一种具有抗肿瘤活性的吴茱萸碱铜盐化合物及其合成方法与流程

本发明涉及医药技术领域，具体涉及一种具有抗肿瘤活性的吴茱萸碱铜盐化合物及其合成方法。

背景技术：

本发明配体选择来源于中药吴茱萸生物碱有效成分吴茱萸碱(Evodiamine)，吴茱萸碱属于吲哚喹唑啉生物碱的经典母核结构，这样的功能结构与金属离子容易螯合生成配合物或以生物碱盐形式存在，络合金属离子后有望发挥中药有效成分与金属离子的双效协同作用。

自从顺铂抗肿瘤金属药物在临床上的成功使用，与其相关的铂等过渡金属配合物抗癌试剂的研究也越来越引起广泛关注。铜，作为生物学必需的微量元素，对衰老和癌症及其相关联的内源性氧化剂所致DNA损伤起着关键作用，铜的毒性比非必须微量元素如铂的毒性要小，因此铜金属配合物或铜离子盐化合物有望具有类似于顺铂药物的抗肿瘤活性而具有低毒性的特点。

目前，已有一些吴茱萸碱衍生物被开发出来用作抗肿瘤药物的研究。但以往研究都停留在有机小分子阶段，而吴茱萸碱的金属盐或配合物尚未有人研究。因此，仍然需要更好的供选方案。

技术实现要素：

本发明提供一种具有抗肿瘤活性的吴茱萸碱铜盐化合物。

本发明提供的一种具有抗肿瘤活性的吴茱萸碱铜盐化合物，其结构式如下所示，

一种具有抗肿瘤活性的吴茱萸碱铜盐化合物的合成方法为：将吴茱萸碱与CuCl₂·2H₂O按物质的量1:0.5～1.5的配比加入溶剂，并放入密闭反应容器中，加热反应至完全，将反应容器取出静置冷却至室温，并从容器中取出晶体，进行洗涤、干燥即得到吴茱萸铜盐化合物。

需要说明的是所述溶剂为丙酮，所述的丙酮的添加量为每克吴茱萸碱和CuCl₂·2H₂O的混合物加入10～100mL。

需要说明的是，所述的反应容器为长度为15～20cm的Pyrex厚壁玻璃管；大量合成时，则改用聚四氟乙烯反应釜。

需要说明的是，所述的加热容器为烘箱，反应温度控制在90～110℃，反应时间为4～8天。

需要说明的是，所述的洗涤采用的是石油醚、氯仿先后进行洗涤。

本发明的有益效果：

本发明以吴茱萸碱为结构基础，在溶剂热条件下，通过与CuCl₂·2H₂O发生络合反应得到吴茱萸碱铜盐化合物，合成方法简单、反应条件易于控制，且反应原料价廉易得。

吴茱萸碱铜盐化合物对卵巢癌细胞株Skov3具有明显的抑制作用，IC50值为8.02μM，显示出良好的潜在药用价值，有望作为金属抗肿瘤药物。

附图说明

图1为本发明产物的红外光谱谱图

图2为本发明产物的X射线单晶衍射结构图

具体实施方案

下面结合具体病例对本发明做进一步详细说明，但不构成对本发明的任何限制，任何在权利范围的内所作出的没有实质的改变，仍在本发明权利要求的保护范围之内。

实施例1

称量吴茱萸碱(0.010g，0.03mmol)，CuCl₂·2H₂O(0.008g，0.04mmol)加入到一端封闭的15cm Pyrex厚壁玻璃管中，滴加1.8mL丙酮，在高温条件下将开口端熔封，混合物混合均匀后放到100℃的烘箱中，反应4天后玻璃管内有黄色棒状晶体生成。将玻璃管取出静置室温冷却，把晶体从玻璃管中取出，用石油醚、氯仿洗涤，干燥得到吴茱萸碱铜盐化合物，产率为85.4％。

产品检测：对上述得到的棕色固体产物分别进行红外光谱、X-射线单晶衍射分析，如图1～2所示。

具体的波谱特征如下：

IR光谱:3444,1704,1549,1499,1335,1103,813,759cm^-1。

1704为C＝O的特征吸收峰，1549cm^-1为C＝N的特征吸收峰，,1335cm^-1为C-N的特征吸收峰。

X-射线单晶衍射结构：X-射线单晶衍射是最有效、最精确的结构表征手段，X射线准确测定了吴茱萸碱铜盐化合物结晶样品中各原子的连接方式和空间位置。结构表明，中心离子铜离子与氯离子结合形成[Cu₄Cl₆]²⁺离子簇，两个吴茱萸碱的N-H的氮原子与氢离子结合发生质子化，形成离子型的吴茱萸碱铜盐。

确定上述黄色晶体产物为吴茱萸碱铜盐化合物，其分子式为C₃₈H₃₂Cl₆Cu₄N₆O₂，分子量为1065.7g/mol，其化学结构式如下：

本发明产品在抗肿瘤药物中的应用试验：

采用吴茱萸碱铜盐对卵巢癌Skov3肿瘤细胞株的体外抗肿瘤活性实验。

1、细胞株与细胞培养

本实验选用卵巢癌Skov3肿瘤细胞株。

细胞株培养在含10wt％小牛血、100U/mL青霉素、100U/mL链霉素的RPMI～1640或DMEM培养液内，置37℃含体积浓度5％CO2孵箱中培养。倒置显微镜观察细胞生长情况，0.25％胰蛋白酶消化传代，取对数生长期细胞用于实验。

2、待测化合物的配制

所用的吴茱萸碱铜盐化合物为本发明实施例1制得的产物，其纯度≥95％，通过RMPI1640培养基依次稀释成五个浓度梯度，分别为40、20、10、5、2.5μmol/L，测试20μmol/L浓度下吴茱萸碱铜盐化合物对不同肿瘤细胞增殖的抑制率。

3、细胞生长抑制实验(MTT法)

(1)取对数生长期的肿瘤细胞，经胰蛋白酶消化后，用含10％小牛血清的培养液配制成浓度为5000个/mL的细胞悬液，以每孔190μL接种于96孔培养板中，使待测细胞密度至1000～10000个/孔(边缘孔用无菌PBS填充)；

(2)5％CO2，37℃孵育24h，至细胞单层铺满孔底，每孔加入一定浓度梯度的药物10μL，每个浓度梯度设4个复孔；

(3)5％CO2，37℃孵育48小时，倒置显微镜下观察；

(4)每孔加入10μL的MTT溶液(5mg/mL PBS，即0.5％MTT)，继续培养4h；

(5)终止培养，小心吸去孔内培养液，每孔加入150μL DMSO充分溶解甲瓒沉淀，振荡器混匀后，在酶标仪用波长为570nm，参比波长为450nm测定各孔的光密度值；

(6)同时设置调零孔(培养基、MTT、DMSO)，对照孔(细胞、相同浓度的药物溶解介质、培养液、MTT、DMSO)。

(7)根据测得的光密度值(OD值)，来判断活细胞数量，OD值越大，细胞活性越强。利用公式：

计算化合物对肿瘤细胞生长的抑制率。

结果表明，吴茱萸碱铜盐化合物对卵巢癌Skov3肿瘤细胞株，具有明显的抑制作用，IC50值为8.02μM，表现了良好的潜在药用价值。另一方面，金属铜元素是人体必需的微量元素，吴茱萸碱来源于天然生物碱，原料天然、易于合成，具有深入研究开发的价值。

实施例2

称量吴茱萸碱(1g，3mmol)，CuCl₂·2H₂O(0.8g，4mmol)，将吴茱萸碱、铜盐放入25mL的聚四氟乙烯反应釜中，滴加丙酮20mL，在高温条件下将开口端熔封，混合物混合均匀后放到90℃的烘箱中，反应4天后玻璃管内有棕色块状晶体生成。将玻璃管取出静置室温冷却，把晶体从玻璃管中取出，用石油醚、氯仿洗涤，干燥得到吴茱萸碱铜盐，产率为81.2％。

产品检测方法同实施例1。

实施例3

称量吴茱萸碱(10g，30mmol)，CuCl₂·2H₂O(8g，40mmol)，将吴茱萸碱、铜盐放入200mL的聚四氟乙烯反应釜中，滴加丙180mL，在高温条件下将开口端熔封，混合物混合均匀后放到100℃的烘箱中，反应5天后玻璃管内有棕色块状晶体生成。将玻璃管取出静置室温冷却，把晶体从玻璃管中取出，用石油醚、氯仿洗涤，干燥得到吴茱萸碱铜盐，产率为82.6％。

产品检测方法同实施例1。

实施例4

称量吴茱萸碱(20g，60mmol)，CuCl₂·2H₂O(8g，40mmol)，将吴茱萸碱、铜盐放入2000mL的聚四氟乙烯反应釜中，滴加丙酮1800mL，在高温条件下将开口端熔封，混合物混合均匀后放到100℃的烘箱中，反应4天后玻璃管内有棕色块状晶体生成。将玻璃管取出静置室温冷却，把晶体从玻璃管中取出，用石油醚、氯仿洗涤，干燥得到吴茱萸碱铜盐，产率为80.8％。

产品检测方法同实施例1。

实施例5

称量吴茱萸碱(1g，3mmol)，CuCl₂·2H₂O(0.4g，2mmol)，将吴茱萸碱、铜盐放入50mL的聚四氟乙烯反应釜中，滴加丙酮40mL，混合物混合均匀后放到110℃的烘箱中，反应8天后玻璃管内有棕色块状晶体生成。将玻璃管取出静置室温冷却，把晶体从玻璃管中取出，用石油醚、氯仿洗涤，干燥得到吴茱萸碱铜盐，产率为76.3％。

产品检测方法同实施例1。

以上所述的仅为本发明的较佳实施例，凡在本发明的精神和原则范围内所作的任何修改、等同替换和改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。