专利名称：：羟基酪醇和含有羟基酪醇的橄榄提取物/浓缩物的新颖用途的制作方法羟基酪醇和含有羟基酪醇的橄榄提取物/浓縮物的新颖用途本发明涉及羟基酪醇或包含羟基酪醇的组合物的下述用途用于在人中治疗或预防年龄相关的黄斑变性，用于在动物(优选人)、特别是老年动物(优选老年人)中维持眼健康，用于改善动物(优选人)视觉，用于在动物中(优选在人中)维持高分辨率视觉和/或用于在动物中(优选在人中)维持视敏度,-以及用于在动物中(优选在人中)维持视觉性能和Z或在动物中(优选在人中)维持视觉功能。顾名思义，年龄相关的黄斑变性(AMD)是与年龄相关的黄斑的变性病症。黄斑表示视网膜的中心部分，其对于高分辨率视觉而言是关键性的，因为此处光感受器(感光细胞)的密度最大。因此，如果黄斑出现功能障碍，则需要高分辨率的视觉工作例如识别脸部或阅读变得越来越困难，直到在深度AMD(advancedAMD)的晚期变得不可能进行。事实上，该病症是美国和世界上其他国家中失明的主导原因。通常，AMD在超过55和65之间的年龄开始，在黄斑区域内和周围积聚特征性的黄色沉积物，称作玻璃疣。患有这些早期改变的大部分人仍然具有满意的视觉，但是它们处于发生深度AMD的风险下。玻璃疣较大且数量众多并且伴随着与光感受器邻近的色素细胞层(称作视网膜色素上皮(RPE))中的扰动时，该风险显著地更高。造成重大视觉损失的深度AMD具有两种形式干性和湿性。中央地图样萎縮(Centralgeographicatrophy)——深度AMD的"干性"形式——通过眼中心部分光感受器和支持光感受器的细胞的损失引起这些问题。目前对该病症尚无治疗方法。新生血管(Neovascular)或渗出性AMD"^深度AMD的"湿性"形式——由于黄斑下和进入黄斑内的异常血管生长(血管发生)而引起视觉损失。这些新形成的血管是有缺陷的，血从中渗漏造成血在视网膜下积累，这导致对黄斑功能层的不可逆的损伤。如果不治疗该病症，则最终视觉会完全丧失。尽管目前已开始能够获得针对该新生血管("湿性")形式AMD的有效但是非常昂贵的治疗方法，但是理想的选择仍然是预防该疾病发生或至少降低该病症发生的风险。为了理解AMD的病因学及其可能的预防或治疗，认识到光感受器长期暴露于视网膜环境中的氧化性损伤是重要的，所述氧化性损伤的特征是光和氧的同时存在。结果，光感受器变得受损和功能紊乱，并且这些"失效"光感受器必须被去除，同时必须形成新的光感受器。前一工作由RPE细胞完成。这些细胞在巨大的代谢负荷下发挥作用。据估计在约10天的时间段内，每个单个RPE细胞必须将约50个光感受器吞噬、消化并排入血流中。因此在60年间，任何单个RPE细胞必须处理超过100000个光感受器。不足为奇，在这一密集的代谢活动期间失效光感受器的消化和排除并不总是完全的并且细胞碎片不断累积，造成渐进性的功能障碍，最终造成RPE以及光感受细胞死亡。因此，预防AMD的符合逻辑的目标似乎是以下这些1:通过抗氧化剂减少氧化性损伤；2:通过可特异吸收蓝光的黄色物质(例如叶黄素和玉米黄素)减少最具损伤性的蓝光的量；3:支持RPE细胞，使其更好地应付其极端的代谢负荷；4:通过抑制血管发生减少新的有缺陷血管的产生。胡萝卜醇(xanthophyll)型类胡萝卜素叶黄素(lutein)和玉米黄素(zeaxanthin)天然在中心视网膜中累积至人体中各处所观察到的最高浓度。因此，并且由于它们的蓝光(其能够引起对视网膜的损伤)吸收和抗氧化特征，有人提出叶黄素和玉米黄素能够有助于AMD的风险降低。对膳食补充抗氧化剂维生素C和E与)8-胡萝卜素和锌的组合已经被证明降低了AMD发展的风险。在其整个生命中用消除了类胡萝卜素的膳食饲养的猴子中，黄斑下的视网膜色素上皮是有缺陷的，其含有的细胞比用类胡萝卜素词养的猴子少得多。另外，最近推测的炎症在AMD病程中的重要性与环氧合酶(COX)抑制剂可能有效预防AMD的预期一致，这受到下述发现的支持特异的COX抑制剂也抑制VEGF(血管内皮生长因子)。因此，阿司匹林也显示降低AMD的风险。具有抗血管生成特征的另一物质是大豆的主要成分一一染料木黄酮。因此，染料木黄酮可能与AMD风险的降低相关，这是受到以下观察结果支持的一个观点亚洲老年人中湿性AMD的发病率低于年龄匹配的欧洲人中的发病率。上述物质主要适用于降低发生AMD的风险。最近已能够获得用于治疗新生血管AMD的针对VEGF(血管内皮生长因子)的抗体。然而，它们必须被注射进眼球中，这对患者而言是有风险的和麻烦的。因此，对患有AMD或处于发生AMD风险下的人而言，对AMD预防和不危险疗法的医学需要仍未解决。最近，丙烯醛对培养的RPE细胞的作用据我们所知首次由Jiaetal.在InvestOphthalmolVisSci.2007Jan;48(l):339-348:Acrolein,aToxicantinCigaretteSmoke，CausesOxidativeDamageandMitochondrialDysfimctioninRPECells:Protectionby(R)-a-LipoicAcid中描述。该出版物记录了丙烯醛是线粒体毒性的，并且硫辛酸能够降低氧化性RPE损伤，导致硫辛酸和具有相似作用机制的化合物能够治疗或预防AMD的结论。目前我们出人意料地发现，羟基酪醇也可以降低对暴露于强氧化剂丙烯醛的经培养的RPE细胞的氧化性RPE损伤。羟基酪醇发挥作用的潜在机制可以经由编码抗氧化蛋白质和第II阶段酶的基因的关键调节子一一Nrf2实现，所述第II阶段酶中和自由基并将其他毒性化合物转化为活性较弱的分子。在该过程中，第II阶段酶将"中和"元件粘附在不想要的物质上，使它们更容易被身体排泄。第n阶段酶的例子是已知介导酶促身体解毒和/或显示抗氧化功能从而保护细胞免受毒素损伤的谷胱甘肽S-转移酶、NAD(P)H:醌氧化还原酶1、UPD-葡萄糖苷酸基转移酶、7-谷氨酸半胱氨酸连接酶和血红素氧化酶-1。我们的数据表明羟基酪醇提高APRE19细胞中的Nrf2蛋白质水平，并随后以积极方式调控GSH(谷胱甘肽的还原丙烯醛硫辛酸7形式)和SOD(超氧化物岐化酶)水平。另外，羟基酪醇处理保护细胞免受线粒体功能减退并且提高细胞生存力。因此，羟基酪醇能够在人中治疗和/或预防AMD。氧化应激和导致的RPE细胞损伤是AMD发病机制的一部分。丙烯醛在RPE细胞中引起氧化应激。因此，该细胞培养物模型能够用于鉴定保护RPE细胞在氧化应激后免于细胞死亡的化合物。可以推测，任何抗氧化剂都有可能保护RPE细胞免受丙烯醛诱导的氧化应激。我们发现在测试的抗氧化剂的整个阵列中，HT是唯一能够保护的抗氧化剂。如引言中所述，视网膜环境的特征是光和氧的同时存在。这种状态导致产生大量活性氧物质和高度活性的氧自由基例如羟基自由基和超氧自由基。羟基酪醇在给定的实施例中惊人地显示能够减轻丙烯醛的毒性。因此，羟基酪醇及其衍生物以及含有羟基酪醇的任何橄榄果汁/水性制剂/提取物/浓縮物可能能够维持视觉性能和/或视觉功能。视觉功能是视觉性能(即考虑速度和准确度的视觉工作的性能)的前题条件。视觉工作可包括若干种能力，如阅读以确定的字体大小书写的文本；在不同光照条件下和针对近距离以及远距离物体的视敏度(能够看到清晰/调好焦距的图像)；在确定的光照条件下在图像中分辨确定大小的细节的能力(图像分辨率、对比度(即在低光照条件(弱对比)下以高图像分辨率观察的能力)))，和在不同光照条件之间迅速适应的能力。羟基酪醇及其衍生物式I的化合物羟基酪醇(式I的化合物；3，4-二羟基苯乙醇)可以是合成来源的，或者其可以与其他水溶性多酚(例如酪醇或橄榄苦苷)一起从橄榄叶、橄榄果实和橄榄油生产的植被水(vegetationwater)的提取中获得。涉及从橄榄叶中提取橄榄苦苷和/或羟基酪醇的参考文献的例子是WO02/18310、US2002/0198415、WO2004/005228、US6,416,808和US2002/0058078，它们公开了下述方法将橄榄植被水用酸水解2到12个月，直至存在的橄榄苦苷中至少90%被转化。从橄榄、橄榄果肉、橄榄油和橄榄研磨废水中提取酚类化合物的方法由Usanalnc.专利US6,361,803和WO01/45514和US2002/0004077描述。EP-A1582512描述了从橄榄叶中提取羟基酪醇。从去核橄榄的植被水中获得羟基酪醇和/或橄榄苦苷的方法公开于US2004/0039066Al中第-段。衍生物可以例如是酯。羟基酪醇的优选的酯的一个例子是橄榄苦苷。可特别地根据US6,416,808(第4栏第37行到第7栏第27行)；WO2004/005228;US6,936,287;US2005-103711;US2003-108651;US2002-198415;US6,165,475;JP2001-252054;JP2000-319161;WO01/45514(Us扁);US6,358,542(特别见第4栏第1行到第9栏第50行和实施例1-5和11-13);US6,361,803(特别见第3栏第64行到第9栏第47行和实施例1_5和ii_i3);和WO2006/084658中公开的方法之一制造植被水。优选地如US6,416,808(第4栏第37行到第7栏第27行)中所公开的内容来制造植被水。还可使用植被水浓縮物代替羟基酪醇；然而优选使用纯度至少为1.5重量％，优选地至少为30重量％，更优选地至少为50重量％的羟基酪醇。一种特别合适的植被水浓縮物是例如可商业得自CreAgri,Hayward，美国的"HDDROX⑧6%"，"HDDROX6%"含有以HDDROX6%总重为基础5到8重量％的蛋白质，45到68重量％的碳水化合物，17到30重量%的脂肪，8到15重量％的灰分和最少6重量％的水溶性单酚和多酚。也可使用均可商业得自CreAgri，Hayward，美国的"HIDROX⑧2%"和"HIDROX9%"，以及可商业得自GlanbiaandIndena(Milan,Italy)的以下产品含有20到35重量％羟基酪醇和4到6重量％酪醇的OLIVACTIV;总酚含量^30重量％(通过UV测量)，羟基酪醇量2.5重量％(通过HPLC测量)，毛蕊花糖苷(verbascoside)量S.O重量％(通过HPLC测量)的OLEASELECT;和每kg含有22到24g羟基酪醇和5.0到6.5g酪醇的粉末OLIVE(OLEA)DRY。9其他合适的产品是可商业得自Seppic的Prolivols，其含有35重量％的多酚，特别是20mg羟基酪醇(每gProlivols)和3mg酪醇(每gProlivols);以及OliveBraunStandard500(来自obipektin):每kg含l.O到2.2g羟基酪醇和0.2到0.7g酪醇的粉末；Olivex橄榄多酚液体PlO(来自AlbertIsliker):每kg含2.0到3.5g羟基酪醇和0.2到1.0g酪醇的液体；Olivex橄榄多酚(来自AlbertIsliker):每kg含22到23g羟基酪醇和6.5到8.0g酪醇的粉末；和OlivePolyphenolsNLT(来自LalilabInc.)，其含有2.0到6重量％的羟基酪醇和0.7至".1重量％的酪醇。在合适的可商业获得的植被水浓縮物中，羟基酪醇的量在每kg植被水浓縮物总重1.0到220g的范围内变化。酪醇的量优选地在每kg植被水浓縮物总重0.2到45g的范围内变化。羟基酪醇与酪醇的重量比例优选地在100:10和100:40之间，最优选地在100:18和100:35之间。"老年人"在本发明的上下文中表示年龄在50到125范围内，优选地年龄在60到90范围内的人。"治疗"在本发明的上下文中被定义为口服应用，从而终止或延迟眼疾的发展。"预防"在本发明的上下文中被定义为目的是减小罹患眼疾的风险的干预措施。"维持眼健康"在本发明的上下文中被定义为确保眼、尤其是视网膜及其不同层整体保持完全有功能或基本有功能或部分有功能。"改善视觉"在本发明的上下文中表示一般性地改善视觉性能，如通过视觉低分辨率图表所测量的，如ETDRS(早期治疗糖尿病性视网膜病研究)图表。"维持高分辨率视觉"在本发明的上下文中表示维持通过阅读图表所测量的阅读能力。"维持视敏度"在本发明的上下文中表示预防视敏度的减退。视敏度是最普遍(但不是唯一)的视觉功能临床度量。视敏度是在标准化的距离下随着符号大小变化而鉴别白色背景上黑色符号能力的定量度量。视敏度代表在这样的图表(通常是所谓的SnellenChart)上恰好能够可靠鉴别的最小尺寸。视敏度通常被表述为普通分数(commonfraction)。使用米作为测量单位，该分数视敏度相对于6/6表述。具有6/6的视敏度表示通常应当在6米外被识别的字母大小确实在该距离被识别。这是最好的视敏度，并且在十进制体系中代表表示100%视敏度的1.0。6/60的视敏度表示在6米处看到具有正常视觉的人在60米距离能看到的细节，这表示10%视敏度。然而，视敏度也可以高于100%。用于人(70kg人)的羟基酪醇每日剂量可以从5到500mg变化，优选地从15到100mg变化。对哺乳动物而言，羟基酪醇的优选的剂量从0.28到1.9mg/kg代谢体重变化，其中对哺乳动物而言"代谢体重"[以kg计^(体重[以kg计])075这表示例如对70kg的人而言，优选的每日剂量应在6.77和45.98mg之间变化，对20kg的狗而言，优选的每日剂量应在2.23和15.1mg之间变化。动物在本发明的上下文中包括人、宠物(狗、猫、鸟(例如金丝雀、鹦鹉、相思鹦鹉(budgerigars)、贝壳长尾小鹦鹉(shellparakeet)))、农业动物、隼和鹰，其中人是特别优选的。本发明还涉及包含羟基酪醇的营养药物组合物，其用于在人中治疗或预防年龄相关的黄斑变性，用于在动物中(优选在人中)、特别是在老年动物(优选老年人)中维持眼健康，用于改善动物(优选人)的视觉，用于在动物中(优选在人中)维持高分辨率视觉和/或用于在动物中(优选在人中)维持视敏度，以及用于在动物中(优选在人中)维持视觉性能和/或在动物中(优选在人中)维持视觉功能。本文使用的术语营养药物组合物包括食物制品、食品、膳食补剂、营养补剂或用于食物制品或食品的补剂组合物、饮料(例如但不限于运动饮料、功能性水、果汁、思慕雪；即食饮品)、乳制品(例如但不限于单次酸乳饮品(singleshotyogurtdrink))、营养棒和涂抹物(spreads)。本文使用的术语"食物制品"是指适用于被人或动物消耗的任何食物或伺料。食物制品可以是经制备和包装的食物(例如蛋黄酱、色拉酱、面包或乳酪食物)或动物饲料(例如挤压和成粒的动物饲料、粗混合饲料或宠物食物组合物)。本文使用的术语"食品"是指适合人或动物消耗的任何物质。术语"食品补剂"是指用于补充人或动物膳食的小量化合物，其被包装在单个或多个剂量单位中。膳食补剂通常不提供大量的卡路里，但是可含有其它微量营养物(例如维生素或矿物)。术语"营养补剂"是指包含与卡路里来源组合的膳食补剂的组合物。在一些实施方案中，营养补剂是肉替代物或补剂(例如营养或能量棒或营养饮料或浓縮物)。食物制品或食品为例如饮料(如非酒精饮品和酒精饮品)以及要被添加进饮用水和液体食物中的液体制剂，非酒精饮品为例如软饮、运动饮品、果汁(例如橙汁、苹果汁和柚子汁)；蔬菜汁例如番茄汁；柠檬水、茶、接近水的饮品和乳和其它乳制品饮品(例如酸乳饮品)和减肥饮品。在另一实施方案中，食物制品或食品是指包含本发明的组合物的固体或半固体的食物。这些形式可包括但不限于烘焙的商品如蛋糕和曲奇、布丁、乳制品、糖膏(confection)、点心食物或冷冻糖膏或花式新品(novelties)(例如冰激凌、奶昔)，制备的冷冻肉、糖果、点心制品(例如薯片)，液体食物如汤、涂抹物、酱、沙拉酱、制备的肉制品、乳酪、酸乳和任何其它含脂肪或油脂的食物，和食物成分(例如小麦粉)。术语食物制品或食品还包括功能性食物和制备的食物制品，后者是指适合人消耗的任何预先包装的食物。包括宠物食物组合物的动物饲料有利地包括旨在补充必需膳食需要的食物，以及调剂物(treats)(例如狗饼干)或其它食物补剂。包含本发明的组合物的动物词料可以是干燥组合物(例如粗粒)、半潮湿组合物、潮湿组合物，或其任何混合物的形式。或者或另外，动物饲料是补剂，例如肉汤、引用水、酸乳、粉末、悬浮液、咀嚼物(chew)、调剂物(例如饼干)或任何其它递送形式。本发明的膳食补剂可以以适用于口递送的任何合适的方式被递送。本发明的膳食补剂的成分包含在可接受的用于口消耗的赋形剂和/或载体中。载体和由此产生的膳食补剂自身的实际形式不是关键的。载体可以是液12体、凝胶、软胶囊、胶囊、粉末、固体片剂(包衣或非包衣的)、茶等等。膳食补剂优选地以片剂或胶囊的形式，最优选以硬(壳)明胶胶囊的形式。合适的赋形剂和/或载体包括麦芽糖糊精、碳酸转、磷酸二,丐、磷酸三钙、微晶纤维素、葡萄糖、米粉、硬脂酸镁、硬脂酸、交联羧甲基纤维素钠、淀粉羟乙酸钠、交聚维酮、蔗糖、植物胶、乳糖、甲基纤维素、聚维酮、羧甲基纤维素、玉米淀粉等等(包括其混合物)。优选的载体包括碳酸钙、硬脂酸镁、麦芽糖糊精及其混合物。使用传统的技术将多种成分和赋形剂和/或载体混合并形成想要的形式。本发明的片剂或胶囊可以用肠包衣包裹，所述肠包衣在约6.0到7.0的pH下溶解。在小肠中溶解而不在胃中溶解的合适肠包衣是醋酸邻苯二甲酸纤维素(celluloseacetatephthalate)。配制和施用技术的更多细节可见于最新版的Remington'sPharmaceuticalSciences(MaackPublishingCo.，Easton,PA)。在其它一些实施方案中，膳食补剂作为适合被消费者添加进食物或饮料中的粉末或液体提供。例如，在一些实施方案中，膳食补剂可以以粉末的形式被施用给个体，所述粉末例如要通过混合进饮料中使用，或通过搅拌进半固体的食物(如例如布丁、点心(topping)、酱、浓汤(puree)、烹调的谷物或沙拉酱)中使用，或以其它方式通过添加进食物(例如封装在食物或饮料容器的盖中，用于在消耗前立即释放)使用。膳食补剂可含有一种或多种惰性成分，特别是如果期望限制由膳食补剂添加进食谱中的卡路里数时。例如，本发明的膳食补剂也可以含有任选的成分，包括例如草药、维生素、矿物、强化剂、着色剂、甜味剂、调味剂、惰性成分等等。在一些实施方案中，膳食补剂还含有维生素和矿物，包括但不限于磷酸钙或醋酸钙；磷酸氢二钾；硫酸镁或氧化镁；盐(氯化钠)；氯化钾或醋酸钾；抗坏血酸；正磷酸铁；烟酰胺；硫酸锌或氧化鋅；泛酸f5;葡萄糖酸铜；核黄素；^-胡萝卜素；盐酸吡哆醇；硫胺单硝酸酯；叶酸；生物素；氯化铬或吡啶甲酸络；碘化钾；硒酸钾；钼酸钠；叶绿醌；维生素D3;氰钴铵素；亚硒酸钠；硫酸铜；维生素A;维生素C;肌醇；碘化钾。维生素和矿物的合适剂量可以通过参考U.S.RDA指南获得。在其它一些实施方案中，本发明提供了包含本发明的组合物的营养补剂(例如能量棒或肉代替品棒或饮料)。营养补剂可以作为进餐或点心替换物使用，并通常提供养分卡路里。优选地，营养补剂以平衡的量提供碳水化合物、蛋白质和脂肪。营养补剂还可包含碳水化合物，单糖、中链长度糖或多糖或其组合。单糖可以针对想要的感觉特性选择。未烹饪的淀粉是复杂碳水化合物的一个例子。如果期望其维持其高分子量结构，则食物配制物或其部分中仅应该包含未经烹饪或加热加工的碳水化合物，因为加热会将复杂的碳水化合物分解为单纯的碳水化合物，其中单纯的碳水化合物是单糖或二糖。在一个实施方案中，营养补剂包含三种链长度水平的碳水化合物(简单、适中和复杂；例如蔗糖、麦芽糖糊精和未烹饪的玉米淀粉)来源的组合。要掺入本发明的营养补剂中的蛋白质来源可以是用于营养配制物中的任何合适的蛋白质，其可包括乳清蛋白、乳清蛋白浓縮物、乳清粉末、卵、大豆粉、大豆乳、大豆蛋白、大豆蛋白分离物、酪蛋白酸盐(例如酪蛋白酸钠、酪蛋白酸钙钠、酪蛋白酸钙、酪蛋白酸钾)、动物和植物蛋白质和水解产物及其混合物。选择蛋白质来源时，首先应当考虑蛋白质的生物学价值，最高的生物学价值在酪蛋白酸盐、乳清、乳清蛋白、卵清蛋白和全卵蛋白中发现。在一个优选的实施方案中，蛋白质是乳清蛋白浓縮物和酪蛋白酸钙的组合。这些蛋白质具有高生物学价值；即它们具有高比例的必需氨基酸0参阅ModernNutritioninHealthandDisease,eighthedition,Lea&Febiger,publishers,1986,especiallyVolume1,pages30-32。营养补剂可还含有其它成分，如其它维生素、矿物、抗氧化剂、纤维和其它膳食补剂(例如蛋白质、氨基酸、胆碱、卵磷脂、脂肪酸)的一种或组合。一种或若干种这些成分的选择是配制、设计、消费者偏好和最终用户的一个问题。添加进本发明的膳食补剂中的这些成分的用量是技术人员容易知道的。对这些用量的指南可以由针对儿童和成人的U.S.RDA提供。可以被添加的其它维生素和矿物包括，但不限于磷酸钙或醋酸钙；磷酸氢二钾；硫酸镁或氧化镁；盐(氯化钠)；氯化钾或醋酸钾；抗坏血酸；正磷酸铁；烟酰胺；硫酸锌或氧化锌；泛酸钙；葡萄糖酸铜；核黄素；/3-胡萝卜素；盐酸吡哆醇；硫胺单硝酸酯；叶酸；生物素；氯化铬或吡啶甲酸14铬；碘化钾；硒酸钾；钼酸钠；叶绿醌；维生素D3;氰钴铵素；亚硒酸钠；硫酸铜；维生素A;维生素C;肌醇；碘化钾。营养补剂可以以多种形式和通过多种生产方法提供。在一个优选的实施方案中，为了制造食物棒，液体成分被烹饪；干燥成分与液体成分被添加进混合机中并混合，直到获得生面团相；将生面团放进挤压机中并挤压；将经挤压的生面团切成合适的长度；使产物冷却。除了本文明确列出的成分外，棒还可含有其它养分和填充剂以加强口味。本领域技术人员理解其它成分(例如填充剂、乳化剂、防腐剂等)可以被添加进本文所述的这些中，用于加工或制造营养补剂。另外，调味剂、着色剂、香料、坚果等等可以被掺入营养药物组合物中。调味剂可以是有味的提取物、挥发油、巧克力调味剂、花生酱调味剂、曲奇碎屑、松脆米(crisprice)、香草或任何可商业获得的调味剂的形式。有用的调味剂的例子包括，但不限于纯净的茴香提取物、仿造的香蕉提取物、仿造的樱桃提取物、巧克力提取物、纯净的柠檬提取物、纯净的橙提取物、纯净的薄荷提取物、仿造的菠萝提取物、仿造的朗姆提取物、仿造的草莓提取物或纯净的香草提取物；或挥发油，如香蜂叶油(balmoil)、月桂叶油、佛手柑油、柏木油(cedarwoodoil)、胡桃油、樱桃油、桂皮油、丁香油或薄荷油；花生酱、巧克力调味剂、香草曲奇碎屑、奶油糖(butterscotch)或太妃糖(toffee)。在一个实施方案中，膳食补剂含有可可或巧克力。乳化剂可以被添加用于营养药物组合物的稳定性。合适的乳化剂的例子包括，但不限于卵磷脂(例如来自卵或大豆)，和/或甘油单酯和甘油二酯。其它乳化剂对技术人员是显而易见的，对合适的乳化剂的选择将部分取决于配制物和最终产物。也可以向营养补剂中添加防腐剂以延长产物的货架寿命。优选地，使用如山梨酸钾、山梨酸钠、苯甲酸钾、苯甲酸钠、或EDTA转二钠(calciumdisodiumEDTA)。除了上述碳水化合物外，营养药物组合物可含有天然或人工的(优选低卡路里的)甜味剂，例如糖类、环己烷氨基磺酸盐(cyclamate)、天冬胺(aspartamine)、天冬甜素(aspartame)、安赛蜜K(acesulfameK)和/或山梨糖醇。如果营养补剂旨在被超重或肥胖的个体或患有II型糖尿病的个体(其易于患高血糖症)消耗，则这类人工甜味剂是期望的。另外，可以向本发明的营养药物性组合物中添加多种维生素和矿物补剂，以获得一些膳食中缺乏的足够量的必需养分。多种维生素和矿物补剂也可以适用于疾病预防和防止生活方式引起的营养丧失和缺乏。当然，通过营养药物组合物施用的羟基酪醇的剂量和比例可根据已知的因素改变，所述因素例如具体组合物的生理特征；接收者的年龄、健康和体重；症状的性质和程度；共存的治疗种类；治疗的频率；和想要的作用，所述因素可以由本领域的专家使用常规试验确定，或使用关于营养药物组合物配制的常见考虑决定。食物或饮料适当地每份含有约0.5mg到约1000mg的羟基酪醇。如果组合物是药物组合物，则这类药物组合物可以以从约1mg到约2000mg每剂量单位(例如每胶囊或片剂)的量含有羟基酪醇，或含有从约1mg每日剂量到约3000mg每日剂量的液体制剂。本发明还涉及包含羟基酪醇的药物组合物，其用于在人中治疗或预防年龄相关的黄斑变性，用于在动物中(优选在人中)、特别是在老年动物(优选老年人)中维持眼健康，用于改善动物(优选人)的视觉，用于在动物中(优选在人中)维持高分辨率视觉和/或用于在动物中(优选在人中)维持视敏度，以及用于在动物中(优选在人中)维持视觉性能和/或在动物中(优选在人中)维持视觉功能。根据本发明的药物组合物优选地还包含可药用载体。合适的药物载体例如在本领域的标准参考文献--上文Remington'sPharmaceuticalSciences中有所描述。这类可药用载体的例子为适用于口施用的无机和有机载体材料，其包括水、明胶、阿拉伯胶、乳糖、淀粉、硬脂酸镁、滑石、植物油等等。药物组合物可还含有常规的药物添加剂和佐剂、赋形剂或稀释剂，其包括但不限于水、任何来源的明胶、植物胶、木质素磺酸盐、滑石、糖、淀粉、阿拉伯胶、植物油、聚亚烷基二醇、调味剂、防腐剂、稳定剂、乳化剂、缓冲液、润滑剂、着色剂、湿润剂、填充剂等等。药物组合物中各个组分的剂量和比例可以由本领域技术人员使用常见的临床前和临床试验确定，或使用关于营养药物组合物配制的常见考虑决疋。在一个优选的实施方案中，羟基酪醇通过药物组合物以单个剂量或多个剂量的方式被施用，其用量为至少0.3mg/kg体重/天，优选地用量为l-450mg/kg体重/天，最优选地用量为4-140mg/kg体重/天。根据本发明的组合物可以是适用于口施用给动物体(包括人体)的任何盖伦形式(galenicform),例如固体形式，例如作为食物或饲料(用的添加剂/补充剂)、食物或饲料预混物、强化的食物或饲料、片剂、丸剂、颗粒剂、锭剂、胶囊和泡腾配制剂(如粉末和片剂)，或液体形式，例如溶液、乳剂或悬浮液的形式，例如作为饮料、糊剂和油悬浮液。糊剂可以被填充进硬或软壳胶囊中，其中胶囊具有例如(鱼、猪、家禽、牛)明胶、植物蛋白或木质素磺酸盐的基质。营养药物和药物组合物可以是受控(延迟)释放的配制剂的形式。本发明接着通过以下的非限制性实施例进一步阐述。实施例实施例1通过常规工序来制备提供下述剂量的软明胶胶囊，所述剂量为每粒胶囊50mg羟基酪醇。合适的每日剂量为l到5粒胶囊。其它成分甘油。水、明胶、植物油实施例2硬明胶胶囊通过常规工序来制备提供下述剂量的硬明胶胶囊，所述剂量为每粒胶囊75mg羟基酪醇。合适的每日剂量为l到5粒胶囊。其它成分填料适量的乳糖或纤维素或纤维素衍生物润滑剂如果需要的话，硬脂酸镁(0.5%)实施例3片剂通过常规工序来制备片剂，每片提供100mg羟基酪醇作为活性成分，和微晶纤维素、二氧化硅(Si02)、硬脂酸镁、交羧甲基纤维素钠总计500mg作为赋形剂。实施例4软饮可如下制备含有羟基酪醇的软饮:成分[g]A.果汁浓縮物和水溶性香料60.3°白利糖度，5.15%酸度657.9943.5°白利糖度，32.7%酸度95.96水溶性橙味香料3.43水溶性杏味香料6.71水26.46B.色素iS-胡萝卜素10%CWS0.89水67,65c.酸和抗氧化剂抗坏血酸4.11无水柠檬酸0.69水43.18D.稳定剂果胶0.20苯甲酸钠2.74水65.6018E.油溶性香料<table>tableseeoriginaldocumentpage19</column></row><table>F.活性成分羟基酪醇提供15mg的量混合果汁浓縮物和水溶性香料而不掺入空气。将色素溶于去离子水中。将抗坏血酸和柠檬酸溶于水中。将苯甲酸钠溶于水中。果胶在搅拌下被添加并在煮沸时溶解。冷却溶液。预混合橙油和油溶性香料。将"F"下提到的活性成分搅拌进A的果汁浓縮物混合物中。为了制备软饮，将所有的组分A-F混合在一起后使用Turrax和随后使用高压匀化器(p,=200bar,p2=50bar)匀化。实施例5使用人ARPE-19细胞的细胞培养物测试将人ARPE-19细胞(人视网膜色素上皮细胞系)维持在补充了10%胎牛血清、0.348%碳酸氢钠、2mML-谷氨酰胺、100U/mL青霉素和100|ag/ml链霉素的DMEM-F12培养基(Dulbecco，s改良的Eagle's培养基)中。将细胞培养物于37"C下维持在95%空气和5%C02的潮湿大气中。每3到4天更换培养基。使用IO代以内的ARPE-19细胞。试剂丙烯醛购自SinopharmChemicalReagentCo.,Ltd(上海，中国)。除非另有说明，所有的试剂购自Sigma-AldrichChemicalCo.(St.Louis，MO)。羟基酪醇是化学合成的。丙烯醛暴露和HTS补充所有实验用96孔板或6孔板中培养的80%汇合的单细胞层进行。将羟基酪醇(HTS)溶于DMSO(二甲基亚砜)中。每次实验是在将丙烯醛溶于PBS(磷酸盐缓冲液)后立即进行的。对急性毒性研究而言，将细胞暴露于丙烯醛24小时。通过用HTS将细胞预处理48小时或7天，用急性毒性模型研究HTS(羟基酪醇)的保护作用。针对细胞生存力的MTT检验使用MTT还原检验(MTTassayreductionassay)作为细胞生存力的定性指标。使用微量培养板分光光度计(SpectraMax340，MolecularDabices，Sunnyvate，CA)在555nm处对光密度读数。用未处理的细胞对吸光度数值进行标准化，以计算细胞生存力的改变。针对线粒体膜电位的JC-1检验使用亲脂的阳离子探针5,5，,6，6，-四氯-1，1',3,3，-四乙基苯并咪唑-碳花菁石典(5,5，,6,6，-tetrachloro-1,1,,3，3，-tetraethylbenzimidazol-carbocyanineiodine,JC-l)在活APRE-19细胞中评价线粒体电位改变(A)。对定量荧光测量而言，在JC-1染色后将细胞洗涤一次，并在485nm激发和535nm和590nm发射下用多标签计数器(Wallac1420;PerkinElmerLifeSciences,Wellesley，MA)扫描，以分别测量绿色和红色的JC-1荧光。在25个区域中扫描每个孔，所述25个区域以5x5的模式成矩形排列，其具有1mm的间隔和约lmn^的光束面积(底部扫描)。对于JC-1染色ARPE-19的显微镜观察而言，用装备了电荷耦合设备(CCD)数字照相机(DiagnosticInstruments,SterlingHeights,MI)白勺显，敛f竟(Axiover25;CarlZeissMeditec,Inc.,Thomwood，NY)上的FITC和TRITC荧光滤镜立方体收集图像，并用图像管理软件(Photoshopver,7,0;AdobeSystems,MountainView,CA)处理。总抗氧化能力通过可商业获得的检验试剂盒(Totalantioxidantpower,A-015,JianchengBiochemicalInc.，南京，中国)根据试剂盒说明书检验ARPE-19细胞的细胞内总抗氧化能力。超氧化物岐化酶(SOD)测量通过超氧化物岐化酶检验试剂盒(A001,JianchengBiochemicalInc.,南京，中国)根据试剂盒的说明书测量细胞内SOD活性。GSH水平的检验使用基于巯基-特异性试剂二硫代硝基苯甲酸(DTNB)的检验，用可商业获得的检验试剂盒(JianchengBiochemicalInc.,南京，中国)测定GSH水平，并在412nm处通过分光光度计测量加合物。蛋白质羰基的检测为了测定蛋白质氧化的度量——蛋白质羰基，将细胞在100mm平板上培养。用Oxyblot蛋白质氧化检测试剂盒(CellBioHTSbs,SanDiego，CA)测定可溶蛋白质中的蛋白质羰基。核因子-E2-reHTSted因子2(NrfT)的总水平将细胞在100mm平板上培养，并在RIPA缓冲液[150mMPBS，其含有1%(体积/体积)lgepalCA630、0.5%(重量/体积)去氧胆酸钠、0.1%(重量/体积)SDS和5pg4d蛋白酶抑制剂混合物]pH7.4中匀化(I:IO)，使用50吗蛋白质进行总Nrf2水平的Western分析，并以1:500的效价用抗-Nrf2抗体(SantaCruz)标记。通过来自AmershamPharmacia的ECLWestern印迹检测试剂盒检测化学发光。细胞内钙检验通过可商业获得的测试试剂盒(C004，JianchengBiochemicalInc.，，南京，中国)根据试剂盒说明书测定细胞内(^++水平。线粒体复合物i、n和m的活性检验将ARPE-19细胞在100mm平板中培养，在PBS中洗涤，重悬于适当的等渗缓冲液(0.25M蔗糖、5mMTris-HCl，pH7.5禾口0.1mM苯甲磺酰氟化物)中并匀化。通过细胞匀化物的差速离心分离线粒体。使用略微修改的常规测试，通过光谱测定NADH-CoQ氧化还原酶(复合物I)、琥珀酸盐-CoQ氧化还原酶(复合物II)、CoQ-细胞色素c还原酶(复合物III)。统计学分析数据被表示为两个或三个独立实验的均值士SD，如图例中所示。使用Prism软件(4.0a版)，使用单通道ANOVA计算统计学显著性，<0.05的p值被认为是显著的。结果在图中使用以下縮写21"C"=对照；:八"=丙烯醛；'11"=羟基酪醇；:H+A'^羟基酪醇+丙烯醛；;0+『=对照+羟基酪醇；HTSx-A"=不同浓度的羟基酪醇与丙烯醛。HTS对ARPE-19细胞中丙烯醛诱导的细胞生存力降低的保护作用将ARPE-19细胞以每孔4x104接种于96孔板中。当细胞80%汇合时用不同水平的HTS将其预处理48小时，然后用75pM丙烯醛处理24小时。在使用的浓度中(ARPE-19中10-100(iMHTS)HTS自身对细胞生存力没有明显的影响(图O。用HTS预处理ARPE-19细胞导致针对75pM丙烯醛诱导的毒性的显著保护。在10-20jaM范围内，HTS能够防护急性丙烯醛诱导的细胞生存力的降低。将ARPE-19细胞预处理7天时20nM的HTS完全消除了丙烯醛毒性(图3)。图1显示通过MTT检验测量的HTS对丙烯醛诱导的细胞生存力降低的保护作用。经过48h-HTS预处理的ARPE-19细胞。数值是来自四个独立实验的数据的均值土SD;每个实验一式三份进行。絲表示与对照(HTS0^M)相比pO.Ol。*表示与75iuM丙烯醛无HTS相比p<0.05。图3显示通过MTT检验测量的HTS对丙烯醛诱导的细胞生存力降低的保护作用。经过7天-HTS预处理的ARPE-19细胞。数值是来自四个独立实验的数据的均值士SD;每个实验一式三份进行。弁弁表示与HTS0相比p<0.01。*表示与丙烯醛无HTS相比p<0.05且**表示与丙烯醛无HTS相比pO.Ol。HTS对ARPE-19细胞中丙烯醛诱导的线粒体膜电位降低的保护作用与细胞生存力的结果相似，在使用的浓度下(ARPE-19细胞中10-100pMHTS)HTS自身在两种ARPE-19细胞中均对线粒体膜电位没有明显影响。与对细胞生存力的保护相似，7天的预处理增强了HTS的保护作用。如图2、4和IO中所示，HTS显著地防止了急性丙烯醛诱导的线粒体膜电位的降低。浓度低于10pM的HTS对ARPE-19中丙烯醛诱导的细胞毒性不显示保护作用。图2显示通过JC-1检验测量的HTS对丙烯醛诱导的线粒体膜电位降低的保护作用。经48h-HTS预处理的ARPE-19细胞。数值是来自三个独立实验的数据的均值土SD;每个实验一式三份进行。#表示与HTS0相比p<0.05且##表示与HTS0相比p<0.01。*表示与HTS0十丙烯醛75|uM相比p0.05。图4显示通过JC-1检验测量的HTS对丙烯醛诱导的线粒体膜电位降低的保护作用。经7天-HTS预处理的ARPE-19细胞。数值是来自代表三个实验的一个实验的数据的均值士SD;每个实验一式三份进行。絲表示与对照相比p<0.01。*表示与无HTS的丙烯醛相比p<0.05且**表示与无HTS的丙烯醛相比p<0.01。HTS调控丙烯醛诱导的ARPE细胞中细胞内SOD的减少用75pM丙烯醛处理引起ARPE-19细胞中细胞内SOD活性的显著降低(图6A)。100HTS的预处理防止了SOD活性的降低(图6A)。用不含丙烯醛的100)liMHTS处理在未处理的正常ARPE-19细胞中提高了细胞内SOD活性(图6A)。HTS调控丙烯醛诱导的ARPE-19细胞中细胞内总抗氧化能力的降低75的丙烯醛降低了ARPE-19细胞中细胞内抗氧化能力。用100HTS预处理防止了细胞经受丙烯醛诱导的所述降低(图6B)。与SOD活性相似，该保护可归因于HTS自身的抗氧化活性，因为无丙烯醛的lOOnMHTS提高了细胞内总体抗氧化能力(图6B)。图6显示ARPE-19细胞中急性丙烯醛暴露(24小时)诱导的细胞内SOD、抗氧化能力和Ca^水平的改变，以及HTS(48小时预处理)对它们的调控。数值是来自三个独立实验的数据的均值士SD，并且每个实验一式三份进行。#表示与对照相比p<0.05且##表示与对照相比p<0.01。*表示与无HTS的丙烯醛相比p<0.05且**表示与无HTS的丙烯醛相比p<0.01。HTS调控ARPE-19细胞中丙烯醛引起的细胞内Ca2+增加线粒体功能障碍通常导致细胞质Ca&水平的提高，所述C^+水平是氧化应激和线粒体功能障碍的生物标记物。用75nM丙烯醛处理ARPE-19细胞导致细胞内(^2+水平的显著提高(图.6C)。在75pM丙烯醛之前用100iliMHTS预处理显著地抑制了Ca"+的提高。100无丙烯醛的HTS未显著改变ARPE-19细胞中的细胞内Ca^水平。HTS抑制ARPE-19细胞中丙烯醛诱导的GSH水平降低用HTS将ARPE-19细胞预处理48小时显示提高GSH水平的趋势(图7)。用75丙烯醛处理24小时引起GSH水平的显著降低，用100i!MHTS处理48小时提供了对GSH水平的完全保护(图7)。图7显示丙烯醛诱导的GSH水平改变和ARPE细胞中HTS的保护作用。用HTS预处理48小时并暴露于丙烯醛24小时。数值是来自四个独立实验的数据的均值士SD，并且每个实验一式三份进行。^^#表示与对照相比p<0.01，*表示与75^M无HTS的丙烯醛相比p0.05。HTS抑制ARPE-19细胞中丙烯醛诱导的蛋白质羰基增加75丙烯醛处理24小时引起蛋白质氧化指标——蛋白质羰基的显著增加(图8)。用100pMHTS预处理48小时显示对丙烯醛诱导的蛋白质羰基增加的显著抑制(图8)。图8显示ARPE细胞中通过western印迹测定的，丙烯醛诱导的蛋白质羰基改变和HTS的保护作用。HTS预处理48小时并暴露于丙烯醛24小时。蛋白质羰基的代表性定量数据来自4个独立的相似实验。HTS调控ARPE-19细胞中丙烯醛诱导的总Nrf2表达的降低75(iM丙烯醛处理24小时引起ARPE-19细胞中总Nrf2表达的显著降低，100uMHTS预处理48小时显著防止了细胞发生丙烯醛诱导的总Nrf2的降低(图9)。图9显示ARPE细胞中通过western印迹测定的，丙烯醛诱导的总Nrf2表达改变和HTS的保护作用。HTS预处理48小时并暴露于丙烯醛24小时。HTS调控ARPE-'19细胞中丙烯醛诱导的线粒体复合物I、II和III的减企用75丙烯醛处理24小时引起ARPE-19细胞1中线粒体复合物24I、n和m活性的显著降低(图10A、B和C)。用100nMHTS预处理显示对复合物I(图10A)、复合物II(图10B)和复合物III(图10C)的显著保护。图IO显示ARPE-19细胞中HTS对丙烯醛诱导的线粒体复合物减少的保护。(A)复合物I，(B)复合物II，和(C)复合物III。用不同浓度的HTS预处理ARPE-19细胞，然后用75)iM丙烯醛处理。数值对复合物I而言是来自四个独立实验的数据的均值士SD，对复合物II和III而言是来自三个独立实验的数据的均值±SD，每个实验一式两份进行。#表示与对照相比p<0.05和弁弁表示与对照相比p<0.01，^表示与无HTS的75pM丙烯醛相比pO.Ol。权利要求1.用于以下用途的包含羟基酪醇的营养药物组合物用于在人中治疗或预防年龄相关的黄斑变性，用于在动物中维持眼健康，用于改善动物视觉，用于在动物中维持高分辨率视觉，用于在动物中维持视敏度，用于在动物中维持视觉性能和/或用于在动物中维持视觉功能。2.根据权利要求1的营养药物组合物，其中所述动物是人。3.羟基酪醇(或包含羟基酪醇的组合物)用于在人中治疗或预防年龄相关的黄斑变性，用于在动物中维持眼健康，用于改善动物视觉，用于在动物中维持高分辨率视觉，用于在动物中维持视敏度，用于在动物中维持视觉性能和/或用于在动物中维持视觉功能的用途(或用于制造用于上述用途的组合物的用途)。4.根据权利要求3的用途，其中所述动物是人。5.用于在人中治疗或预防年龄相关的黄斑变性的包含羟基酪醇的药物组合物。6.羟基酪醇(或包含羟基酪醇的组合物)用于在人中治疗年龄相关的黄斑变性的用途(或用于制造用于上述用途的组合物的用途)。7.用于在动物中、特别是在(老年)人中维持眼健康的，包含羟基酪醇的营养药物组合物。8.羟基酪醇(或包含羟基酪醇的组合物)用于在动物中、特别是在(老年)人中维持眼健康的用途(或用于制造用于上述用途的组合物的用途)。9.用于改善动物、特别是人的视觉的，包含羟基酪醇的营养药物组合物。10.羟基酪醇(或包含羟基酪醇的组合物)用于改善动物、特别是人的视觉的用途(或用于制造用于上述用途的组合物的用途)。11.用于在动物中、特别是在人中维持高分辨率视觉的，包含羟基酪醇的营养药物组合物。12.羟基酪醇(或包含羟基酪醇的组合物)用于在动物中、特别是在人中维持高分辨率视觉的用途(或用于制造用于上述用途的组合物的用途)。13.用于在动物中、特别是在人中维持视觉性能的，包含羟基酪醇的营养药物组合物。14.羟基酪醇(或包含羟基酪醇的组合物)用于在动物中、特别是在人中维持视觉性能的用途(或用于制造用于上述用途的组合物的用途)。15.用于在动物中、特别是在人中维持视敏度的，包含羟基酪醇的营养药物组合物。16.羟基酪醇(或包含羟基酪醇的组合物)用于在动物中、特别是在人中维持视敏度的用途(或用于制造用于上述用途的组合物的用途)。17.用于在动物中、特别是在人中维持视觉功能的，包含羟基酪醇的营养药物组合物。18.羟基酪醇(或包含羟基酪醇的组合物)用于在动物中、特别是在人中维持视觉功能的用途(或用于制造用于上述用途的组合物的用途)。19.用于在人中治疗或预防年龄相关的黄斑变性的方法，所述方法通过对人施用有效量的羟基酪醇(或包含羟基酪醇的组合物)来实现。20.用于在动物中维持眼健康，用于改善动物视觉，用于在动物中维持高分辨率视觉，用于在动物中维持视敏度，用于在动物中维持视觉性能和/或用于在动物中维持视觉功能的方法，所述方法通过对所述动物施用有效量的羟基酪醇(或包含羟基酪醇的组合物)来实现。21.根据权利要求20的方法，其中所述动物是人。22.用于在动物中、特别是在(老年)人中维持眼健康的方法，所述方法通过对所述动物/(老年)人施用有效量的羟基酪醇(或包含羟基酪醇的组合物)来实现。23.用于改善动物、特别是人的视觉的方法，所述方法通过对所述动物/人施用有效量的羟基酪醇(或包含羟基酪醇的组合物)来实现。24.用于在动物中、特别是在人中维持高分辨率视觉的方法，所述方法通过对所述动物/人施用有效量的羟基酪醇(或包含羟基酪醇的组合物)来实现。25.用于在动物中、特别是在人中维持视觉性能的方法，所述方法通过对所述动物/人施用有效量的羟基酪醇(或包含羟基酪醇的组合物)来实现。26.用于在动物中、特别是在人中维持视敏度的方法，所述方法通过对所述动物/人施用有效量的羟基酪醇(或包含羟基酪醇的组合物)来实现。27.用于在动物中、特别是在人中维持视觉功能的方法，所述方法通过对所述动物/人施用有效量的羟基酪醇(或包含羟基酪醇的组合物)来实现。全文摘要本发明涉及羟基酪醇或包含羟基酪醇的组合物的下述用途用于在人中治疗或预防年龄相关的黄斑变性，用于在动物(优选人)、特别是老年动物(优选老年人)中维持眼健康，用于改善动物(优选人)视觉，用于在动物中(优选在人中)维持高分辨率视觉和/或用于在动物中(优选在人中)维持视敏度，以及用于在动物中(优选在人中)维持视觉性能和/或在动物中(优选在人中)维持视觉功能。文档编号A61K31/05GK101652130SQ200780052642公开日2010年2月17日申请日期2007年4月18日优先权日2007年4月18日发明者卡林·威兹,建康·刘,沃夫冈·斯沙赫,迎·王-史密特申请人:帝斯曼知识产权资产管理有限公司