通用型CAR-T细胞及其制备方法和用途与流程

文档序号:16765322发布日期:2019-01-29 17:57阅读:来源:国知局

技术特征:

1.一种制备通用型CAR-T细胞的方法,所述方法包括如下步骤:

1)在T细胞中引入sgRNA分子和Cas9分子;

2)在所述T细胞中引入CAR分子;

其中,步骤2)可在步骤1)之前、之后或同时进行,并且所述sgRNA分子包含与来自TCR的a链和/或β链恒定编码区(即TRAC和/或TRBC)基因的靶区域互补的靶向结构域;

并且其中所述靶向结构域的序列如SEQ ID NO:3或SEQ ID NO:8所示,

其中通过电转技术将所述sgRNA分子和编码Cas9分子的mRNA引入所述T细胞中。

2.权利要求1的方法,所述方法在步骤1)之前还包括分离和/或激活健康志愿者或供者的T细胞的步骤。

3.权利要求2的方法,其中所述方法在步骤2)之后还包括对通用型CAR-T细胞进行分选的步骤。

4.权利要求3的方法,其中分选之后再对所得的通用型CAR-T细胞进行有效性验证。

5.权利要求1或2的方法,其中所述CAR分子通过慢病毒转染技术引入所述T细胞中。

6.使用权利要求1至5任一项所述的方法制备的通用型CAR-T细胞,其中,所述通用型CAR-T细胞表达特异性嵌合抗原受体(CAR)并且不表达T细胞受体(TCR),其中所述CAR包含顺序连接的信号肽、胞外结合区、任选的铰链区、跨膜区和胞内信号区;所述信号肽的核苷酸序列如发明专利申请201510324558.X的序列表中SEQ ID No:1或SEQ ID No:2所示;所述胞外结合区的核苷酸序列如发明专利申请201510324558.X的序列表中SEQ ID No:4或SEQ ID No:5所示;所述铰链区的核苷酸序列如发明专利申请201510324558.X的序列表中SEQ ID No:6或SEQ ID No:7所示;所述跨膜区的核苷酸序列如发明专利申请201510324558.X的序列表中SEQ ID No:8或SEQ ID No:9所示;所述胞内信号区的核苷酸序列如发明专利申请201510324558.X的序列表中SEQ ID No:10、SEQ ID No:11或SEQ ID No:12所示。

当前第2页1 2 3 
网友询问留言 已有0条留言
  • 还没有人留言评论。精彩留言会获得点赞!
1