专利名称：一种从柿叶中提取活性成分熊果酸的方法
技术领域：
本发明属天然药物领域，尤其涉及一种从柿叶中提取活性成分熊果酸的方法。
背景技术：
柿科(the family Ebenaceae)柿属植物，全世界总共有240多种，它们主要广泛地分布于热带有亚热带地区，温带偶有分布。我国大约有56种，产于西南部至东南部，北至辽宁(侯宽昭编，中国种子植物科属词典，第二版，北京科技出版社，1984，159)。此发明所用柿叶，是柿树的干燥叶，其味苦、酸、涩，性凉，具有清肺止咳、凉血、降血压之功效。主要用于咳喘、肺气肿、各种内出血、高血压等病症。现代研究表明，柿叶含有丰富的黄酮类、鞣质、树脂、维生素C、内脂香豆素类、挥发油及熊果酸、齐墩果酸等三萜酸，世界各地的柿叶都含有熊果酸(Row L.Ramachandra et al，Indian Journal of chemistry，1969，7204-206；Mallavadhani U.V.et al，Biochemical Systematics and Ecology，1998，26941-942；甄汉深等，中药材，2001，24(3)182；Mallavadhani U.V.et al，Pharmaceutical Biology，2001，39(1)20-24；Chen Guang et al，Clinica ChimicaActa 2002，32011-16)。
熊果酸具有广泛的药用价值(Liu Jie，Journal of Ethnopharmacology，1995，4957-68)，如抗高血压、抗动脉粥样硬化、抗氧化等作用(Somova L.I.etal，Journal of Ethnopharmacology，2003，84299-305)，且它对多种致癌细胞具有细胞毒、诱导分化及抗血管形成作用，其防癌抗癌作用已引起重视，成为现代肿瘤药研究的新热点(Chiang Lien-Chai et al，The American Journal ofChinese Medicine，2003，31(1)37-46；夏国豪等，国外医学肿瘤学分册，2002，29(6)420-422)，熊果酸也有可能成为抗HIV的潜在药物(Quéré Luc et al，Biochemical and Biophysical Research Communications 1996，227484-488)。
熊果酸(Ursolic acid)又名乌苏酸或乌索酸，属三萜类化合物，分子式为C30H18O3，化学名称为3β-羟基-熊果烷-12-烯-28-羧酸，为无色针状晶体。熊果酸溶于甲醇、乙醇、氯仿、丙酮等，易溶于1，4-二氧六环、吡啶，不溶于水及石油醚。
发明内容
本发明目的在于提供一种简单、低成本、高产率、较适合工业生产的从柿叶中提取活性成分熊果酸的方法。
一种从柿叶中提取熊果酸的方法将粉碎过的柿叶用低极性溶剂脱去脂溶性成分，脱脂后的柿叶粉用中等极性的溶剂浸取，回收溶剂得到黄绿色浸取物，该浸取物用低极性溶剂脱去脂溶性成分后，溶于低碳链醇中用活性炭脱色，过滤，滤液经回收溶剂得到熊果酸粗提物，熊果酸粗提物再用低碳链醇重结晶几次后得到无色针状结晶的熊果酸精品。
另一种从柿叶中提取熊果酸的方法将粉碎过的柿叶用低碳链醇浸取，回收溶剂得到浸膏，浸膏用低极性溶剂脱脂后再用中等极性溶剂浸取，回收溶剂得到浸取物，该浸取物用低极性溶剂脱去脂溶性成分后，溶于低碳链醇中用活性炭脱色，过滤，滤液经回收溶剂得到白色的熊果酸粗提物，熊果酸粗提物再用低碳链醇重结晶几次可得到无色针状结晶的熊果酸精品又一种从柿叶中提取熊果酸的方法将粉碎过的柿叶用低极性溶剂脱去脂溶性成分，脱脂后的柿叶粉用中等极性的溶剂浸取，回收溶剂得到黄绿色浸取物，该浸取物用低极性溶剂脱去脂溶性成分后，溶于低碳链醇中用活性炭脱色，过滤，滤液经回收溶剂得到熊果酸粗提物，熊果酸粗品用低碳链醇溶解，浓缩，加碱溶液调pH至10～11，再活性炭脱色，过滤，滤液加酸溶液调pH至1～2，并过滤，干燥，再用低碳链醇重结晶就可得到熊果酸精品。
或者将粉碎过的柿叶用低碳链醇浸取，回收溶剂得到浸膏，浸膏用低极性溶剂脱脂后再用中等极性溶剂浸取，回收溶剂得到浸取物，该浸取物用低极性溶剂脱去脂溶性成分后，溶于低碳链醇中用活性炭脱色，过滤，滤液经回收溶剂得到白色的熊果酸粗提物，熊果酸粗品用低碳链醇溶解，浓缩，加碱溶液调pH至10～11，再活性炭脱色，过滤，滤液加酸溶液调pH至1～2，并过滤，干燥，再用低碳链醇重结晶就可得到熊果酸精品。
本发明的优点是所用柿叶在我国分布广泛，但柿叶往往被当作废料扔掉或烧掉，因此本发明柿叶原料易得；所用各种化学试剂都很常见，容易大批量购买；所用有机溶剂都可回收再用，提取后柿叶废渣可用作肥料，又一种从柿叶中提取熊果酸的方法中，过滤后得到的酸液可以作为下一批次生产所需的酸溶液，因此“三废”处理量小且容易，对环境基本上不产生污染；采用脱脂过程，使得到的浸取物因含很少脂类物质而不会产生粘稠状物，为后续步骤处理带来了方便；采用脱色过程，使粗产品的中熊果酸纯度进一步提高，有利于后续步骤中形成晶体且使晶体纯度提高；文献方法中从柿叶里提取熊果酸都用到柱色谱方法，而本发明不需用柱色谱技术，因此本发明操作简单，快捷。综上所述，本发明所用原料廉价易得，对环境基本不产生污染，工艺简单易行、快捷，所获得的熊果酸成本较低、纯度高，所以适合工业规模化生产。
具体实施例方式
实施例1将柿叶(采自浙江省)自然晾干，粉碎，取柿叶粉，用8倍量石油醚(沸点60-90℃)4次脱去脂溶性成分(每次2小时，60℃，800r/min)。脱脂后的柿叶用8倍量乙酸乙酯浸取3次(每次3小时，70℃，800r/min)，常压蒸馏回收乙酸乙酯得到黄绿色固体。乙酸乙酯浸取物用20倍量的石油醚(沸点60-90℃)脱去脂溶性成分(4次，每次3小时，60℃，800r/min)，再将脱脂后的固体溶于乙醇中用活性炭脱色4次(每次1小时，70℃，500r/min)至滤液无色，滤液减压蒸馏回收乙醇后得到白色的熊果酸粗提物。熊果酸粗提物用无水乙醇重结晶得到无色针状结晶的熊果酸精品，得率约0.51％(以干燥柿叶计)。
实施例2将柿叶自然晾干，粉碎，取柿叶粉，用4倍量正己烷4次脱去脂溶性成分(每次2小时，60℃，800r/min)。脱脂后的柿叶用8倍量二氯甲烷室温浸取3次(每次8小时，800r/min)，常压蒸馏回收二氯甲烷得到黄绿色固体。二氯甲烷浸取物在索氏抽提装置中用正己烷脱去脂溶性成分，再将脱脂后的固体溶于甲醇中用活性炭脱色4次(每次2小时，室温，500r/m)至滤液无色，滤液减压蒸馏回收甲醇后得到白色的熊果酸粗提物。熊果酸粗提物用甲醇重结晶得到无色针状结晶的熊果酸精品，得率约0.42％(以干燥柿叶计)。
实施例3将柿叶自然晾干，粉碎，取柿叶粉，用8倍量环己烷4次脱去脂溶性成分(每次3小时，70℃，500r/m)。脱脂后的柿叶用三氯甲烷在渗漉装置中提取，减压蒸馏回收三氯甲烷得到黄绿色固体。三氯甲烷浸取物在索氏抽提装置中用环己烷脱去脂溶性成分，再将脱脂后的固体溶于乙醇中用活性炭脱色4次(每次1小时，70℃，400r/min)至滤液无色，滤液减压蒸馏回收乙醇后得到白色的熊果酸粗提物。熊果酸粗提物用乙醇重结晶得到无色针状结晶的熊果酸精品，得率约0.46％(以干燥柿叶计)。
实施例4将柿叶自然晾干，粉碎，取柿叶粉，用8倍量环庚烷4次脱去脂溶性成分(每次2小时，80℃，500r/m)。脱脂后的柿叶用四氯甲烷在渗漉装置中提取，减压蒸馏回收四氯甲烷得到黄绿色固体。四氯甲烷浸取物用20倍量的环庚烷脱去脂溶性成分(4次，每次2小时，80℃，500r/m)，再将脱脂后的固体溶于甲醇中用活性炭脱色4次(每次2小时，室温，400r/min)至滤液无色，滤液减压蒸馏回收甲醇后得到白色的熊果酸粗提物。熊果酸粗提物用甲醇重结晶得到无色针状结晶的熊果酸精品，得率约0.48％(以干燥柿叶计)。
实施例5将柿叶自然晾干，粉碎，取柿叶粉，用8倍量正己烷和环己烷的混合物4次(正己烷/环己烷＝1/1，室温，每次12小时)脱去脂溶性成分。脱脂后的柿叶用二氯乙烷在索氏提取装置中浸取，减压蒸馏回收二氯乙烷得到黄绿色固体。二氯乙烷浸取物在索氏抽提装置中用石油醚(沸点60-90℃)脱去脂溶性成分，再将脱脂后的固体溶于甲醇中用活性炭脱色4次(每次2小时，室温，500r/m)至滤液无色，滤液减压蒸馏回收甲醇后得到白色的熊果酸粗提物。熊果酸粗提物用甲醇重结晶得到无色针状结晶的熊果酸精品，得率约0.45％(以干燥柿叶计)。
实施例6将柿叶自然晾干，粉碎，取柿叶粉，用8倍量石油醚(沸点60-90℃)4次脱去脂溶性成分(每次2小时，60℃，500r/min)。脱脂后的柿叶用12倍量丙酮在超声辅助提取装置中提取3次(每次3小时，室温800r/min)，常压蒸馏回收丙酮得到黄绿色固体。丙酮浸取物用30倍量的石油醚(沸点60-90℃)脱去脂溶性成分(4次，每次3小时，60℃，800r/min)，再将脱脂后的固体溶于乙醇中用活性炭脱色4次(每次1小时，70℃，500r/min)至滤液无色，滤液减压蒸馏回收乙醇后得到白色的熊果酸粗提物。熊果酸粗提物用无水乙醇重结晶得到无色针状结晶的熊果酸纯品，得率约0.56％(以干燥柿叶计)。
实施例7将柿叶自然晾干，粉碎，取柿叶粉，用8倍量石油醚(沸点60-90℃)4次脱去脂溶性成分(每次2小时，60℃，800r/min)。脱脂后的柿叶用8倍量乙酸乙酯浸取3次(70℃，800r/min，每次3小时)，常压蒸馏回收乙酸乙酯得到黄绿色固体。乙酸乙酯浸取物用10倍量的石油醚(沸点60-90℃)脱去脂溶性成分(4次，每次3小时，60℃，800r/min)，再将脱脂后的固体溶于乙醇中用活性炭脱色4次(每次1小时，70℃，500r/min)至滤液无色，滤液减压蒸馏回收乙醇后得到白色的熊果酸粗提物。熊果酸粗提物用无水乙醇和甲醇的混合物(乙醇/甲醇＝5/1)重结晶得到无色针状结晶的熊果酸精品，得率约0.51％(以干燥柿叶计)。
实施例8
将柿叶自然晾干，粉碎，取柿叶粉，用8倍量石油醚(沸点60-90℃)4次脱去脂溶性成分(每次2小时，60℃，800r/min)。脱脂后的柿叶用8倍量乙酸乙酯和二氯甲烷的混合物(乙酸乙酯/二氯甲烷＝1/1)室温浸取3次(每次8小时，800r/min)，常压蒸馏回收乙酸乙酯和二氯甲烷得到黄绿色固体。乙酸乙酯和二氯甲烷的混合物浸取物在索氏抽提装置中用正己烷脱去脂溶性成分，再将脱脂后的固体溶于甲醇中用活性炭脱色4次(每次2小时，室温，500r/m)至滤液无色，滤液减压蒸馏回收甲醇后得到白色的熊果酸粗提物。熊果酸粗提物用甲醇重结晶得到无色针状结晶的熊果酸精品，得率约0.45％(以干燥柿叶计)。
实施例9将柿叶自然晾干，粉碎，取柿叶粉，将粉碎过的柿叶用8倍量甲醇室温浸取3次(每次12小时，800r/min)，减压蒸馏回收甲醇得到浸膏，甲醇浸膏用20倍量石油醚(沸点60-90℃)4次脱去脂溶性成分(每次2小时，60℃，800r/min)。脱脂后的浸膏用乙酸乙酯在索氏抽提装置中提取，减压蒸馏回收乙酸乙酯得到黄绿色固体。乙酸乙酯浸取物用20倍量的石油醚(沸点60-90℃)脱去脂溶性成分(4次，每次3小时，60℃，800r/min)，再将脱脂后的固体溶于乙醇中用活性炭脱色4次(每次1小时，70℃，500r/min)至滤液无色，滤液减压蒸馏回收乙醇后得到白色的熊果酸粗提物。熊果酸粗提物用无水乙醇重结晶得到无色针状结晶的熊果酸精品，得率约0.40％(以干燥柿叶计)。
实施例10将柿叶自然晾干，粉碎，取柿叶粉，将粉碎过的柿叶用12倍量乙醇在超声辅助提取装置中提取3次(每次1小时，室温800r/min)，减压蒸馏回收乙醇得到浸膏，乙醇浸膏在索氏抽提装置中用正己烷脱去脂溶性成分。脱脂后的浸膏用8倍量二氯甲烷浸取3次(每次8小时，室温，800r/min)，常压蒸馏回收二氯甲烷得到黄绿色固体。二氯甲烷浸取物用10倍量的环己烷脱去脂溶性成分(4次，每次3小时，60℃，800r/min)，再将脱脂后的固体溶于甲醇中用活性炭脱色4次(每次1小时，60℃，500r/min)至滤液无色，滤液回收甲醇后得到白色的熊果酸粗提物。熊果酸粗提物用甲醇重结晶得到无色针状结晶的熊果酸精品，得率约0.42％(以干燥柿叶计)。
实施例11将柿叶自然晾干，粉碎，取柿叶粉，将粉碎过的柿叶用丙醇在渗漉装置中提取，减压蒸馏回收丙醇得到浸膏，丙醇浸膏在索氏抽提装置中用环己烷脱去脂溶性成分。脱脂后的浸膏用8倍量三氯甲烷浸取3次(每次2小时，50℃，800r/min)，减压蒸馏回收三氯甲烷得到黄绿色固体。三氯甲烷浸取物用10倍量的正庚烷脱去脂溶性成分(4次，每次3小时，80℃，800r/min)，再将脱脂后的固体溶于甲醇中用活性炭脱色4次(每次1小时，60℃，500r/min)至滤液无色，滤液减压蒸馏回收甲醇后得到白色的熊果酸粗提物。熊果酸粗提物用甲醇重结晶得到无色针状结晶的熊果酸精品，得率约0.44％(以干燥柿叶计)。
实施例12将柿叶自然晾干，粉碎，取柿叶粉，将粉碎过的柿叶用12倍量乙醇提取(3次，每次3小时，70℃，800r/min)，减压蒸馏回收乙醇得到浸膏，乙醇浸膏在索氏抽提装置中用石油醚(沸点60-90℃)脱去脂溶性成分。脱脂后的浸膏用8倍量四氯甲烷浸取3次(每次6小时，室温，800r/min)，减压蒸馏回收四氯甲烷得到黄绿色固体。四氯甲烷浸取物用10倍量的正己烷脱去脂溶性成分(4次，每次3小时，60℃，800r/min)，再将脱脂后的固体溶于乙醇中用活性炭脱色4次(每次1小时，70℃，500r/min)至滤液无色，滤液减压蒸馏回收乙醇后得到白色的熊果酸粗提物。熊果酸粗提物用乙醇重结晶得到无色针状结晶的熊果酸精品，得率约0.48％(以干燥柿叶计)。
实施例13将柿叶自然晾干，粉碎，取柿叶粉，将粉碎过的柿叶用乙醇在索氏抽提装置中提取，减压蒸馏回收乙醇得到浸膏，乙醇浸膏在索氏抽提装置中用正庚烷脱去脂溶性成分。脱脂后的浸膏用8倍量二氯乙烷浸取3次(每次2小时，70℃，800r/min)，常压蒸馏回收二氯乙烷得到黄绿色固体。二氯乙烷浸取物用20倍量的正庚烷脱去脂溶性成分(4次，每次3小时，80℃，800r/min)，再将脱脂后的固体溶于乙醇中用活性炭脱色4次(每次1小时，70℃，500r/min)至滤液无色，滤液减压蒸馏回收乙醇后得到白色的熊果酸粗提物。熊果酸粗提物用甲醇重结晶得到无色针状结晶的熊果酸精品，得率约0.42％(以干燥柿叶计)。
实施例14将柿叶自然晾干，粉碎，取柿叶粉，将粉碎过的柿叶用12倍量乙醇在超声辅助提取装置中提取3次(每次1小时，室温，800r/min)，减压蒸馏回收乙醇得到浸膏，乙醇浸膏在索氏抽提装置中用正己烷脱去脂溶性成分。脱脂后的浸膏用8倍量乙酸乙酯浸取3次(每次3小时，70℃，800r/min)，减压蒸馏回收乙酸乙酯烷得到黄绿色固体。乙酸乙酯浸取物用20倍量的石油醚(沸点60-90℃)脱去脂溶性成分(4次，每次3小时，60℃，800r/min)，再将脱脂后的固体溶于乙醇中用活性炭脱色4次(每次1小时，70℃，500r/min)至滤液无色，滤液减压蒸馏回收乙醇后得到白色的熊果酸粗提物。熊果酸粗提物用乙醇和甲醇的混合物(乙醇/甲醇＝5/1)重结晶得到无色针状结晶的熊果酸精品，得率约0.52％(以干燥柿叶计)。
实施例15将柿叶自然晾干，粉碎，取柿叶粉，将粉碎过的柿叶用乙醇在索氏抽提装置中提取，减压蒸馏回收乙醇得到浸膏，乙醇浸膏在索氏抽提装置中用正己烷脱去脂溶性成分。脱脂后的浸膏用8倍量乙酸乙酯和丙酮的混合物(乙酸乙酯/丙酮＝1/1)浸取3次(每次2小时，40℃，800r/min)，常压蒸馏回收乙酸乙酯和丙酮得到黄绿色固体。乙酸乙酯和丙酮混合物的浸取物用30倍量的正己烷脱去脂溶性成分(4次，每次3小时，60℃，800r/min)，再将脱脂后的固体溶于乙醇和甲醇的混合物(乙醇/甲醇＝5/1)中用活性炭脱色4次(每次1小时，70℃，500r/min)至滤液无色，滤液减压蒸馏回收乙醇和甲醇后得到白色的熊果酸粗提物。熊果酸粗提物用甲醇重结晶得到无色针状结晶的熊果酸精品，得率约0.42％(以干燥柿叶计)。
实施例16将柿叶自然晾干，粉碎，取柿叶粉，用8倍量石油醚(沸点60-90℃)4次脱去脂溶性成分(每次2小时，60℃，800r/min)。脱脂后的柿叶用8倍量乙酸乙酯浸取3次(70℃，800r/min，每次3小时)，常压蒸馏回收乙酸乙酯得到黄绿色固体。乙酸乙酯浸取物用15倍量的石油醚(沸点60-90℃)脱去脂溶性成分(4次，每次3小时，60℃，800r/min)，再将脱脂后的固体溶于乙醇中用活性炭脱色4次(每次1小时，70℃，500r/min)至滤液无色，滤液减压蒸馏回收乙醇后得到白色的熊果酸粗提物。熊果酸粗品用乙醇溶解，浓缩至有少量沉淀后，加入1mol·L-1NaOH溶液调pH至11，活性炭脱色，再用1mol·L-1HCl调pH至2，此时有大量白色沉淀析出，过滤得到白色固体，用水洗至滤液呈中性和无Cl-为止，如此精制3次，可得到纯度更高的熊果酸产品，然后再用无水乙醇重结晶得到无色针状晶体的熊果酸精品得率约0.50％(以干燥柿叶计)。
实施例17将柿叶自然晾干，粉碎，取柿叶粉，用8倍量正己烷4次脱去脂溶性成分(每次2小时，60℃，800r/min)。脱脂后的柿叶用8倍量二氯甲烷室温浸取3次(每次12小时，800r/min)，常压蒸馏回收二氯甲烷得到黄绿色固体。二氯甲烷浸取物在索氏抽提装置中用正己烷脱去脂溶性成分，再将脱脂后的固体溶于甲醇中用活性炭脱色4次(每次2小时，室温，500r/m)至滤液无色，滤液减压蒸馏回收甲醇后得到白色的熊果酸粗提物。熊果酸粗品用乙醇溶解，浓缩至有少量沉淀后，加入1mol·L-1KOH溶液调pH至10，活性炭脱色，再用1mol·L-1H2SO4调pH至1，此时有大量白色沉淀析出，过滤得到白色固体，用水洗至滤液呈中性和无SO42-为止，如此精制3次，可得到纯度更高的熊果酸产品，然后再用甲醇重结晶得到无色针状晶体的熊果酸精品得率约0.44％(以干燥柿叶计)。
实施例18将柿叶自然晾干，粉碎，取柿叶粉，将粉碎过的柿叶用12倍量乙醇提取(3次，每次3小时，70℃，800r/min)，减压蒸馏回收乙醇得到浸膏，乙醇浸膏在索氏抽提装置中用石油醚(沸点60-90℃)脱去脂溶性成分。脱脂后的浸膏用8倍量四氯甲烷浸取3次(每次6小时，室温，800r/min)，减压蒸馏回收四氯甲烷得到黄绿色固体。四氯甲烷浸取物用10倍量的正己烷脱去脂溶性成分(4次，每次3小时，60℃，800r/min)，再将脱脂后的固体溶于乙醇中用活性炭脱色4次(每次1小时，70℃，500r/min)至滤液无色，滤液减压蒸馏回收乙醇后得到白色的熊果酸粗提物。熊果酸粗品用乙醇溶解，浓缩至有少量沉淀后，加入Ca(OH)2溶液调pH至10，活性炭脱色，再用1mol·L-1HCl溶液调pH至1，此时有大量白色沉淀析出，过滤得到白色固体，用水洗至滤液呈中性和无Cl-为止，如此精制3次，可得到纯度更高的熊果酸产品，然后再用甲醇重结晶得到无色针状晶体的熊果酸精品得率约0.41％(以干燥柿叶计)。
实施例19将柿叶自然晾干，粉碎，取柿叶粉，用8倍量石油醚(沸点60-90℃)4次脱去脂溶性成分(每次2小时，60℃，800r/min)。脱脂后的柿叶用8倍量乙酸乙酯和二氯甲烷的混合物(乙酸乙酯/二氯甲烷＝1/1)室温浸取3次(每次8小时，800r/min)，常压蒸馏回收乙酸乙酯和二氯甲烷得到黄绿色固体。乙酸乙酯和二氯甲烷的混合物浸取物在索氏抽提装置中用正己烷脱去脂溶性成分，再将脱脂后的固体溶于甲醇中用活性炭脱色4次(每次2小时，室温，500r/m)至滤液无色，滤液减压蒸馏回收甲醇后得到白色的熊果酸粗提物。熊果酸粗品用乙醇溶解，浓缩至有少量沉淀后，加入1mol·L-1KOH溶液调pH至10，活性炭脱色，再用2mol·L-1H3PO4溶液调pH至2，此时有大量白色沉淀析出，过滤得到白色固体，用水洗至滤液呈中性和无PO43-为止，如此精制3次，可得到纯度更高的熊果酸产品，然后再用甲醇重结晶得到无色针状晶体的熊果酸精品得率约0.43％(以干燥柿叶计)。
实施例20
将柿叶自然晾干，粉碎，取柿叶粉，将粉碎过的柿叶用乙醇在渗漉装置中提取，减压蒸馏回收乙醇得到浸膏，乙醇浸膏在索氏抽提装置中用正己烷脱去脂溶性成分。脱脂后的浸膏用8倍量乙酸乙酯和丙酮的混合物(乙酸乙酯/丙酮＝1/1)浸取3次(每次2小时，40℃，800r/min)，常压蒸馏回收乙酸乙酯和丙酮得到黄绿色固体。乙酸乙酯和丙酮混合物的浸取物用10倍量的正己烷脱去脂溶性成分(4次，每次3小时，60℃，800r/min)，再将脱脂后的固体溶于乙醇中用活性炭脱色4次(每次1小时，70℃，500r/min)至滤液无色，滤液减压蒸馏回收乙醇后得到白色的熊果酸粗提物。熊果酸粗品用乙醇溶解，浓缩至有少量沉淀后，加入1mol·L-1NaOH和KOH的混合溶液调pH至10，活性炭脱色，再用1mol·L-1H2SO4和HCl的混合溶液调pH至2，此时有大量白色沉淀析出，过滤得到白色固体，用水洗至滤液呈中性和无SO42-及Cl-为止，如此精制3次，可得到纯度更高的熊果酸产品，然后再用甲醇重结晶得到无色针状晶体的熊果酸精品得率约0.45％(以干燥柿叶计)。
鉴别高效液相色谱(HPLC)方法取少量熊果酸产品及标准品用甲醇分别溶解，进行HPLC分析并比较，HPLC测定条件仪器Agilent 1100 series色谱柱Hypersil ODS-C18柱(200mm×4.6mm，5μm)，流动相甲醇/水(91/9)，流速0.5ml/min，检测波长220nm，温度30℃。标准品(购自陕西慧科植物开发有限公司)保留时间为13.189min，产品保留时间为13.082min，两者基本一致。
红外光谱将熊果酸产品及标准品用溴化钾压片法在红外光谱仪上(Impact-410，美国Nicolet公司)测定，结果两者的振动吸收峰基本一致。
核磁共振谱将熊果酸产品及标准品作氢(1H)核磁共振分析。仪器Advance DMX500瑞士Bruker公司，工作频率1H-NMR 500MHz，溶剂氘代DMSO，测定温度300K。结果显示熊果酸产品及标准品的核磁共振谱基本一致。
综合以上分析可证实，本发明从柿叶中提取得到的无色针状晶体为熊果酸。
权利要求
1.一种从柿叶中提取活性成分熊果酸的方法，其特征在于将粉碎过的柿叶用低极性溶剂脱去脂溶性成分，脱脂后的柿叶粉用中等极性的溶剂浸取，回收溶剂得到黄绿色浸取物，该浸取物用低极性溶剂脱去脂溶性成分后，溶于低碳链醇中用活性炭脱色，过滤，滤液经回收溶剂得到熊果酸粗提物，熊果酸粗提物再用低碳链醇重结晶几次后得到无色针状结晶的熊果酸精品。
2.根据权利1所述的一种从柿叶中提取活性成分熊果酸的方法，其特征在于所说的低极性溶剂为石油醚、正己烷、环己烷、正庚烷或它们的混合物，所说的中等极性溶剂为二氯甲烷、三氯甲烷、四氯化碳、二氯乙烷、乙酸乙酯、丙酮或它们的混合物，所说的低碳链醇为甲醇、乙醇、丙醇或它们的混合物。
3.根据权利1所述的一种从柿叶中提取熊果酸的方法，其特征在于所说的脱脂及浸取采用冷浸、热浸、索氏提取、渗漉或超声辅助提取方法，所说的脱色采用冷浸、热浸方法，所说的回收溶剂采用常压蒸馏或减压蒸馏。
4.一种从柿叶中提取活性成分熊果酸的方法，其特征在于将粉碎过的柿叶用低碳链醇浸取，回收溶剂得到浸膏，浸膏用低极性溶剂脱脂后再用中等极性溶剂浸取，回收溶剂得到浸取物，该浸取物用低极性溶剂脱去脂溶性成分后，溶于低碳链醇中用活性炭脱色，过滤，滤液经回收溶剂得到白色的熊果酸粗提物，熊果酸粗提物再用低碳链醇重结晶几次可得到无色针状结晶的熊果酸精品
5.根据权利4所述的一种从柿叶中提取活性成分熊果酸的方法，其特征在于所说的低极性溶剂为石油醚、正己烷、环己烷、正庚烷或它们的混合物，所说的中等极性溶剂为二氯甲烷、三氯甲烷、四氯化碳、二氯乙烷、乙酸乙酯、丙酮或它们的混合物，所说的低碳链醇为甲醇、乙醇、丙醇或它们的混合物。
6.根据权利4所述的一种从柿叶中提取活性成分熊果酸的方法，其特征在于所说的脱脂及浸取采用冷浸、热浸、索氏提取、渗漉或超声辅助提取方法，所说的脱色采用冷浸、热浸方法，所说的回收溶剂采用常压蒸馏或减压蒸馏。
7.一种从柿叶中提取活性成分熊果酸的方法，其特征在于将粉碎过的柿叶用低极性溶剂脱去脂溶性成分，脱脂后的柿叶粉用中等极性的溶剂浸取，回收溶剂得到黄绿色浸取物，该浸取物用低极性溶剂脱去脂溶性成分后，溶于低碳链醇中用活性炭脱色，过滤，滤液经回收溶剂得到熊果酸粗提物，或者将粉碎过的柿叶用低碳链醇浸取，回收溶剂得到浸膏，浸膏用低极性溶剂脱脂后再用中等极性溶剂浸取，回收溶剂得到浸取物，该浸取物用低极性溶剂脱去脂溶性成分后，溶于低碳链醇中用活性炭脱色，过滤，滤液经回收溶剂得到白色的熊果酸粗提物，熊果酸粗品用低碳链醇溶解，浓缩，加碱溶液调pH至10～11，再活性炭脱色，过滤，滤液加酸溶液调pH至1～2，并过滤，干燥，再用低碳链醇重结晶就可得到熊果酸精品。
8.根据权利7所述的一种从柿叶中提取活性成分熊果酸的方法，其特征在于所说的低极性溶剂为石油醚、正己烷、环己烷、正庚烷或它们的混合物，所说的中等极性溶剂为二氯甲烷、三氯甲烷、四氯化碳、二氯乙烷、乙酸乙酯、丙酮或它们的混合物，所说的低碳链醇为甲醇、乙醇、丙醇或它们的混合物。
9.根据权利7所述的一种从柿叶中提取熊果酸的方法，其特征在于所说的脱脂及浸取采用冷浸、热浸、索氏提取、渗漉或超声辅助提取方法，所说的脱色采用冷浸、热浸方法，所说的回收溶剂采用常压蒸馏或减压蒸馏。
10.根据权利7所述的一种从柿叶中提取活性成分熊果酸的方法，其特征在于所说碱为碱金属的碱、碱土金属的碱或它们的混合物，酸为中、强酸或它们的混合物。
全文摘要
本发明公开了一种从柿叶中提取活性成分熊果酸的方法。它是将粉碎过的柿叶用低极性溶剂脱去脂溶性成分，脱脂后的柿叶粉用中等极性的溶剂浸取，回收溶剂得到黄绿色浸取物，该浸取物用低极性溶剂脱去脂溶性成分后，溶于低碳链醇中用活性炭脱色，过滤，滤液经回收溶剂得到熊果酸粗提物，熊果酸粗提物再用低碳链醇重结晶几次后得到无色针状结晶的熊果酸精品。本发明所用原料廉价易得，对环境基本不产生污染，工艺简单易行、快捷，所获得的熊果酸成本较低、纯度高，所以适合工业规模化生产。
文档编号C07J63/00GK1594356SQ200410025770
公开日2005年3月16日 申请日期2004年6月29日 优先权日2004年6月29日
发明者何潮洪, 范杰平 申请人:浙江大学