本发明属于药物制剂领域，具体涉及一种刺五加注射液的类过敏性检验方法。
背景技术：
近年来，随着中药注射剂的广泛应用，其不良反应的报道也逐年增多。据统计，注射剂仅占中药制剂的3％，但其不良反应却高达70％。中药注射剂不良反应由多种原因引起，大多为过敏样反应即类过敏反应。类过敏反应区别于过敏反应最重要的一点是它的发生无免疫系统参与，药物可直接刺激体内肥大细胞和嗜碱性粒细胞脱颗粒，释放大量生物活性物质，例如组胺和白三烯，并且引起全身或局部的病理生理反应，例如过敏性休克、支气管痉挛和皮疹等。
目前中药注射剂的免疫毒性安全评价技术与方法主要是根据《中药、天然药物免疫毒性研究技术指导原则》制定的，但是该指导原则中并没有将致类过敏反应原列为评价项目。RBL-2H3细胞是1978年美国国立牙科研究所的免疫学实验室从Wistar大鼠保持肿瘤状态的嗜碱性细胞中分离和克隆出来的嗜碱性白血病细胞株，具有肥大细胞的许多生物学特性，在致敏物质的刺激下发生脱颗粒反应，释放组胺等炎症介质，现已广泛用作肥大细胞体外研究的细胞模型。
RBL-2H3细胞脱颗粒模型在中药注射剂类过敏反应研究中应用已十分广泛。如刘炯，汤家铭和吴文斌等在2012年发表的《中药注射剂致RBL-2H3细胞脱颗粒的研究》(刘炯,汤家铭,吴文斌.[J].上海中医药大学学报,2012,05:85-91.)。但目前常用的相关检验方法过程耗时过长；并不具备对所有种类注射液的普遍适用性，尤其是对于刺五加注射液，现有的相关检验方法并不能准确的反映出其实际致敏情况，获得的检测数据并不稳定，几次平行检测之间差异大，重复性不好；并且使用现有检验方法在对一些可以引起小鼠类过敏反应的刺五加注射液进行检验时，获得的检验结果小于阴性对照，说明现有的检验技术并不能准确的反应出刺五加注射液的致敏情况。
因此，提供一种适用于刺五加注射液的类过敏性检验方法，使得检验过程耗时缩短，检测结果更加准确和稳定，并且能够更加真实地反应刺五加注射液的实际致敏情况，对刺五加注射液的开发制造和临床实用的安全性具有重要实际意义。
技术实现要素：
本发明的目的是提供一种刺五加注射液的类过敏反应检验方法。
如无特别说明，本发明中涉及的浓度百分比指质量-体积浓度；如无特别说明，本发明中涉及的溶液配制的溶剂为超纯水。
本发明中所述的“OD405”指在405nm处测得的吸光度值。
本发明提供的一种刺五加注射液的类过敏反应检验方法包括以下步骤：
(1)、样品预处理；
(2)、制备检测细胞；
(3)、β-氨基己糖苷酶释放率检测。
所述的检验方法的步骤(1)样品预处理的过程为：将待检测的刺五加注射液于40-60℃水浴10-30min后，立即在6000-10000rpm下离心30-60s，取上清液，将上清液以无酚红无血清MEM培养基稀释10-15倍，获得待检测液。
所述的检验方法的步骤(1)中：水浴温度优选为45-55℃；进一步优选为42-53℃；更进一步优选为50℃。
所述的检验方法的步骤(1)中：水浴时间优选为15-25min；进一步优选为18-22min；更进一步优选为20min。
所述的检验方法的步骤(1)中：离心转速优选为7000-9000rpm；进一步优选为7500-8500rpm；更进一步优选为8000rpm。
所述的检验方法的步骤(1)中：离心时间优选为35-55s；进一步优选为40-50s；更进一步优选为45s。
所述的将上清液以无酚红无血清MEM培养基稀释的倍数优选为11-14倍；进一步优选为12-13倍；更进一步优选为12倍。
所述的检验方法的步骤(2)制备检测细胞的方法为：于37℃、5％CO2细胞培养箱中培养RBL-2H3细胞，当RBL-2H3细胞生长铺满90％的培养瓶底面积时，进行传代，传代比例为1:5-1:8，隔天传代一次，获得正常生长的RBL-2H3细胞，即为检测细胞。
所述的检验方法的步骤(2)中培养RBL-2H3细胞所使用的培养基优选为含有1％青霉素-链霉素双抗生素和10％热灭活的胎牛血清的MEM培养基。
所述的检验方法的步骤(2)中的传代比例优选为1:6-1:8；进一步优选为1:7-1:8；更进一步优选为1:7。
所述的检验方法的步骤(3)β-氨基己糖苷酶释放率检测的方法为：取步骤(2)获得的检测细胞接种于24孔微孔培养板中，将接种后的微孔培养板于37℃、5％CO2细胞培养箱中培养12-24h后，使用PBS缓冲液洗涤细胞1次；向洗涤后的细胞孔中加入供试药品，于30-37℃作用30-40min后，将微孔培养板于4℃、2000-4000rpm离心5-10min，吸取上清液；将50μL上清液转移入96孔微孔培养板中，再加入β-氨基己糖酶底物50μL/孔，于25-37℃孵育20-60min后；加入pH9-10的Na2CO3-NaHCO3缓冲液或Tris-HCl缓冲液100μL/孔后，于405nm处测定吸光度，计算β-氨基己糖苷酶释放率。
所述的检验方法的步骤(3)中，所述的检测细胞接种的密度为2-5×105/孔。
所述的检验方法的步骤(3)中，所述的供试药品分为3组，加药体积为200-400μL/孔；所述的3组供试药品分别为：
待测组：步骤(1)获得的待检测液；
阴性对照组：体积浓度为0.1％的二甲基亚砜；
总酶组：用体积浓度为1％的曲拉通X-100。
所述的检验方法的步骤(3)中，所述的β-氨基己糖酶底物为50mM、pH4.5的柠檬酸缓冲液配制的2-3mM的β-氨基己糖酶底物溶液。
所述的检验方法的步骤(3)中，在405nm处测定吸光度时，以步骤(1)获得的待检测液作为本底组；β-氨基己糖酶的释放率计算公式如下：
待测组的β-氨基己糖苷酶释放率(％)＝(待测组的OD405-本底组的OD405)/(总酶组的OD405-阴性对照组的OD405)×100％；
阴性对照组的β-氨基己糖苷酶释放率(％)＝(阴性对照组的OD405-本底组的OD405)/(总酶组的OD405-阴性对照组的OD405)×100％。
本发明所述的检验方法中，当待测组的β-氨基己糖苷酶释放率和阴性对照组的β-氨基己糖苷酶释放率之比大于1.2时，即可判定该刺五加注射液在临床上可出现类过敏反应。
和现有技术相比，本发明的有益效果为：
(1)、本发明提供的刺五加注射液的类过敏反应检验方法操作简单，检验耗时短。
(2)、本发明提供的刺五加注射液的类过敏反应检验方法采用体积浓度为0.1％的二甲基亚砜作为阴性对照，其引起RBL-2H3细胞β-氨基己糖苷酶释放率相对较低，并且在动物实验时未引起小鼠类过敏反应发生，以其作为阴性对照，提高了待检测样品的对比标准，使得检验结果能够更加准确的反应待测样品的实际致敏情况，进而能够一定程度地提高刺五加注射液的质量保障，降低了其临床应用过程中的类过敏反应的发生风险。
(3)、本发明创造性地发现，当待测样品的β-氨基己糖苷酶释放率小于1.2倍的阴性对照组的β-氨基己糖苷酶释放率时，该待测样品在动物实验中也不会引起小鼠类过敏反应的发生，因此将大于1.2倍的阴性对照组的β-氨基己糖苷酶释放率作为判定刺五加注射液在临床上可出现类过敏反应的标准，使得检验结果的评价和判定更加方便直观。
(4)、对于一些实际上能够引起小鼠类过敏反应的，但常规检验方法获得的β-氨基己糖苷酶释放率小于阴性对照，因此被误判为不会引起类过敏反应的刺五加注射液，使用本发明提供的刺五加注射液的类过敏反应检验方法能够获得和实际小鼠实验相一致的较为准确的检验和判定结果。
(5)、本发明提供的刺五加注射液的类过敏反应检验方法更加稳定可靠，对同一样品的多次检验结果无明显差别，重复性高。
具体实施方式
以下实施例的说明只是用于帮助理解本发明的方法及其核心思想。应当指出，对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明原理的前提下，还可以对本发明进行若干改进和修饰，这些改进和修饰也落入本发明权利要求的保护范围内。对所公开的实施例的下述说明，使本领域专业技术人员能够实现或使用本发明。对这些实施例的多种修改对本领域的专业技术人员来说将是显而易见的，本文中所定义的一般原理可以在不脱离本发明的精神或范围的情况下，在其它实施例中实现。因此，本发明将不会被限制于本文所示的这些实施例中，而是可以应用于符合与本文所公开的原理和新颖特点相一致的更宽的范围。
除非另外定义，本文中使用的所有技术和科学术语具有与本发明所属技术领域的普通技术人员通常理解的相同意义。
术语：
C48/80：Compound48/80，是N-甲基-对甲氧基苯乙胺和甲醛缩合产生的聚合物。
实施例1-5所用的刺五加注射液样品由哈尔滨珍宝制药有限公司提供，批号分别为20120402、20120405、20120411、C20120507和C20120511。
MEM培养基、无酚红无血清MEM培养基、青霉素-链霉素、0.25％胰蛋白酶消化液购自Gibco公司；胎牛血清(FBS)、Compound 48/80(C48/80)、β-氨基己糖苷酶底物购自Sigma公司；曲拉通X-100购自上海碧云天生物技术有限公司；实验用C57BL/6小鼠和ICR小鼠由北京维通利华实验动物技术有限公司提供，动物生产许可证号SCXK(京)2012-0001。
细胞培养箱为3111型CO2培养箱，购自美国Thermo公司；冷冻离心机型号为5810R，购自德国Eppendorf公司；多功能酶标仪型号为infinite F200，购自TECAN公司；分析天平型号为METTLER TOLEDO AL104，购自梅特勒-托利多仪器(上海)有限公司；超纯水系统型号为Milli-Q，购自法国Milipore公司。
实施例1一种刺五加注射液的类过敏反应检验方法
步骤为：
(1)、样品预处理：将刺五加注射液于40℃水浴30min后，立即在6000rpm下离心60s，取上清液，将上清液以无酚红无血清MEM培养基稀释10倍，获得待检测液；
(2)、制备检测细胞：使用含有1％青霉素-链霉素双抗生素和10％热灭活的胎牛血清的MEM培养基于37℃、5％CO2细胞培养箱中培养RBL-2H3细胞，当RBL-2H3细胞生长铺满90％的培养瓶底面积时，进行传代，传代比例为1:5，隔天传代一次，传代3次，获得正常生长的RBL-2H3细胞，即为检测细胞；
(3)、β-氨基己糖苷酶释放率检测：按照2×105/孔的接种密度将步骤(2)获得的检测细胞接种于加有无酚红无血清MEM培养基的24孔微孔培养板中，将接种后的24孔微孔培养板于37℃、5％CO2细胞培养箱中培养12h后，使用PBS缓冲液洗涤细胞1次；分别向细胞中加入步骤(1)获得的待检测液200μL/孔作为待测组，体积浓度为0.1％的二甲基亚砜200μL/孔作为阴性对照组，以及200μL/孔体积浓度为1％的曲拉通X-100作为总酶组；于30℃作用40min后，将微孔培养板于4℃、2000rpm离心10min，将待测组、阴性对照组和总酶组中的上清液50μL转移入96孔微孔培养板中，再向96孔微孔培养板的剩余微孔中加入50μL步骤(1)获得的待检测液作为本底组，向各加样微孔中加入β-氨基己糖酶底物50μL/孔，于37℃孵育30min后；加入pH9的Na2CO3-NaHCO3缓冲液缓冲液100μL/孔后，于405nm处测定各孔吸光度，同一组的3个细胞孔的测定出的吸光度取平均值作为各个组的最终OD405。
其中PBS缓冲液的配方为：每1000mL超纯水中含有1.44g Na2HPO4、0.24g KH2PO4、0.2g KCl和8g NaCl；其中β-氨基己糖酶底物为50mM、pH4.5的柠檬酸缓冲液配制的2mM的β-氨基己糖酶底物溶液。
根据下式分别计算阴性对照组和待测组的β-氨基己糖苷酶释放率(％)：
待测组的β-氨基己糖苷酶释放率(％)＝(待测组的OD405-本底组的OD405)/(总酶组的OD405-阴性对照组的OD405)×100％；
阴性对照组的β-氨基己糖苷酶释放率(％)＝(阴性对照组的OD405-本底组的OD405)/(总酶组的OD405-阴性对照组的OD405)×100％。
对刺五加注射液样品进行5次平行检验，检验结果为：
5次平行检验的结果无明显差别，重复性高。待测组/阴性对照组小于1.2，可判定为该刺五加注射液不会引起明显类过敏反应；将检验用刺五加注射液进行小鼠实验，未引起明显类过敏反应，与本发明检验方法的判定结果一致。
实施例2一种刺五加注射液的类过敏反应检验方法
步骤为：
(1)、样品预处理：将刺五加注射液于45℃水浴25min后，立即在7000rpm下离心50s，取上清液，将上清液以无酚红无血清MEM培养基稀释11倍，获得待检测液。
(2)、制备检测细胞：使用含有1％青霉素-链霉素双抗生素和10％热灭活的胎牛血清的MEM培养基于37℃、5％CO2细胞培养箱中培养RBL-2H3细胞，当RBL-2H3细胞生长铺满90％的培养瓶底面积时，进行传代，传代比例为1:6，隔天传代一次，传代2次，获得正常生长的RBL-2H3细胞，即为检测细胞；
(3)、β-氨基己糖苷酶释放率检测：按照5×105/孔的接种密度将步骤(2)获得的检测细胞接种于加有无酚红无血清MEM培养基的24孔微孔培养板中，将接种后的24孔微孔培养板于37℃、5％CO2细胞培养箱中培养12h后，使用PBS缓冲液洗涤细胞1次；分别向细胞中加入400μL/孔步骤(1)获得的待检测液作为待测组，400μL/孔体积浓度为0.1％的二甲基亚砜作为阴性对照组，400μL/孔体积浓度为1％的曲拉通X-100作为总酶组；于30℃作用40min后，将微孔培养板于4℃、2000rpm离心10min，将待测组、阴性对照组和总酶组中的上清液50μL转移入96孔微孔培养板中，再向96孔微孔培养板的剩余微孔中加入50μL步骤(1)获得的待检测液作为本底组，向各加样微孔中加入β-氨基己糖酶底物50μL/孔，于37℃孵育30min后；加入pH9的Na2CO3-NaHCO3缓冲液缓冲液100μL/孔后，于405nm处测定各孔吸光度，同一组的3个细胞孔的测定出的吸光度取平均值作为各个组的最终OD405。
其中PBS缓冲液的配方为：每1000mL超纯水中含有1.44g Na2HPO4、0.24g KH2PO4、0.2g KCl和8g NaCl；其中β-氨基己糖酶底物为50mM、pH4.5的柠檬酸缓冲液配制的2.5mM的β-氨基己糖酶底物溶液。
根据下式分别计算阴性对照组和待测组的β-氨基己糖苷酶释放率(％)：
待测组的β-氨基己糖苷酶释放率(％)＝(待测组的OD405-本底组的OD405)/(总酶组的OD405-阴性对照组的OD405)×100％；
阴性对照组的β-氨基己糖苷酶释放率(％)＝(阴性对照组的OD405-本底组的OD405)/(总酶组的OD405-阴性对照组的OD405)×100％。
对刺五加注射液样品进行5次平行检验，检验结果为：
5次平行检验的结果无明显差别，重复性高。待测组/阴性对照组小于1.2，可判定为该刺五加注射液不会引起明显类过敏反应；将检验用刺五加注射液进行小鼠实验，未引起明显类过敏反应，与本发明检验方法的判定结果一致。
实施例3一种刺五加注射液的类过敏反应检验方法
步骤为：
(1)、样品预处理：将刺五加注射液于50℃水浴20min后，立即在8000rpm下离心40s，取上清液，将上清液以无酚红无血清MEM培养基稀释12倍，获得待检测液。
(2)、制备检测细胞：使用含有1％青霉素-链霉素双抗生素和10％热灭活的胎牛血清的MEM培养基于37℃、5％CO2细胞培养箱中培养RBL-2H3细胞，当RBL-2H3细胞生长铺满90％的培养瓶底面积时，进行传代，传代比例为1:7，隔天传代一次，传代2次，获得正常生长的RBL-2H3细胞，即为检测细胞；
(3)、β-氨基己糖苷酶释放率检测：按照3×105/孔的接种密度将步骤(2)获得的检测细胞接种于加有无酚红无血清MEM培养基的24孔微孔培养板中，将接种后的24孔微孔培养板于37℃、5％CO2细胞培养箱中培养12h后，使用PBS缓冲液洗涤细胞1次；分别向细胞中加入250μL/孔步骤(1)获得的待检测液作为待测组，250μL/孔体积浓度为0.1％的二甲基亚砜作为阴性对照组，250μL/孔体积浓度为1％的曲拉通X-100作为总酶组；于30℃作用40min后，将微孔培养板于4℃、2000rpm离心10min，将待测组、阴性对照组和总酶组中的上清液50μL转移入96孔微孔培养板中，再向96孔微孔培养板的剩余微孔中加入50μL步骤(1)获得的待检测液作为本底组，向各加样微孔中加入β-氨基己糖酶底物50μL/孔，于37℃孵育30min后；加入pH9.5的Na2CO3-NaHCO3缓冲液缓冲液100μL/孔后，于405nm处测定各孔吸光度，同一组的3个细胞孔的测定出的吸光度取平均值作为各个组的最终OD405。
其中PBS缓冲液的配方为：每1000mL超纯水中含有1.44g Na2HPO4、0.24g KH2PO4、0.2g KCl和8g NaCl；其中β-氨基己糖酶底物为50mM、pH4.5的柠檬酸缓冲液配制的3mM的β-氨基己糖酶底物溶液。
根据下式分别计算阴性对照组和待测组的β-氨基己糖苷酶释放率(％)：
待测组的β-氨基己糖苷酶释放率(％)＝(待测组的OD405-本底组的OD405)/(总酶组的OD405-阴性对照组的OD405)×100％；
阴性对照组的β-氨基己糖苷酶释放率(％)＝(阴性对照组的OD405-本底组的OD405)/(总酶组的OD405-阴性对照组的OD405)×100％。
对刺五加注射液样品进行5次平行检验，检验结果为：
5次平行检验的结果几乎完全一致，重复性非常高。待测组/阴性对照组小于1.2，可判定为该刺五加注射液不会引起明显类过敏反应；将检验用刺五加注射液进行小鼠实验，未引起明显类过敏反应，与本发明检验方法的判定结果一致。
实施例4一种刺五加注射液的类过敏反应检验方法
步骤为：
(1)、样品预处理：将刺五加注射液于55℃水浴15min后，立即在9000rpm下离心45s，取上清液，将上清液以无酚红无血清MEM培养基稀释13倍，获得待检测液。
(2)、制备检测细胞：使用含有1％青霉素-链霉素双抗生素和10％热灭活的胎牛血清的MEM培养基于37℃、5％CO2细胞培养箱中培养RBL-2H3细胞，当RBL-2H3细胞生长铺满90％的培养瓶底面积时，进行传代，传代比例为1:8，隔天传代一次，传代2次，获得正常生长的RBL-2H3细胞，即为检测细胞；
(3)、β-氨基己糖苷酶释放率检测：按照4×105/孔的接种密度将步骤(2)获得的检测细胞接种于加有无酚红无血清MEM培养基的24孔微孔培养板中，将接种后的24孔微孔培养板于37℃、5％CO2细胞培养箱中培养12h后，使用PBS缓冲液洗涤细胞1次；分别向细胞中加入300μL/孔步骤(1)获得的待检测液作为待测组，300μL/孔体积浓度为0.1％的二甲基亚砜作为阴性对照组，300μL/孔体积浓度为1％的曲拉通X-100作为总酶组；于30℃作用40min后，将微孔培养板于4℃、2000rpm离心10min，将待测组、阴性对照组和总酶组中的上清液50μL转移入96孔微孔培养板中，再向96孔微孔培养板的剩余微孔中加入50μL步骤(1)获得的待检测液作为本底组，向各加样微孔中加入β-氨基己糖酶底物50μL/孔，于37℃孵育30min后；加入pH10的Na2CO3-NaHCO3缓冲液缓冲液100μL/孔后，于405nm处测定各孔吸光度，同一组的3个细胞孔的测定出的吸光度取平均值作为各个组的最终OD405。
其中PBS缓冲液的配方为：每1000mL超纯水中含有1.44g Na2HPO4、0.24g KH2PO4、0.2g KCl和8g NaCl；其中β-氨基己糖酶底物为50mM、pH4.5的柠檬酸缓冲液配制的2mM的β-氨基己糖酶底物溶液。
根据下式分别计算阴性对照组和待测组的β-氨基己糖苷酶释放率(％)：
待测组的β-氨基己糖苷酶释放率(％)＝(待测组的OD405-本底组的OD405)/(总酶组的OD405-阴性对照组的OD405)×100％；
阴性对照组的β-氨基己糖苷酶释放率(％)＝(阴性对照组的OD405-本底组的OD405)/(总酶组的OD405-阴性对照组的OD405)×100％。
对刺五加注射液样品进行5次平行检验，检验结果为：
5次平行检验的结果无明显差别，重复性高。待测组/阴性对照组大于1.2，可判定为该刺五加注射液会引起明显类过敏反应；将检验用刺五加注射液进行小鼠实验，引起明显类过敏反应，与本发明检验方法的判定结果一致。
实施例5一种刺五加注射液的类过敏反应检验方法
步骤为：
(1)、样品预处理：将刺五加注射液于60℃水浴10min后，立即在10000rpm下离心30s，取上清液，将上清液以无酚红无血清MEM培养基稀释15倍，获得待检测液。
(2)、制备检测细胞：使用含有1％青霉素-链霉素双抗生素和10％热灭活的胎牛血清的MEM培养基于37℃、5％CO2细胞培养箱中培养RBL-2H3细胞，当RBL-2H3细胞生长铺满90％的培养瓶底面积时，进行传代，传代比例为1:7，隔天传代一次，传代3次，获得正常生长的RBL-2H3细胞，即为检测细胞；
(3)、β-氨基己糖苷酶释放率检测：按照5×105/孔的接种密度将步骤(2)获得的检测细胞接种于加有无酚红无血清MEM培养基的24孔微孔培养板中，将接种后的24孔微孔培养板于37℃、5％CO2细胞培养箱中培养12h后，使用PBS缓冲液洗涤细胞1次；分别向细胞中加入350μL/孔步骤(1)获得的待检测液作为待测组，350μL/孔体积浓度为0.1％的二甲基亚砜作为阴性对照组，350μL/孔体积浓度为1％的曲拉通X-100作为总酶组；于30℃作用40min后，将微孔培养板于4℃、2000rpm离心10min，将待测组、阴性对照组和总酶组中的上清液50μL转移入96孔微孔培养板中，再向96孔微孔培养板的剩余微孔中加入50μL步骤(1)获得的待检测液作为本底组，向各加样微孔中加入β-氨基己糖酶底物50μL/孔，于37℃孵育30min后；加入pH9的Tris-HCl缓冲液缓冲液100μL/孔后，于405nm处测定各孔吸光度，同一组的3个细胞孔的测定出的吸光度取平均值作为各个组的最终OD405。
其中PBS缓冲液的配方为：每1000mL超纯水中含有1.44g Na2HPO4、0.24g KH2PO4、0.2g KCl和8g NaCl；其中β-氨基己糖酶底物为50mM、pH4.5的柠檬酸缓冲液配制的3mM的β-氨基己糖酶底物溶液。
根据下式分别计算阴性对照组和待测组的β-氨基己糖苷酶释放率(％)：
待测组的β-氨基己糖苷酶释放率(％)＝(待测组的OD405-本底组的OD405)/(总酶组的OD405-阴性对照组的OD405)×100％；
阴性对照组的β-氨基己糖苷酶释放率(％)＝(阴性对照组的OD405-本底组的OD405)/(总酶组的OD405-阴性对照组的OD405)×100％。
对刺五加注射液样品进行5次平行检验，检验结果为：
5次平行检验有1次的待测组/阴性对照组小于1.2，但其余4次均大于1.2，因此判定为该刺五加注射液会引起明显类过敏反应；将检验用刺五加注射液进行小鼠实验，引起明显类过敏反应，与本发明检验方法的判定结果一致。
对比例1一种刺五加注射液的类过敏反应检验方法
检验的刺五加注射液样品同实施例4。
步骤为：
(1)、制备检测细胞：同实施例4；
(2)、β-氨基己糖苷酶释放率检测：直接将未处理的刺五加注射液作为待检测液，其余同实施例4。
对刺五加注射液样品进行5次平行检验，检验结果为：
5次平行检验的结果波动较大，稳定性差，且其中有4次检验的结果小于阴性对照组，仅1次检验的大于阴性对照组，按照常规判定，应属于不会引起明显类过敏反应的样品。但小鼠实验表明该刺五加注射液会引起明显类过敏反应，因此该对比例获得的检验和判定结果不准确，与动物实验不一致。
对比例2一种刺五加注射液的类过敏反应检验方法
检验的刺五加注射液样品同实施例1。
步骤为：
(1)、样品预处理：同实施例1；
(2)、制备检测细胞：除传代比例为1:3外，其余同实施例1；
(3)、β-氨基己糖苷酶释放率检测：同实施例1。
对刺五加注射液样品进行5次平行检验，检验结果为：
5次平行检验的结果波动明显，重复性相对较低；并且其中一次的检验的结果大于阴性对照组。
对比例3一种刺五加注射液的类过敏反应检验方法
检验的刺五加注射液样品同实施例1。
步骤为：
(1)、样品预处理：除40℃水浴的时间为5min外，其余同实施例1；
(2)、制备检测细胞：同实施例1；
(3)、β-氨基己糖苷酶释放率检测：同实施例1。
对刺五加注射液样品进行5次平行检验，检验结果为：
5次平行检验的结果波动明显，稳定性差，其中有2次的待测组/阴性对照组小于1.2；有3次获得的待测组/阴性对照组大于1.2，无法判定该刺五加注射液的致敏性。
对比例4一种刺五加注射液的类过敏反应检验方法
检验的刺五加注射液样品同实施例1。
步骤为：
(1)、样品预处理：同实施例1；
(2)、制备检测细胞：同实施例1；
(3)、β-氨基己糖苷酶释放率检测：除使用的Tris-HCl缓冲液的pH值为7.4之外，其余同实施例1。
对刺五加注射液样品进行5次平行检验，检验结果为：
5次平行检验的结果获得的待测组/阴性对照组均大于1.2，根据检验结果判定为该刺五加注射液会引起类过敏反应，但小鼠实验表明该刺五加注射液不会引起明显类过敏反应，因此该对比例获得的检验和判定结果不准确，与动物实验不一致。
实验例1小鼠类过敏反应实验
实验方法：对C57BL/6小鼠腹腔注射1.5％戊巴比妥钠，注射体积为0.1mL/20g，麻醉后，剃去背部毛发；小鼠尾静脉注射0.5％依文思蓝，注射体积为50μL/20g；15min后，给小鼠注射刺五加注射液，注射方式为在小鼠背部左右侧皮肤皮下注射50μL；60min后颈椎脱臼处死小鼠，剪下背部皮肤，对其蓝染情况进行拍照；并将皮肤剪碎后加入1.5mL组织浸出液(丙酮：生理盐水＝7:3)，避光浸泡48h后，离心取上清液，酶标仪595nm处测量其吸光度值。与阴性对照组相比，若出现明显蓝染加重和/或吸光度增加，即为发生类过敏反应；若无明显蓝染加重和吸光度增加，则为未发生类过敏反应。
以上所述仅为本发明的部分对比例和部分较佳实施例而已，并不用以限制本发明，凡在本发明的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。