一种橄榄叶提取物的制备方法
【技术领域】
[0001] 本发明涉及一种橄榄叶提取物的制备方法，属于天然植物提取物领域。
【背景技术】
[0002] 油橄榄（Olea europaea L.)，属木犀科（Oleaceae)木犀榄属（Olea)常绿乔木， 是世界著名的木本油料树种，有4000多年的栽培历史。油橄榄主要分布在北炜45°到南 炜37°之间，中心分布区是地中海国家，希腊、意大利、突尼斯、西班牙为集中产地，现在包 括中国的世界各国均有引种栽培。我国于1964年引种油橄榄以来，近十年来，在西部开发 政策支持下，油橄榄的种植发展较快，甘肃、四川二省的基地建设已初具规模，并建立起橄 榄油加工厂，油橄榄果实得到充分利用，但每年因修剪而废弃的油橄榄叶在数千吨以上，而 未得到很好利用。
[0003] 橄榄叶中主要含有裂环烯醚萜及其苷、黄酮及其苷、双黄酮及其苷、低分子单宁等 成分，裂环烯醚萜类为主要活性成分。
[0004] 橄榄苦苷（Oleuropein)是橄榄叶中的苦味素，是一种双分子结构酚类和黄酮类 物质，分子式C 25H32013，分子量540. 52,熔点87~89°C，易吸湿，易溶于乙醇、丙酮、吡啶等， 可溶于水、丁醇、乙酸乙酯等，几乎不溶于乙醚、石油醚、氯仿等。据报道，橄榄苦苷具有天 然的抗氧化、抗肿瘤、延缓衰老、增强心血管功能、治疗慢性前列腺炎、增强免疫力、调解内 分泌系统、护肝、抗炎等重要的保健功能，同时还有降血脂、降血糖的药理作用，广泛用于食 品、化妆和生物制药等领域。
[0005] 橄榄苦苷主要从橄榄叶中提取获得。目前文献报道或专利公开的橄榄苦苷提取分 离技术较多，橄榄叶提取技术主要包括有机溶剂提取技术、超临界〇) 2萃取技术、超声波萃 取技术及微波萃取技术等。但是，有机溶剂提取具有杂质含量高、溶剂消耗大、成本高、污染 大等缺点。超临界C0 2萃取具有提取含量尚、无污染等优点，但投入大、成本尚。超声波及 微波萃取虽然具有节能、高效等优点，但在生产上难以实现大规模化应用。
[0006] 例如，中国专利CN1583052A公开一种橄榄叶提取物提取制备方法，将橄榄叶经消 毒漂洗、干燥后，醇提，真空浓缩，在浓缩液中加入茶多酚抗氧化，经干燥获得橄榄叶提取 物，但其制备的橄榄叶提取物中有效成分含量低。中国专利CN101003557A公开了一种富含 高纯度橄榄苦苷的油橄榄叶提取物的制备方法，通过橄榄叶极性溶剂提取、碱性离心沉降、 离心清液、膜耦合分离等步骤得到通过纳滤膜的浓缩液，然后介质吸附、解吸附得到洗脱 液，真空浓缩后干燥，获得橄榄苦苷含量大于50 %的富含高纯度橄榄苦苷的油橄榄叶提取 物。但该方法实际操作步骤过多，不利于工业化大生产，而且膜分离设备首期投资大，提高 了产品成本。日本特开2002128678用含水溶剂提取，合成树脂处理后，干燥得到含橄榄苦 苷25%以上的提取物。美国专利US5714150中采用醇水溶液热提二次以上，提取液真空浓 缩后喷雾干燥或者真空干燥，其制备得到含橄榄苦苷30-40 %的橄榄叶提取物。这些提取物 中橄榄苦苷的含量太低，均不能满足市场要求。
[0007] 王成章等的文章"引种阿斯油橄榄叶中橄榄苦苷提取分离及结构鉴定"中采用多 次有机溶剂萃取、硅胶柱层析以及HPLC制备色谱，分离出了含量为95%的橄榄苦甙，但该 法尽限于少量样品制备。欧洲专利EP1795201中将橄榄叶磨成直径0. 05到1毫米的细粉， pH8. 0碱水提取；水提液经有机溶剂萃取，萃取液真空低温干燥得到含橄榄苦苷40-45%的 粗提物；此粗提物再经快速硅胶色谱柱纯化，收集含橄榄苦苷部分的解吸液，回收溶剂后得 到含95-98%橄榄苦苷的非晶质固体。但该方法中虽然获得了较高的橄榄苦苷含量，但成本 偏高，更适合于科学研究，难以实现规模化生产。
[0008]因此，本申请的发明人为了提出一种有效成分含量高、成本低、且方法简便、溶剂 可循环利用，降低环境污染，易于产业化的方法，进行了深入研究，进而获得本发明。
【发明内容】
[0009]为了实现上述目的，本发明提供了一种橄榄叶提取物的制备方法，包括如下步 骤： (1) 将原料橄榄叶盐水浸泡1-2小时后，烘干，粉碎成细粉； (2) 向原料中加入3-8倍水，加入纤维素酶：碱性蛋白酶的复合酶，复合酶用量为原料 的0. 5-2重量％，保持在30-50°C下酶解0. 5-2h，过滤，得酶解液； (3) 酶解液直接通过中性氧化铝柱，树脂柱径高比为1 : 4~1 : 15,分别用1-3倍柱 体积水、1-2倍柱体积95%乙醇溶液洗脱除杂，用6-10倍柱体积的0. 2-0. 5%冰醋酸-50% 乙醇（1:1)溶液洗脱，收集洗脱液； (4) 挥去洗脱液中的冰醋酸和乙醇后，微波真空干燥，得橄榄苦苷含量大于90%的橄榄 叶提取物产品。
[0010] 步骤（1)中，盐水可以是饱和食盐水，粉碎的粒度优选是通过40-60目筛。
[0011] 步骤（2)中，水量优选为4-6倍，更优选是5倍；复合酶优选是纤维素酶：碱性蛋白 酶1:3的复合酶。
[0012] 步骤（3)中，微波真空干燥温度：40-60°C，回差温度2-4°C，真空度-0. 07Mpa以上， 微波功率10-80KW，干燥100-150分钟。
[0013]本发明通过对橄榄叶的浸润、酶解提取、分离、干燥的工艺，得到了富含橄榄苦苷 的产品：经过系统的筛选和优化，首先确定了原料前处理步骤，在制备前用盐水进行浸润， 并通过适度的粉碎，更为彻底地溶出有效成分，进一步地，采用中性氧化铝柱，酶解液无需 浓缩即可直接上柱，极大地降低了能耗，最后经冰醋酸-乙醇洗脱液洗脱及干燥后，得到了 橄榄苦苷含量大于90%的橄榄叶提取物产品。整个方法仅由4个步骤构成，所采用试剂均 为常见的无毒成分，收率高且成本低，所得到产品可直接用于制备药物和保健品、食品，是 非常适于工业生产的方法。
[0014]本发明还提供了上述制备方法制得的橄榄叶提取物。
【具体实施方式】
[0015]以下将详细介绍本发明的研发过程。
[0016]-、酶解工艺的研究 实验材料：橄榄叶粉末，果胶酶、纤维素酶、碱性蛋白酶、淀粉酶、脂肪酶、溶菌酶 实验方法：取橄榄叶粉末，加入原料重量1. 5-2倍的水，并加入1%的酶，超声处理。测 定酶解后的上清液中橄榄苦苷的含量。
[0017] 实验结果见下表。_1_1
[0018] 由此可见，纤