本发明属于生物提取技术领域，具体涉及一种从狼牙刺花中提取氧化槐果碱的方法。
背景技术：
狼牙刺又名白刺花, 为豆科槐属多年生灌木, 多生于海拔400～1500m的阳坡或河谷地带, 广泛分布于我国华北、江苏、浙江、湖北、河南、陕西、甘肃及西南等省。狼牙刺的根、茎、叶、花、果实和种子中都含有生物碱，包括氧化苦参碱、槐果碱、槐定碱等多种生物碱。狼牙刺作为一种民间药材被广泛使用,氧化槐果碱是中草药的主要有效成分，具有抗炎、保肝、抗肿瘤、抗心率失常、免疫调节、升高白细胞及杀菌、杀虫、利尿、平喘、抗心律失常等作用，是研制多种人体用药、洗涤用品及杀虫类生物农药的重要原料。
目前，直接从植物中提取氧化槐果碱的提取率低，一般是采用先从植物中提取得到槐果碱，再利用工业制备方法将槐果碱制备成氧化槐果碱，此种方法过程复杂、成本高。中国专利（CN102786523 A）公开了一种从苦豆子中制备槐果碱的方法，利用苦豆子中各种生物碱极性不同的原理，将苦参碱、槐果碱与其他碱分离，再分离出槐果碱。但是，这种方法只能提取得到槐果碱。氧化槐果碱主要通过工业制备方法获取，导致制备工艺繁琐，例如，中国专利（CN1354181 A）是将槐果碱加入双氧水中，然后将反应液萃取或者减压浓缩得到氧化槐果碱。
中国专利（CN 1473830A）公开了一种从白刺花中提取苦参碱的方法，是将白刺花的地上部分用盐酸浸泡，然后经过甲苯回流，煮沸，加还原剂，萃取，加酸制得苦参总碱后，将苦参总碱离心分离，经过氢化、重结晶后制备得到苦参碱和槐定碱。但是，该工艺中制备得到的苦参总碱中，槐果碱和氧化槐果碱的提取率极低，而且该工艺中使用甲苯对人体有害，难以推广应用。
目前仅仅对狼牙刺种子进行生物碱提取和系列产品开发利用，而狼牙刺结实率极低，仅有不到10%的花能够成熟为种子，90%以上的花在生长过程中造成落花浪费；另外，狼牙刺种子的收集难度大且收集率低，而花朵收集率高且易收集。因此，对狼牙刺花进行开发利用，提取其中的氧化槐果碱具有积极意义。
技术实现要素：
针对现有技术的缺陷，本发明提供一种从狼牙刺花中提取氧化槐果碱的方法，具有提取率高、纯度高的优点。
本发明是通过以下技术方案实现的。
一种从狼牙刺花中提取氧化槐果碱的方法，包括以下步骤：
（1）预处理：称取香菇，按照料液比1g：30 mL加入水，40-50℃加热40-60min，冷却后，过滤，香菇回收利用，得到的香菇滤液备用；将狼牙刺花和得到的香菇滤液按照料液比1:8混合，在3-6℃下浸泡2h，每隔20min翻动搅拌一次，过滤，得到预处理过的狼牙刺花；
（2）提取：将步骤（1）预处理过的狼牙刺花，按照料液比1g：8 mL加入至少含有一种有机溶剂的溶液，浸泡72h，过滤后收集滤液和滤渣，滤渣按照料液比1g：8 mL用至少含有一种有机溶剂的溶液继续浸泡48 h，过滤后收集滤液和滤渣，合并2次得到的滤液，将滤液经旋转蒸发仪减压浓缩得到氧化槐果碱粗提物浸膏；将滤渣按照料液比1g：10 mL加入质量浓度为1%-5%的乙酸溶液，浸泡72h，过滤后收集滤液和滤渣，滤渣按照料液比1g：10 mL用质量浓度为1%-5%的乙酸溶液继续浸泡48 h，过滤后收集滤液，滤液经过真空浓缩得到氧化槐果碱粗提物浸膏；合并2次得到的氧化槐果碱粗提物浸膏，备用；
（3）水沉除杂：将步骤（2）最终得到的氧化槐果碱粗提物浸膏中加入3-5倍质量的水，用氨水调节pH至11，室温下静置48 h后过滤，收集滤液；
（4）将步骤（3）得到的滤液经过真空浓缩得到浓缩膏、浓缩膏真空干燥后、采用甲醇和二氯甲烷为洗脱液进行硅胶柱分离、加入乙醚进行结晶分离、加入丙酮重结晶后进行干燥，即得到氧化槐果碱纯品。
优选地，步骤（1）中所述至少含有一种有机溶剂的溶液为甲醇、乙醇、氯仿或二氯甲烷中的任意一种。
优选地，步骤（1）中所述至少含有一种有机溶剂的溶液为体积比为（85-95）：（5-15）的甲醇和氯仿的混合物、体积比为9:1的甲醇和乙酸的混合物、或者体积比为（30-50）：（50-70）的浓氨水和氯仿的混合物中的任意一种。
优选地，上述浓氨水的质量浓度为27%。
优选地，步骤（2）和步骤（4）中所述的真空浓缩为：将滤液在60-65℃、真空度-0.075至-0.081MPa下真空浓缩20-25min，得到浓缩膏。
优选地，上述真空干燥为：将真空浓缩得到的浓缩膏在55℃-60℃、压力-0.081至-0.085MPa条件下真空干燥6-8h，得到粉末状氧化槐果碱粗品。
优选地，上述采用甲醇和二氯甲烷为洗脱液进行硅胶柱分离的具体操作为：按照质量比为1：（2-3），将氧化槐果碱粗品与200目的硅胶拌样上柱，采用甲醇和二氯甲烷为洗脱液，先按照甲醇：二氯甲烷的质量比为2：3进行洗脱，去除脂溶性色素、脂类等杂质，同时用薄层层析法检识洗脱液中的氧化槐果碱，当检测到洗脱液中氧化槐果碱呈阳性时，再按照甲醇：二氯甲烷的质量比为2：6进行洗脱，直至检测到洗脱液中氧化槐果碱呈阴性时，收集洗脱液；将收集的洗脱液减压分段蒸馏回收二氯甲烷和甲醇，当洗脱液蒸馏至干时，按照氧化槐果碱粗品与二氯甲烷的料液比为1g:1mL加入二氯甲烷，得到二氯甲烷-氧化槐果碱溶液。
优选地，上述加入乙醚进行结晶分离的具体操作为：按照体积比1:1，向二氯甲烷-氧化槐果碱溶液中加入乙醚，过滤，得到滤液，按照滤液与乙醚的体积比为1:（3-5），向滤液中加入乙醚，静置结晶12h，过滤，得到氧化槐果碱结晶产品，滤液经减压分段蒸馏回收二氯甲烷和乙醚。
优选地，上述加入丙酮重结晶后进行干燥的具体操作为：按照料液比1g:（3-5）mL，向氧化槐果碱结晶产品中加入丙酮，重结晶得到氧化槐果碱单体，然后在100-105℃下干燥3-4h，得到氧化槐果碱成品。采用液相色谱进行氧化槐果碱成品含量测试。
本发明的优点：
本发明采用狼牙刺花为原料提取氧化槐果碱，可以将落花浪费的狼牙刺花进行回收利用，原料来源广而且收取成本低，操作过程简单，直接提取即可得到氧化槐果碱，提取率高，产品纯度高，能达到99%以上。
具体实施方式
实施例1
原料狼牙刺花中氧化槐果碱的含量检测
（1）标品溶液的配制：精密称取氧化槐果碱标品10.0 mg,用超纯水溶解后定容至10 mL容量瓶中, 制成含氧化槐果碱1.00 mg/mL 的标品母液；
（2）样品溶液的制备：准确称取狼牙刺花样品0.5 g , 置于100 mL三角瓶中, 加入10mL分析纯浓氨水使之湿润, 再加入30mL分析纯氯仿, 振摇提取30 min，静置4h后，过滤，滤渣连续提取3 次, 合并提取液, 然后80℃回收氯仿，得到干燥物，干燥物用超纯水定容至25 mL , 经0.5μm 微孔滤膜过滤后，收集滤液为样品溶液，备用；
（3）色谱条件：选用ZORBAXC18色谱柱(150 mm×4.6 mm，5μm)；检测波长220 nm；流动相为0.04 mol/ L 的磷酸-甲醇溶液(体积比90：10，分析纯)；流速1.0 mL/min ；柱温20 ℃条件下，精密吸取标品溶液和样品溶液10μL分别进样测定。
（4）检测指标：经以上方法检测，样品原料狼牙刺花中氧化槐果碱的含量为2.4%。
实施例2
一种从狼牙刺花中提取氧化槐果碱的方法，包括以下步骤：
（1）预处理：称取香菇，按照料液比1g：30 mL加入水， 50℃加热40min，冷却后，过滤，香菇回收利用，得到的香菇滤液备用；将50g狼牙刺花和上述得到的香菇滤液按照料液比1:8混合，在3℃下浸泡2h，每隔20min翻动搅拌一次，过滤，得到预处理过的狼牙刺花；
（2）提取：将步骤（1）预处理过的狼牙刺花，按照料液比1g：8 mL加入400mL甲醇溶液，浸泡72h，过滤后收集滤液和滤渣，滤渣按照料液比1g：8 mL用400mL甲醇溶液继续浸泡48 h，过滤后收集滤液和滤渣，合并2次得到的滤液，将滤液经旋转蒸发仪减压浓缩得到氧化槐果碱粗提物浸膏；将滤渣按照料液比1g：10 mL加入500mL质量浓度为1%的乙酸溶液，浸泡72h，过滤后收集滤液和滤渣，滤渣按照料液比1g：10 mL用500mL质量浓度为1%的乙酸溶液继续浸泡48 h，过滤后收集滤液，滤液在60℃、真空度-0.081 MPa下真空浓缩20min得到氧化槐果碱粗提物浸膏；合并2次得到的氧化槐果碱粗提物浸膏，备用；
（3）水沉除杂：将步骤（2）最终得到的氧化槐果碱粗提物浸膏中加入3倍质量的水，用氨水调节pH至11，室温下静置48 h后过滤，收集滤液；
（4）真空浓缩：将步骤（3）得到的滤液在60℃、真空度-0.081 MPa下真空浓缩20min，得到浓缩膏，密度为1.45g/mL；
（5）真空干燥：将步骤（4）的浓缩膏在55℃、压力-0.085MPa条件下真空干燥6h，得到粉末状氧化槐果碱粗品；
（6）采用甲醇和二氯甲烷为洗脱液进行硅胶柱分离：按照质量比为1：2，将氧化槐果碱粗品与200目的硅胶拌样上柱，采用甲醇和二氯甲烷为洗脱液，先按照甲醇：二氯甲烷的质量比为2：3进行洗脱，去除脂溶性色素、脂类等杂质，同时用薄层层析法检识洗脱液中的氧化槐果碱，当检测到洗脱液中氧化槐果碱呈阳性时，再按照甲醇：二氯甲烷的质量比为2：6进行洗脱，直至检测到洗脱液中氧化槐果碱呈阴性时，收集洗脱液；将收集的洗脱液减压分段蒸馏回收二氯甲烷和甲醇，当洗脱液蒸馏至干时，按照氧化槐果碱粗品与二氯甲烷的料液比为1g:1mL加入二氯甲烷，得到二氯甲烷-氧化槐果碱溶液；
（7）加入乙醚进行结晶分离：按照体积比1:1，向二氯甲烷-氧化槐果碱溶液中加入乙醚，过滤，得到滤液，按照滤液与乙醚的体积比为1:3，向滤液中加入乙醚，静置结晶12h，过滤，得到氧化槐果碱结晶产品，滤液经减压分段蒸馏回收二氯甲烷和乙醚；
（8）加入丙酮重结晶后进行干燥：按照料液比1g:3mL，向氧化槐果碱结晶产品中加入丙酮，重结晶得到氧化槐果碱单体，然后在105℃下干燥3h，得到氧化槐果碱成品。
所用试剂全部为化学纯。
实施例3
一种从狼牙刺花中提取氧化槐果碱的方法，包括以下步骤：
（1）预处理：称取香菇，按照料液比1g：30 mL加入水，40℃加热60min，冷却后，过滤，香菇回收利用，得到的香菇滤液备用；将50g狼牙刺花和上述得到的香菇滤液按照料液比1:8混合，在6℃下浸泡2h，每隔20min翻动搅拌一次，过滤，得到预处理过的狼牙刺花；
（2）提取：将步骤（1）预处理过的狼牙刺花，按照料液比1g：8 mL加入400mL甲醇溶液，浸泡72h，过滤后收集滤液和滤渣，滤渣按照料液比1g：8 mL用400mL甲醇溶液继续浸泡48 h，过滤后收集滤液和滤渣，合并2次得到的滤液，将滤液经旋转蒸发仪减压浓缩得到氧化槐果碱粗提物浸膏；将滤渣按照料液比1g：10 mL加入500mL质量浓度为5%的乙酸溶液，浸泡72h，过滤后收集滤液和滤渣，滤渣按照料液比1g：10 mL用500mL质量浓度为5%的乙酸溶液继续浸泡48 h，过滤后收集滤液，滤液在65℃、真空度-0.075MPa下真空浓缩25min得到氧化槐果碱粗提物浸膏；合并2次得到的氧化槐果碱粗提物浸膏，备用；
（3）水沉除杂：将步骤（2）最终得到的氧化槐果碱粗提物浸膏中加入5倍质量的水，用氨水调节pH至11，室温下静置48 h后过滤，收集滤液；
（4）真空浓缩：将步骤（3）得到的滤液在65℃、真空度-0.075MPa下真空浓缩25min，得到浓缩膏，密度为1.38g/mL；
（5）真空干燥：将步骤（4）的浓缩膏在60℃、压力-0.081MPa条件下真空干燥8h，得到粉末状氧化槐果碱粗品；
（6）采用甲醇和二氯甲烷为洗脱液进行硅胶柱分离：按照质量比为1：3，将氧化槐果碱粗品与200目的硅胶拌样上柱，采用甲醇和二氯甲烷为洗脱液，先按照甲醇：二氯甲烷的质量比为2：3进行洗脱，去除脂溶性色素、脂类等杂质，同时用薄层层析法检识洗脱液中的氧化槐果碱，当检测到洗脱液中氧化槐果碱呈阳性时，再按照甲醇：二氯甲烷的质量比为2：6进行洗脱，直至检测到洗脱液中氧化槐果碱呈阴性时，收集洗脱液；将收集的洗脱液减压分段蒸馏回收二氯甲烷和甲醇，当洗脱液蒸馏至干时，按照氧化槐果碱粗品与二氯甲烷的料液比为1g:1mL加入二氯甲烷，得到二氯甲烷-氧化槐果碱溶液；
（7）加入乙醚进行结晶分离：按照体积比1:1，向二氯甲烷-氧化槐果碱溶液中加入乙醚，过滤，得到滤液，按照滤液与乙醚的体积比为1:5，向滤液中加入乙醚，静置结晶12h，过滤，得到氧化槐果碱结晶产品，滤液经减压分段蒸馏回收二氯甲烷和乙醚；
（8）加入丙酮重结晶后进行干燥：按照料液比1g:5mL，向氧化槐果碱结晶产品中加入丙酮，重结晶得到氧化槐果碱单体，然后在100℃下干燥4h，得到氧化槐果碱成品。
所用试剂全部为化学纯。
实施例4
一种从狼牙刺花中提取氧化槐果碱的方法，包括以下步骤：
（1）预处理：称取香菇，按照料液比1g：30 mL加入水，45℃加热50min，冷却后，过滤，香菇回收利用，得到的香菇滤液备用；将50g狼牙刺花和上述得到的香菇滤液按照料液比1:8混合，在4℃下浸泡2h，每隔20min翻动搅拌一次，过滤，得到预处理过的狼牙刺花；
（2）提取：将步骤（1）预处理过的狼牙刺花，按照料液比1g：8 mL加入400mL甲醇溶液，浸泡72h，过滤后收集滤液和滤渣，滤渣按照料液比1g：8 mL用400mL甲醇溶液继续浸泡48 h，过滤后收集滤液和滤渣，合并2次得到的滤液，将滤液经旋转蒸发仪减压浓缩得到氧化槐果碱粗提物浸膏；将滤渣按照料液比1g：10 mL加入500mL质量浓度为3%的乙酸溶液，浸泡72h，过滤后收集滤液和滤渣，滤渣按照料液比1g：10 mL用500mL质量浓度为3%的乙酸溶液继续浸泡48 h，过滤后收集滤液，滤液在63℃、真空度-0.077MPa下真空浓缩23min，得到氧化槐果碱粗提物浸膏；合并2次得到的氧化槐果碱粗提物浸膏，备用；
（3）水沉除杂：将步骤（2）最终得到的氧化槐果碱粗提物浸膏中加入4倍质量的水，用氨水调节pH至11，室温下静置48 h后过滤，收集滤液；
（4）真空浓缩：将步骤（3）得到的滤液在63℃、真空度-0.077MPa下真空浓缩23min，得到浓缩膏，密度为1.40g/mL；
（5）真空干燥：将步骤（4）的浓缩膏在58℃、压力-0.083Mpa条件下真空干燥7h，得到粉末状氧化槐果碱粗品；
（6）采用甲醇和二氯甲烷为洗脱液进行硅胶柱分离：按照质量比为1：3，将氧化槐果碱粗品与200目的硅胶拌样上柱，采用甲醇和二氯甲烷为洗脱液，先按照甲醇：二氯甲烷的质量比为2：3进行洗脱，去除脂溶性色素、脂类等杂质，同时用薄层层析法检识洗脱液中的氧化槐果碱，当检测到洗脱液中氧化槐果碱呈阳性时，再按照甲醇：二氯甲烷的质量比为2：6进行洗脱，直至检测到洗脱液中氧化槐果碱呈阴性时，收集洗脱液；将收集的洗脱液减压分段蒸馏回收二氯甲烷和甲醇，当洗脱液蒸馏至干时，按照氧化槐果碱粗品与二氯甲烷的料液比为1g:1mL加入二氯甲烷，得到二氯甲烷-氧化槐果碱溶液；
（7）加入乙醚进行结晶分离：按照体积比1:1，向二氯甲烷-氧化槐果碱溶液中加入乙醚，过滤，得到滤液，按照滤液与乙醚的体积比为1:4，向滤液中加入乙醚，静置结晶12h，过滤，得到氧化槐果碱结晶产品，滤液经减压分段蒸馏回收二氯甲烷和乙醚；
（8）加入丙酮重结晶后进行干燥：按照料液比1g:4mL，向氧化槐果碱结晶产品中加入丙酮，重结晶得到氧化槐果碱单体，然后在105℃下干燥4h，得到氧化槐果碱成品。
所用试剂全部为化学纯。
实施例5
称取10份狼牙刺花样品，每份50g，分别用乙醇、氯仿、二氯甲烷、体积比95:5、90:10、85:15的甲醇和氯仿的混合液、体积比为9:1的甲醇和乙酸的混合液、体积比为30:70、40:60、50:50的浓氨水（质量浓度为27%）和氯仿的混合液，代替步骤（2）中的甲醇，进行提取，其他同实施例4，10份样品分别记为对比例5（1）、对比例5（2）、对比例5（3）、对比例5（4）、对比例5（5）、对比例5（6）、对比例5（7）、对比例5（8）、对比例5（9）、对比例5（10）。
对比例1
采用中国专利（CN 1473830A）实施例1的方法，检测其步骤（三）中B得到的苦参碱粗品中氧化槐果碱的含量。
对比例2
称取3份狼牙刺花样品，每份50g，省略步骤（1），不采用预处理，直接从步骤（2）开始提取，其他步骤分别同实施例2、3、4，3份样品分别记为对比例2（1）、对比例2（2）、对比例2（3）。
采用实施例1的检测方法，采用液相色谱进行检测氧化槐果碱成品含量，得到氧化槐果碱成品的纯度。对不同实施例得到的氧化槐果碱检测结果见表1，提取率按照以下公式计算得到：狼牙刺花氧化槐果碱提取率(％)＝(样品中氧化槐果碱净质量÷原料狼牙刺花氧化槐果碱质量)×100％。
表1 不同实施例氧化槐果碱的检测结果
由表1可知，实施例2-4采用甲醇先对狼牙刺花进行浸泡提取，将滤液减压浓缩得到粗提物浓缩膏，再采用质量浓度1-5%的乙酸对滤渣浸泡提取，乙酸浓度在3%时，氧化槐果碱的提取率和纯度相对较高；当采用其他溶剂代替甲醇，浓氨水和氯仿的混合液提取时，氧化槐果碱的提取率和纯度相对较高；而采用对比例1的方法，检测苦参碱粗品中氧化槐果碱的含量时，其纯度为0，采用该方法提取不能得到氧化槐果碱；采用对比例2的方法，不对狼牙刺花进行预处理，直接进行提取时，其氧化槐果碱的提取率和纯度明显低于对狼牙刺花先采用预处理然后进行提取的方法。