本发明涉及医药技术领域，特别涉及一种具有降血糖作用的山核桃叶球松素的制备方法和用途。
背景技术：
糖尿病是由血液中葡萄糖堆积过多引起的代谢性疾病，危急免疫功能。也因其病程较长人体的麻烦随之而至，糖尿病患者很容隐感染由感冒、肺炎、肺结核引起的多种感染疾病，并且不易治愈。严重的可能引起全身多器官损害，出现失明、肾病等并发症，危害人体健康。糖尿病一般分1型糖尿病、2型糖尿病、妊娠糖尿病及其他特殊类型的糖尿病。在糖尿病患者中，2型糖尿病所占的比例约为95％。随着今年来居民生活水平的提高，糖尿病患者的数量也大大增加，这也造成大量降血糖药物随之问世，但目前临床上常见糖尿病治疗药物多为化学合成类药物，虽然疗效确切，也同时存在较多不良反应。天然药物，是经现代医药体系证明的具有一定药理活性的动物药、植物药和矿物药等。
社会的发展使人们越来越关注化学药品的负面影响，在这种背景下，中草药无疑具有不可取代的优势。因此，开发具有预防及治疗糖尿病及其并发症的中草药既迎合市场需求又具有良好的社会效益。
ob/ob小鼠是瘦素基因敲出所获得的一种先天性肥胖小鼠，其发病过程与人类肥胖相似，是较常用的遗传性肥胖模型之一，也常用于二型糖尿病动物实验研究。
山核桃树是一种胡桃科落叶乔木，其叶多在夏秋两季采收，入药具有清热解毒、杀虫止痒的功效。主要用于脚趾湿痒及皮肤癣证的治疗等。研究发现山核桃叶提取物中含有大量抗氧化活性物质，如黄酮等，具有抗衰老、抗肿瘤、抗血管生成等功效。黄酮类化合物是药用植物主要活性成分之一，具有广谱药理活性和较低毒性，研究表明山核桃叶球松素可降低模型ob/ob小鼠的血糖水平，可用于防治高血糖，特别是2型糖尿病为主要功能的药品及保健食品。
技术实现要素：
本发明的目的在于提供一种具有降血糖作用的山核桃叶提取物球松素的制备方法，同时提供了其用途。
本发明解决其技术问题所采用的技术方案是：
一种具有降血糖作用的山核桃叶提取物球松素，含有球松素的质量百分比在90％以上。
一种具有降血糖作用的山核桃叶球松素的制备方法，所述制备方法包括以下步骤：
(1)将山核桃叶置于烘箱中干燥，粉碎过筛，加入75-95％的乙醇回流提取，每次30-120分钟，重复1-3次，过滤，合并滤液；
(2)将步骤(1)的滤液浓缩，每4ml滤液加入0.7ml、1mol/l的氢氧化钠溶液，混匀后再添加聚酰胺充分混合，减压浓缩上柱，以4-12bv/h的流速，依次用水、20％乙醇、40％乙醇、60％乙醇洗脱，每种溶剂洗脱6-10倍柱体积，收集60％乙醇的洗脱液，减压浓缩至干燥得山核桃叶粗提物；
(3)将步骤(2)的山核桃叶粗提物按照每1g山核桃叶粗提取物加5-35ml甲醇的比例加入甲醇，并以石油醚1:1比例进行萃取，重复3-10次，然后将石油醚萃取液于30-50℃减压浓缩至干燥，即得山核桃叶黄色粗提取物；
(4)将步骤(3)的山核桃叶黄色粗提取物以1g:8-12ml的比例，加入60vol％-90％乙醇水溶液，在70-90℃水浴中进行溶解，溶解结束后，迅速放于4℃冰箱中，放置12-24h，进行结晶，滤纸过滤，得到山核桃叶球松素晶体，球松素含量在90％以上。
作为优选，步骤(1)中烘箱干燥温度为30-80℃。
作为优选，步骤(1)过筛筛目为40-100目。
作为优选，步骤(1)中提取条件为常压60-120℃。
作为优选，步骤(1)中70-95％乙醇水溶液用量为每1g山核桃叶粉碎物加10ml
作为优选，步骤(2)中聚酰胺的用量为每100ml碱化后的滤液添加5g聚酰胺。
一种具有降血糖作用的山核桃叶球松素的用途，将上述制备的山核桃叶球松素与药剂或者食品上认可的辅料，采用现代制剂技术，制成以山核桃叶球松素为主的胶囊剂、片剂、散剂、口服液、软胶囊、丸剂、凝胶剂、缓释制剂等各种剂型及保健食品。
本发明的有益效果：本发明以胡桃科山核桃叶为原料制备其初提物，并经进一步纯化获得具有降血糖作用的山核桃叶球松素，该方法简单易行，且进一步扩大了山核桃叶的应用范围，具有十分巨大的市场潜力和经济价值。
具体实施方式
下面通过具体实施例对本发明作进一步详细的説明，但本发明并不限于这些实施例。
实施例1
山核桃叶于40℃烘干，粉碎，过40目筛，称取粉末100g，加入1l体积浓度85％乙醇溶液回流提取，2次，提取条件为常压80℃，每次60min，合并滤液，每4ml滤液加入0.7ml、1mol/l的氢氧化钠溶液碱化12h，碱化后将样品溶液每100ml加入5g聚酰胺(100-200目)比例混合均匀，减压浓缩至干燥，上层析柱(15mm×350mmi.d)，依次用10bv的水、20％乙醇、40％乙醇、60％乙醇洗脱，收集60％乙醇洗脱液，减压浓缩至干燥，获得山核桃叶粗提物。
将上述山核桃叶粗提物按照每1g山核桃叶粗提物加入5ml甲醇的比例进行溶解，再用等体积石油醚萃取10次，将石油醚产物减压旋转蒸发至干燥，获得山核桃叶黄色粗提物。将山核桃叶黄色粗提物溶解于90℃、80％乙醇中，趁热过滤，并将滤液迅速放于4℃冰箱中，放置12h，结晶。将结晶液滤纸过滤，得到山核桃叶提取物球松素晶体，球松素含量在90％以上。
实施例2
将山核桃叶置于35℃烘箱干燥，粉碎，过80目筛，称取山核桃叶粉末200g，加入2l体积浓度95％乙醇回流提取，提取条件为常压60℃，2次，每次30min，合并滤液，每4ml滤液加入0.7ml、1mol/l的氢氧化钠溶液碱化12h，碱化后将样品溶液每100ml加入5g聚酰胺(100-200目)比例混合均匀，减压浓缩至干燥，上层析柱(15mm×350mmi.d)，依次用10bv的水、20％乙醇、40％乙醇、60％乙醇洗脱，收集60％乙醇洗脱液，减压浓缩至干燥，获得山核桃叶粗提物。
将上述山核桃叶粗提物按照每1g山核桃叶粗提物加入20ml甲醇的比例进行溶解，再用等体积石油醚萃取10次，将石油醚产物减压旋转蒸发至干燥，获得山核桃叶黄色粗提物。将山核桃叶黄色粗提物溶解于90℃、80％乙醇中，趁热过滤，并将滤液迅速放于4℃冰箱中，放置12h，结晶。将结晶液滤纸过滤，得到山核桃叶提取物球松素晶体，球松素含量在90％以上。
实施例3
将山核桃叶置于烘箱中80℃干燥，粉碎过100目筛，称取山核桃叶粉末300g，加入3l体积浓度75％的乙醇回流提取，提取条件为常压120℃，每次120分钟，重复1次，过滤，合并滤液；
(2)将步骤(1)的滤液浓缩，每4ml滤液加入0.7ml、1mol/l的氢氧化钠溶液，碱化12h后再添加聚酰胺充分混合，每100ml碱化后的滤液添加5g聚酰胺；减压浓缩上柱，以12bv/h的流速，依次用水、20％乙醇、40％乙醇、60％乙醇洗脱，每种溶剂洗脱6-10倍柱体积，收集60％乙醇的洗脱液，减压浓缩至干燥得山核桃叶粗提物；
(3)将步骤(2)的山核桃叶粗提物按照每1g山核桃叶粗提取物加35ml甲醇的比例加入甲醇，并以石油醚1:1比例进行萃取，重复3次，然后将石油醚萃取液于30-50℃减压浓缩至干燥，即得山核桃叶黄色粗提取物；
(4)将步骤(3)的山核桃叶黄色粗提取物以1g:12ml的比例，加入90％乙醇水溶液，在70℃水浴中进行溶解，溶解结束后，迅速放于4℃冰箱中，放置24h，进行结晶，滤纸过滤，得到山核桃叶球松素晶体，球松素含量在90％以上。
球松素含量测定方法参见沈勇等.高效液相色谱法测定山核桃叶中5个黄酮苷元含量[j].药物分析杂志,2013年05期。
山核桃叶球松素对四氧嘧啶致致高血糖小鼠模型的作用研究
1.实验方法：
将雄性icr小鼠50只，随机分为6组，其中空白对照组10只，其余各组各8只，将40只模型小鼠禁食12h后尾静脉注射四氧嘧啶溶液80mg/kg造摸(正常对照组注射等量生理盐水)，5d后测血糖，当血糖>11.1mmol/l时造模成功。然后将模型小鼠随机分为5组，分别为高血糖模型组，山核桃叶球松素50mg/kg低剂量组、100mg/kg中剂量组、200mg/kg高剂量组，50mg/kg二甲双胍阳性药组。实验期间正常对照组及模型组给予0.5％cmc-na灌胃，其余各组按给药剂量灌胃，1次/d，连续14d。14d后，测定各组小鼠血糖、体重及血清果糖胺，并记录。实验结果均利用spss18.0统计软件进行统计学处理。实验数据均以平均数±标准差表示，采用单因素方差分析，p＜0.05时认为有显著性差异。
2.实验结果
结果一见表1、表2，由表中可知山核桃叶球松素可以显著降低小鼠血糖含量，对四氧嘧啶致高血糖小鼠模型具有显著作用。
表1山核桃叶球松素对高血糖模型小鼠的影响
注：与正常组比较，**p<0.01；与模型组比较，#p<0.05，##p<0.01。
表2山核桃叶总黄酮不同给药剂量对高血糖小鼠体重的影响
注：与正常组比较，**p<0.01；与模型组比较，#p<0.05。
山核桃叶球松素对ob/ob肥胖小鼠模型的作用研究
1.实验方法
取8周龄ob/ob雄性小鼠40只，适应性饲养l周，然后将小鼠随机分为山核桃叶球松素50mg/kg低剂量组、100mg/kg中剂量组、200mg/kg高剂量组，50mg/kg黄连素阳性药组，并以c57小鼠作为正常对照组，各组小鼠1次/天灌胃。连续28d。28d后，测定各组小鼠血糖并记录。实验结果均利用spss18.0统计软件进行统计学处理。实验数据均以平均数±标准差表示，采用单因素方差分析，p＜0.05时认为有显著性差异。
2.实验结果
实验结果见表3，由表中可知山核桃叶球松素可以显著降低小鼠血糖含量，对肥胖小鼠即ii型糖尿病模型小鼠效果良好。
表3山核桃叶球松素对ob/ob肥胖模型小鼠的影响
注：与正常组比较，**p<0.01；与模型组比较，#p<0.05，##p<0.01。
以上所述的实施例只是本发明的一种较佳的方案，并非对本发明作任何形式上的限制，在不超出权利要求所记载的技术方案的前提下还有其它的变体及改型。