本发明涉及鲜猪血提取技术领域，具体涉及一种鲜猪血中免疫球蛋白的提取方法。
背景技术：
免疫球蛋白(immunoglobulin,ig)是对抗原刺激应答中，b淋巴细胞产生的能与相应抗原特异性的结合，产生各种免疫球效应(生理效应)的一类球蛋白。大量研究报道了口服免疫球蛋白可以有效的预防和治疗婴幼儿由大肠杆菌和轮状病毒引发的肠道疾病。猪血中免疫球蛋白含量很高，其中以g型免疫球蛋白(简称igg)为主。
我国猪血资源十分丰富，在当今动物蛋白资源短缺的情况下，开发利用猪血蛋白收到了中外学者的高度重视。从血液中提取免疫球蛋白常用的方法有盐析法(如硫酸铵盐析法、多聚磷酸盐盐析法等)、有机聚合物沉淀法、变性沉淀法等。其中多聚磷酸盐盐析法成本低，安全环保，高效可控，操作简单，是解决猪血清大规模igg分离制备的有效途径之一。但目前还未有深入研究，使得所制备出的igg回收率、纯度及活性保留率分别为64.5％、71.2％、85.2％左右。因此有必要对多聚磷酸盐盐析法提取工艺进行优化，提高igg的提取率、纯度及活性保留率。
技术实现要素：
本发明目的在于解决上述现有技术中igg的回收率、纯度及活性保留率低等不足，提供一种成本低、安全环保、制备回收率高、纯度好及活性保留率高的利用鲜猪血提取免疫球蛋白的方法。
为解决上述问题，本发明采用的技术方案如下：
一种鲜猪血中免疫球蛋白的提取方法，包括以下步骤：
步骤一：猪血清前处理：将新鲜猪血经离心机两次离心分离，第一次离心转数5000rpm,时间10min，第二次离心转数8000rpm，离心时间20min，收集上清液，即得猪血清。
步骤二：取猪血清，加入等量生理盐水稀释，边搅拌边缓慢加入多聚磷酸盐溶液至多聚磷酸盐终浓度质量分数为0.05-0.1％，然后调节温度至20-50℃，柠檬酸溶液调节至ph3.0-6.0，在一定温度水浴中保持相应反应温度0.5-2h的时间；然后离心分离，弃沉淀，收集上清液，即得igg粗品；此步骤使用多聚磷酸盐盐析法，选择质量分数0.05％-1％多聚磷酸盐使部分杂质呈盐析状态，免疫球蛋白成盐溶状态；并且选择适当的温度20-50℃，ph3.0-6.0，时间0.5-2h，保证免疫球蛋白高的活性保留率及回收率。
步骤三：igg粗品过deae52-纤维素层析柱，以硼酸盐缓冲液洗脱，收集洗脱液、浓缩即得igg产品；此步骤中层析柱采用deae52-纤维素层析柱，免疫球蛋白以静电键结合到层析柱上，然后用硼酸盐缓冲液洗脱，保证igg产品的高纯度。
进一步的技术方案是：步骤一所述的离心机为蝶片式离心机。
进一步的技术方案是：步骤二所述的柠檬酸溶液的质量分数为2％。
进一步的技术方案是：步骤二所述离心分离采用台式过滤离心机，转数大于10000rpm,离心时间30min。
进一步的技术方案是：步骤三所述的硼酸盐缓冲液浓度为浓度为0.02mol/l，ph为8.5。
综上所述，由于采用了上述技术方案，本发明的有益效果是：
1、本发明采用多聚磷酸盐盐析法，在适当的浓度，温度，ph，时间条件下提取免疫球蛋白，在经deae52-纤维素层析柱提纯。该方法反应条件安全环保，操作简单、成本低。
2、本发明采用多聚磷酸盐盐析法，将鲜猪血分两次分离离心得猪血清，使得纤维素蛋白剔除得更干净，并且大大提高了免疫球蛋白溶出率；同时，本发明采用2％柠檬酸调节ph，使得免疫球蛋白回收率及活性保留率大大提高，回收率从原来的64.5％提高到82.6％，活性保留率从原来的85.2％提高到92.6％；另外本发明还结合了离子层析柱纯化，使用0.02mol/lph8.5p硼酸盐缓冲液洗脱，使得免疫球蛋白纯度从原来的71.2％提高到89.7％。本发明在提高免疫球蛋白加工增值能力的同时，也充分利用了猪血资源，实现了资源的可持续利用，产生了巨大的经济效益。
具体实施方式
为了更好的对本发明的技术方案进行理解，下面通过具体的实施例进行阐述和说明。
实施例1
步骤一：猪血清前处理：将新鲜猪血经碟片式离心机两次离心分离，第一次离心转数5000rpm,时间10min，第二次分离转数8000rpm，离心时间20min，收集上清液得猪血清。
步骤二：取猪血清，加入等量生理盐水稀释，边搅拌边缓慢加入多聚磷酸盐溶液至多聚磷酸盐终浓度0.05％，然后调节温度至20℃，2％柠檬酸溶液调节至ph3.0，在水浴中保持相应温度0.5h的时间；台式过滤离心机离心分离，转数大于10000rpm，时间30min，弃沉淀，收集上清液，即得igg粗品。
步骤三：igg粗品过deae52-纤维素层析柱，以0.02mol/lph8.5硼酸盐缓冲液洗脱，收集洗脱液，浓缩即得igg产品，经检测纯度为88％，回收率为79.6％，活性保留率为90％。
实施例2
步骤一：猪血清前处理：将新鲜猪血经碟片式离心机两次离心分离，第一次离心转数5000rpm,时间10min，第二次分离转数8000rpm，离心时间20min，收集上清液得猪血清。
步骤二：取猪血清，加入等量生理盐水稀释，边搅拌边缓慢加入多聚磷酸盐溶液至多聚磷酸盐终浓度0.1％，然后调节温度至50℃，2％柠檬酸溶液调节至ph6.0，在水浴中保持相应温度1h的时间；台式过滤离心机离心分离，转数大于10000rpm，时间30min,弃沉淀，收集上清液，即得igg粗品。
步骤三：igg粗品过deae52-纤维素层析柱，以0.02mol/lph8.5硼酸盐缓冲液洗脱，收集洗脱液，即得igg产品，经检测纯度为89.2％，回收率为79.1％，活性保留率为91.2％。
实施例3
步骤一：猪血清前处理：将新鲜猪血经碟片式离心机两次离心分离，第一次离心转数5000rpm,时间10min，第二次分离转数8000rpm，离心时间20min，收集上清液得猪血清。
步骤二：取猪血清，加入等量生理盐水稀释，边搅拌边缓慢加入多聚磷酸盐溶液至多聚磷酸盐终浓度0.06％，然后调节温度至40℃，2％柠檬酸溶液调节至ph4.5，在水浴中保持相应温度1h的时间；台式过滤离心机离心分离，转数大于10000rpm，时间30min，弃沉淀，收集上清液，即得igg粗品。
步骤三：igg粗品过deae52-纤维素层析柱，以0.02mol/lph8.5硼酸盐缓冲液洗脱，收集洗脱液，即得igg产品，经检测纯度为89.0％，回收率为80.2％，活性保留率为92.1％。
尽管这里参照本发明的解释性实施例对本发明进行了描述，上述实施例仅为本发明较佳的实施方式，本发明的实施并不受上述实施例的限制，应该理解，本领域技术人员可以设计出很多其他的修改和实施方式，凡在本发明的精神和原则之内所作的任何修改、等同替换和改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。