本发明属于植物天然产物制备技术领域，尤其涉及一种从胡椒中提取榄香素的方法。
背景技术：
榄香素，化学式为5-烯丙基-1,2,3-三甲氧基苯，为新型麻醉剂，其结构式如下：
虽然在很多植物中含有该种成分，但因为含量较少难以提取，并且杂质较多而放弃。为此，有科研工作者尝试采用化学合成的方法对榄香素进行合成实验，但化学合成的方法中也不免会有含苯类其他杂质，对人体有较大危险。
胡椒是我国南方地区大量种植的一种植物，目前人们使用较多的是胡椒的果实，而茎叶基本没有进一步加工使用。相关研究表明，胡椒中含有一定量的榄香素。若能研究一种可从胡椒中提取榄香素的方法，不仅提高了胡椒的利用价值，也为榄香素的获取提供一种全新的渠道。然而，目前本领域内尚无此类方法。
技术实现要素：
为解决上述技术问题，本发明提供了一种从胡椒中提取榄香素的方法，旨在为榄香素的获取提供一种新的途径，同时提高胡椒叶的资源利用率。
本发明是这样实现的，一种从胡椒中提取榄香素的方法，所述方法以胡椒叶为原料，包括：
处理步骤：将胡椒叶粉碎，先冷冻，然后进行热水浸泡；
萃取步骤：过滤，取过滤后的胡椒叶进行乙醇超声萃取，得萃取液；
榄香素获取步骤：过滤所述萃取液，取滤液在95-105℃温度下蒸馏1-2h。
本发明与现有技术相比，有益效果在于：本发明所提供的一种从胡椒中提取榄香素的方法，在萃取前先对胡椒叶采用先冷冻再泡热水的方式，使叶片的细胞壁和细胞膜得到有效破坏，有利于后续萃取步骤中榄香素的提取。在胡椒叶进行处理后，采用乙醇超声萃取+蒸馏处理，有效地提取了胡椒叶中的榄香素，且提取率高。
附图说明
图1是本发明实施例1提供的的萃取步骤的流程示意图。
具体实施方式
为了使本发明的目的、技术方案及优点更加清楚明白，以下结合附图及实施例，对本发明进行进一步详细说明。应当理解，此处所描述的具体实施例仅仅用以解释本发明，并不用于限定本发明。
本发明提供了一种从胡椒中提取榄香素的方法，所述方法以胡椒叶为原料，包括以下步骤：
处理步骤：将胡椒叶粉碎，先冷冻，然后进行热水浸泡；
萃取步骤：过滤，取过滤后的胡椒叶进行乙醇超声萃取，得萃取液；以及
榄香素获取步骤：过滤所述萃取液，取滤液在95-105℃温度下蒸馏1-2h。
本发明在处理步骤中，对胡椒叶采用先冷冻再泡热水的方式，使叶片的细胞壁和细胞膜得到有效破坏，有利于萃取步骤中榄香素的提取。
具体地，所述乙醇超声萃取过程为：
将过滤后的胡椒叶按质量等分成第一份、第二份和第三份，每份进行三次乙醇超声萃取；
所述第一份胡椒叶的三次乙醇超声萃取过程为：
将第一份胡椒叶浸泡于三倍于其质量的乙醇中进行第一次超声萃取，过滤，得第一次固体物质和第一次萃取液；
将第一次固体物质浸泡于两倍于其质量的乙醇中进行第二次超声萃取，过滤，得第二次固体物质和第二次萃取液；
将第二次固体物质浸泡于两倍于其质量的乙醇中进行第三次超声萃取，过滤，得胡椒叶废渣和第三次萃取液。
具体地，所述第二份胡椒叶的三次乙醇超声萃取过程为：
将第二份胡椒叶浸泡于所述第一次萃取液中进行第一次超声萃取，过滤，得第二份第一次固体物质和第二份第一次萃取液；
将所述第二份第一次固体物质浸泡于所述第二次萃取液中进行第二次超声萃取，过滤，得第二份第二次固体物质和第二份第二次萃取液；
将第二份第二次固体物质浸泡于所述第三次萃取液中进行第三次超声萃取，过滤，得胡椒叶废渣和第二份第三次萃取液。
具体地，所述第三份胡椒叶的三次乙醇超声萃取过程为：
将第三份胡椒叶浸泡于所述第二份第一次萃取液中进行第一次超声萃取，过滤，得第三份第一次固体物质和第三份第一次萃取液；
将所述第三份第一次固体物质浸泡于所述第二份第二次萃取液中进行第二次超声萃取，过滤，得第三份第二次固体物质和第三份第二次萃取液；
将第三份第二次固体物质浸泡于所述第二份第三次萃取液中进行第三次超声萃取，过滤，得胡椒叶废渣和第三份第三次萃取液；
合并所述第三份第一次萃取液、第三份第二次萃取液、第三份第三次萃取液，即为所述萃取液。
具体地，将所述萃取液静置48h即可进行后续过滤步骤。
具体地，所述第一次超声萃取的频率为0.05-0.5MHz(兆赫)，时间为0.5h；所述第二次超声萃取的频率为6-15MHz，时间为1-2h；所述第三次超声萃取的频率为30-50MHz，时间为1-2h。所述第二份和第三份的第一次、第二次、第三次超声萃取的频率和时间均与第一份对应的相同。
在萃取步骤中，本发明将第一份胡椒叶的三次萃取液分别用于萃取第二份胡椒叶，接着用于第三份。采用动态逆流提取法+超声波处理，溶剂乙醇与胡椒叶间的相对运动使溶剂乙醇与物料胡椒叶间界面层更新快，有效成分的收率和提取效率都得到提高，如采用非动态逆流提取法+非超声波萃取,至少要10kg秋季老龄胡椒叶片才能提取10g左右的榄香素，而经过本发明的萃取方法，3kg秋季老龄胡椒叶片即可萃取10g以上的榄香素。
具体地，所述胡椒叶粉碎后的直径为1-5mm，优选2-3mm。
具体地，所述冷冻的温度为3℃以下，时间为0.5-2h；优选冷冻温度-5℃-0℃，时间1-1.5h。所述热水浸泡的温度为70-100℃，时间为0.5-5h；优选温度80-90℃，时间0.5-2h。
具体地，所述榄香素获取步骤还包括在所述蒸馏之前向所述滤液中加入ODS硅胶(十八烷基硅烷键合硅胶)。蒸馏后用乙醇-水洗脱，浓缩干燥后得榄香素。本发明还采用ODS硅胶柱纯化，可以得到高纯度的榄香素，硅胶也是重复利用。
优选地，所述胡椒叶为秋季老龄胡椒叶片，老龄胡椒叶片包括从树上自然脱落的叶片。老龄胡椒叶中蛋白质发生水解、叶绿素丧失，这些变化促进了乙醇对胡椒叶中的榄香素的萃取。
本发明提供的一种从胡椒中提取榄香素的方法，根据榄香素的分子结构从胡椒的茎叶中进行萃取，操作简单，所用设备较少，可用于批量萃取榄香素。本发明的提取方法适于大规模生产，且产量大、生产效率高并节约能源。
以下结合具体实施例对本发明的技术方案进行说明。
实施例1
一种从胡椒中提取榄香素的方法，步骤如下：
处理步骤：选用秋季老龄胡椒叶片3kg，将胡椒叶进行粉碎，然后2℃冷冻2小时；取出冷冻后粉碎的胡椒叶，放入装有90℃的热水容器中；
萃取步骤：将称量好的同样的3份胡椒叶粉分别放入第一、二、三罐3个提取罐内，向第一罐中加入3倍固体重量的乙醇，超声波提取浸泡30分钟，然后将提取液A1置第二罐第一次提取，固体渣继续用2倍体积的乙醇超声波提取1h，提取液A2置于第二罐用于第二次提取，第一罐固体渣继续加2倍体积的乙醇超声波提取1h，提取液A3置于第二罐第三次提取，最后得到药液C1、C2和C3相混合，静置48h，然后过滤制得萃取液(参考附图1)。
榄香素获取步骤：过滤得萃取液，在萃取液中加入ODS硅胶搅拌，蒸馏，然后挥发干乙醇和其他杂质，再用乙醇-水洗脱，浓缩干燥得到纯化的榄香素，称量其质量为12g。
实施例2
一种从胡椒中提取榄香素的方法，步骤如下：
处理步骤：选用秋季老龄胡椒叶片3kg，将胡椒叶进行粉碎，然后-5℃冷冻1-2小时；取出冷冻后粉碎的胡椒叶，放入装有70-90℃的热水容器中；
萃取步骤：将称量好的同样的3份胡椒叶粉分别放入第一、二、三罐3个提取罐内，向第一罐中加入3倍固体重量的乙醇，超声波提取浸泡30分钟，然后将提取液A1置第二罐第一次提取，固体渣继续用2倍体积的乙醇超声波提取1.5h，提取液A2置于第二罐用于第二次提取，第一罐固体渣继续加2倍体积的乙醇超声波提取1.5h，提取液A3置于第二罐第三次提取，最后得到药液C1、C2和C3相混合，静置48h，然后过滤制得萃取液(参考附图1)。
榄香素获取步骤：过滤得萃取液，在萃取液中加入ODS硅胶搅拌，蒸馏，然后挥发干乙醇和其他杂质，再用乙醇-水洗脱，浓缩干燥得到纯化的榄香素，称量其质量为15g。
以上所述仅为本发明的较佳实施例而已，并不用以限制本发明，凡在本发明的精神和原则之内所作的任何修改、等同替换和改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。