1.1hz，1h)，6.38(d，j＝8.6hz，1h)，5.10-4.73(m，1h)，4.59-4.37(m，1h)，4.31-4.19(m，1h)，3.30(dd，j＝13.4，1.9hz，1h)，3.26-3.13(m，2h)，3.06-2.88(m，3h)，2.48-2.36(m，j＝16.3，8.3，4.1hz，1h)，2.21(d，j＝14.4hz，1h)，2.12(d，j＝12.1hz，1h)，1.94(s，1h)，1.88-1.68(m，2h)，1.67-1.57(m，1h)，1.50(s，1h)，1.31(d，j＝13.6hz，1h)。
实施例24
合成(9s)-n-(5-氟吡啶-2-基)-2-(3-(三氟甲基)哌啶-1-基)-8，9-二氢-6h-5，9-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环辛四烯-10(7h)-甲酰胺
向(9s)-2-(3-(三氟甲基)哌啶-1-基)-7，8，9，10-四氢-6h-5，9-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环辛四烯(中间sfc分离的峰-ii，0.600g，1.838mmol)在四氢呋喃(thf)(30ml)中的溶液中添加dmap(0.674g，5.52mmol)和(5-氟吡啶-2-基)氨基甲酸苯基酯(1.281g，5.52mmol)。将反应混合物在65℃搅拌36小时。反应冷却至室温且在减压下浓缩。残余物在水(10ml)和etoac(50ml)之间分配。将有机层分离且用无水na2so4干燥，过滤且将滤液蒸发以得到粗物质，其为棕色固体(tlc洗脱液：己烷中的80％etoac：rf-0.3；uv活性)。该粗物质通过柱色谱使用中性氧化铝纯化且用己烷中的25-30％etoac洗脱以得到纯的(9s)-n-(5-氟吡啶-2-基)-2-(3-(三氟甲基)哌啶-1-基)-8，9-二氢-6h-5，9-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环辛四烯-10(7h)-甲酰胺(0.288g，0.608mmol，33.1％产率)，其为白色固体，lcms(m/z)：465.3[m+h]+.
1hnmr(400mhz，cdcl3)：δ13.62(s，1h)，8.20(ddd，j＝9.2，4.1，0.6hz，1h)，8.09(s，1h)，7.39(ddd，j＝9.1，7.8，3.0hz，1h)，7.30(d，j＝8.5hz，1h)，6.39(d，j＝8.6hz，1h)，4.87(p，j＝2.8hz，1h)，4.30(dtt，j＝12.5，3.7，1.8hz，2h)，3.31(dd，j＝13.4，1.9hz，1h)，3.25-3.13(m，2h)，3.07-2.85(m，3h)，2.44(dt，j＝7.4，3.6hz，1h)，2.26-2.05(m，2h)，1.99-1.83(m，2h)，1.78-1.66(m，1h)，1.62(dd，j＝12.4，3.8hz，1h)，1.53-1.44(m，1h)，1.37-1.26(m，1h)。
实施例25
合成(9s)-n-(吡啶-3-基)-2-(3-(三氟甲基)哌啶-1-基)-8，9-二氢-6h-5，9-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环辛四烯-10(7h)-甲酰胺
向(9s)-2-(3-(三氟甲基)哌啶-1-基)-7，8，9，10-四氢-6h-5，9-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环辛四烯(中间sfc分离的峰-i，600mg，1.838mmol)在四氢呋喃(30ml)中的溶液中，添加dmap(674mg，5.52mmol)和吡啶-3-基氨基甲酸苯基酯(1182mg，5.52mmol)。将反应混合物在65℃搅拌16小时。反应混合物用水(50ml)稀释且用乙酸乙酯萃取(2x75ml)。合并的有机层用水且用饱和盐水溶液洗涤且用无水硫酸钠干燥，过滤且浓缩以得到粗物质，其为白色固体。(tlc洗脱液：100％纯的乙酸乙酯；rf值：0.4；uv活性)。粗产物通过柱色谱纯化(中性氧化铝)，产物用己烷中的25％乙酸乙酯洗脱以得到(9s)-n-(吡啶-3-基)-2-(3-(三氟甲基)哌啶-1-基)-8，9-二氢-6h-5，9-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环辛四烯-10(7h)-甲酰胺(350mg，0.782mmol，42.5％产率)，其为灰白色固体，lcms(m/z)：447.26[m+h]+.
1hnmr(400mhz，cdcl3)：δ12.94(s，1h)，8.62(dd，j＝2.6，0.7hz，1h)，8.32(dd，j＝4.7，1.5hz，1h)，8.15(ddd，j＝8.4，2.7，1.5hz，1h)，7.33(d，j＝8.5hz，1h)，7.29-7.24(m，1h)，6.41(d，j＝8.6hz，1h)，4.90(t，j＝2.6hz，1h)，4.22-4.04(m，2h)，3.31(dd，j＝13.5，1.9hz，1h)，3.25-3.14(m，2h)，2.99-2.88(m，3h)，2.48-2.36(m，1h)，2.25-2.18(m，1h)，2.13(dd，j＝13.2，4.0hz，1h)，1.98-1.92(m，1h)，1.85(tdd，j＝13.9，5.2，2.9hz，1h)，1.71(dtd，j＝16.5，8.3，7.7，4.3hz，1h)，1.63(d，j＝3.8hz，1h)，1.57-1.44(m，1h)，1.33(d，j＝14.2hz，1h)。
实施例26
合成(9s)-n-(1-甲基-1h-吡唑-4-基)-2-(2-甲基吡啶-4-基)-8，9-二氢-6h-5，9-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环辛四烯-10(7h)-甲酰胺
在室温将dmap(0.573g，4.69mmol)添加至(9s)-2-(2-甲基吡啶-4-基)-7，8，9，10-四氢-6h-5，9-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环辛四烯(0.5g，1.877mmol)和(1-甲基-1h-吡唑-4-基)氨基甲酸苯基酯(1.01g，4.692mmol)在四氢呋喃(10ml)中的搅拌溶液中且在80℃在封闭管中加热至24h。将反应混合物冷却至28℃，且用乙酸乙酯和水稀释。分离有机层且用水和盐水洗涤。有机层用硫酸钠干燥且在减压下蒸发以得到粗化合物(tlc洗脱液：etoac中的10％meoh；rf-0.4；uv活性)。该粗化合物通过使用中性氧化铝纯化且用己烷中的75％乙酸乙酯洗脱以得到(9s)-n-(1-甲基-1h-吡唑-4-基)-2-(2-甲基吡啶-4-基)-8，9-二氢-6h-5，9-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环辛四烯-10(7h)-甲酰胺(0.17g，0.430mmol，22.89％产率)，其为灰白色固体，lcms(m/z)：390.28[m+h]+.
1hnmr(cdcl3，400mhz)：δ13.27(s，1h)，8.67(d，j＝5.26hz，1h)，7.87(s，1h)，7.63(d，j＝1.53hz，1h)，7.53-7.57(m，2h)，7.43(d，j＝0.66hz，1h)，7.40(s，1h)，4.99(t，j＝2.30hz，1h)，3.89(s，3h)，3.22-3.42(m，3h)，2.98(brd，j＝13.59hz，1h)，2.70(s，3h)，2.20-2.28(m，1h)，1.92(tdd，j＝13.67，13.67，5.54，3.07hz，1h)，1.32-1.50(m，2h)。
实施例27
合成(9s)-n-(吡嗪-2-基)-2-(3-(三氟甲基)哌啶-1-基)-8，9-二氢-6h-5，9-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环辛四烯-10(7h)-甲酰胺
将叠氮磷酸二苯酯(1.996g，7.25mmol)添加至在氩气下在室温搅拌的吡嗪-2-甲酸(中间sfc分离的峰-ii，0.600g，4.83mmol)和dipea(4.22ml，24.17mmol)在四氢呋喃(thf)(60ml)中的搅拌溶液中。将反应混合物在室温搅拌2hr且添加(9s)-2-(3-(三氟甲基)哌啶-1-基)-7，8，9，10-四氢-6h-5，9-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环辛四烯(1.105g，3.38mmol)。将反应混合物在65℃搅拌16hr。将反应混合物冷却至室温且在减压下浓缩。残余物在水(30ml)和etoac(100ml)之间分配。将有机层分离且用无水na2so4干燥，过滤且将滤液蒸发以得到粗物质，其为棕色固体(tlc洗脱液：100％etoac：rf-0.3；uv活性)。该粗物质通过柱色谱使用中性氧化铝纯化且用己烷中的50％etoac洗脱以得到纯的(9s)-n-(吡嗪-2-基)-2-(3-(三氟甲基)哌啶-1-基)-8，9-二氢-6h-5，9-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环辛四烯-10(7h)-甲酰胺(0.367g，0.815mmol，16.86％产率)，其为淡黄色固体，lcms(m/z)：448.3[m+h]+.
1hnmr(400mhz，cdcl3)：δ13.79(s，1h)，9.53(d，j＝1.5hz，1h)，8.25(d，j＝2.5hz，1h)，8.20(d，j＝1.6hz，1h)，7.32(d，j＝8.6hz，1h)，6.42(d，j＝8.6hz，1h)，4.90(s，1h)，4.28(s，2h)，3.32(dd，j＝13.5，1.9hz，1h)，3.21(dd，j＝12.5，3.3hz，2h)，3.10-2.86(m，3h)，2.44(dt，j＝7.6，3.6hz，1h)，2.28-2.18(m，1h)，2.11(d，j＝3.6hz，1h)，1.99-1.80(m，2h)，1.78-1.65(m，1h)，1.65-1.60(m，1h)，1.49(s，1h)，1.35(s，1h)。
实施例28
合成(9s)-n-(吡啶-3-基)-2-(3-(三氟甲基)哌啶-1-基)-8，9-二氢-6h-5，9-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环辛四烯-10(7h)-甲酰胺
向(9s)-2-(3-(三氟甲基)哌啶-1-基)-7，8，9，10-四氢-6h-5，9-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环辛四烯(中间sfc分离的峰-ii，(源自中间sfc分离的峰-ii，0.700g，2.145mmol)在四氢呋喃(thf)(70ml)中的溶液中添加dmap(0.786g，6.43mmol)和吡啶-3-基氨基甲酸苯基酯(1.378g，6.43mmol)，在65℃搅拌36hr，然后将反应冷却至室温且在减压下浓缩。残余物在水(20ml)和etoac(75ml)之间分配。将有机层分离且用无水na2so4干燥，过滤且将滤液蒸发以得到粗物质，其为棕色固体(tlc洗脱液：己烷中的80％etoac：rf-0.3；uv活性)。该粗物质通过柱色谱使用中性氧化铝纯化且用己烷中的50％etoac洗脱以得到纯的(9s)-n-(吡啶-3-基)-2-(3-(三氟甲基)哌啶-1-基)-8，9-二氢-6h-5，9-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环辛四烯-10(7h)-甲酰胺(0.355g，0.794mmol，37.0％产率)，其为白色固体，lcms(m/z)：447.3[m+h]+.
1h-nmr(400mhz，cdcl3)：δppm12.92(s，1h)，8.62(d，j＝2.63hz，1h)，8.32(dd，j＝4.71，1.43hz，1h)，8.08-8.21(m，1h)，7.33(d，j＝8.55hz，1h)，7.20-7.29(m，1h)，6.40(d，j＝8.55hz，1h)，4.90(brs，1h)，4.00-4.21(m，2h)，3.31(dd，j＝13.48，1.86hz，1h)，3.17-3.26(m，2h)，2.88-3.03(m，3h)，2.36-2.49(m，1h)，2.19-2.25(m，1h)，2.10-2.16(m，1h)，1.92-1.99(m，1h)，1.86(tdd，j＝13.84，13.84，5.10，2.96hz，1h)，1.65-1.76(m，1h)，1.46-1.58(m，2h)，1.29-1.38(m，1h)
实施例29
合成(9s)-n-(5-氟吡啶-2-基)-2-(3-(三氟甲基)哌啶-1-基)-8，9-二氢-6h-5，9-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环辛四烯-10(7h)-甲酰胺
向(9s)-2-(3-(三氟甲基)哌啶-1-基)-7，8，9，10-四氢-6h-5，9-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环辛四烯(源自sfc分离的峰-i，450mg，1.379mmol)在四氢呋喃(30ml)中的溶液中，添加dmap(505mg，4.14mmol)和(5-氟吡啶-2-基)氨基甲酸苯基酯(961mg，4.14mmol)。将反应混合物在65℃搅拌16小时。反应混合物用水(50ml)稀释且用乙酸乙酯萃取(2x75ml)。合并的有机层用水且用饱和盐水溶液洗涤且用无水硫酸钠干燥，过滤且浓缩以得到粗物质，其为灰白色固体。(tlc洗脱液：100％乙酸乙酯；rf值：0.4；uv活性)。粗产物通过柱色谱纯化(中性氧化铝)，产物用己烷中的25％乙酸乙酯洗脱以得到(9s)-n-(5-氟吡啶-2-基)-2-(3-(三氟甲基)哌啶-1-基)-8，9-二氢-6h-5，9-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环辛四烯-10(7h)-甲酰胺(140mg，0.296mmol，21.46％产率)，其为白色固体，lcms(m/z)：465.21[m+h]+.
1hnmr(400mhz，cdcl3)：δppm1.15-1.43(m，1h)1.43-1.68(m，2h)1.68-1.89(m，3h)2.04-2.28(m，2h)2.42(dtd，j＝11.67，7.92，7.92，4.06hz，1h)2.86-3.09(m，3h)3.10-3.36(m，3h)4.23-4.47(m，2h)4.87(brs，1h)6.39(d，j＝8.55hz，1h)7.3(d，j＝8.8hz，1h)7.34-7.59(m，1h)8.09(d，j＝2.8hz，1h)8.20(dd，j＝9.21，4.17hz，1h)13.65(s，1h)。
实施例30
合成(9s)-n-(吡嗪-2-基)-2-(3-(三氟甲基)哌啶-1-基)-8，9-二氢-6h-5，9-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环辛四烯-10(7h)-甲酰胺
将吡嗪-2-甲酸(0.6g，4.83mmol)在四氢呋喃(50ml)中的悬浮液中添加叠氮磷酸二苯酯(1.996g，7.25mmol)和dipea(4.22ml，24.17mmol)。将反应混合物在28℃搅拌2hr，将(9s)-2-(3-(三氟甲基)哌啶-1-基)-7，8，9，10-四氢-6h-5，9-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环辛四烯(源自中间sfc分离的峰-i1.105g，3.38mmol)添加至反应混合物。将反应混合物在65℃搅拌16hr。反应混合物用水稀释(50ml)且用乙酸乙酯(2x75ml)萃取。合并的有机层用水且用饱和盐水溶液洗涤且用无水na2so4干燥，过滤且浓缩以得到粗物质，其为灰白色固体。(tlc洗脱液：100％乙酸乙酯；rf值：0.3；uv活性)。粗产物通过柱色谱纯化(中性氧化铝)，产物用己烷中的30％乙酸乙酯洗脱以得到(9s)-n-(吡嗪-2-基)-2-(3-(三氟甲基)-哌啶-1-基)-8，9-二氢-6h-5，9-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环辛四烯-10(7h)-甲酰胺(0.330g，0.728mmol，15.05％产率)，其为白色固体，lcms(m/z)：448.25[m+h]+.
1hnmr(400mhz，cdcl3)：6ppm1.31-1.34(m，1h)1.45-1.67(m，2h)1.68-1.79(m，1h)1.82-1.99(m，2h)2.05-2.18(m，2h)2.42(dddt，j＝15.65，11.78，8.03，3.97，3.97hz，1h)2.86-3.09(m，3h)3.11-3.35(m，3h)4.21-4.39(m，2h)4.89(brs，1h)6.42(d，j＝8.55hz，1h)7.32(d，j＝8.4hz，1h)8.14-8.20(m，1h)8.24(d，j＝2.8hz，1h)9.53(d，j＝1.53hz，1h)13.81(s，1h)
实施例31
合成(9s)-n-(吡啶-2-基)-2-(3-(三氟甲基)吡咯烷-1-基)-8，9-二氢-6h-5，9-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环辛四烯-10(7h)-甲酰胺盐酸盐
在0℃将乙醚中的2.0m氢氯酸(2ml，4.00mmol)添加至(9s)-n-(吡啶-2-基)-2-(3-(三氟甲基)吡咯烷-1-基)-8，9-二氢-6h-5，9-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环辛四烯-10(7h)-甲酰胺(180mg，0.416mmol)。将反应混合物在28℃搅拌4h且浓缩以得到粗化合物(tlc洗脱液：dcm中的5％meoh：rf-0.1；uv活性)。该粗化合物用乙醚(2x5ml)洗涤以得到纯的(9s)-n-(吡啶-2-基)-2-(3-(三氟甲基)吡咯烷-1-基)-8，9-二氢-6h-5，9-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环辛四烯-10(7h)-甲酰胺盐酸盐(83mg，0.177mmole，42.78％产率)，其为浅棕色固体，lcms(m/z)：433.28[m+h]+.
1hnmr(400mhz，cdcl3)：δ15.02(brs，1h)，13.34(brs，1h)，8.25(brd，j＝3.73hz，1h)，8.13(brd，j＝8.33hz，1h)，8.06(d，j＝8.77hz，1h)，7.75-7.68(m，1h)，7.04-6.98(m，1h)，6.15(s，1h)，5.30-5.24(b，s，1h)，4.12-3.94(m，2h)，3.73-3.59(m，4h)，3.49-3.37(m，2h)，3.18-3.04(m，1h)，2.45-2.25(m，3h)，1.86(d，j＝12.50hz，2h)。
实施例32
合成(9s)-2-(2-甲基吡啶-4-基)-n-(吡啶-3-基)-8，9-二氢-6h-5，9-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环辛四烯-10(7h)-甲酰胺
在氮气氛下在室温向(9s)-2-(2-甲基吡啶-4-基)-7，8，9，10-四氢-6h-5，9-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环辛四烯(300mg，1.126mmol)在thf(30ml)中的搅拌溶液中添加吡啶-3-基氨基甲酸苯基酯(724mg，3.38mmol)、dmap(413mg，3.38mmol)且在65℃搅拌48h。(tlc洗脱液：dcm中的5％meoh：rf-0.4；uv活性)。将反应混合物冷却至室温，浓缩且残余物在水(20ml)和etoac(100ml)之间分配。将有机层分离，用无水na2so4干燥，过滤且将滤液蒸发以得到粗化合物。该粗物质通过柱色谱纯化(中性氧化铝，洗脱液：dcm中的2％meoh)以得到所需产物(9s)-2-(2-甲基吡啶-4-基)-n-(吡啶-3-基)-8，9-二氢-6h-5，9-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环辛四烯-10(7h)-甲酰胺(200mg，0.516mmol，45.8％产率)，其为淡黄色固体。lcms(m/z)：387.09[m+h]+，rt＝1.21分钟。
1hnmr(400mhz，cdcl3)：δppm13.61(s，1h)，8.84-8.62(m，2h)，8.33(dd，j＝4.71，1.21hz，1h)，8.17(dd，j＝8.33，1.54hz，1h)，7.63(s，1h)，7.58(d，j＝7.89hz，1h)，7.52(brd，j＝5.04hz，1h)，7.42(d，j＝8.11hz，1h)，7.28(brd，j＝4.60hz，1h)，5.02(brs，1h)，3.45-3.31(m，3h)，3.01(brd，j＝13.59hz，1h)，2.69(s，3h)，2.27(brd，j＝12.93hz，1h)，3.01-1.85(m，1h)，1.54-1.32(m，2h)。
实施例33
合成(9s)-3-氯-n2-环丙基-n10-(吡啶-2-基)-8，9-二氢-6h-5，9-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环辛四烯-2，10(7h)-二甲酰胺.
在氮气下在室温向(9s)-3-氯-10-(吡啶-2-基氨基甲酰基)-7，8，9，10-四氢-6h-5，9-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环辛四烯-2-甲酸(650mg，1.739mmol)在dmf(6ml)中的搅拌溶液中，添加dipea(0.911ml，5.22mmol)、hatu(1322mg，3.48mmol)和环丙烷胺(119mg，2.087mmol)，然后将反应混合物搅拌16h。(tlc体系：dcm中的5％甲醇。rf值：0.30)。反应物质用50ml冰冷却的水稀释，用etoac萃取(3x100ml)。合并的有机层用盐水洗涤(100ml)，用na2so4干燥，过滤且浓缩以得到粗化合物。粗物质通过combiflash纯化(使用硅胶柱，75％etoac在己烷中)。将含纯的化合物的级分合并且浓缩以得到所需化合物(9s)-3-氯-n2-环丙基-n10-(吡啶-2-基)-8，9-二氢-6h-5，9-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环辛四烯-h)-二甲酰胺(97mg，0.229mmol，13.15％产率)，其为灰白色固体。lcms(m/z)：413.10[m+h]+，rt＝1.84分钟。
1hnmr(400mhz，cdcl3)：δppm13.12(brs，1h)，8.33(dd，j＝4.93，0.99hz，1h)，8.14(d，j＝8.33hz，1h)，7.51-7.76(m，2h)，7.60(m，1h)，7.09(br，1h)，4.97(brs，1h)，3.23-3.44(m，3h)，3.04(ddt，j＝10.91，7.18，3.89，3.89hz，1h)，2.93(brd，j＝13.81hz，1h)，2.10-2.32(m，1h)，1.80-2.07(m，1h)，1.22-1.46(m，2h)，0.81-0.98(m，4h)
实施例34
合成(9s)-n10-(4-((r)-2，3-二羟基丙氧基)吡啶-2-基)-n2-((r)-1，1，1-三氟丙-2-基)-8，9-二氢-6h-5，9-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环辛四烯-2，10(7h)-二甲酰胺：
在0℃向(9s)-n10-(4-(((s)-2，2-二甲基-1，3-二氧杂环戊烷-4-基)甲氧基)吡啶-2-基)-n2-((r)-1，1，1-三氟丙-2-基)-8，9-二氢-6h-5，9-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环辛四烯-2，10(7h)-二甲酰胺(200mg，0.354mmol)在甲醇(10ml)中的溶液中经5分钟滴加hcl水溶液(0.308ml，3.54mmol)，且在室温搅拌1h。(tlc体系：100％乙酸乙酯.rf值：0.3)。然后反应混合物用饱和nahco3溶液(20ml)淬灭且用dcm萃取(2x30ml)。合并的有机层用无水硫酸钠干燥且在减压下浓缩以得到粗产物。粗产物用戊烷∶乙醚(1∶1)研磨以得到所需纯度的所需产物(9s)-n10-(4-((r)-2，3-二羟基丙氧基)吡啶-2-基)-n2-((r)-1，1，1-三氟丙-2-基)-8，9-二氢-6h-5，9-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环辛四烯-2，10(7h)-二甲酰胺(100mg，0.187mmol，52.7％产率)，其为灰白色固体。lcms(m/z)：525.14[m+h]+，rt＝1.53分钟。
1hnmr(400mhz，cdcl3)：δppm13.84(s，1h)，8.16(brd，j＝9.21hz，1h)，8.09(d，j＝5.92hz，1h)，8.00(d，j＝7.89hz，1h)，7.80(d，j＝2.19hz，1h)，7.61(d，j＝7.89hz，1h)，6.60(dd，j＝5.81，2.30hz，1h)，5.17-5.04(m，1h)，4.96(brs，1h)，4.25-4.03(m，3h)，3.89-3.71(m，2h)，3.44-3.18(m，3h)，2.96(brd，j＝14.03hz，1h)，2.59(brs，1h)，2.22(brd，j＝14.47hz，1h)，2.06-1.76(m，2h)，1.60(d，j＝7.02hz，3h)，1.45-1.33(m，2h)。
实施例35
合成(9s)-n2-(2，2-二氟丙基)-n10-(4-((r)-2，3-二羟基丙氧基)吡啶-2-基)-8，9-二氢-6h-5，9-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环辛四烯-2，10(7h)-二甲酰胺
在0℃向(9s)-n2-(2，2-二氟丙基)-n10-(4-(((s)-2，2-二甲基-1，3-二氧杂环戊烷-4-基)甲氧基)吡啶-2-基)-8，9-二氢-6h-5，9-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环辛四烯-2，10(7h)-二甲酰胺(210mg，0.384mmol)在甲醇(10ml)中的溶液中经5分钟滴加hcl水溶液(0.667ml，7.68mmol)且在室温搅拌1h。(tlc体系：100％乙酸乙酯。rf值：0.3)。然后，反应混合物用饱和nahco3溶液(20ml)淬灭且用dcm萃取(2x30ml)。合并的有机层用无水硫酸钠干燥且在减压下浓缩且用戊烷∶乙醚(1∶1)研磨以得到所需产物(9s)-n2-(2，2-二氟丙基)-n10-(4-((r)-2，3-二羟基丙氧基)吡啶-2-基)-8，9-二氢-6h-5，9-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环辛四烯-2，10(7h)-二甲酰胺(95mg，0.186mmol，48.5％产率)，其为灰白色固体。lcms(m/z)：507.14[m+h]+，rt＝1.40分钟。
1hnmr(400mhz，cdcl3)：δppm14.25(s，1h)，8.69(brt，j＝6.47hz，1h)，8.12(d，j＝5.92hz，1h)，7.95(d，j＝8.11hz，1h)，7.71(d，j＝2.19hz，1h)，7.60(d，j＝7.89hz，1h)，6.58(dd，j＝5.92，2.41hz，1h)，4.94(brs，1h)，4.24-4.08(m，3h)，4.04-3.90(m，2h)，3.87-3.73(m，2h)，3.43-3.24(m，3h)，2.97(brd，j＝14.03hz，1h)，2.62-2.50(m，1h)，2.27-2.16(m，1h)，2.08-1.89(m，2h)，1.69(t，j＝18.64hz，3h)，1.465-1.35(m，2h)。
实施例36
合成(9s)-n2-环丙基-n10-(吡啶-2-基)-8，9-二氢-6h-5，9-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环辛四烯-2，10(7h)-二甲酰胺
在氮气下在0℃向(9s)-10-(吡啶-2-基氨基甲酰基)-7，8，9，10-四氢-6h-5，9-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环辛四烯-2-甲酸(6g，17.68mmol)在dmf(60ml)中的搅拌溶液中添加dipea(9.26ml，53.0mmol)、hatu(13.45g，35.4mmol)和环丙烷胺(1.514g，26.5mmol)且将反应混合物在室温搅拌16h。(tlc体系：己烷中的70％乙酸乙酯，rf值：0.3)。向反应混合物添加冰冷却的水(100ml)且搅拌15分钟。将所得固体过滤，干燥且通过combiflash色谱法纯化(使用硅胶柱，用dcm中的3％甲醇洗脱)以得到(9s)-n2-环丙基-n10-(吡啶-2-基)-8，9-二氢-6h-5，9-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环辛四烯-2，10(7h)-二甲酰胺(4.05g，10.70mmol，60.5％产率)，其为灰白色固体。lcms(m/z)：379.16[m+h]+，rt＝1.97分钟。
1hnmr(400mhz，cdcl3)：δppm13.70-14.14(m，1h)，8.29-8.42(m，1h)，8.16(dt，j＝8.33，0.88hz，2h)，7.97(d，j＝7.89hz，1h)，7.72(td，j＝7.84，1.64hz，1h)，7.58(d，j＝7.89hz，1h)，7.04(ddd，j＝7.29，4.99，1.10hz，1h)，4.97(t，j＝2.19hz，1h)，3.29-3.42(m，3h)，3.10(ddt，j＝10.93，7.32，3.92，3.92hz，1h)，2.96(brd，j＝13.59hz，1h)，2.16-2.29(m，1h)，1.86-1.99(m，1h)，1.59(s，1h)，1.32-1.45(m，2h)，0.81-1.02(m，4h)。
实施例37
合成(9s)-n10-(吡啶-2-基)-n2-(2，2，2-三氟乙基)-8，9-二氢-6h-5，9-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环辛四烯-2，10(7h)-二甲酰胺
在氮气下在0℃向(9s)-10-(吡啶-2-基氨基甲酰基)-7，8，9，10-四氢-6h-5，9-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环辛四烯-2-甲酸(7g，20.63mmol)在dmf(50ml)中的搅拌溶液中添加dipea(10.81ml，61.9mmol)、hatu(15.69g，41.3mmol)和2，2，2-三氟乙胺(2.248g，22.69mmol)然后将反应在室温搅拌16h。(tlc体系：己烷中的70％乙酸乙酯，rf值：0.3)。向反应混合物添加冰冷却的水(200ml)且搅拌30分钟。将所得固体过滤，干燥且通过combiflash色谱法纯化(使用硅胶柱，用dcm中的3％甲醇洗脱)以得到产物，其为灰白色固体。在80℃将固体产物溶于乙醇(500ml)且添加钯清除剂(silicyclebrand，8g)且持续加热5h。反应混合物通过硅藻土过滤，将滤液浓缩以得到(9s)-n10-(吡啶-2-基)-n2-(2，2，2-三氟乙基)-8，9-二氢-6h-5，9-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环辛四烯-2，10(7h)-二甲酰胺(8.1g，19.17mmol，93％产率)，其为灰白色固体。lcms(m/z)：421.1[m+h]+，rt＝2.23分钟。
1hnmr(400mhz，cdcl3)：δppm14.13-14.37(m，1h)，8.71(brt，j＝5.92hz，1h)，8.25(dd，j＝4.93，0.99hz，1h)，8.11(d，j＝8.33hz，1h)，7.96(d，j＝7.89hz，1h)，7.70-7.77(m，1h)，7.61(d，j＝7.89hz，1h)，7.00-7.05(m，1h)，4.97(t，j＝2.30hz，1h)，4.13-4.37(m，2h)，3.27-3.45(m，3h)，2.97(brd，j＝13.59hz，1h)，2.18-2.27(m，1h)，1.87-2.00(m，1h)，1.34-1.46(m，2h)。
实施例38
合成(9s)-3-氯-n10-(吡啶-2-基)-n2-(2，2，2-三氟乙基)-8，9-二氢-6h-5，9-亚甲基吡啶并[2，3-b]h，4]二氮杂环辛四烯-2，10(7h)-二甲酰胺.
在氮气下在室温向(9s)-3-氯-10-(吡啶-2-基氨基甲酰基)-7，8，9，10-四氢-6h-5，9-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环辛四烯-2-甲酸(900mg，2.408mmol)在乙腈(15ml)中的悬浮液中添加dipea(1.262ml，7.22mmol)、2-氯-1-甲基吡啶-1-鎓碘化物(615mg，2.408mmol)和2，2，2-三氟乙胺(238mg，2.408mmol)，然后所得反应混合物搅拌16h。(tlc体系：己烷中的75％etoac，rf值：0.30)。反应物质用100ml水稀释且用etoac萃取(2x150ml)。合并的有机层用盐水(80ml)洗涤，用na2so4干燥，过滤且浓缩以得到粗物质。粗物质通过combiflash纯化(使用硅胶柱，70％etoac在己烷中)。将包含化合物的级分合并且浓缩以得到所需化合物(9s)-3-氯-n10-(吡啶-2-基)-n2-(2，2，2-三氟乙基)-8，9-二氢-6h-5，9-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环辛四烯-2，10(7h)-二甲酰胺(52mg，0.114mmol，4.75％产率)，其为灰白色固体。lcms(m/z)：455.05[m+h]+，rt＝2.17分钟。
1hnmr(400mhz，cdcl3)：δppm13.43(s，1h)，8.29-8.49(m，1h)，8.25(d，j＝4.17hz，1h)，8.11(d，j＝8.33hz，1h)，7.67-7.84(m，1h)，7.59(s，1h)，6.95-7.14(m，1h)，4.97(brs，1h)，4.12-4.37(m，2h)，3.28-3.44(m，3h)，2.95(brd，j＝13.81hz，1h)，2.10-2.33(m，1h)，1.86-2.07(m，1h)，1.25-1.50(m，2h)。
实施例39
合成(9s)-3-氯-n10-(吡啶-2-基)-n2-((r)-1，1，1-三氟丙-2-基)-8，9-二氢-6h-5，9-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环辛四烯-2，10(7h)-二甲酰胺.
在氮气下在室温向(9s)-3-氯-10-(吡啶-2-基氨基甲酰基)-7，8，9，10-四氢-6h-5，9-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环辛四烯-2-甲酸(500mg，1.338mmol)在dmf(6ml)中的搅拌溶液中添加dipea(0.701ml，4.01mmol)、hatu(1017mg，2.68mmol)和(r)-1，1，1-三氟丙-2-胺(182mg，1.605mmol)，然后所得反应混合物在室温搅拌16h。(tlc体系：dcm中的5％meoh，rf值：0.30)。反应物质用50ml冰冷却的水稀释，用etoac萃取(2x100ml)。合并的有机层用盐水(80ml)洗涤，用na2so4干燥，过滤且浓缩以得到粗化合物。粗物质通过combiflash纯化(使用硅胶柱，80％etoac在己烷中)。将包含化合物的级分合并且浓缩以得到所需化合物，其通过lcms测定具有60％纯度。其进一步通过制备型hplc纯化(柱：kromsilphenyl(150x25)mm10μ；mp-a：10mm碳酸氢铵(aq)，mp-b：乙腈；方法：50∶50；流速：20ml/min溶解：acn+thf)以得到所需产物(9s)-3-氯-n10-(吡啶-2-基)-n2-((r)-1，1，1-三氟丙-2-基)-8，9-二氢-6h-5，9-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环辛四烯-2，10(7h)--二甲酰胺(50mg，0.106mmol，7.93％产率)，其为灰白色固体。lcms(m/z)：469.16[m+h]+，rt＝2.22分钟。
1hnmr(400mhz，cdcl3)：δppm12.89(s，1h)，8.27(d，j＝4.17hz，1h)，8.15(d，j＝8.33hz，1h)，7.64-7.80(m，2h)，7.59(s，1h)，6.90-7.15(m，1h)，5.09(dq，j＝16.83，7.55hz，1h)，4.89-5.01(m，1h)，3.26-3.44(m，3h)，2.94(brd，j＝13.81hz，1h)，2.14-2.35(m，1h)，1.85-2.09(m，1h)，1.39-1.63(m，3h)，1.40-1.32(s，2h)。
实施例40
合成(9s)-n10-(异噁唑-3-基)-n2-((r)-1，1，1-三氟丙-2-基)-8，9-二氢-6h-5，9-亚甲基吡啶并[2，3-b]11，4]二氮杂环辛四烯-2，10(7h)-二甲酰胺
在氮气下在室温向(9s)-10-(异噁唑-3-基氨基甲酰基)-7，8，9，10-四氢-6h-5，9-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环辛四烯-2-甲酸(400mg，1.215mmol)和(r)-1，1，1-三氟丙-2-胺(206mg，1.822mmol)在dmf(15ml)中的搅拌溶液中添加hatu(554mg，1.458mmol)、dipea(0.424ml，2.429mmol)且搅拌16h。(tlc体系：乙酸乙酯。rf值：0.6)。反应混合物用冰冷却的水(30ml)淬灭且用乙酸乙酯萃取(3x50ml)。合并的有机层用盐水溶液(30ml)洗涤，用无水硫酸钠干燥且在减压下浓缩以得到粗化合物。粗产物通过快速柱色谱法纯化(硅胶，使用石油醚中的60％乙酸乙酯)以得到所需产物(9s)-n10-(异噁唑-3-基)-n2-((r)-1，1，1-三氟丙-2-基)-8，9-二氢-6h-5，9-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环辛四烯-2，10(7h)-二甲酰胺(160mg，0.373mmol，30.7％产率)，其为灰白色固体。lcms(m/z)：425.09[m+h]+，rt＝2.14分钟。
1hnmr(400mhz，cdcl3)：δppm13.55(s，1h)，8.30(d，j＝1.32hz，1h)，7.96(d，j＝7.89hz，1h)，7.62(d，j＝7.89hz，1h)，7.23(brs，1h)，6.99(d，j＝1.75hz，1h)，4.89-5.05(m，2h)，3.32-3.47(m，3h)，2.96(brd，j＝13.81hz，1h)，2.22(dt，j＝14.69，2.96hz，1h)，1.90-2.02(m，1h)，1.64(d，j＝7.02hz，3h)，1.33-1.45(m，2h)。
实施例41
合成(9s)-n10-(6-甲基-1h-吡唑并[3，4-b]吡啶-3-基)-n2-(2，2，2-三氟乙基)-8，9-二氢-6h-5，9-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环辛四烯-2，10(7h)-二甲酰胺.
在氮气氛下在28℃向(9s)-10-((6-甲基-1h-吡唑并[3，4-b]吡啶-3-基)氨基甲酰基)-7，8，9，10-四氢-6h-5，9-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环辛四烯-2-甲酸(200mg，0.508mmol)在n，n-二甲基甲酰胺(5ml)中的搅拌溶液中添加hatu(193mg，0.508mmol)和dipea(0.089ml，0.508mmol)且搅拌30分钟。在室温随后添加2，2，2-三氟乙胺盐酸盐(103mg，0.763mmol)且将反应混合物在28℃搅拌16h。(tlc：10％meoh/ch2cl2，rf值：0.4)。反应混合物用水(40ml)稀释且用etoac萃取(2x40ml)。合并的有机层用无水na2so4干燥，过滤且将滤液蒸发以得到粗化合物。粗产物通过快速柱色谱法纯化(硅胶：100-200目，洗脱液：5％甲醇/dcm)以得到所需产物(9s)-n10-(6-甲基-1h-吡唑并[3，4-b]吡啶-3-基)-n2-(2，2，2-三氟乙基)-8，9-二氢-6h-5，9-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环辛四烯-2，10(7h)-二甲酰胺(100mg，0.211mmol，41.5％产率)，其为灰白色固体。lcms(m/z)：475.10[m+h]+，rt＝1.96分钟。
1hnmr(400mhz，cdcl3-d)：δppm13.85(s，1h)，10.39(s，1h)，8.75(d，j＝8.33hz，1h)，8.04-7.90(m，2h)，7.63(d，j＝7.89hz，1h)，7.03(d，j＝8.55hz，1h)，5.00(d，j＝2.19hz，1h)，4.37-4.12(m，2h)，3.48-3.30(m，3h)，3.00(d，j＝13.59hz，1h)，2.69(s，3h)，2.37-2.25(m，1h)，2.07-1.88(m，1h)，1.48-1.39(m，2h)。
实施例42
合成(9s)-n2-环丙基-n10-(6-甲基-1h-吡唑并[3，4-b]吡啶-3-基)-8，9-二氢-6h-5，9-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环辛四烯-2，10(7h)-二甲酰胺
在室温向(9s)-10-((6-甲基-1h-吡唑并[3，4-b]吡啶-3-基)氨基甲酰基)-7，8，9，10-四氢-6h-5，9-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环辛四烯-2-甲酸(300mg，0.763mmol)、hatu(435mg，1.144mmol)和dipea(0.400ml，2.288mmol)在dmf(15ml)中的搅拌溶液中添加环丙烷胺(65.3mg，1.144mmol)且在室温搅拌反应混合物16h。(tlc：纯的乙酸乙酯，rf值：0.3，uv活性)。反应混合物用水(100ml)稀释且用etoac萃取(2x100ml)。合并的有机层用饱和盐水溶液(50ml)洗涤且用无水na2so4干燥，过滤且将滤液蒸发以得到粗化合物。粗产物通过快速柱色谱法纯化(硅胶：100-200目，洗脱液：正己烷中的80％乙酸乙酯)以得到所需产物(9s)-n2-环丙基-n10-(6-甲基-1h-吡唑并[3，4-b]吡啶-3-基)-8，9-二氢-6h-5，9-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环辛四烯-2，10(7h)-二甲酰胺(90mg，0.202mmol，26.5％产率)，其为灰白色固体。lcms(m/z)：433.16[m+h]+，rt＝1.76分钟。
1hnmr(400mhz，cdcl3)：δppm13.67-13.63(m，1h)，13.65(s，1h)，11.16(s，1h)，8.71(d，j＝8.33hz，1h)，7.93(d，j＝7.89hz，1h)，7.60(d，j＝8.11hz，1h)，7.52(d，j＝2.85hz，1h)，7.03(d，j＝8.55hz，1h)，5.01(s，1h)，3.42-3.31(m，3h)，3.12-3.05(m，1h)，3.00(d，j＝13.81hz，1h)，2.73(s，3h)，2.27(d，j＝14.47hz，1h)，2.01-1.88(m，1h)，1.45-1.36(m，2h)，0.91-0.85(m，3h)。
实施例43
合成(9s)-n10-(6-甲基-1h-吡唑并[3，4-b]吡啶-3-基)-n2-((r)-1，1，1-三氟丙-2-基)-8，9-二氢-6h-5，9-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环辛四烯-2，10(7h)-二甲酰胺
在室温向(9s)-10-((6-甲基-1h-吡唑并[3，4-b]吡啶-3-基)氨基甲酰基)-7，8，9，10-四氢-6h-5，9-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环辛四烯-2-甲酸(200mg，0.508mmol)、hobt(97mg，0.635mmol)、edc(122mg，0.635mmol)和dipea(0.266ml，1.525mmol)在dmf(15ml)中的搅拌溶液中添加(r)-1，1，1-三氟丙-2-胺(69.0mg，0.610mmol)且将反应混合物在室温搅拌16h。(tlc：纯的乙酸乙酯，rf值：0.3，uv活性)。反应混合物用水稀释(100ml)且用etoac萃取(2x100ml)。合并的有机层用盐水溶液(50ml)洗涤且用无水na2so4干燥，过滤且将滤液蒸发以得到粗化合物。粗产物通过快速柱色谱法纯化(使用100-200硅胶，化合物用正己烷中的80％乙酸乙酯洗脱)以得到所需产物(9s)-n10-(6-甲基-1h-吡唑并[3，4-b]吡啶-3-基)-n2-((r)-1，1，1-三氟丙-2-基)-8，9-二氢-6h-5，9-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环辛四烯-2，10(7h)-二甲酰胺(119mg，0.237mmol，46.6％产率)，其为灰白色固体。lcms：(m/z)：489.2[m+h]+，rt＝2.06分钟。
1hnmr(400mhz，cdcl3)：δppm13.63(s，1h)，10.14(s，1h)，8.69(d，j＝8.33hz，1h)，7.96(d，j＝7.89hz，1h)，7.69(d，j＝9.21hz，1h)，7.62(d，j＝7.89hz，1h)，7.03(d，j＝8.55hz，1h)，5.12-4.95(m，2h)，3.51-3.18(m，3h)，2.93-3.05(m，1h)，2.68(s，3h)，2.29(d，j＝14.47hz，1h)，2.04-1.87(m，1h)，1.57(s，3h)，1.49-1.25(m，2h)。
实施例44
合成(9s)-n10-(4-(2-甲基噻唑-5-基)吡啶-2-基)-n2-((r)-1，1，1-三氟丙-2-基)-8，9-二氢-6h-5，9-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环辛四烯-2，10(7h)-二甲酰胺
在氮气下在室温向(9s)-n10-(4-溴吡啶-2-基)-n2-((r)-1，1，1-三氟丙-2-基)-8，9-二氢-6h-5，9-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环辛四烯-2，10(7h)-二甲酰胺(350mg，0.682mmol)和2-甲基-5-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧杂硼杂环戊烷-2-基)噻唑(230mg，1.023mmol)在1，4-二噁烷(20ml)和水(1.0ml)中的溶液中添加k3po4(434mg，2.046mmol)且通过吹洗氩气20分钟而脱气。然后添加pdcl2(dppf)-ch2cl2加合物(55.7mg，0.068mmol)且混合物在110℃保持3.5h。(tlc体系：100％乙酸乙酯.rf值：0.3)。将反应混合物冷却至室温且用水(30ml)稀释，用乙酸乙酯萃取(2x50ml)。合并的有机层用盐水溶液(50ml)洗涤且用无水硫酸钠干燥且在减压下浓缩以得到粗化合物。粗产物通过快速柱色谱法纯化(100-200硅胶，用石油醚中的50％etoac洗脱)以得到所需产物(9s)-n10-(4-(2-甲基噻唑-5-基)吡啶-2-基)-n2-((r)-1，1，1-三氟丙-2-基)-8，9-二氢-6h-5，9-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环辛四烯-2，10(7h)-二甲酰胺(320mg，0.594mmol，87％产率)，其为灰白色固体。lcms(m/z)：532.20[m+h]+，rt＝2.60分钟。
1hnmr(400mhz，cdcl3)：δppm13.88(s，1h)，8.39(s，1h)，8.26(d，j＝5.26hz，1h)，8.13-7.89(m，3h)，7.62(d，j＝8.11hz，1h)，7.15(dd，j＝5.26，1.53hz，1h)，5.20-5.06(m，1h)，5.00(brs，1h)，3.44-3.21(m，3h)，3.03-2.90(m，1h)，2.76(s，3h)，2.25(brd，j＝14.47hz，1h)，2.05-1.89(m，1h)，1.62(d，j＝7.02hz，3h)，1.49-1.36(m，2h)。
实施例45
合成(9s)-n10-(6-甲基-1h-吡唑并[3，4-b]吡啶-3-基)-n2-(1，1，1-三氟-3-羟基丙-2-基)-8，9-二氢-6h-5，9-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环辛四烯-2，10(7h)-二甲酰胺.
在氮气下在0℃向(9s)-10-((6-甲基-1h-吡唑并[3，4-b]吡啶-3-基)氨基甲酰基)-7，8，9，10-四氢-6h-5，9-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环辛四烯-2-甲酸(4.5g，11.44mmol)在吡啶(40ml)中的搅拌悬浮液中添加edc(4.39g，22.88mmol)，然后添加2-氨基-3，3，3-三氟丙-1-醇(2.215g，17.16mmol)，且将反应混合物在室温搅拌16h。(tlc体系，dcm中的5％甲醇。rf值0.3)。将反应混合物浓缩且残余物溶于etoac(200ml)且用水洗涤(2x100ml)。合并的有机层用无水na2so4干燥，过滤且浓缩以得到粗物质，其为棕色固体。该固体用乙醚(50ml)研磨，过滤且干燥以得到所需化合物，其为非对映异构体混合物。非对映异构体通过制备型手性sfc分离(柱/尺寸：chiralpakad-h(250x30)mm，5μ；％co2：50.0；％共溶剂：50.0％(meoh)；总流量：100.0g/min，反压：100.0巴；uv：213nm，堆积时间：6.7分钟，负载/进样：95.0mg，溶解：meoh，总进样次数：60，仪器详情：make/model：tharsfc-200new-1)。
峰-1将从sfc收集的级分浓缩且用乙醚(20ml)研磨，干燥且在研钵中磨碎以得到(9s)-n10-(6-甲基-1h-吡唑并[3，4-b]吡啶-3-基)-n2-(1，1，1-三氟-3-羟基丙-2-基)-8，9-二氢-6h-5，9-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环辛四烯-2，10(7h)-二甲酰胺(920mg，1.821mmol，15.92％产率)，其为灰白色固体。lcms(m/z)：505.23[m+h]+.rt＝1.85分钟。
实施例46
合成(9s)-n10-(6-甲基-1h-吡唑并[3，4-b]吡啶-3-基)-n2-(1，1，1-三氟-3-羟基丙-2-基)-8，9-二氢-6h-5，9-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环辛四烯-2，10(7h)-二甲酰胺.
在氮气下在0℃向(9s)-10-((6-甲基-1h-吡唑并[3，4-b]吡啶-3-基)氨基甲酰基)-7，8，9，10-四氢-6h-5，9-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环辛四烯-2-甲酸(4.5g，11.44mmol)在吡啶(40ml)中的搅拌悬浮液中添加edc(4.39g，22.88mmol)，然后添加2-氨基-3，3，3-三氟丙-1-醇(2.215g，17.16mmol)且将反应混合物在室温搅拌16h。(tlc体系，dcm中的5％甲醇。rf值0.3)。将反应混合物浓缩且残余物溶于etoac(200ml)且用水洗涤(2x100ml)。合并的有机层用无水na2so4干燥，过滤且浓缩以得到粗物质，其为棕色固体。该固体用乙醚(50ml)研磨，过滤且干燥以得到所需化合物，其为非对映异构体混合物。非对映异构体通过制备型手性sfc分离(柱/尺寸：chiralpakad-h(250x30)mm，5μ；％co2：50.0；％共溶剂：50.0％(meoh)；总流量：100.0g/min，反压：100.0巴；uv：213nm，堆积时间：6.7分钟，负载/进样：95.0mg，溶解：meoh，总进样次数：60，仪器详情：make/model：tharsfc-200new-1)。
峰-2将从sfc收集的级分浓缩且用乙醚(20ml)洗涤，干燥且在研钵中磨碎以得到(9s)-n10-(6-甲基-1h-吡唑并[3，4-b]吡啶-3-基)-n2-(1，1，1-三氟-3-羟基丙-2-基)-8，9-二氢-6h-5，9-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环辛四烯-2，10(7h)-二甲酰胺(1g，1.966mmol，17.19％产率)，其为灰白色固体。lcms(m/z)：505.2323[m+h]+.rt＝1.85min
1hnmr(400mhz，dmso-d6)：δppm13.15(s，1h)，12.92-13.08(m，1h)，8.56(d，j＝8.99hz，1h)，8.39(d，j＝8.33hz，1h)，7.60-7.85(m，2h)，7.03(d，j＝8.55hz，1h)，5.24(t，j＝6.36hz，1h)，4.74-4.91(m，2h)，3.85(t，j＝6.25hz，2h)，3.43(dd，j＝13.48，1.64hz，3h)，2.81-3.04(m，1h)，2.57(s，3h)，2.05(brd，j＝18.42hz，2h)，1.33(brd，j＝8.33hz，2h)。
实施例47
合成(9s)-4-甲基-n10-(6-甲基-1h-吡唑并[3，4-b]吡啶-3-基)-n2-((r)-1，1，1-三氟丙-2-基)-8，9-二氢-6h-5，9-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环辛四烯-2，10(7h)-二甲酰胺：
在室温向(9s)-4-甲基-n-((r)-1，1，1-三氟丙-2-基)-7，8，9，10-四氢-6h-5，9-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环辛四烯-2-甲酰胺(300mg，0.914mmol)在thf(30ml)中的搅拌溶液中添加tea(0.764ml，5.48mmol)、三光气(271mg，0.914mmol)且搅拌30分钟，然后添加6-甲基-1h-吡唑并[3，4-b]吡啶-3-胺(271mg，1.827mmol)且反应混合物在65℃加热16h。(tlc洗脱体系：100％etoac：rf-0.4；uv活性)。将反应混合物冷却至室温，用水(20ml)淬灭且萃取至etoac(2x35ml)中。将有机层分离，用无水硫酸钠干燥，过滤且将滤液蒸发以得到粗产物。将粗物质通过色谱法纯化(grace使用c-18reserval柱，流动相a：0.1％甲酸水溶液；b：acn，洗脱液a中的44％b)，且将合并的级分浓缩且用饱和nahco3碱化。水层用dcm萃取，合并的dcm层用无水na2so4干燥，过滤且将滤液蒸发以得到(9s)-4-甲基-n10-(6-甲基-1h-吡唑并[3，4-b]吡啶-3-基)-n2-((r)-1，1，1-三氟丙-2-基)-8，9-二氢-6h-5，9-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环辛四烯-2，10(7h)-二甲酰胺(105mg，0.204mmol，22.34％产率)，其为黄色固体。lcms(m/z)：503.25[m+h]+，rt＝2.38分钟。
1hnmr(400mhz，cdcl3)：δppm13.87(s，1h)，9.81(brs，1h)，8.70(d，j＝8.1hz，1h)，7.84(s，1h)，7.68(brd，j＝8.8hz，1h)，7.02(d，j＝8.3hz，1h)，5.11-4.90(m，2h)，3.39(brd，j＝13.4hz，1h)，3.21(brd，j＝6.8hz，2h)，2.97(brd，j＝14.0hz，1h)，2.66(s，3h)，2.43(s，3h)，2.38-2.13(m，1h)，2.13-1.86(m，1h)，1.63-1.49(m，3h)，1.42(brd，j＝6.1hz，2h)。
实施例48
合成(9s)-n2-(2，2-二氟环丙基)-n10-(6-甲基-1h-吡唑并[3，4-b]吡啶-3-基)-8，9-二氢-6h-5，9-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环辛四烯-2，10(7h)-二甲酰胺
向在氮气下在室温搅拌的(9s)-10-((6-甲基-1h-吡唑并[3，4-b]吡啶-3-基)氨基甲酰基)-7，8，9，10-四氢-6h-5，9-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环辛四烯-2-甲酸(500mg，2.54mmol)在dmf(10ml)中的搅拌溶液中添加hatu(2.9g，7.63mmol)和dmap(0.621g，5.08mmol)。向其添加2，2-二氟环丙烷胺盐酸盐(0.823g，6.35mmol)且将反应混合物在50℃搅拌16h(tlc洗脱液：dcm中的10％meoh：rf-0.4；uv活性)。使反应混合物冷却至室温且用冰水稀释，用萃取乙酸乙酯(2x50ml)。合并的有机层用盐水溶液洗涤且用无水硫酸钠干燥且在减压下浓缩以得到粗化合物。粗产物通过柱色谱纯化(硅胶：100-200目，洗脱液：dcm中的2％甲醇)以得到非对映混合物且进行sfc分离(条件：(柱/尺寸)：chiralpakic(250x30)mm，5μ，％co2：50.0％共溶剂：50.0％(100％甲醇)，总流量：100.0g/min，反压：100.0巴，uv：217nm，堆积时间：16.5分钟，负载/进样：46.0mg，溶解：甲醇，总进样次数：7，仪器详情：make/model：tharsfc-200(old))以得到两个峰，其为峰-i和峰-ii。
峰-ii：(9s)-n2-(2，2-二氟环丙基)-n10-(6-甲基-1h-吡唑并[3，4-b]吡啶-3-基)-8，9-二氢-6h-5，9-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环辛四烯-2，10(7h)-二甲酰胺(73mg，0.155mmol，6.08％产率)，其为浅棕色固体。lcms(m/z)：469.2[m+h]+，rt＝1.94分钟。
1hnmr(400mhz，dmso-d6)：δppm13.2(s，1h)，12.8(s，1h)，8.64(brs，1h)，8.41(d，j＝8.55hz，1h)，7.74-7.6(m，1h)，7.64-7.62(m，1h)，7.05(d，j＝8.55hz，1h)，4.87(s，1h)，3.56-3.39(m，2h)，3.35(brs，2h)，2.87(d，j＝13.37hz，1h)，2.55(s，3h)，2.07-1.9(m，4h)，1.35-1.22(m，2h)。
实施例49
合成(9s)-n10-(5-((r)-2，3-二羟基丙氧基)吡嗪-2-基)-n2-((r)-1，1，1-三氟丙-2-基)-8，9-二氢-6h-5，9-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环辛四烯-2，10(7h)-二甲酰胺
在0℃在氮气氛下向(9s)-n10-(5-(((s)-2，2-二甲基-1，3-二氧杂环戊烷-4-基)甲氧基)吡嗪-2-基)-n2-((r)-1，1，1-三氟丙-2-基)-8，9-二氢-6h-5，9-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环辛四烯-2，10(7h)-二甲酰胺(200mg，0.354mmol)在甲醇(10ml)中的搅拌溶液中添加hcl水溶液(4ml，16.00mmol)。所得反应混合物在28℃搅拌1h。(tlc体系：dcm中的5％甲醇，rf：0.3，uv活性)。在减压下蒸发溶剂，用饱和nahco3溶液碱化(直到ph：8-9)且将沉淀的固体过滤以得到所需产物(9s)-n10-(5-((r)-2，3-二羟基丙氧基)吡嗪-2-基)-n2-((r)-1，1，1-三氟丙-2-基)-8，9-二氢-6h-5，9-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环辛四烯-2，10(7h)-二甲酰胺(110mg，0.207mmol，58.4％产率)，其为灰白色固体。lcms(m/z)：526.26[m+h]+，rt＝1.87分钟。
1hnmr(400mhz，cdcl3)：δ13.64(s，1h)，8.99(s，1h)，8.96-7.96(m，2h)，7.71(d，j＝9.43hz，1h)，7.62(d，j＝7.89hz，1h)，5.15-4.93(m，2h)，4.54-4.39(m，2h)，4.16-4.03(m，1h)，3.85-3.66(m，2h)，3.46-3.27(m，3h)，3.08(d，j＝3.95hz，1h)，2.96(d，j＝14.03hz，1h)，2.33-2.18(m，2h)，2.02-1.87(m，1h)，1.57(d，j＝7.02hz，3h)，1.42(s，2h)。
实施例50
合成(9s)-n2-(2，2-二氟环丙基)-n10-(4-((r)-2，3-二羟基丙氧基)吡啶-2-基)-8，9-二氢-6h-5，9-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环辛四烯-2，10(7h)-二甲酰胺
在0℃向(9s)-n2-(2，2-二氟环丙基)-n10-(4-(((s)-2，2-二甲基-1，3-二氧杂环戊烷-4-基)甲氧基)吡啶-2-基)-8，9-二氢-6h-5，9-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环辛四烯-2，10(7h)-二甲酰胺(270mg，0.496mmol)在甲醇(5ml)中的搅拌溶液中经5分钟滴加盐酸(0.030ml，0.992mmol)。然后将反应混合物在室温搅拌2h。(tlc洗脱液：dcm中的5％meoh：rf-0.1；uv活性)。反应混合物用碳酸氢钠溶液中和且过滤所得固体，用乙醚(2x30ml)、正戊烷(2x30ml)洗涤以得到所需产物(9s)-n2-(2，2-二氟环丙基)-n10-(4-((r)-2，3-二羟基丙氧基)吡啶-2-基)-8，9-二氢-6h-5，9-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环辛四烯-2，10(7h)-二甲酰胺(150mg，0.297mmol，59.8％产率)，其为灰白色固体。lcms(m/z)：505.23[m+h]+，rt＝1.50分钟。
1hnmr(400mhz，tfa-d)：δppm8.58-8.49(m，1h)，8.28(d，j＝7.7hz，1h)，8.01-7.98(m，1h)，7.39-7.20(m，2h)，5.40-5.36(m，1h)，4.68-4.39(m，3h)，4.45-3.80(m，6h)，3.62-3.49(m，1h)，2.39-2.29(m，1h)，2.30-1.80(m，5h)。
实施例51
合成(9s)-3-氯-n10-(4-(2-甲基噁唑-5-基)吡啶-2-基)-n2-((r)-1，1，1-三氟丙-2-基)-8，9-二氢-6h-5，9-亚甲基吡啶并[2，3-b]11，4]二氮杂环辛四烯-2，10(7h)-二甲酰胺
在室温向(9s)-3-氯-n-((r)-1，1，1-三氟丙-2-基)-7，8，9，10-四氢-6h-5，9-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环辛四烯-2-甲酰胺(700mg，2.007mmol)在thf(20ml)中的溶液中添加tea(1.399ml，10.04mmol)，然后添加三光气(357mg，1.204mmol)且搅拌30分钟。然后添加4-(2-甲基噁唑-5-基)吡啶-2-胺(527mg，3.01mmol)且将反应混合物加热至80℃保持16h。(tlc体系：100％乙酸乙酯，rf值：0.4)。反应混合物用冷却水(50ml)稀释且用etoac萃取(2x50ml)。合并的有机层用盐水溶液(30ml)洗涤，用无水硫酸钠干燥且在减压下浓缩以得到粗化合物。粗产物通过制备型hplc纯化(柱：kromosilphenylc18(150*25)mm10u，流动相-a：10mm碳酸氢铵(aq)，流动相-b：乙腈，梯度：时间t/％b＝0/45，12/45，12.5/100，15/100，15.5/45，柱温：室温，流速：30ml/min，稀释剂：乙腈+thf+水)以得到(9s)-3-氯-n10-(4-(2-甲基噁唑-5-基)吡啶-2-基)-n2-((r)-1，1，1-三氟丙-2-基)-8，9-二氢-6h-5，9-亚甲基吡啶并-[2，3-b][1，4]-二氮杂环辛四烯-2，10(7h)-二甲酰胺(95mg，0.171mmol，8.53％产率)，其为灰白色固体。lcms(m/z)：550.20[m+h]+，rt＝2.36分钟。
1hnmr(400mhz，dmso-d6)：δppm13.04(s，1h)，9.22(d，j＝8.77hz，1h)，8.36(s，1h)，8.30(d，j＝5.26hz，1h)，7.81(d，j＝12.50hz，2h)，7.39(dd，j＝5.26，1.53hz，1h)，4.93-4.71(m，2h)，3.48-3.39(m，1h)，3.32-3.30(m，2h)，2.88(brd，j＝13.81hz，1h)，2.53(s，3h)，2.02-1.88(m，2h)，1.46(d，j＝7.02hz，3h)，1.38-1.22(m，2h)。
实施例52
合成(9s)-n2-(2，2-二氟环丙基)-n10-(4-((r)-2，3-二羟基丙氧基)吡啶-2-基)-8，9-二氢-6h-5，9-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环辛四烯-2，10(7h)-二甲酰胺
在0℃向(9s)-n2-(2，2-二氟环丙基)-n10-(4-(((s)-2，2-二甲基-1，3-二氧杂环戊烷-4-基)甲氧基)吡啶-2-基)-8，9-二氢-6h-5，9-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环辛四烯-2，10(7h)-二甲酰胺(230mg，0.422mmol)在甲醇(5ml)中的搅拌溶液中经5分钟滴加盐酸(0.026ml，0.845mmol)。然后将反应混合物在室温搅拌2h。(tlc洗脱液：dcm中的5％meoh：rf-0.1；uv活性)。然后反应混合物用碳酸氢钠溶液中和且将所得固体过滤且用醚(2x30ml)、戊烷(2x30ml)洗涤以得到所需产物(9s)-n2-(2，2-二氟环丙基)-n10-(4-((r)-2，3-二羟基丙氧基)吡啶-2-基)-8，9-二氢-6h-5，9-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环辛四烯-2，10(7h)-二甲酰胺(175mg，0.346mmol，82％产率)，其为灰白色固体。lcms(m/z)：505.23[m+h]+，rt＝1.50分钟。
1hnmr(400mhz，tfa-d)：δppm8.56-8.50(m，1h)，8.39(d，j＝7.7hz，1h)，8.02(m，1h)，7.24-7.10(m，2h)，5.41-5.39(m，1h)，4.64-4.41(m，3h)，4.39-3.89(m，6h)，3.68-3.51-3.39(m，1h)，2.41-2.29(m，1h)，2.22-1.76(m，5h)。
实施例53
合成(9s)-n2-(2，2-二氟环丙基)-n10-(6-甲基-1h-吡唑并[3，4-b]吡啶-3-基)-8，9-二氢-6h-5，9-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环辛四烯-2，10(7h)-二甲酰胺
向在氮气下在室温搅拌的(9s)-10-((6-甲基-1h-吡唑并[3，4-b]吡啶-3-基)氨基甲酰基)-7，8，9，10-四氢-6h-5，9-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环辛四烯-2-甲酸(500mg，2.54mmol)在dmf(10ml)中的搅拌溶液中添加hatu(2.9g，7.63mmol)和dmap(0.621g，5.08mmol)。向其中添加2，2-二氟环丙烷胺盐酸盐(0.823g，6.35mmol)且将反应混合物在50℃搅拌16h(tlc洗脱液：dcm中的10％meoh：rf-0.4；uv活性)。将反应混合物冷却至室温且用冰水稀释，用萃取乙酸乙酯(2x50ml)。合并的有机层用盐水溶液洗涤且用无水硫酸钠干燥且在减压下浓缩以得到粗化合物。粗产物通过柱色谱纯化(硅胶：100-200目，洗脱液：dcm中的2％甲醇)以得到非对映混合物且进行sfc分离(条件：(柱/尺寸)：chiralpakic(250x30)mm，5μ，％co2：50.0％共溶剂：50.0％(100％m乙醇)，总流量：100.0g/min，反压：100.0巴，uv：217nm，堆积时间：16.5分钟，负载/进样：46.0mg，溶解：甲醇，总进样次数：7，仪器详情：make/model：tharsfc-200(old))以得到两个峰，其为峰-i和峰-ii。
峰-i：(9s)-n2-(2，2-二氟环丙基)-n10-(6-甲基-1h-吡唑并[3，4-b]吡啶-3-基)-8，9-二氢-6h-5，9-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环辛四烯-2，10(7h)-二甲酰胺(70mg，0.147mmol，5.80％产率)，其为灰白色固体。lcms(m/z)：469.2[m+h]+，rt＝1.92分钟。
1hnmr(400mhz，dmso-d6)：δppm13.26(s，1h)，12.99(s，1h)，8.64(brs，1h)，8.41(d，j＝8.55hz，1h)，7.74-7.69(m，1h)，7.66-7.62(m，1h)，7.03(d，j＝8.55hz，1h)，4.87(brs，1h)，3.54-3.39(m，2h)，3.32(brs，2h)，2.88(d，j＝13.37hz，1h)，2.57(s，3h)，2.07-1.88(m，4h)，1.35-1.24(m，2h)。
实施例54
合成(9s)-n10-(5-((s)-2，3-二羟基丙氧基)吡啶-2-基)-n2-((r)-1，1，1-三氟丙-2-基)-8，9-二氢-6h-5，9-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环辛四烯-2，10(7h)-二甲酰胺
向(9s)-10-((5-((s)-2，3-二羟基丙氧基)吡啶-2-基)氨基甲酰基)-7，8，9，10-四氢-6h-5，9-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环辛四烯-2-甲酸(300mg，0.699mmol)和hatu(398mg，1.048mmol)在n，n-二甲基甲酰胺(10ml)中的搅拌溶液中添加dipea(0.488ml，2.79mmol)，然后在室温向反应混合物添加(r)-1，1，1-三氟丙-2-胺盐酸盐(104mg，0.699mmol)。所得反应混合物搅拌16h。在28℃(tlc洗脱液：dcm中的10％meoh：rf-0.3；uv活性)。反应混合物倒入水中(30ml)且用etoac萃取(2x20ml)。合并的有机层用盐水溶液洗涤，用na2so4干燥，过滤且蒸发以得到粗化合物。该粗化合物通过grace纯化(c-18reserval柱，洗脱液：水中的60％meoh和0.1％甲酸)以得到所需产物(9s)-n10-(5-((s)-2，3-二羟基丙氧基)吡啶-2-基)-n2-((r)-1，1，1-三氟丙-2-基)-8，9-二氢-6h-5，9-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环辛四烯-2，10(7h)-二甲酰胺(169mg，0.310mmol，44.4％产率)，其为淡黄色固体。lcms(m/z)：525.25[m+h]+，rt＝1.86分钟。
1hnmr(400mhz，cdcl3)：δppm13.62(s，1h)，8.14(d，j＝8.99hz，1h)，8.06-7.90(m，3h)，7.71-7.51(m，1h)，7.417.24(m，1h)，5.02-5.21(m，1h)，4.98(brs，1h)，4.24-4.03(m，3h)，3.95-3.83(m，1h)，3.76-3.82(m，1h)，3.41-3.27(m，3h)，2.95(d，j＝14.03hz，1h)，2.55(brs，1h)，2.23(d，j＝15.13hz，1h)，1.87-2.01(m，2h)，1.61(d，j＝7.02hz，3h)，1.48-1.34(m，2h)。
实施例55
合成(9s)-n10-(6-((r)-2，3-二羟基丙氧基)哒嗪-3-基)-n2-((r)-1，1，1-三氟丙-2-基)-8，9-二氢-6h-5，9-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环辛四烯-2，10(7h)-二甲酰胺
在0℃在氮气下向(9s)-n10-(6-(((s)-2，2-二甲基-1，3-二氧杂环戊烷-4-基)甲氧基)哒嗪-3-基)-n2-((r)-1，1，1-三氟丙-2-基)-8，9-二氢-6h-5，9-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环辛四烯-2，10(7h)-二甲酰胺(220mg，0.389mmol)在甲醇(10ml)中的搅拌溶液中添加hcl水溶液(0.8ml，3.20mmol)。将反应混合物在28℃搅拌1h。(tlc体系：dcm中的5％甲醇，rf：0.3，uv活性)。在减压下蒸发溶剂，用饱和nahco3碱化溶液(直到ph：8-9)且用dcm萃取(3x30ml)。合并的有机层用水、盐水溶液洗涤，过滤且蒸发以得到粗化合物。该粗化合物通过制备型hplc纯化(条件：mp-a：10mm乙酸铵(aq)mp-b：乙腈，柱：kromasilc18(250*21.2)mm，10μ，方法(t/％b)：65∶35，流速：20ml/min，溶解：乙腈+meoh+thf)以得到所需产物(9s)-n10-(6-((r)-2，3-二羟基丙氧基)哒嗪-3-基)-n2-((r)-1，1，1-三氟丙-2-基)-8，9-二氢-6h-5，9-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环辛四烯-2，10(7h)-二甲酰胺(130mg，0.234mmol，60.1％产率)，其为灰白色固体。lcms(m/z)：524.2[m+h]+，rt＝5.98分钟。
1hnmr(400mhz，cdcl3)：δppm14.34(s，1h)，8.42(d，j＝9.43hz，1h)，8.07(d，j＝9.21hz，1h)，8.01(d，j＝7.89hz，1h)，7.63(d，j＝7.89hz，1h)，7.10(d，j＝9.43hz，1h)，5.12-5.00(m，1h)，4.96(brs，1h)，4.65-4.54(m，2h)，4.16-4.08(m，1h)，3.82-3.66(m，2h)，3.49(brs，1h)，3.43-3.30(m，3h)，2.97(d，j＝13.81hz，1h)，2.34(brs，1h)，2.26-2.17(m，1h)，2.01-1.89(m，1h)，1.71(d，j＝7.02hz，3h)，1.47-1.36(m，2h)。
实施例56
合成(9s)-n10-(5-((s)-2，3-二羟基丙氧基)吡啶-2-基)-4-甲基-n2-((r)-1，1，1-三氟丙-2-基)-8，9-二氢-6h-5，9-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环辛四烯-2，10(7h)-二甲酰胺：
在0℃向(9s)-n10-(5-(((r)-2，2-二甲基-1，3-二氧杂环戊烷-4-基)甲氧基)吡啶-2-基)-4-甲基-n2-((r)-1，1，1-三氟丙-2-基)-8，9-二氢-6h-5，9-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环辛四烯-2，10(7h)-二甲酰胺(300mg，0.519mmol)在甲醇(15ml)中的搅拌溶液中添加hcl水溶液(1.5ml，49.4mmol)且在氮气下在室温搅拌1h。(tlc洗脱液：dcm中的5％meoh，rf-0.2；uv活性)。将反应混合物在0℃用饱和碳酸氢钠溶液碱化(直到ph-8-9)且溶剂在减压下蒸发。残余物用水稀释且所得固体通过布氏漏斗过滤，在减压下干燥以得到粗化合物。将粗物质通过色谱法纯化(grace，使用c-18reserval柱，流动相a：0.1％甲酸水溶液；b：acn，洗脱液a中的45-50％b)且合并的级分浓缩，然后用饱和nahco3碱化。将沉淀的固体过滤且干燥以得到(9s)-n10-(5-((s)-2，3-二羟基丙氧基)吡啶-2-基)-4-甲基-n2-((r)-1，1，1-三氟丙-2-基)-8，9-二氢-6h-5，9-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环辛四烯-2，10(7h)-二甲酰胺(214mg，0.395mmol，76％产率)，其为灰白色固体。lcms(m/z)：539.29[m+h]+，rt＝2.14分钟。
1hnmr(400mhz，cdcl3)：δppm13.83(s，1h)，8.14(d，j＝8.99hz，1h)，7.93-8.01(m，2h)，7.87(s，1h)，7.32(dd，j＝9.10，2.96hz，1h)，5.04-5.17(m，1h)，4.95(brs，1h)，4.04-4.19(m，3h)，3.72-3.92(m，2h)，3.37(dd，j＝13.59，1.75hz，1h)，3.14-3.25(m，2h)，2.92(brd，j＝13.37hz，1h)，2.58(d，j＝4.60hz，1h)，2.41(s，3h)，2.26(brd，j＝14.47hz，1h)，1.86-2.02(m，2h)，1.53-1.64(m，3h)，1.33-1.47(m，2h)。
实施例57
合成(9s)-n10-(4-((r)-2，3-二羟基丙氧基)吡啶-2-基)-4-甲基-n2-((r)-1，1，1-三氟丙-2-基)-8，9-二氢-6h-5，9-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环辛四烯-2，10(7h)-二甲酰胺：
在0℃向(9s)-n10-(4-(((s)-2，2-二甲基-1，3-二氧杂环戊烷-4-基)甲氧基)吡啶-2-基)-4-甲基-n2-((r)-1，1，1-三氟丙-2-基)-8，9-二氢-6h-5，9-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环辛四烯-2，10(7h)-二甲酰胺(300mg，0.519mmol)在甲醇(15ml)中的搅拌溶液中添加hcl水溶液(1.5ml，18.00mmol)且在氮气下在室温搅拌1h。(tlc洗脱液：dcm中的5％meoh，rf-0.3；uv活性)。将反应混合物在0℃用饱和碳酸氢钠溶液碱化(直到ph-8-9)且在减压下蒸发溶剂。残余物用水稀释且将沉淀的固体过滤，在减压下干燥以得到粗物质。将粗物质通过色谱法纯化(grace使用c-18reserval柱，流动相a：0.1％甲酸水溶液；b：acn，洗脱液a中的50-55％b)且合并的级分浓缩，然后用饱和nahco3溶液碱化。将沉淀的固体过滤且干燥以得到(9s)-n10-(4-((r)-2，3-二羟基丙氧基)吡啶-2-基)-4-甲基-n2-((r)-1，1，1-三氟丙-2-基)-8，9-二氢-6h-5，9-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环辛四烯-2，10(7h)-二甲酰胺(230mg，0.424mmol，82％产率)，其为灰白色固体。lcms(m/z)：539.32[m+h]+，rt＝1.78分钟。
1hnmr(400mhz，cdcl3)：δppm14.06(s，1h)，8.15(brd，j＝9.21hz，1h)，8.08(d，j＝5.92hz，1h)，7.89(s，1h)，7.81(d，j＝2.41hz，1h)，6.59(dd，j＝5.70，2.41hz，1h)，5.00-5.15(m，1h)，4.93(brs，1h)，4.10-4.22(m，3h)，3.69-3.90(m，2h)，3.37(dd，j＝13.48，1.64hz，1h)，3.13-3.23(m，2h)，2.93(brd，j＝13.37hz，1h)，2.57(d，j＝3.73hz，1h)，2.41(s，3h)，2.26(brd，j＝14.25hz，1h)，1.86-2.07(m，2h)，1.50-1.63(m，3h)，1.32-1.45(m，2h)。
实施例58
合成(9s)-n-(5-氟吡啶-2-基)-2-(3-(三氟甲基)哌啶-1-基)-7，8，9，10-四氢-6h-5，9-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环辛四烯-3-甲酰胺
向在氮气下在室温搅拌的(9s)-2-(3-(三氟甲基)哌啶-1-基)-7，8，9，10-四氢-6h-5，9-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环辛四烯(源自中间sfc分离的峰-ii，0.700g，2.145mmol)在四氢呋喃(thf)(40ml)中的溶液中添加三乙胺(1.794ml，12.87mmol)和三光气(0.636g，2.145mmol)。然后将反应混合物在室温搅拌30分钟。在室温添加5-氟吡啶-2-胺(0.721g，6.43mmol)，然后将反应混合物在65℃搅拌16小时。将反应混合物冷却至28℃且浓缩至干。残余物在水(10ml)和二氯甲烷(50ml)之间分配。将有机层分离且用无水na2so4干燥，过滤且将滤液蒸发以得到粗物质，其为棕色固体(tlc洗脱液：100％etoac：rf-0.3；uv活性)。该粗物质通过柱色谱使用中性氧化铝纯化且用己烷中的35-40％etoac洗脱以得到纯的(9s)-n-(5-氟吡啶-2-基)-2-(3-(三氟甲基)哌啶-1-基)-7，8，9，10-四氢-6h-5，9-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环辛四烯-3-甲酰胺(0.220g，0.468mmol，21.82％产率)，其为灰白色固体，lcms(m/z)：465.3[m+h]+.
1hnmr(400mhz，cdcl3)：δ12.14(s，1h)，8.41(dd，j＝9.2，4.2hz，1h)，8.15(d，j＝3.0hz，1h)，8.02(s，1h)，7.42(ddd，j＝9.2，7.7，3.0hz，1h)，5.51(d，j＝4.6hz，1h)，3.76(s，1h)，3.58-3.46(m，1h)，3.41-3.17(m，4h)，3.03(s，1h)，2.88-2.72(m，3h)，2.14(d，j＝13.7hz，1h)，2.08(s，1h)，2.00-1.77(m，3h)，1.53-1.42(m，2h)，1.37-1.21(m，2h)。
实施例59
合成(9s)-n-(吡嗪-2-基)-2-(3-(三氟甲基)哌啶-1-基)-7，8，9，10-四氢-6h-5，9-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环辛四烯-3-甲酰胺
向在室温搅拌10分钟的(9s)-2-(3-(三氟甲基)哌啶-1-基)-7，8，9，10-四氢-6h-5，9-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环辛四烯(源自中间sfc分离的峰-i，500mg，1.532mmol)在四氢呋喃(50ml)中的悬浮液中，添加三乙胺(0.641ml，4.60mmol)和三光气(227mg，0.766mmol)。将反应混合物搅拌30分钟且添加吡嗪-2-胺(437mg，4.60mmol)。将反应混合物在65℃搅拌16hr。将反应物质浓缩且残余物用水(25ml)稀释且用etoac萃取(2x75ml)。合并的有机层用水和饱和盐水溶液洗涤且用无水na2so4干燥，过滤且浓缩以得到粗物质，其为白色固体(tlc洗脱液：100％乙酸乙酯：rf-0.4；uv活性)。粗产物通过柱色谱纯化(中性氧化铝)，产物用己烷中的60％乙酸乙酯洗脱以得到(9s)-n-(吡嗪-2-基)-2-(3-(三氟甲基)哌啶-1-基)-7，8，9，10-四氢-6h-5，9-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环辛四烯-3-甲酰胺(150mg，0.319mmol，20.82％产率)，其为灰白色固体，lcms(m/z)：448.35[m+h]+.
1hnmr(400mhz，cdcl3)：δ12.31(s，1h)，9.70(d，j＝1.5hz，1h)，8.30(dd，j＝2.5，0.4hz，1h)，8.26(dd，j＝2.6，1.5hz，1h)，8.03(d，j＝0.7hz，1h)，5.55(d，j＝4.6hz，1h)，3.76(s，1h)，3.56-3.39(m，1h)，3.29-3.20(m，4h)，3.02(t，j＝11.7hz，1h)，2.93-2.78(m，3h)，2.15(d，j＝13.1hz，1h)，2.06-1.82(m，4h)，1.54-1.42(m，2h)，1.36(s，1h)。
实施例60
合成(9s)-n-(吡啶-3-基)-2-(3-(三氟甲基)哌啶-1-基)-7，8，9，10-四氢-6h-5，9-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环辛四烯-3-甲酰胺
向在氮气下在室温搅拌的(9s)-2-(3-(三氟甲基)哌啶-1-基)-7，8，9，10-四氢-6h-5，9-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环辛四烯(源自中间sfc分离的峰-ii，0.550g，1.685mmol)在四氢呋喃(thf)(30ml)中的溶液中添加三乙胺(1.409ml，10.11mmol)和三光气(0.500g，1.685mmol)。然后反应混合物在室温搅拌30分钟，然后在添加室温吡啶-3-胺(0.476g，5.06mmol)。然后将反应混合物在65℃搅拌16hr，然后冷却至28℃且在减压下浓缩。残余物在水(10ml)和二氯甲烷(50ml)之间分配。将有机层分离且用无水na2so4干燥，过滤且将滤液蒸发以得到粗物质，其为棕色固体(tlc洗脱液：100％etoac：rf-0.3；uv活性)。该粗物质通过柱色谱使用中性氧化铝纯化且用己烷中的50-60％etoac洗脱以得到纯的(9s)-n-(吡啶-3-基)-2-(3-(三氟甲基)哌啶-1-基)-7，8，9，10-四氢-6h-5，9-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环辛四烯-3-甲酰胺(0.264g，0.587mmol，34.8％产率)，其为灰白色固体，lcms(m/z)：447.3[m+h]+.
1hnmr(400mhz，cdcl3)：δ11.74(s，1h)，8.59(d，j＝2.6hz，1h)，8.44(ddd，j＝8.4，2.7，1.5hz，1h)，8.32(dd，j＝4.7，1.6hz，1h)，8.02(d，j＝0.8hz，1h)，7.30(dd，j＝8.4，4.7hz，1h)，5.53(d，j＝5.0hz，1h)，3.76(s，1h)，3.58-3.41(m，1h)，3.24(ddt，j＝10.1，7.3，2.2hz，4h)，3.12(t，j＝11.7hz，1h)，2.90-2.70(m，2h)，2.55(dtt，j＝15.5，7.5，3.9hz，1h)，2.12(d，j＝13.0hz，1h)，2.01-1.84(m，3h)，1.81-1.66(m，1h)，1.53(td，j＝12.7，4.3hz，2h)，1.35(s，1h)，1.26(s，1h)。
实施例61
合成(9s)-n-(吡啶-3-基)-2-(3-(三氟甲基)哌啶-1-基)-7，8，9，10-四氢-6h-5，9-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环辛四烯-3-甲酰胺
向在室温搅拌10分钟的(9s)-2-(3-(三氟甲基)哌啶-1-基)-7，8，9，10-四氢-6h-5，9-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环辛四烯(中间sfc分离的峰-i，600mg，1.840mmol)在四氢呋喃(50ml)中的悬浮液中，添加三乙胺(0.796ml，5.521mmol)和三光气(279mg，0.9202mmol)。将反应混合物搅拌30分钟且添加吡啶-3-胺(519mg，5.521mmol)。将反应混合物在65℃搅拌16hr。将反应物质浓缩且残余物用水(25ml)稀释且用etoac萃取(2x75ml)。合并的有机层用水和饱和盐水溶液洗涤且用无水na2so4干燥，过滤且浓缩以得到粗物质，其为白色固体(tlc洗脱液：100％乙酸乙酯：rf-0.4；uv活性)。粗产物通过柱色谱纯化(中性氧化铝)，产物用己烷中的60％乙酸乙酯洗脱以得到(9s)-n-(吡啶-3-基)-2-(3-(三氟甲基)哌啶-1-基)-7，8，9，10-四氢-6h-5，9-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环辛四烯-3-甲酰胺(354mg，0.791mmol，43％产率)，其为灰白色固体，lcms(m/z)：447.28[m+h]+.
1hnmr(400mhz，cdcl3)：δ11.66(s，1h)，8.60(s，1h)，8.47-8.40(m，1h)，8.33(s，1h)，8.01(s，j＝0.66hz，1h)，7.34-7.28(m，1h)，5.53(brd，j＝4.17hz，1h)，3.76(s，1h)，3.47(dt，j＝12.17，1.70hz，1h)，3.30-3.19(m，4h)，3.09(t，j＝11.62hz，1h)，2.95-2.76(m，2h)，2.65-2.48(m，1h)，2.18-2.07(m，1h)，1.98-1.85(m，3h)，1.78-1.68(m，2h)，1.62-1.44(m，2h)，1.39-1.30(m，1h)。
实施例62
合成(9s)-n-(吡嗪-2-基)-2-(3-(三氟甲基)哌啶-1-基)-7，8，9，10-四氢-6h-5，9-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环辛四烯-3-甲酰胺
向在氮气下在室温搅拌的(9s)-2-(3-(三氟甲基)哌啶-1-基)-7，8，9，10-四氢-6h-5，9-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环辛四烯(源自中间sfc分离的峰-ii，0.700g，2.145mmol)在四氢呋喃(thf)(30ml)中的溶液中添加三乙胺(1.794ml，12.87mmol)和三光气(0.636g，2.145mmol)。然后将反应混合物在室温搅拌30分钟，然后添加吡嗪-2-胺(0.612g，6.43mmol)。然后将反应混合物在65℃搅拌16小时。将反应混合物冷却至28℃且在减压下浓缩。所得残余物在水(10ml)和二氯甲烷(50ml)之间分配。将有机层分离且用无水na2so4干燥，过滤且将滤液蒸发以得到粗物质，其为棕色固体(tlc洗脱液：100％etoac：rf-0.3；uv活性)。该粗物质通过柱色谱使用中性氧化铝纯化且用己烷中的50-60％etoac洗脱以得到纯的(9s)-n-(吡嗪-2-基)-2-(3-(三氟甲基)哌啶-1-基)-7，8，9，10-四氢-6h-5，9-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环辛四烯-3-甲酰胺(105mg，0.227mmol，10.58％产率)，其为淡黄色固体，lcms(m/z)：448.3[m+h]+.
1h-nmr(400mhz，cdcl3)：δppm12.36(s，1h)，9.69(d，j＝1.53hz，1h)，8.28(d，j＝2.41hz，1h)，8.23-8.25(m，1h)，8.03(s，1h)，5.54(brd，j＝4.17hz，1h)，3.75(brs，1h)，3.48(brd，j＝10.30hz，1h)，3.18-3.27(m，4h)，3.05(t，j＝11.84hz，1h)，2.74-2.85(m，3h)，2.14(brd，j＝12.93hz，1h)，2.02(dt，j＝13.21，4.03hz，1h)，1.81-1.92(m，3h)，1.39-1.52(m，2h)，1.27-1.36(m，1h)。
实施例63
合成(9s)-3-氯-n-(吡啶-2-基)-2-(3-(三氟甲基)苯基)-8，9-二氢-6h-5，9-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环辛四烯-10(7h)-甲酰胺
在0℃向(9s)-3-氯-2-(3-(三氟甲基)苯基)-7，8，9，10-四氢-6h-5，9-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环辛四烯(500mg，1.413mmol)在thf(10ml)中的搅拌溶液中添加nah(33.9mg，1.413mmol)且在氮气氛下搅拌30分钟。然后将3-(吡啶-2-基)-2h-吡啶并[1，2-a][1，3，5]三嗪-2，4(3h)-二酮(340mg，1.413mmol)添加至该反应混合物且在80℃搅拌16h。(tlc洗脱液：纯的乙酸乙酯；rf：0.25)。反应混合物用冰水淬灭且用乙酸乙酯萃取(2x15ml)。合并的有机层用盐水溶液(20ml)洗涤且用无水硫酸钠干燥，在减压下浓缩以得到粗化合物。粗产物通过快速柱色谱纯化(硅胶：100-200目，洗脱液：石油醚中的70％乙酸乙酯)以得到所需产物(9s)-3-氯-n-(吡啶-2-基)-2-(3-(三氟甲基)苯基)-8，9-二氢-6h-5，9-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环辛四烯-10(7h)-甲酰胺(260mg，0.548mmol，38.7％产率)，其为灰白色固体。lcms(m/z)：474.05[m+h]+，rt＝3.0分钟。
1hnmr(400mhz，cdcl3)：δppm13.40(s，1h)，8.30-8.23(m，2h)，8.20-8.26(m，1h)，8.20-8.13(m，1h)，7.78-7.69(m，1h)，7.59-7.57(m，2h)，7.52-7.48(m，1h)，6.97-6.91(m，1h)，5.02-4.97(m，1h)，3.41-3.37(m，3h)，2.96-2.95(m，1h)，2.92(d，j＝14.03hz，1h)，2.41-2.06(m，1h)，1.63-1.21(m，2h)。
实施例64
合成(9s)-3-氯-n-(6-((s)-2，3-二羟基丙氧基)吡啶-2-基)-2-(3-(三氟甲基)苯基)-8，9-二氢-6h-5，9-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环辛四烯-10(7h)-甲酰胺：
在0℃向(9s)-3-氯-n-(6-(((r)-2，2-二甲基-1，3-二氧杂环戊烷-4-基)甲氧基)吡啶-2-基)-2-(3-(三氟甲基)苯基)-8，9-二氢-6h-5，9-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环辛四烯-10(7h)-甲酰胺(250mg，0.414mmol)在甲醇(10ml)中的搅拌溶液中添加hcl水溶液(0.345ml，4.14mmol，36％)且在室温搅拌4h。反应通过tlc确认完成后，挥发物在减压下蒸发以得到粗物质(tlc洗脱液体系：100％etoac，rf-0.5，uv活性)。粗物质用水(5ml)稀释且用10％碳酸氢钠溶液碱化(直到ph8)，将沉淀的固体过滤，用水洗涤且真空干燥以得到(9s)-3-氯-n-(6-((s)-2，3-二羟基丙氧基)吡啶-2-基)-2-(3-(三氟甲基)苯基)-8，9-二氢-6h-5，9-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环辛四烯-10(7h)-甲酰胺(162mg，0.285mmol，68.8％产率)，其为灰白色固体。lcms(m/z)：564.13[m+h]+，rt＝2.50分钟。
1hnmr(400mhz，cdcl3)：δppm13.10(brs，1h)，7.89-8.16(m，2h)，7.72-7.80(m，1h)，7.63-7.70(m，1h)，7.47-7.61(m，2h)，6.42(d，j＝7.89hz，1h)，5.00(brs，1h)，3.92(qd，j＝11.91，4.60hz，2h)，3.67-3.81(m，1h)，3.48(brs，2h)，3.27-3.42(m，2h)，2.98(brd，j＝12.93hz，2h)，2.80(brd，j＝5.48hz，1h)，2.25(brd，j＝15.13hz，2h)，1.94(brd，j＝12.50hz，2h)，1.22-1.49(m，2h)。
实施例65
合成(9s)-3-氯-n-(6-((r)-2，3-二羟基丙氧基)吡啶-2-基)-2-(3-(三氟甲基)苯基)-8，9-二氢-6h-5，9-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环辛四烯-10(7h)-甲酰胺：
在0℃向(9s)-3-氯-n-(6-(((s)-2，2-二甲基-1，3-二氧杂环戊烷-4-基)甲氧基)吡啶-2-基)-2-(3-(三氟甲基)苯基)-8，9-二氢-6h-5，9-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环辛四烯-10(7h)-甲酰胺(270mg，0.447mmol)在甲醇(10ml)中的搅拌溶液中添加hcl水溶液(1ml，32.9mmol，36％)且在室温搅拌4h。反应完成后，挥发物在减压下蒸发以得到粗物质(tlc洗脱液体系：100％etoac，rf-0.5，uv活性)。粗物质用水(5ml)稀释且用10％碳酸氢钠溶液碱化，将沉淀的固体过滤且用水洗涤且真空干燥以得到(9s)-3-氯-n-(6-((r)-2，3-二羟基丙氧基)吡啶-2-基)-2-(3-(三氟甲基)苯基)-8，9-二氢-6h-5，9-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环辛四烯-10(7h)-甲酰胺(142mg，0.248mmol，55.5％产率)，其为灰白色固体。lcms(m/z)：564.13[m+h]+，rt＝2.51min。
1hnmr(400mhz，cdcl3)：δppm13.11(s，1h)，7.89-8.14(m，2h)，7.61-7.82(m，2h)，7.44-7.61(m，3h)，6.42(d，j＝7.89hz，1h)，5.00(brs，1h)，3.83-4.04(m，2h)，3.63-3.83(m，1h)，3.42-3.57(m，2h)，3.28-3.41(m，3h)，2.98(brd，j＝14.03hz，1h)，2.60-2.87(m，1h)，2.17-2.39(m，2h)，1.86-1.98(m，1h)，1.24-1.52(m，2h)。
实施例66
合成(9s)-3-氯-2-(2-甲基吡啶-4-基)-n-(吡啶-3-基)-8，9-二氢-6h-5，9-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环辛四烯-10(7h)-甲酰胺
在氮气下在室温向(9s)-3-氯-2-(2-甲基吡啶-4-基)-7，8，9，10-四氢-6h-5，9-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环辛四烯(300mg，0.997mmol)在thf(30ml)中的搅拌溶液添加三乙胺(0.834ml，5.98mmol)、三光气(296mg，0.997mmol)且搅拌4h。然后添加吡啶-3-胺(282mg，2.99mmol)且反应在65℃加热16h。(tlc洗脱液：100％etoac：rf-0.3；uv活性)。将反应混合物冷却至室温，浓缩且残余物在水(5ml)和etoac(20ml)之间分配。将有机层分离，用无水na2so4干燥，过滤且将滤液蒸发以得到粗化合物。该粗物质通过柱色谱纯化(中性氧化铝，洗脱液：在己烷中的60％乙酸乙酯)以得到所需产物(9s)-3-氯-2-(2-甲基吡啶-4-基)-n-(吡啶-3-基)-8，9-二氢-6h-5，9-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环辛四烯-10(7h)-甲酰胺(135mg，0.319mmol，31.9％产率)，其为灰白色固体。lcms(m/z)：550.13[m+h]+，rt＝1.95分钟
1hnmr(400mhz，cdcl3)：δppm13.11(s，1h)，8.71(d，j＝5.04hz，1h)，8.49(d，j＝2.19hz，1h)，8.29(dd，j＝4.60，1.32hz，1h)，8.05-7.97(m，1h)，7.59(s，1h)，7.54(s，1h)，7.51(d，j＝5.04hz，1h)，7.22(dd，j＝8.33，4.82hz，1h)，5.00(brs，1h)，3.42-3.32(m，3h)，2.98(brd，j＝14.03hz，1h)，2.70(s，3h)，2.25(brd，j＝14.25hz，1h)，2.00-1.87(m，1h)，1.51-1.40(m，2h)
实施例67
合成(9s)-3-氯-n-(6-((r)-2，3-二羟基丙氧基)吡嗪-2-基)-2-(3-(三氟甲基)苯基)-8，9-二氢-6h-5，9-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环辛四烯-10(7h)-甲酰胺
在0℃向(9s)-3-氯-n-(6-(((s)-2，2-二甲基-1，3-二氧杂环戊烷-4-基)甲氧基)吡嗪-2-基)-2-(3-(三氟甲基)苯基)-8，9-二氢-6h-5，9-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环辛四烯-10(7h)-甲酰胺(200mg，0.331mmol)在甲醇(10ml)中的搅拌溶液中添加hcl水溶液(0.201ml，6.61mmol，36％)且搅拌2h。(tlc洗脱液：100％etoac：rf-0.2；uv活性)。反应混合物用饱和碳酸氢钠溶液碱化(直到ph-8-9)且溶剂在减压下蒸发。残余物用水(10ml)稀释且萃取至二氯甲烷(2x15ml)。合并的有机萃取物用无水硫酸钠干燥，过滤且将滤液真空蒸发且粗物质用戊烷(10ml)研磨以得到所需产物(9s)-3-氯-n-(6-((r)-2，3-二羟基丙氧基)吡嗪-2-基)-2-(3-(三氟甲基)苯基)-8，9-二氢-6h-5，9-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环辛四烯-10(7h)-甲酰胺(123mg，0.214mmol，64.6％产率)，其为灰白色固体。lcms(m/z)：565.14[m+h]+，rt＝2.33分钟
1hnmr(400mhz，cdcl3)：δppm13.27(s，1h)，8.88(s，1h)，8.03(s，1h)，7.96(brd，j＝7.67hz，1h)，7.92(s，1h)，7.78-7.74(m，1h)，7.72-7.66(m，1h)，7.61(s，1h)，5.01(brs，1h)，3.99-3.92(m，1h)，3.91-3.83(m，2h)，3.66-3.59(m，2h)，3.42-3.31(m，3h)，2.99(brd，j＝13.59hz，1h)，2.56(d，j＝4.82hz，1h)，2.26(brd，j＝15.35hz，1h)，2.07(brt，j＝6.03hz，1h)，2.00-1.86(m，1h)，1.52-1.39(m，2h)
实施例68
合成(9s)-3-甲基-2-(2-甲基吡啶-4-基)-n-(吡啶-3-基)-8，9-二氢-6h-5，9-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环辛四烯-10(7h)-甲酰胺
在氮气氛下在室温向(9s)-3-甲基-2-(2-甲基吡啶-4-基)-7，8，9，10-四氢-6h-5，9-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环辛四烯(250mg，0.892mmol)在thf(25ml)中的搅拌溶液中添加吡啶-3-基氨基甲酸苯基酯(573mg，2.68mmol)、dmap(327mg，2.68mmol)且在65℃搅拌48h。(tlc洗脱液：dcm中的5％meoh：rf-0.4；uv活性)。将反应混合物冷却至室温，浓缩且残余物在水(10ml)和etoac(30ml)之间分配。将有机层分离，用无水na2so4干燥，过滤且将滤液蒸发以得到粗化合物。该粗物质通过柱色谱纯化(中性氧化铝，洗脱液：70％etoac在己烷中)以得到(9s)-3-甲基-2-(2-甲基吡啶-4-基)-n-(吡啶-3-基)-8，9-二氢-6h-5，9-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环辛四烯-10(7h)-甲酰胺(178mg，0.437mmol，49.0％产率)，其为淡黄色固体。lcms(m/z)：401.1[m+h]+，rt＝3.342分钟。
1hnmr(400mhz，cdcl3)：δppm13.57(s，1h)，8.68(d，j＝5.26hz，1h)，8.48(d，j＝2.41hz，1h)，8.26(dd，j＝4.71，1.43hz，1h)，8.08-7.99(m，1h)，7.42-7.36(m，2h)，7.30(dd，j＝5.15，1.21hz，1h)，7.20(dd，j＝8.33，4.60hz，1h)，4.97(brs，1h)，3.42-3.28(m，3h)，3.00(brd，j＝13.59hz，1h)，2.69(s，3h)，2.36(s，3h)，2.30-2.20(m，1h)，2.01-1.87(m，1h)，1.54-1.35(m，2h)
实施例69
合成(4s)-8-氯-n-(2-((r)-2，3-二羟基丙氧基)嘧啶-5-基)-7-(3-(三氟甲基)苯基)-3，4-二氢-1，4-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂
在室温向(9s)-3-氯-n-(2-(((s)-2，2-二甲基-1，3-二氧杂环戊烷-4-基)甲氧基)嘧啶-5-基)-2-(3-(三氟甲基)苯基)-8，9-二氢-6h-5，9-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环辛四烯-10(7h)-甲酰胺(150mg，0.248mmol)在甲醇(10ml)中的搅拌溶液中添加hcl水溶液(1.240ml，2.479mmol，36％)且搅拌2h。(tlc洗脱液：100％etoac：rf-0.2；uv活性)。反应混合物用饱和碳酸氢钠溶液碱化(直到ph8-9)且溶剂在减压下蒸发。残余物用水(5ml)稀释且萃取至二氯甲烷(2x10ml)。合并的有机萃取物用无水硫酸钠干燥，过滤且将滤液真空蒸发且粗物质用乙醚(10ml)和戊烷(10ml)研磨以得到所需产物(9s)-3-氯-n-(2-((r)-2，3-二羟基丙氧基)嘧啶-5-基)-2-(3-(三氟甲基)苯基)-8，9-二氢-6h-5，9-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环辛四烯-10(7h)-甲酰胺(89mg，0.153mmol，61.6％产率)，其为灰白色固体。lcms(m/z)：565.17[m+h]+，rt＝2.30min
1hnmr(400mhz，cdcl3)：δppm13.10(s，1h)，8.58(s，2h)，8.02(s，1h)，7.94(d，j＝7.89hz，1h)，7.77(d，j＝7.89hz，1h)，7.71-7.65(m，1h)，7.61(s，1h)，4.98(brs，1h)，4.51-4.41(m，2h)，4.15-4.06(m，1h)，3.82-3.67(m，2h)，3.44-3.31(m，3h)，3.14(d，j＝5.26hz，1h)，2.98(brd，j＝13.59hz，1h)，2.34-2.18(m，2h)，2.00-1.88(m，1h)，1.54-1.42(m，2h)
实施例70
合成(9s)-3-氯-n-(6-((r)-2，3-二羟基丙氧基)嘧啶-4-基)-2-(3-(三氟甲基)苯基)-8，9-二氢-6h-5，9-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环辛四烯-10(7h)-甲酰胺
在0℃向(9s)-3-氯-n-(6-(((s)-2，2-二甲基-1，3-二氧杂环戊烷-4-基)甲氧基)嘧啶-4-基)-2-(3-(三氟甲基)苯基)-8，9-二氢-6h-5，9-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环辛四烯-10(7h)-甲酰胺(0.25g，0.413mmol)在甲醇(10ml)中的搅拌溶液中添加hcl水溶液(0.517ml，6.20mmol，36％)且在室温搅拌1h。(tlc洗脱液：100％etoac：rf-0.2；uv活性)。反应混合物通过添加饱和碳酸氢钠溶液碱化(直到ph-8-9)然后浓缩。残余物用水(10ml)稀释且萃取至etoac(2x25ml)。合并的有机萃取物用无水na2so4干燥，过滤且将滤液蒸发以得到粗产物。粗物质用乙醚(10ml)研磨以得到所需产物(9s)-3-氯-n-(6-((r)-2，3-二羟基丙氧基)嘧啶-4-基)-2-(3-(三氟甲基)苯基)-8，9-二氢-6h-5，9-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环辛四烯-10(7h)-甲酰胺(0.18g，0.311mmol，75％产率)，其为灰白色固体。lcms(m/z)：565.14[m+h]+，rt＝2.51分钟。
1hnmr(400mhz，cdcl3)：δppm13.64(s，1h)，8.35(s，1h)，8.19(s，1h)，8.11(brd，j＝7.89hz，1h)，7.75(brd，j＝8.11hz，1h)，7.69-7.60(m，2h)，7.55(s，1h)，4.95(brs，1h)，4.51-4.46(m，2h)，4.06-3.98(m，1h)，3.75-3.63(m，2h)，3.48-3.31(m，4h)，2.99(brd，j＝13.59hz，1h)，2.51(brt，j＝6.14hz，1h)，2.23(brd，j＝12.28hz，1h)，1.98-1.88(m，1h)，1.49-1.40(m，2h)。
实施例71
合成(9s)-3-氯-n-环丙基-2-(3-(三氟甲基)苯基)-8，9-二氢-6h-5，9-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环辛四烯-10(7h)-甲酰胺
在室温向(9s)-3-氯-2-(3-(三氟甲基)苯基)-8，9-二氢-6h-5，9-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环辛四烯-10(7h)-甲酸苯基酯(400mg，0.844mmol)在thf(30ml)中的搅拌溶液中添加dmap(516mg，4.22mmol)、环丙烷胺(0.301ml，4.22mmol)且在65℃搅拌16h。(tlc洗脱液：石油醚中的70％乙酸乙酯，.rf：0.4)。将反应混合物冷却至室温，真空浓缩且残余物在水(40ml)和etoac(80ml)之间分配。将有机层分离且用无水na2so4干燥，过滤且将滤液蒸发以得到粗化合物。该粗化合物通过柱色谱纯化(使用硅胶，洗脱液50％乙酸乙酯在己烷中)，然后用制备型hplc纯化(柱：xbridgec18(150x4.6mm，3.5μ)，流动相：a：0.01m碳酸氢铵，b：acn，梯度：时间/％b：0/5，0.8/5，5/50，8/95，12/95，12.5/5，15/5，温度：室温，流速：0.8ml/min，稀释剂：acn)以得到(9s)-3-氯-n-环丙基-2-(3-(三氟甲基)苯基)-8，9-二氢-6h-5，9-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环辛四烯-10(7h)-甲酰胺(118mg，0.269mmol，31.9％产率)，其为灰白色固体。lcms(m/z)：437.05[m+h]+；rt＝2.03min
1hnmr(400mhz，cdcl3)：δppm10.51(brs，1h)，7.97(s，1h)，7.92(d，j＝7.67hz，1h)，7.71(d，j＝7.67hz，1h)，7.64-7.59(m，1h)，7.50(s，1h)，4.95(t，j＝2.19hz，1h)，3.35-3.26(m，3h)，2.89(brd，j＝13.59hz，1h)，2.79(tq，j＝7.19，3.68hz，1h)，2.24-2.16(m，1h)，1.92-1.81(m，1h)，1.52-1.33(m，2h)，0.75-0.67(m，2h)，0.46-0.40(m，2h)。
实施例72
合成(9s)-3-氯-n-(2-((s)-2，3-二羟基丙氧基)嘧啶-5-基)-2-(3-(三氟甲基)苯基)-8，9-二氢-6h-5，9-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环辛四烯-10(7h)-甲酰胺
在0℃向(9s)-3-氯-n-(2-(((r)-2，2-二甲基-1，3-二氧杂环戊烷-4-基)甲氧基)嘧啶-5-基)-2-(3-(三氟甲基)苯基)-8，9-二氢-6h-5，9-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环辛四烯-10(7h)-甲酰胺(300mg，0.496mmol)在甲醇(20ml)中的搅拌溶液中添加hcl水溶液(1.2ml，14.40mmol)且搅拌4h。(tlc洗脱液：100％etoac，rf：0.2)。反应混合物真空浓缩且残余物用饱和nahco3溶液(20ml)碱化。将所得固体过滤且通过手性纯化(柱/尺寸：chiralpakad-h(250x30)mm，5μ％co2：50.0％％共溶剂：50.0％(0.5％dea在meoh中)，总流量：70.0g/min，反压：100.0巴，uv：260nm，堆积时间：14.min，负载/进样：38.0mg，溶解：甲醇，总进样数：8，仪器详情：make/model：tharsfc-80)以得到(9s)-3-氯-n-(2-((s)-2，3-二羟基丙氧基)嘧啶-5-基)-2-(3-(三氟甲基)苯基)-8，9-二氢-6h-5，9-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环辛四烯-10(7h)-甲酰胺(139mg，0.239mmol，48.1％产率)，其为灰白色固体。lcms(m/z)：565.17[m+h]+，rt＝2.30min.
1hnmr(400mhz，cdcl3)：δppm13.10(s，1h)，8.58(s，2h)，8.08-7.91(m，2h)，7.78(s，1h)，7.71-7.57(m，2h)，4.98(brs，1h)，4.59-4.38(m，2h)，4.17-4.05(m，1h)，3.87-3.63(m，2h)，3.47-3.26(m，3h)，2.98(d，j＝13.81hz，1h)，2.23(d，j＝14.25hz，2h)，2.04-1.83(m，2h)，1.69-1.38(m，2h)
实施例73
合成(9s)-3-氯-n-(5-((r)-2，3-二羟基丙氧基)吡嗪-2-基)-2-(3-(三氟甲基)苯基)-8，9-二氢-6h-5，9-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环辛四烯-10(7h)-甲酰胺
经5分钟在0℃向(9s)-3-氯-n-(5-(((s)-2，2-二甲基-1，3-二氧杂环戊烷-4-基)甲氧基)吡嗪-2-基)-2-(3-(三氟甲基)苯基)-8，9-二氢-6h-5，9-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环辛四烯-10(7h)-甲酰胺(200mg，0.331mmol)在甲醇(2ml)中的搅拌溶液中滴加盐酸(0.5ml，16.46mmol)。然后将反应混合物在室温搅拌2h。(tlc洗脱液：dcm中的10％meoh：rf-0.3)。蒸发溶剂且用碳酸氢钠溶液中和，过滤所得固体且用水洗涤以得到所需产物(9s)-3-氯-n-(5-((r)-2，3-二羟基丙氧基)吡嗪-2-基)-2-(3-(三氟甲基)苯基)-8，9-二氢-6h-5，9-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环辛四烯-10(7h)-甲酰胺(130mg，0.229mmol，69.2％产率)，其为白色固体。lcms(m/z)：565.17[m+h]+，rt＝2.51分钟。
1hnmr(400mhz，dmso-d6)：δppm13.35(s，1h)，8.83(d，j＝1.32hz，1h)，8.18-8.12(m，2h)，7.91-7.85(m，3h)，7.83-7.76(m，1h)，4.92(d，j＝5.26hz，1h)，4.94-4.90(m，1h)，4.83(brs，1h)，4.63(t，j＝5.70hz，1h)，4.30(dd，j＝10.85，4.06hz，1h)，4.15(dd，j＝10.74，6.58hz，1h)，3.85-3.76(m，1h)，3.48-3.37(m，3h)，3.32(d，j＝3.07hz，1h)，2.91(d，j＝14.03hz，1h)，2.11-1.76(m，2h)，1.50-1.27(m，2h)。
实施例74
合成(9s)-3-氯-n-(5-((s)-2，3-二羟基丙氧基)吡啶-2-基)-2-(3-(三氟甲基)苯基)-8，9-二氢-6h-5，9-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环辛四烯-10(7h)-甲酰胺
在0℃向(9s)-3-氯-n-(5-(((r)-2，2-二甲基-1，3-二氧杂环戊烷-4-基)甲氧基)吡啶-2-基)-2-(3-(三氟甲基)苯基)-8，9-二氢-6h-5，9-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环辛四烯-10(7h)-甲酰胺(250mg，0.414mmol)在甲醇(8ml)和四氢呋喃(5ml)中的搅拌溶液中添加hcl(0.5ml，16.46mmol)然后在室温搅拌2h。(tlc洗脱液：纯的乙酸乙酯，rf：0.2)。将反应混合物真空浓缩且残余物用饱和nahco3溶液中和且过滤所得固体，用正戊烷洗涤(10mlx3)以得到所需产物(9s)-3-氯-n-(5-((s)-2，3-二羟基丙氧基)吡啶-2-基)-2-(3-(三氟甲基)苯基)-8，9-二氢-6h-5，9-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环辛四烯-10(7h)-甲酰胺(201mg，0.354mmol，86％产率)，其为灰白色固体。lcms(m/z)：564.17[m+h]+，rt＝2.44分钟。
1hnmr(400mhz，cdcl3)：δppm13.34(s，1h)，8.22(s，1h)，8.14(d，j＝7.89hz，1h)，8.04(d，j＝8.99hz，1h)，7.95(d，j＝3.07hz，1h)，7.73(d，j＝7.89hz，1h)，7.67-7.61(m，1h)，7.58(s，1h)，7.25-7.22(m，1h)，4.98(brs，1h)，4.14-4.03(m，3h)，3.89-3.82(m，1h)，3.79-3.72(m，1h)，3.40-3.31(m，3h)，2.98(d，j＝13.81hz，1h)，2.54(d，j＝4.38hz，1h)，2.25(d，j＝12.06hz，1h)，1.97-1.87(m，2h)，1.52-1.35(m，2h)。
实施例75
合成(9s)-3-氯-n-(4-((s)-2，3-二羟基丙氧基)嘧啶-2-基)-2-(3-(三氟甲基)苯基)-8，9-二氢-6h-5，9-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环辛四烯-10(7h)-甲酰胺
在0℃向(9s)-3-氯-n-(4-(((r)-2，2-二甲基-1，3-二氧杂环戊烷-4-基)甲氧基)嘧啶-2-基)-2-(3-(三氟甲基)苯基)-8，9-二氢-6h-5，9-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环辛四烯-10(7h)-甲酰胺(200mg，0.331mmol)在甲醇(5ml)和四氢呋喃(5ml)中的搅拌溶液中添加hcl(0.3ml，9.87mmol)然后在室温搅拌1h。(tlc体系：纯的乙酸乙酯，rf：0.1)。将反应混合物真空浓缩且残余物用饱和nahco3溶液中和且过滤所得固体，用正戊烷洗涤(10mlx2)以得到所需产物(9s)-3-氯-n-(4-((s)-2，3-二羟基丙氧基)嘧啶-2-基)-2-(3-(三氟甲基)苯基)-8，9-二氢-6h-5，9-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环辛四烯-10(7h)-甲酰胺(114mg，0.200mmol，60.4％产率)，其为灰白色固体。lcms(m/z)：565.17[m+h]+，rt＝2.05分钟。
1hnmr(400mhz，cdcl3)：δppm13.90(s，1h)，8.21-8.16(m，2h)，8.10(d，j＝7.67hz，1h)，7.73(d，j＝7.89hz，1h)，7.66-7.59(m，2h)，6.42(d，j＝5.70hz，1h)，5.03(brs，1h)，4.64(dd，j＝11.95，5.37hz，1h)，4.46(dd，j＝11.95，4.49hz，1h)，4.11(d，j＝6.36hz，1h)，3.94-3.88(m，1h)，3.64-3.57(m，2h)，3.46-3.30(m，4h)，2.97(d，j＝14.03hz，1h)，2.27(d，j＝12.50hz，1h)，1.97-1.86(m，1h)，1.52-1.39(m，2h)。
实施例76
合成(9s)-3-氯-n-(5-((r)-2，3-二羟基丙氧基)吡啶-3-基)-2-(3-(三氟甲基)苯基)-8，9-二氢-6h-5，9-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环辛四烯-10(7h)-甲酰胺
经2分钟在0℃向(9s)-3-氯-n-(5-(((s)-2，2-二甲基-1，3-二氧杂环戊烷-4-基)甲氧基)吡啶-3-基)-2-(3-(三氟甲基)苯基)-8，9-二氢-6h-5，9-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环辛四烯-10(7h)-甲酰胺(240mg，0.397mmol)在甲醇(10ml)中的搅拌溶液中滴加hcl水溶液(0.345ml，3.97mmol)且在室温搅拌1h。(tlc体系：100％乙酸乙酯。rf值：0.3)。然后该反应混合物在饱和nahco3溶液(20ml)和dcm(30ml)之间分配，分离的有机层用无水硫酸钠干燥且在减压下浓缩以得到粗化合物。粗产物通过快速柱色谱法纯化(100-200硅胶，用乙酸乙酯中的0-2％meoh洗脱)以得到所需产物(9s)-3-氯-n-(5-((r)-2，3-二羟基丙氧基)吡啶-3-基)-2-(3-(三氟甲基)苯基)-8，9-二氢-6h-5，9-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环辛四烯-10(7h)-甲酰胺(170mg，0.299mmol，75％产率)，其为灰白色固体。lcms(m/z)：564.20[m+h]+，rt＝2.17分钟。
1hnmr(400mhz，cdcl3)：δppm13.21(s，1h)，8.04(s，1h)，7.99(d，j＝2.41hz，1h)，7.94(d，j＝7.45hz，1h)，7.88(t，j＝2.30hz，1h)，7.83(d，j＝1.97hz，1h)，7.76-7.80(m，1h)，7.67-7.74(m，1h)，7.61(s，1h)，4.97(brs，1h)，4.01-4.13(m，3h)，3.79-3.86(m，2h)，3.71-3.77(m，1h)，3.30-3.42(m，3h)，2.99(brd，j＝13.81hz，1h)，2.63(brs，1h)，2.24(brd，j＝14.69hz，1h)，1.88-1.99(m，1h)，1.39-1.48(m，1h)，1.26(s，1h)。
实施例77
合成(9s)-3-氯-n-(5-((s)-2，3-二羟基丙氧基)吡嗪-2-基)-2-(3-(三氟甲基)苯基)-8，9-二氢-6h-5，9-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环辛四烯-10(7h)-甲酰胺
经2分钟在0℃向(9s)-3-氯-n-(5-(((r)-2，2-二甲基-1，3-二氧杂环戊烷-4-基)甲氧基)吡嗪-2-基)-2-(3-(三氟甲基)苯基)-8，9-二氢-6h-5，9-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环辛四烯-10(7h)-甲酰胺(200mg，0.331mmol)在甲醇(10ml)中的搅拌溶液中滴加hcl水溶液(0.287ml，3.31mmol)，且在室温搅拌1h。(tlc体系：100％乙酸乙酯.rf值：0.4)。然后该反应混合物在饱和nahco3溶液(20ml)和dcm(30ml)之间分配用无水硫酸钠干燥且在减压下浓缩以得到所需产物(9s)-3-氯-n-(5-((s)-2，3-二羟基丙氧基)吡嗪-2-基)-2-(3-(三氟甲基)苯基)-8，9-二氢-6h-5，9-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环辛四烯-10(7h)-甲酰胺(171mg，0.299mmol，91％产率)，其为灰白色固体。lcms(m/z)：565.17[m+h]+，rt＝2.51分钟。
1hnmr(400mhz，dmso-d6)：δppm13.35(s，1h)，8.83(s，1h)，8.15(s，2h)，7.26-7.96(m，4h)，4.92(d，j＝5.26hz，1h)，4.83(brs，1h)，4.63(brt，j＝5.81hz，1h)，4.30(brdd，j＝10.85，3.84hz，1h)，4.15(brdd，j＝10.63，6.69hz，1h)，3.81(brdd，j＝10.19，5.15hz，1h)，3.30-3.63(m，5h)，2.91(brd，j＝13.37hz，1h)，1.88-2.11(m，2h)，1.34(brd，j＝4.38hz，2h)。
实施例78
合成(9s)-3-氯-n-(4-((r)-2，3-二羟基丙氧基)嘧啶-2-基)-2-(3-(三氟甲基)苯基)-8，9-二氢-6h-5，9-亚甲基吡啶并[2，3-b]h，4]二氮杂环辛四烯-10(7h)-甲酰胺
经5分钟在0℃向(9s)-3-氯-n-(4-(((s)-2，2-二甲基-1，3-二氧杂环戊烷-4-基)甲氧基)嘧啶-2-基)-2-(3-(三氟甲基)苯基)-8，9-二氢-6h-5，9-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环辛四烯-10(7h)-甲酰胺(290mg，0.479mmol)在甲醇(10ml)中的溶液中滴加hcl水溶液(0.416ml，4.79mmol)且在室温搅拌1h。(tlc体系：100％乙酸乙酯.rf值：0.3)。然后该反应混合物在饱和nahco3水溶液(20ml)和dcm(30ml)之间分配。分离的有机层用无水硫酸钠干燥且在减压下浓缩以得到所需产物(9s)-3-氯-n-(4-((r)-2，3-二羟基丙氧基)嘧啶-2-基)-2-(3-(三氟甲基)苯基)-8，9-二氢-6h-5，9-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环辛四烯-10(7h)-甲酰胺(100mg，0.173mmol，36.1％产率)，其为灰白色固体。lcms(m/z)：565.10[m+h]+，rt＝2.07分钟。
1hnmr(400mhz，dmso-d6)：δppm13.42(s，1h)，8.31-8.18(m，1h)，8.17-7.97(m，2h)，7.95-7.80(m，1h)，6.58-6.41(m，1h)，4.92(brd，j＝5.04hz，1h)，4.80(brs，1h)，4.62(brt，j＝5.70hz，1h)，4.24-4.13(m，2h)，4.08(brdd，j＝10.85，5.81hz，1h)，3.79-3.67(m，2h)，3.52-3.31(m，3h)，3.34-3.30(m，2h)，2.90(brd，j＝12.72hz，1h)，2.04-1.78(m，2h)，1.42-1.19(m，2h)。
实施例79
合成(9s)-3-氯-n-(6-((r)-2，3-二羟基丙氧基)吡啶-3-基)-2-(3-(三氟甲基)苯基)-8，9-二氢-6h-5，9-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环辛四烯-10(7h)-甲酰胺
在0℃向(9s)-3-氯-n-(6-(((s)-2，2-二甲基-1，3-二氧杂环戊烷-4-基)甲氧基)吡啶-3-基)-2-(3-(三氟甲基)苯基)-8，9-二氢-6h-5，9-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环辛四烯-10(7h)-甲酰胺(300mg，0.497mmol)在甲醇(10ml)中的搅拌溶液中添加hcl(0.151ml，4.97mmol)且在25℃搅拌2h。(tlc体系：100％乙酸乙酯，rf值：0.2)。反应混合物用饱和nahco3溶液淬灭(10ml)且用dcm萃取(2x30ml)。合并的有机层用无水na2so4干燥，过滤且将滤液蒸发以得到粗化合物。该粗化合物用正戊烷研磨(3x10ml)。以得到所需产物(9s)-3-氯-n-(6-((r)-2，3-二羟基丙氧基)吡啶-3-基)-2-(3-(三氟甲基)苯基)-8，9-二氢-6h-5，9-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环辛四烯-10(7h)-甲酰胺(140mg，0.248mmol，49.8％产率)，其为白色固体。lcms(m/z)：564.17[m+h]+，rt＝2.42分钟。
1hnmr(400mhz，cdcl3)：δppm12.92(s，1h)，8.09(d，j＝2.85hz，1h)，8.03(s，1h)，7.96(d，j＝7.67hz，1h)，7.77(dd，j＝8.88，2.74hz，2h)，7.71-7.64(m，1h)，7.59(s，1h)，6.73(d，j＝8.99hz，1h)，4.98(brs，1h)，4.43-4.39(m，2h)，4.01-3.95(m，2h)，3.70-3.61(m，2h)，3.42-3.30(m，3h)，2.98(d，j＝13.81hz，1h)，2.69(t，j＝6.47hz，1h)，2.24(d，j＝12.06hz，1h)，1.98-1.87(m，1h)，1.53-1.40(m，2h)。
实施例80
合成(9s)-3-氯-n-(5-((s)-2，3-二羟基丙氧基)吡啶-3-基)-2-(3-(三氟甲基)苯基)-8，9-二氢-6h-5，9-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环辛四烯-10(7h)-甲酰胺
经5分钟在0℃向(9s)-3-氯-n-(5-(((r)-2，2-二甲基-1，3-二氧杂环戊烷-4-基)甲氧基)吡啶-3-基)-2-(3-(三氟甲基)苯基)-8，9-二氢-6h-5，9-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环辛四烯-10(7h)-甲酰胺(200mg，0.331mmol)在甲醇(5ml)中的搅拌溶液中添加hcl水溶液(1.0ml，32.9mmol)。然后将反应混合物在室温搅拌1h。(tlc洗脱液：dcm中的10％meoh，rf：0.3；uv活性)且将反应混合物倒入冰冷却的水(10ml)中，反应混合物的ph用饱和nahco3溶液调节至中性且用etoac萃取(2x25ml)。合并的有机层用水(10ml)、盐水溶液(10ml)洗涤且用无水na2so4干燥，过滤且在减压下浓缩以得到粗化合物。该粗化合物通过快速柱色谱法纯化(硅胶：100-200目，洗脱液：dcm中的5％meoh)以得到所需产物(9s)-3-氯-n-(5-((s)-2，3-二羟基丙氧基)吡啶-3-基)-2-(3-(三氟甲基)苯基)-8，9-二氢-6h-5，9-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环辛四烯-10(7h)-甲酰胺(110mg，0.190mmol，57.4％产率)，其为灰白色固体。lcms(m/z)：564.38[m+h]+，rt＝2.17分钟。
1hnmr(400mhz，dmso-d6)：δppm13.07(s，1h)，8.18-8.10(m，2h)，7.95-7.81(m，5h)，7.64(brs，1h)，4.96(d，j＝5.04hz，1h)，4.82(brs，1h)，4.67(t，j＝5.59hz，1h)，3.99(dd，j＝9.32，3.84hz，1h)，3.87-3.75(m，2h)，3.45(t，j＝5.59hz，3h)，3.40(s，1h)，2.89(d，j＝13.59hz，1h)，2.04-1.90(m，2h)，1.41-1.29(m，3h)。
实施例81
合成(9s)-3-氯-n-(2-((s)-2，3-二羟基丙氧基)嘧啶-4-基)-2-(3-(三氟甲基)苯基)-8，9-二氢-6h-5，9-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环辛四烯-10(7h)-甲酰胺
在氮气下在0℃向(9s)-3-氯-n-(2-(((r)-2，2-二甲基-1，3-二氧杂环戊烷-4-基)甲氧基)嘧啶-4-基)-2-(3-(三氟甲基)苯基)-8，9-二氢-6h-5，9-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环辛四烯-10(7h)-甲酰胺(170mg，0.281mmol)在甲醇(10ml)中的溶液中添加hcl水溶液(1ml，32.9mmol，36％)且在室温搅拌2h。(tlc洗脱液：100％乙酸乙酯：rf-0.2；uv活性)。反应混合物在0℃用饱和碳酸氢钠溶液碱化(直到ph-8-9)且溶剂在减压下蒸发。残余物用水(30ml)稀释且萃取至dcm(2x100ml)中。合并的有机萃取物用无水硫酸钠干燥，过滤且将滤液蒸发以得到粗物质，其为白色固体。粗物质用醚研磨且过滤以得到(9s)-3-氯-n-(2-((s)-2，3-二羟基丙氧基)嘧啶-4-基)-2-(3-(三氟甲基)苯基)-8，9-二氢-6h-5，9-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环辛四烯-10(7h)-甲酰胺(70mg，0.121mmol，43.0％产率)，其为灰白色固体。lcms(m/z)：565.17[m+h]+，rt＝2.32分钟。
1hnmr(400mhz，cdcl3)：δppm13.57(s，1h)，8.32(d，j＝5.70hz，1h)，8.15-7.97(m，2h)，7.87-7.67(m，3h)，7.62(s，1h)，4.95(brs，1h)，4.31-4.07(m，2h)，4.00-3.85(m，1h)，3.77-3.52(m，2h)，3.43-3.21(m，3h)，3.16(brd，j＝5.26hz，1h)，3.00(brd，j＝13.81hz，1h)，2.41(brt，j＝6.25hz，1h)，2.24(brd，j＝14.69hz，1h)，2.03-1.85(m，1h)，1.54-1.37(m，2h)。
实施例82
合成(9s)-3-氯-n-(4-((r)-2，3-二羟基丙氧基)吡啶-2-基)-2-(3-(三氟甲基)苯基)-8，9-二氢-6h-5，9-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环辛四烯-10(7h)-甲酰胺
在0℃经5分钟向(9s)-3-氯-n-(4-(((s)-2，2-二甲基-1，3-二氧杂环戊烷-4-基)甲氧基)吡啶-2-基)-2-(3-(三氟甲基)苯基)-8，9-二氢-6h-5，9-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环辛四烯-10(7h)-甲酰胺(180mg，0.298mmol)在甲醇(10ml)中的搅拌溶液中添加盐酸(5ml，165mmol)。然后将反应混合物在30℃搅拌2h。(tlc洗脱液：dcm中的5％meoh：rf-0.5；uv活性)。蒸发溶剂且反应混合物用碳酸氢钠溶液中和，过滤所得固体且用水(10ml)和正戊烷(2x20ml)洗涤以得到所需产物(9s)-3-氯-n-(4-((r)-2，3-二羟基丙氧基)吡啶-2-基)-2-(3-(三氟甲基)苯基)-8，9-二氢-6h-5，9-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环辛四烯-10(7h)-甲酰胺(120mg，0.212mmol，35.5％产率)，其为灰白色固体。lcms(m/z)：564[m+h]+，rt＝6.0分钟。
1hnmr(400mhz，cdcl3)：δppm13.43(s，1h)，8.23(s，1h)，8.16(d，j＝8.11hz，1h)，8.04(d，j＝5.70hz，1h)，7.71-7.79(m，2h)，7.60-7.67(m，1h)，7.58(s，1h)，6.53(dd，j＝5.70，2.19hz，1h)，4.96(s，1h)，4.08-4.18(m，2h)，3.79-3.87(m，1h)，3.70-3.77(m，1h)，3.31-3.40(m，3h)，3.00(d，j＝13.59hz，1h)，2.60(s，3h)，2.24(d，j＝12.93hz，1h)，2.05(d，j＝7.67hz，1h)，1.86-1.98(m，1h)，1.38-1.52(m，1h)。
实施例83
合成(9s)-3-氯-n-(2-((s)-2，3-二羟基丙氧基)吡啶-4-基)-2-(3-(三氟甲基)苯基)-8，9-二氢-6h-5，9-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环辛四烯-10(7h)-甲酰胺
在0℃经5min向(9s)-3-氯-n-(2-(((r)-2，2-二甲基-1，3-二氧杂环戊烷-4-基)甲氧基)吡啶-4-基)-2-(3-(三氟甲基)苯基)-8，9-二氢-6h-5，9-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环辛四烯-10(7h)-甲酰胺(420mg，0.695mmol)在甲醇(10ml)中的搅拌溶液中添加盐酸(5ml，165mmol)。然后将反应混合物在30℃搅拌30分钟。(tlc体系：dcm中的5％meoh：rf-0.5；uv活性)。然后蒸发溶剂且反应混合物用碳酸氢钠溶液中和，过滤且用水和正戊烷(2x20ml)洗涤以得到所需产物(9s)-3-氯-n-(2-((s)-2，3-二羟基丙氧基)吡啶-4-基)-2-(3-(三氟甲基)苯基)-8，9-二氢-6h-5，9-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环辛四烯-10(7h)-甲酰胺(299mg，0.517mmol，37.1％产率)，其为灰白色固体。lcms(m/z)：564.20[m+h]+，rt＝2.35分钟。
1hnmr(400mhz，cdcl3)：δppm13.29(s，1h)，8.02(s，1h)，7.97(d，j＝7.67hz，1h)，7.85(d，j＝5.70hz，1h)，7.81(d，j＝7.45hz，1h)，7.73-7.65(m，1h)，7.61(s，1h)，7.06(d，j＝1.53hz，1h)，6.69(dd，j＝5.70，1.75hz，1h)，4.97(s，1h)，4.46-4.42(m，2h)，4.28(d，j＝4.82hz，1h)，3.96(d，j＝4.38hz，1h)，3.69-3.60(m，2h)，3.41-3.32(m，3h)，2.98(d，j＝13.81hz，1h)，2.85(t，j＝6.36hz，1h)，2.23(d，j＝14.03hz，1h)，2.01-1.87(m，1h)，1.49-1.38(m，2h)。
实施例84
合成(9s)-3-氯-n-(6-((s)-2，3-二羟基丙氧基)吡啶-3-基)-2-(3-(三氟甲基)苯基)-8，9-二氢-6h-5，9-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环辛四烯-10(7h)-甲酰胺
经5分钟在0℃向(9s)-3-氯-n-(6-(((r)-2，2-二甲基-1，3-二氧杂环戊烷-4-基)甲氧基)吡啶-3-基)-2-(3-(三氟甲基)苯基)-8，9-二氢-6h-5，9-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环辛四烯-10(7h)-甲酰胺(150mg，0.248mmol)在甲醇(10ml)中的搅拌溶液中添加盐酸(4ml，132mmol)。然后将反应混合物在30℃搅拌30分钟。(tlc洗脱液：dcm中的5％meoh：rf-0.5；uv活性)。蒸发溶剂且反应混合物用碳酸氢钠溶液中和，用dcm萃取(2x50.ml)。合并的有机层用盐水溶液洗涤且用无水硫酸钠干燥，过滤且蒸发以得到粗化合物。粗产物通过combi-flash色谱法纯化(120g反相柱：洗脱液：100％乙腈)且所得产物用正戊烷洗涤(2x20ml)以得到所需产物(9s)-3-氯-n-(6-((s)-2，3-二羟基丙氧基)吡啶-3-基)-2-(3-(三氟甲基)苯基)-8，9-二氢-6h-5，9-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环辛四烯-10(7h)-甲酰胺(108mg，0.190mmol，77％产率)，其为灰白色固体。lc-ms(m/z)：564.17[m+h]+，rt＝2.42分钟。
1hnmr(400mhz，cdcl3)：δppm12.92(s，1h)，8.09(d，j＝2.85hz，1h)，8.03(s，1h)，7.96(d，j＝7.67hz，1h)，7.77(dd，j＝8.99，2.63hz，2h)，7.71-7.63(m，1h)，7.59(s，1h)，6.73(d，j＝8.77hz，1h)，4.99(s，1h)，4.42(d，j＝4.17hz，2h)，3.97(s，2h)，3.73-3.61(m，2h)，3.40-3.31(m，3h)，2.98(d，j＝13.59hz，1h)，2.67(t，j＝6.14hz，1h)，2.23(d，j＝14.03hz，1h)，1.99-1.87(m，1h)，1.49-1.38(m，2h)。
实施例85
合成(9s)-3-氯-n-(2-((r)-2，3-二羟基丙氧基)吡啶-4-基)-2-(3-(三氟甲基)苯基)-8，9-二氢-6h-5，9-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环辛四烯-10(7h)-甲酰胺
在0℃向(9s)-3-氯-n-(2-(((s)-2，2-二甲基-1，3-二氧杂环戊烷-4-基)甲氧基)吡啶-4-基)-2-(3-(三氟甲基)苯基)-8，9-二氢-6h-5，9-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环辛四烯-10(7h)-甲酰胺(250mg，0.414mmol)在甲醇(5.0ml)中的搅拌悬浮液中添加hcl水溶液(0.349ml，4.14mmol，36％)且在室温搅拌5h。反应完成后挥发物在减压下蒸发以得到粗物质(tlc洗脱液体系：dcm中的5％甲醇，rf-0.2，uv活性)。粗物质用水(5ml)稀释且用碳酸氢钠水溶液碱化(直到ph8)。将沉淀的固体过滤，用水洗涤且真空干燥以得到(9s)-3-氯-n-(2-((r)-2，3-二羟基丙氧基)吡啶-4-基)-2-(3-(三氟甲基)苯基)-8，9-二氢-6h-5，9-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环辛四烯-10(7h)-甲酰胺(149.0mg，0.262mmol，63.4％产率)，其为灰白色固体。lcms(m/z)：564.20[m+h]+，rt＝2.37分钟。
1hnmr(400mhz，cdcl3)：δppm13.30(s，1h)，8.02(s，1h)，7.97(brd，j＝7.67hz，1h)7.78-7.88(m，2h)，7.66-7.73(m，1h)，7.61(s，1h)，7.06(d，j＝1.32hz，1h)，6.69(dd，j＝5.70，1.53hz，1h)，4.96(brs，1h)，4.43(d，j＝4.60hz，2h)，4.30(brs，1h)，3.97(brd，j＝3.73hz，1h)，3.65(brd，j＝4.38hz，2h)，3.29-3.42(m，3h)，2.87-3.01(m，2h)，2.23(brd，j＝14.47hz，1h)，1.87-2.00(m，1h)，1.39-1.55(m，2h)。
实施例86
合成(9s)-3-氯-n-(6-((s)-2，3-二羟基丙氧基)嘧啶-4-基)-2-(3-(三氟甲基)苯基)-8，9-二氢-6h-5，9-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环辛四烯-10(7h)-甲酰胺
在0℃经5分钟向(9s)-3-氯-n-(6-(((r)-2，2-二甲基-1，3-二氧杂环戊烷-4-基)甲氧基)嘧啶-4-基)-2-(3-(三氟甲基)苯基)-8，9-二氢-6h-5，9-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环辛四烯-10(7h)-甲酰胺(200mg，0.331mmol)在甲醇(5ml)中的搅拌溶液中滴加盐酸(1ml，32.9mmol)。然后将反应混合物在28℃搅拌30分钟。(tlc洗脱液：dcm中的10％meoh：rf-0.2；uv活性)。反应混合物用碳酸氢钠溶液中和且过滤所得固体，用乙醚研磨以得到所需产物(9s)-3-氯-n-(6-((s)-2，3-二羟基丙氧基)嘧啶-4-基)-2-(3-(三氟甲基)苯基)-8，9-二氢-6h-5，9-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环辛四烯-10(7h)-甲酰胺(110mg，0.189mmol，57.1％产率)，其为灰白色固体。lcms(m/z)：565.10[m+h]+，rt：2.52分钟。
1hnmr(400mhz，cdcl3)：δppm13.64(s，1h)，8.35(d，j＝0.66hz，1h)，8.19(s，1h)，8.11(d，j＝7.89hz，1h)，7.75(d，j＝8.11hz，1h)，7.67-7.62(m，1h)，7.61(s，1h)，7.55(d，j＝0.88hz，1h)，4.95(brs，1h)，4.55-4.42(m，2h)，3.98-4.08(m，1h)，3.75-3.62(m，2h)，3.50-3.31(m，4h)，2.99(d，j＝13.59hz，1h)，2.52(t，j＝6.25hz，1h)，2.22(brd，j＝14.69hz，1h)，2.02-1.82(m，1h)，1.53-1.37(m，2h)。
实施例87
合成(9s)-3-氯-n-(5-((r)-2，3-二羟基丙氧基)吡啶-2-基)-2-(3-(三氟甲基)苯基)-8，9-二氢-6h-5，9-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环辛四烯-10(7h)-甲酰胺
在0℃向(9s)-3-氯-n-(5-(((s)-2，2-二甲基-1，3-二氧杂环戊烷-4-基)甲氧基)吡啶-2-基)-2-(3-(三氟甲基)苯基)-8，9-二氢-6h-5，9-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环辛四烯-10(7h)-甲酰胺(250mg，0.414mmol)在甲醇(5ml)中的搅拌溶液中添加hcl水溶液(0.126ml，4.14mmol)。将反应混合物搅拌1h。(tlc体系：rf：0.4，etoac)。在室温且在减压下浓缩以得到残余物。残余物用饱和碳酸氢钠溶液中和且过滤所得固体且干燥以得到所需产物(9s)-3-氯-n-(5-((r)-2，3-二羟基丙氧基)吡啶-2-基)-2-(3-(三氟甲基)苯基)-8，9-二氢-6h-5，9-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环辛四烯-10(7h)-甲酰胺(160mg，0.274mmol，66.1％产率)，其为灰白色固体。lcms(m/z)：564.1[m+h]+，rt＝2.44分钟。
1hnmr(400mhz，dmso-d6)：δppm13.22(s，1h)，8.23-8.12(m，2h)，7.99(d，j＝9.21hz，1h)，7.90-7.84(m，3h)，7.83-7.78(m，1h)，7.43(dd，j＝9.21，3.07hz，1h)，4.95(brs，1h)，4.83(brs，1h)，4.65(brs，1h)，4.02(dd，j＝9.87，3.95hz，1h)，3.92-3.85(m，1h)，3.82-3.74(m，1h)，3.48-3.31(m，5h)，2.89(d，j＝13.81hz，1h)，2.06-1.89(m，2h)，1.42-1.30(m，2h)。
实施例88
合成(9s)-3-氯-n-(2-((r)-2，3-二羟基丙氧基)嘧啶-4-基)-2-(3-(三氟甲基)苯基)-8，9-二氢-6h-5，9-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环辛四烯-10(7h)-甲酰胺
在氮气下在0℃向(9s)-3-氯-n-(2-(((s)-2，2-二甲基-1，3-二氧杂环戊烷-4-基)甲氧基)嘧啶-4-基)-2-(3-(三氟甲基)苯基)-8，9-二氢-6h-5，9-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环辛四烯-10(7h)-甲酰胺(300mg，0.496mmol)在甲醇(10ml)中的搅拌溶液中添加hcl水溶液(1ml，4.00mmol，36％)且在室温搅拌1h。(tlc洗脱液：dcm中的5％甲醇，rf：0.3，uv活性)。向反应混合物添加饱和nahco3溶液(直到ph-8-9)且萃取至etoac(3x10ml)中。合并的有机萃取物用无水na2so4干燥，过滤且将滤液蒸发以得到粗产物。该粗化合物通过色谱法纯化(grace仪器，使用c-18柱，流动相a：0.1％甲酸水溶液；b：acn，该产物用90％acn/0.1％甲酸水溶液洗脱)。随后所需级分浓缩且用饱和nahco3碱化且萃取至dcm中。合并的萃取物用无水na2so4干燥，过滤且蒸发以得到(9s)-3-氯-n-(2-((r)-2，3-二羟基丙氧基)嘧啶-4-基)-2-(3-(三氟甲基)苯基)-8，9-二氢-6h-5，9-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环辛四烯-10(7h)-甲酰胺(170mg，0.292mmol，58.9％产率)，其为灰白色固体。lcms(m/z)：565.2[m+h]+，rt＝2.30分钟。
1hnmr(400mhz，cdcl3)：δppm13.57(s，1h)，8.32(d，j＝5.70hz，1h)，8.10-8.05(m，2h)，7.79-7.69(m，3h)，7.62(s，1h)，4.95(brs，1h)，4.24-4.12(m，2h)，3.97(dq，j＝10.06，5.05hz，1h)，3.72-3.58(m，2h)，3.41-3.32(m，3h)，3.11(d，j＝5.26hz，1h)，3.00(brd，j＝14.03hz，1h)，2.37(t，j＝6.36hz，1h)，2.24(brd，j＝14.03hz，1h)，2.00-1.88(m，1h)，1.53-1.39(m，2h)
实施例89
合成(9s)-3-氯-n-(5-((r)-2，3-二羟基丙氧基)嘧啶-2-基)-2-(3-(三氟甲基)苯基)-8，9-二氢-6h-5，9-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环辛四烯-10(7h)-甲酰胺
在0℃向(9s)-3-氯-n-(5-(((s)-2，2-二甲基-1，3-二氧杂环戊烷-4-基)甲氧基)嘧啶-2-基)-2-(3-(三氟甲基)苯基)-8，9-二氢-6h-5，9-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环辛四烯-10(7h)-甲酰胺(120mg，0.198mmol)在甲醇(15ml)中的搅拌溶液中添加hcl水溶液(6.03μl，0.198mmol，36％)且在室温搅拌1h。(tlc洗脱液：etoac中的10％meoh：rf-0.1；uv活性)。反应混合物在0℃用饱和碳酸氢钠溶液碱化(直到ph-8-9)且浓缩。残余物用水(8ml)稀释且萃取至dcm(2x25ml)。合并的有机萃取物用无水硫酸钠干燥，过滤且将滤液蒸发在减压下以得到(9s)-3-氯-n-(5-((r)-2，3-二羟基丙氧基)嘧啶-2-基)-2-(3-(三氟甲基)苯基)-8，9-二氢-6h-5，9-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环辛四烯-10(7h)-甲酰胺(40mg，0.068mmol，34.4％产率)，其为棕色固体。lcms(m/z)：565.17[m+h]+，rt＝2.25分钟。
1hnmr(400mhz，dmso-d6)：δppm13.43(s，1h)，8.33(s，2h)，8.00-8.24(m，2h)，7.83-7.91(m，2h)，7.83-7.91(m，1h)，5.01(brd，j＝3.95hz，1h)，4.80(brs，1h)，4.47-4.74(m，1h)，4.12(dd，j＝10.08，3.73hz，2h)，3.89-4.06(m，1h)，3.36-3.48(m，3h)，3.30-3.34(m，2h)，2.89(brd，j＝13.59hz，1h)，1.98(brs，2h)，1.35(brs，2h)。
实施例90
合成(9s)-4-甲基-2-(2-甲基吡啶-4-基)-n-(吡啶-3-基)-8，9-二氢-6h-5，9-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环辛四烯-10(7h)-甲酰胺。
在室温向(9s)-4-甲基-2-(2-甲基吡啶-4-基)-7，8，9，10-四氢-6h-5，9-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环辛四烯(500mg，1.783mmol)在thf(30ml)中的搅拌溶液中添加dipea(0.934ml，5.35mmol)、三光气(318mg，1.070mmol)且搅拌1h。然后添加吡啶-3-胺(252mg，2.68mmol)且将反应混合物加热至75℃保持16h。(tlc洗脱体系：dcm中的10％meoh；rf-0.3；uv活性)。将反应混合物冷却至室温且用水(15ml)淬灭且萃取至etoac(2x15ml)。将有机层分离，用无水硫酸钠干燥，过滤且将滤液蒸发以得到粗化合物。将粗物质通过色谱法纯化(grace使用c-18reserval柱，流动相a：0.1％甲酸水溶液；b：acn，洗脱液a中的56％b)。将合并的级分蒸发且用饱和nahco3溶液碱化。水层用dcm萃取，dcm层用无水na2so4干燥，过滤且将滤液蒸发以得到(9s)-4-甲基-2-(2-甲基吡啶-4-基)-n-(吡啶-3-基)-8，9-二氢-6h-5，9-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环辛四烯-10(7h)-甲酰胺(160mg，0.395mmol，22.17％产率)，其为黄色固体。lcms(m/z)：400.9[m+h]+，rt＝4.45分钟。
1hnmr(400mhz，cdcl3)：δppm13.83(s，1h)，8.57-8.76(m，2h)，8.31(dd，j＝4.71，1.43hz，1h)，8.02-8.23(m，1h)，7.61(s，1h)，7.51(dd，j＝5.04，1.53hz，1h)，7.20-7.33(m，2h)，4.99(brs，1h)，3.38(dd，j＝13.59，1.75hz，1h)，3.12-3.28(m，2h)，2.98(brd，j＝13.59hz，1h)，2.68(s，3h)，2.44(s，3h)，2.13-2.41(m，1h)，1.85-2.00(m，1h)，1.44(dt，j＝6.08，3.21hz，2h)。
实施例91
合成(9s)-n-(4-((r)-2，3-二羟基丙氧基)吡啶-2-基)-3-甲基-2-(3-(三氟甲基)苯基)-8，9-二氢-6h-5，9-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环辛四烯-10(7h)-甲酰胺
在0℃经5分钟向(9s)-n-(4-(((s)-2，2-二甲基-1，3-二氧杂环戊烷-4-基)甲氧基)吡啶-2-基)-3-甲基-2-(3-(三氟甲基)苯基)-8，9-二氢-6h-5，9-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环辛四烯-10(7h)-甲酰胺(300mg，0.514mmol)在甲醇(10ml)中的搅拌溶液中滴加hcl(1ml，32.9mmol)。然后将反应混合物在30℃搅拌1h。(tlc洗脱液：dcm中的5％meoh：rf-0.3；uv活性)。蒸发溶剂在减压下且用碳酸氢钠溶液中和且过滤所得固体，将其用1∶1比例的乙醚(50ml)和戊烷(50ml)研磨以得到纯的化合物(9s)-n-(4-((r)-2，3-二羟基丙氧基)吡啶-2-基)-3-甲基-2-(3-(三氟甲基)苯基)-8，9-二氢-6h-5，9-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环辛四烯-10(7h)-甲酰胺(250mg，0.453mmol，88％产率)，其为灰白色固体。lcms(m/z)：544.26[m+h]+，rt＝2.23分钟。
1hnmr(400mhz，cdcl3)：δ：13.76(s，1h)，8.08-8.00(m，2h)，7.97-7.88(m，2h)，7.73-7.57(m，2h)，7.38(d，j＝0.7hz，1h)，7.23(dd，j＝9.0，3.1hz，1h)，4.95(d，j＝3.1hz，1h)，4.16-4.00(m，3h)，3.85(dd，j＝11.4，3.8hz，2h)，3.76(dd，j＝11.4，5.4hz，3h)，3.01(d，j＝13.6hz，1h)，2.55-2.4(m，1h)，2.39(s，3h)，2.25(d，j＝14.4hz，1h)，1.98-1.84(m，2h)，1.42-1.33(m，1h)。
实施例92
合成(9s)-3-氯-n-(5-((s)-2，3-二羟基丙氧基)嘧啶-2-基)-2-(3-(三氟甲基)苯基)-8，9-二氢-6h-5，9-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环辛四烯-10(7h)-甲酰胺
在0℃向(9s)-3-氯-n-(5-(((r)-2，2-二甲基-1，3-二氧杂环戊烷-4-基)甲氧基)嘧啶-2-基)-2-(3-(三氟甲基)苯基)-8，9-二氢-6h-5，9-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环辛四烯-10(7h)-甲酰胺(0.420g，0.694mmol)在甲醇(5ml)中的搅拌溶液中添加hcl水溶液(0.5ml，6.00mmol，12m)且在室温搅拌1h。(tlc洗脱液100％乙酸乙酯：rf＝0.1；uv活性)。反应混合物通过添加饱和碳酸氢钠溶液碱化(直到ph-8-9)然后浓缩。残余物用水(10ml)稀释且萃取至乙酸乙酯(20ml)。合并的有机萃取物用无水硫酸钠干燥，过滤且将滤液真空蒸发且粗物质用乙醚(10ml)研磨以得到所需产物(9s)-3-氯-n-(5-((s)-2，3-二羟基丙氧基)嘧啶-2-基)-2-(3-(三氟甲基)苯基)-8，9-二氢-6h-5，9-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环辛四烯-10(7h)-甲酰胺(0.083g，0.145mmol，20.90％产率)，其为灰白色固体。lcms(m/z)：565.14[m+h]+，rt＝2.25分钟。
1hnmr(400mhz，cdcl3)：δ13.74(s，1h)，8.29(s，2h)，8.18(s，1h)，8.10(d，j＝7.89hz，1h)，7.77-7.75(m，1h)，7.65-7.56(m，2h)，5.03(brs，1h)，4.21-4.00(m，3h)，3.86(brdd，j＝11.18，2.63hz，1h)，3.76(brdd，j＝11.18，4.82hz，1h)，3.44-3.24(m，3h)，2.98(brd，j＝13.59hz，1h)，2.62(brs，1h)，2.38-2.21(m，1h)，2.01(brs，2h)，1.98-1.75(m，2h)。
实施例93.全长sirt1的制备
表达全长人sirt1(hsirt1)蛋白使之带有c-末端his6标记物并如hubbard.等人(2013)science339，1216中所述进行纯化。在冰上将各细胞糊再混悬于含1,000ubenzonase核酸酶(sigmaaldrich)的缓冲液a(50mmtris-hclph7.5，250mmnacl，25mm咪唑和0.1mmtcep)，其补充有完整无edta的蛋白酶抑制剂混合片剂(roche)。细胞经脉冲超声破碎，在40w以50％开启和50％停止总共进行12分钟。通过离心除去不溶性的碎片。将澄清的上清液直接上样至1mlhistrapffcrude柱(gelifesciences)。用缓冲液a洗涤后，将sirt1用缓冲液b(50mmtris-hclph7.5，250mmnacl，500mm咪唑和0.1mmtcep)洗脱。将该蛋白进一步用尺寸排阻色谱在缓冲液c(50mmtris-hclph7.5，300mmnacl，0.1mmtcep)中进行纯化，其使用hi-loadsuperdex20016/60柱(gelifesciences)。酶浓度用使用bsa作为标准品的bradford分析进行确定。最终蛋白纯度用胶体光密度测定法进行评估。蛋白通过lc/ms确定。所有蛋白均大于90％纯度。
实施例94.sirt1脱乙酰反应
sirt1脱乙酰基反应是在25℃反应缓冲液(50mmhepes-naoh，ph7.5，150mmnacl，1mmdtt和1％dmso)中进行，使用持续性pncl/gdh偶联分析监测烟酰胺的产生(smith，b.c.等人(2009)analbiochem394，101)或用质谱监测o-乙酰基adp核糖(oacadpr)的产生(hubbard.等人(2013)science339，1216)。所使用的最终浓度的pnc1/gdh偶联系统成分为20单元/ml牛gdh(sigma-aldrich)、1um酵母pnc1、3.4mmα-酮戊二酸和220μmnadh或nadph。使用6.22mm-1cm-1消光系数和0.81cm光路长度在340nm处转变吸光度，得到所用150ul反应的产物浓度。监测oacadpr产生的分析是在含0.05％bsa的反应缓冲液中进行且通过用终止溶液淬灭该脱乙酰反应取时间点，所述终止溶液提供1％甲酸和5mm烟酰胺的最终浓度。淬灭的反应用1∶1乙腈∶甲醇稀释5倍并以5,000xg旋转10分钟用于沉淀蛋白，之后将其用agilentrapidfire200high-throughput质谱系统(agilent，wakefield，ma)分析，该质谱系统偶联至装有电喷雾离子源的absciexapi4000质谱仪。分别从americancenturypeptide和biopeptide，inc.得到基于p53的ac-p53(w5)(ac-rhkkacw-nh2)和tamra(ac-ee-k(生物素)-gqstsshsk(ac)nlesteg-k(5tmr)-ee-nh2)肽。底物km测定是在固定饱和浓度的第二底物的情况下，通过改变一个底物浓度进行的。sirt1活化和抑制分析是在25℃，在含0.05％bsa的反应缓冲液中进行并使用oacadpr分析进行分析。在加入底物前，对酶和化合物进行20分钟预培养。对于全长hsirt1的活化筛选，化合物以一式两份以剂量响应进行测定。为了对km-调节的活性剂敏感，使用底物km值的大约十分之一的底物浓度。测定5个化合物的剂量依赖性且该活化倍数数据用方程式1描述。
其中vx/v0是存在(vx)与不存在(v0)活化剂(x)的反应速率的比例，rvmax是在无穷大的活化剂浓度下的相对速率，ec50是产生二分之一的rvmax所需活化剂的浓度和b是vx/v0的最小值。
实施例95.生物学活性
基于质谱的分析用于鉴定sirt1活性的调节剂。该基于tamra的分析使用具有如下所示的20个氨基酸的肽：
ac-ee-k(生物素)-gqstsshsk(ac)nlesteg-k(5tmr)-ee-nh2(seqidno：1)
其中k(ac)是乙酰化的赖氨酸残基，nle是正亮氨酸。该肽在c-末端用荧光团5tmr(激发540nm/发射580nm)标记。该肽底物的序列基于具有几处修饰的p53。另外，用正亮氨酸代替天然存在于序列中的甲硫氨酸残基，因为甲硫氨酸在合成和纯化期间对氧化敏感。基于trp的分析使用具有如下所示的氨基酸的肽：
ac-r-h-k-k(ac)-w-nh2(seqidno：2)
该基于tamra的质谱分析如下进行：在25℃，在反应缓冲液(50mmtris-乙酸盐，ph8，137mmnacl，2.7mmkcl，1mmmgcl2，5mmdtt，0.05％bsa)中，将0.5μm肽底物和120μmβnad+与10nmsirt1温育25分钟。sirt1蛋白如下得到：将sirt1基因克隆到含有t7-启动子的载体中，然后将其在bl21(de3)细菌细胞中转化并表达。将测试化合物以各种浓度添加到该反应混合物中，监测得到的反应。与sirt1温育25分钟后，添加10μl的10％甲酸以终止反应。将得到的反应密封，并冷冻用于之后的质谱分析。测定由沉默调节蛋白介导的nad-依赖性脱乙酰化反应形成的脱乙酰化的底物肽的量(或者，生成的o-乙酰基-adp-核糖(oaadpr)的量)，可以精确测量相对sirt1活性(各种浓度的测试化合物存在下对比缺少测试化合物的对照反应)。
trp质谱分析进行如下：在25℃，在反应缓冲液(50mmhepesph7.5、1500mmnacl、1mmdtt、0.05％bsa)中，将0.5μm肽底物和120μmβnad+与10nmsirt1温育25分钟。sirt1蛋白如下得到：将sirt1基因克隆到含有t7-启动子的载体中，然后在bl21(de3)细菌细胞中表达，并纯化，如下面进一步详述的。将测试化合物以各种浓度添加到该反应混合物中，监测得到的反应。与sirt1温育25分钟后，添加10μl的10％甲酸以终止反应。将得到的反应密封，并冷冻用于之后的质谱分析。然后通过测定由nad-依赖性沉默调节蛋白脱乙酰化反应形成的o-乙酰基-adp-核糖(oaadpr)的量(或者，生成的脱乙酰化trp肽的量)，测量相对sirt1活性(各种浓度的测试化合物存在下对比缺少测试化合物的对照反应)。测试试剂通过sirt1活化脱乙酰化的程度表达为ec1.5(即，增加sirt1活性50％需要的化合物的浓度，相对于缺少测试化合物的对照)，和最大活化百分数(即，对于测试化合物得到的相对于对照(100％)的最大活性)。
在反应开始时，通过加入1μl的500mm烟酰胺作为阴性对照(例如，允许测定最大沉默调节蛋白抑制)来进行沉默调节蛋白活性抑制的对照。沉默调节蛋白活性的活化的对照是如下进行的：使用10nm沉默调节蛋白，用1μldmso代替化合物，在分析的线性范围内，在给定时间点测定底物的脱乙酰化量。该时间点与试验化合物所使用的时间点相同，并且在线性范围内，端点代表速度变化。
对于上述分析，sirt1蛋白表达并纯化如下。将sirt1基因克隆到含有t7-启动子的载体中，并转化到bl21(de3)中。在18℃，通过用1mmiptg(作为n-末端his-标记融合蛋白)诱导来表达该蛋白过夜，并在30,000xg下收获。在裂解缓冲液(50mmtris-hcl，2mmtris[2-羧乙基]膦(tcep)，10μmzncl2，200mmnacl)中，用溶菌酶将细胞裂解，并进一步用超声处理10分钟，以便完全裂解。用ni-nta柱(amersham)纯化蛋白，并合并含有纯蛋白的级分，浓缩，使其经过用分级柱(sephadexs20026/60global)。收集含有可溶性蛋白的峰，并通过离子交换柱(monoq)。梯度洗脱(200mm-500mmnacl)得到纯蛋白。将该蛋白浓缩，并用渗析缓冲液(20mmtris-hcl，2mmtcep)进行渗析过夜。将蛋白等分，并在-80℃冷冻，直到进一步使用为止。
使用上述分析，鉴定活化sirt1的式(i)的调节沉默调节蛋白的化合物，如下表1所示。ec1.5值代表导致sirt1的150％活化的试验化合物的浓度。式(i)的活化化合物的ec1.5值由a(ec1.5＜1μm)、b(ec1.5：1-25μm)、c(ec1.5＞25μm)代表。最大活化倍数百分数由a(活化倍数≥150％)或b(活化倍数＜150％)代表。“nt”表示未测试；“nd”表示测不到。表中编号的化合物从化合物编号10开始，和括号编号(#)对应的是图4的stac编号系统和实施例90-106(即，化合物编号68也是stac1，因此将其表示为68(1)，还有stac：546(3)、444(4)、314(5)、816(7)、76(8)和81(9))。
应注意本发明化合物由两个不同的化学命名习惯命名，由两种不同的化学图和/或化学命名计算机程序产生，即分别由chemaxon(jchem-excel)和cambridgesoft
表1
实施例96
本发明涉及沉默调节蛋白调节剂，其在科学文献中已知可用于增加细胞寿命，和用于治疗和/或预防多种疾病和障碍，所述疾病和障碍包括，但不限于，例如，与老化或应激相关的疾病或障碍、糖尿病、肥胖症、神经变性疾病、心血管疾病、凝血障碍、炎症、癌症、和/或潮红以及将得益于增加线粒体活性的疾病或障碍。
除了治疗潜力，sirt1活性的结构和生物物理研究以及经小分子沉默调节蛋白调节剂的活化将用于推进对沉默调节蛋白的生物学功能、沉默调节蛋白活化的作用机理的了解以及帮助研发用于鉴定新的沉默调节蛋白调节剂的试验。
基于前文，分别引用以下文献参考资料，以证明本发明化合物作为沉默调节蛋白调节剂的用途及其与各种疾病的关联性，如以下参考文献中所例示或公开的：
1.marciac.haigisanddavida.sinclair，mammaliansirtuins：biologicalinsightsanddiseaserelevance，annurevpathol.2010；5：253-29。
haigis和sinclair教导了：
“老化伴随着多器官系统健康功能的衰退，导致疾病如ii型糖尿病、神经变性疾病、癌症和心血管疾病的发病率和死亡率增加。历史上，研究人员专注于研究孤立器官中的个别途径，作为确定疾病根源的策略，希望设计出更好的药物。酵母中的老化研究认识了一种被称为沉默调节蛋白的保守酶的家族，其影响增加有机体寿命和整体健康的多种途径。自从10年前发现第一种已知的哺乳动物沉默调节蛋白(sirt1)以来，我们对沉默调节蛋白的酶学及其调控以及广泛改善哺乳动物生理和健康寿命的能力有了重大进展。本综述总结并讨论了过去十年的发现进展以及未来几年将面临的挑战(见其中的“摘要”及其参考文献)。”
2.gizemdonmez1等人，sirt1andsirt2：emergingtargetsinneurodegeneration，embomolmed(2013)5，344-352.
gizemdonmezl等人，教导了：
“沉默调节蛋白是已知对年龄相关疾病如癌症、糖尿病、心血管疾病和神经变性疾病具有保护作用的nad依赖性蛋白脱乙酰基酶。在哺乳动物中，有七种沉默调节蛋白(sirt1-7)，其显示亚细胞定位和功能的多样性。sirt1由于其与寿命延长的初步联系和卡路里限制的参与而得到广泛研究，其他沉默调节蛋白的重要生物和治疗作用最近才得到认可。在这里，我们综述了sirt1和sirt2在神经变性疾病中的潜在作用和效果。我们讨论了sirt1和sirt2在多种神经变性疾病(包括阿尔茨海默病(ad)、帕金森病(pd)和亨廷顿病(hd))中的不同功能和目标。我们还介绍了sirt1在神经元分化中的作用，这是由于其可能参与神经变性疾病，并以sirt1和sirt2在这些疾病中潜在治疗价值的前景作出总结(参见，其中的“摘要”及其参考文献。”
3.bracke等人，targetedsilencingofdefb4inabioengineeredskin-humanizedmousemodelforpsoriasis：developmentofsirnasecosome-basednoveltherapies；expdermatol.2014mar；23(3)：199-201.doi：10.1111/exd.12321.
具体地，bracke等人教导了
“牛皮癣是一种复杂的炎症性皮肤病，呈现多种临床表现。人β防御素-2(hbd-2)在牛皮癣病变中高度上调，并被定义为疾病活性的生物标志物。我们通过在牛皮癣的生物工程化皮肤-人源化小鼠模型中局部应用含defb4-sirna的secosomes探讨了靶向hbd-2的潜在益处。通过组织学检查观察到牛皮癣表型的显著改善，皮肤结构正常化和皮肤隔室中血管数量和大小的减少。治疗导致转谷氨酰胺酶活性、丝聚蛋白表达和角质层外观恢复到与正常再生人皮肤中发现相似的水平。结合使用secosome技术，可用于牛皮癣的可靠的皮肤-人源化小鼠模型可能为鉴定潜在的该疾病治疗靶点提供了有价值的临床前工具。”
4.karlineguilloteau等人，skininflammationinducedbythesynergisticactionofil-17a，il-22recapitulatessomefeaturesofpsoriasisoncostatinm，il-1a，andtnf-a，jimmunol2010；184：5263-5270.
guilloteau等人教导了：
“角质形成细胞在调节皮肤炎症、响应环境和免疫细胞刺激方面发挥关键作用。它们产生的可溶性因子可以以自分泌或旁分泌的方式在免疫细胞上起作用或直接作用于侵袭者。筛选36种细胞因子对角质形成细胞基因表达的活性，鉴定出il-17a、il-22、制瘤素m、tnf-α和il-1a作为诱导皮肤炎症的有效细胞因子。这五种促炎细胞因子协同增加cxcl8和b-防御素2(bd2)的产生。此外，对于人类皮肤外植体的离体研究表明响应于细胞因子的相同组合的bd2、s100a7和cxcl8表达的上调。体内皮内注射这5种细胞因子在小鼠中增加cxcl1、cxcl2、cxcl3、s100a9和bd3表达，与嗜中性粒细胞浸润有关。我们使用定量实时pcr分析证实并扩展了这种协同效应，并观察到9种趋化因子和12种抗微生物肽的表达增加。在这种细胞因子组合存在下刺激的角质形成细胞产生cxcl、cxcl5和cxcl8与增加的嗜中性粒细胞趋化活性相关。类似地，bd2、bd3和s100a7的高产量与增加的抗微生物活性相关。最后，在炎症角质形成细胞的这种体外模型中观察到的转录概况与损伤性牛皮癣皮肤相关。我们的研究结果表明il-17a、il-22、制瘤素m、tnf-α和il-1a对角质形成细胞的重要增强活性。这在牛皮癣的情形中特别有意义，其中这些细胞因子过表达并且可以协同作用以在趋化因子上调和抗微生物肽生产中发挥重要作用。thejournalofimmunology，2010，184：5263-5270(参见，其中的“摘要”及其参考文献)”。
实施例97
测试的描述：
pbmc测试
沉默调节蛋白1(sirt1)是沉默信息调节剂2(sir2)的同源物，且是nad依赖性iii类组蛋白脱乙酰基酶的成员。sirt1将组蛋白、转录因子和非组蛋白上的赖氨酸残基脱乙酰化。sirt1已被证明参与老化、细胞周期调节、凋亡、代谢调节和炎症。sirt1的活化导致核因子kb(nf-kb)转录因子的rela/p65亚基的赖氨酸310脱乙酰化，其抑制nf-kb转录并下调tnfα的水平。tnfα是一种多效细胞因子，主要由巨噬细胞和单核细胞产生。tnfα密切参与免疫防御和慢性炎症，包括牛皮癣。已知牛皮癣皮肤中1型细胞因子如tnfα的表达增加，并且其在牛皮癣的病因中起重要作用(uyemurak等人，1993，j.investdermatol，101，p701)。重要的是，抗tnf剂已被临床用于牛皮癣。因此，诱导炎症细胞中tnfα表达降低的sirt1活化剂在中重度牛皮癣患者中具有治疗作用。
开发了基于pbmc/tnfα细胞的测定法，以鉴定能够抑制响应于脂多糖(lps)刺激外周血单核细胞(pbmc)的tnfα释放的sirt1活化剂。简单地说，通过lps刺激pbmc，导致tnfα分泌的产生增加。通过tnfαhtrf(均相时间分辨荧光)试剂盒(cisbio，inc)测量tnfα蛋白水平。根据制造商的说明进行细胞裂解和tnfα检测。在lps存在下测试sirt1活化剂以评估其对tnfα释放的抑制作用，并且在剂量-响应实验中测定ic50。
β-防御素2(bd2)测试
沉默调节蛋白是nad依赖性脱乙酰基酶的家族，其具有广泛的生理功能，并且已经涉及许多自身免疫和代谢疾病，包括类风湿性关节炎和i型糖尿病。sirt1的底物是多种多样的，并且包括在天然和适应性免疫应答中具有确定的作用的炎症组分，例如nfκb、ap-1、foxo和p53。
牛皮癣是由遗传，自身免疫和环境因素引起的慢性炎性皮肤病。病变的特征在于表皮中角质形成细胞的过度增殖和炎性细胞的浸润，导致银屑覆盖的慢性红斑斑块。以前的研究表明，sirt1可以通过直接抑制stat3乙酰化来阻止il-22(一种在牛皮癣中的关键细胞因子)(sestito等，2011)。此外，sirt1过表达和白藜芦醇治疗(sirt1活化)都可以诱导角质形成细胞分化(blander等，2009)。
β-防御素2(bd2)是可从上皮细胞分泌的抗微生物肽，其作为记忆t细胞、未成熟树突状细胞和嗜中性粒细胞的化学引诱物。因此，bd2是皮肤炎症反应的主要部分。与在正常皮肤中相比，牛皮癣患者的损伤性表皮细胞中不仅诱导bd2，而且也是牛皮癣患者中疾病严重程度的血清生物标记(jansen等，2009；kamsteeg等，2009)。此外，bd2可能与牛皮癣遗传相关，因为最近的研究揭示了增加的β-防御素基因拷贝数与牛皮癣风险之间的显著关联(hollox等人，2008)。值得注意的是，bd2sirna的局部递送导致在用于牛皮癣的生物工程化皮肤-人源化小鼠模型中正常皮肤结构和蛋白质表达的恢复(bracke等，2014)。
之前描述了模拟牛皮癣发炎的体外角质形成细胞测定(guilloteau等，2010；teng等，2014)。在这些研究中，发现il-1α、il-17a、il-22、osm和tnfα(称为“m5”)的细胞因子混合物在体外在原代人角质形成细胞中协同作用以产生“牛皮癣样”转录谱。在这些研究中，bd2是诱导角化细胞炎症的最强应答者之一。
因此，为了评估sirt1活化剂化合物对局部牛皮癣的疗效，进一步开发了该测定法。具体地，使用m5细胞因子组合体外处理永生化人角质形成细胞系(hacat)来优化条件，以诱导牛皮癣炎症(如上文参考文献)。在48小时的时间范围内，通过bd2elisa测定(alphadiagnostics)测量的bd2分泌比未刺激的角质形成细胞显著增加。可以通过已知抑制牛皮癣炎症的化合物或重要的是用sirt1活化剂的子集处理来抑制该bd2诱导。平行地，通过celltiter-glo发光细胞活力测定(promega)确定在48小时测定的长度上的细胞毒性，以确定毒性是否可能在bd2反应中起作用。
参考文献：
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brackes，carreterom，guerrero-aspizuas，desmete，illeran，navarrom，lambertj，delriom.targetedsilencingofdefb4inabioengineeredskin-humanizedmousemodelforpsoriasis：developmentofsirnasecosome-basednoveltherapies.expdermatol.2014mar；23(3)：199-201.
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牛皮癣和il-17
牛皮癣是具有由遗传、环境和免疫病理因素影响的多因素发病机制的慢性、复发性炎症性自身免疫性皮肤病(griffithsce等人，lancet2007；370：263-71)。牛皮癣的特征是，升高的、良好分界的红斑卵形斑块伴随粘附银色鳞片的复发性发作。组织学上，牛皮癣的特征是存在增厚的成核角质形成细胞层，具有夸张的表皮突，由于角质形成细胞的过度增生和活化的t细胞、嗜中性粒细胞和树突状细胞的皮肤浸润引起(schonmpn.engl.j.med.352：1899-1912)。
积累的身体证据表明，牛皮癣作为th17介导的疾病，由其特征性细胞因子il-17a、il-17f和il-22驱动。il-22诱导角质形成细胞的增殖，而il-17a刺激角质形成细胞分泌趋化因子和其他促炎症介质，其招募额外的炎症细胞，包括嗜中性粒细胞、树突状细胞和先天性淋巴样细胞(martinda等人，jinvestdermatol2013；133：17-26)。
il-17途径在介导牛皮癣中的临床验证，通过使用靶向il-17的单克隆抗体治疗显著改善疾病的成功3期研究得以证明(langley等人，nejm2014)。此外，il-17抑制后牛皮癣损伤的全局转录谱分析将源自角质形成细胞和白细胞亚群的多个炎性因子抑制至与非损伤皮肤中观察到的相似水平(russell等，jimmunol2014，192：3828-3836)。总之，这些发现支持il-17在介导牛皮癣发病机制中的作用。
方法(离体皮肤测试)
使用th17细胞因子混合物刺激离体人皮肤外植体中的皮肤常驻免疫细胞，导致th17相关细胞因子(il-17a、il-17f和il-22)的显著上调，其将该系统建立为基于人组织的牛皮癣模型。使用th17细胞因子混合物刺激后的离体皮肤培养法评估测试化合物调节il-17a、il-17f和il-22表达的能力。
简单地说，处理从腹部成形术手术获得的离体人体皮肤以除去脂肪，并将组织皮肤切成约750微米。然后在包含抗生素/抗真菌溶液的室温pbs中，以5-10分钟的两次连续冲洗清洁切成的皮肤。将皮肤切片用一次性活检穿孔器切至10mm直径的圆形切片，然后将其放入用cornification培养基制备的含有30μl64％牛胶原溶液(organogenesis，#200-055)的0.4μm的pcf膜跨室(transwell)(millicell#pihp01250)的上室中。将皮肤样品在37℃在加湿室中在胶原溶液上放置30分钟。将跨室上的皮肤样品转移到6孔板(每孔1个样品)中，并且将下室填充1ml完全培养基(comification培养基)。
在腹部手术后的第一天，将皮肤外植体在cornification培养基中培养，并在37℃孵育过夜。具体地，用th17混合物(cd3，1μg/ml，cd28，2μg/ml，il-1b，10ng/ml，il-6，5ng/ml，tgfb，1ng/ml，il-21，10ng/ml，抗il-4，1μg/ml和抗infg，1μg/ml)刺激人皮肤外植体(每个条件n＝3)。与th17混合物同时加入1、3和10um的测试化合物。在th17活化后24小时收获组织，分离rna用于使用qpcr的转录物定量(il-17a、il-17f、il-22)。
使用qiagen的minirna分离试剂盒(cat#74106)从约40mg的组织中分离总rna。简言之，在precellys-24机器中，使用300μl补充有1％2-β-疏基-乙醇的rlt缓冲液，在6300rpm下将组织切碎并匀化30秒，持续10个循环，其中具有2分钟的冰中断。向匀浆中加入490μl含有10μl蛋白酶k的水，并在55℃消化15分钟。将消化的组织在10,000g下离心3分钟以沉淀细胞碎片，并使用qiagen的rneasy微型柱根据制造商的方案将上清液用于rna分离。使用nanodrop2000定量总rna，并在安捷伦生物分析仪上进行分析(附加文件)。使用invitrogensuperscriptvilocdna合成试剂盒(#11754-050)，在20μlpcr体积中使用1.4μgrna作为模板以产生cdna模板。然后cdna对随后的qpcr稀释1∶25，对每个需定量的基因用特定的taqman探针。使用deltadeltact公式计算感兴趣基因的相对表达的rna水平。
等同方案
本发明提供了调节沉默调节蛋白的化合物及其使用方法等。尽管已经讨论了主题发明的具体实施方案，但上述说明书是例示性的，不是限制性的。在审阅该说明书后，本发明的许多变化对本领域技术人员来说是显而易见的。本发明的全部范围应该参考权利要求书，以及其等同方案的整个范围，和说明书以及此类变化来确定。