本发明涉及生物与新医药技术，特别是涉及一种红霉素杂质b的分离方法。
背景技术：
：红霉素是一类大环内酯类抗生素，主要由链霉菌、小单孢菌和糖多孢菌产生。在临床上主要应用于治疗革兰氏阳性细菌感染，对革兰氏阴性菌如流感杆菌、百日咳杆菌、淋球菌、布氏杆菌、军团菌及脑膜炎球菌等也有抗菌作用。红霉素发酵液中主要含有红霉素a(er-a)、红霉素b（er-b）、红霉素c（er-c）、红霉素d（er-d）、以及红霉素e（er-e）、红霉素f（er-f），其中红霉素a是红霉素成品（硫氰酸红霉素）的主要活性成分，红霉素b和红霉素c生物活性低，副作用大，是成品中的杂质，欧洲药典中规定它们的含量不能超过5%。此外，新一代红霉素衍生物都是以红霉素a为原料合成的。因此，有效提升红霉素a含量，降低成品中红霉素b（er-b）、红霉素c（er-c）、红霉素d（er-d）、以及红霉素e（er-e）、红霉素f（er-f）等杂质成分含量是当前红霉素生产的一个重要技术突破点。红霉素杂质b(结构式如下式所示)的化学结构和红霉素a在r、r1、r2位上的官能团相同，唯一不同的是在氨基糖部分，即红霉素b的甲氨基，比红霉素a少了一个甲基而显得碱性更强一些，在成盐反应中红霉素杂质b会优先参与成盐结晶并析出，从而影响到红霉素产品的数量和质量。因此，切实阻断红霉素杂质b的成盐反应可能是提升红霉素产品数量和质量的有效手段。但是在结晶过程中，要避免红霉素杂质b与硫氰酸的成盐反应非常困难。技术实现要素：本发明的目的在于克服上述现有技术的缺陷，提供一种控制硫氰酸红霉素成品中红霉素杂质b的方法，该方法通过在红霉素成盐结晶的上游降低或分离红霉素杂质b，从而有效控制硫氰酸红霉素成品中的杂质b含量。为实现上述发明目的所采取的技术方案为：一种红霉素杂质b的分离方法，其特征在于其工艺步骤为：将经过陶瓷微滤膜过滤、脱色树脂脱色、纳滤浓缩处理后红霉素发酵液打入树脂柱中进行循环吸附，待树脂柱中的水溶液完全走空后，氨水过柱，排出树脂中的残余水分，然后用洗脱剂洗脱，根据流出时间或流出量，将流出的洗脱剂分段接出、分别成盐结晶。用所述陶瓷微滤膜过滤多次，每次过滤完后加水稀释，再过滤。所述陶瓷微滤膜滤径为1～10μｍ。经两道脱色树脂脱色，脱色液透光率不低于35%。所述树脂为漂莱特红霉素专用吸附树脂pad550，过柱速度1-5bv/h。所述洗脱剂为丙酮、醋酸丁酯和乙醇中的一种或几种的混合液，其用量为树脂体积1-2.5bv（bv，树脂柱内装载树脂的体积称为床，容积(bedvolume)简写为bv）。本发明是在综合考虑了阻断红霉素杂质b与硫氰酸的成盐反应的困难性后，另辟蹊径，在成盐结晶的上游降低或分离杂质b来达到降低红霉素成品中的红霉素b杂质含量。本发明基于极性原理，即红霉素各组分在洗脱剂中的溶解度不同，来达到分离的目的。通过收集不同时间段的洗脱液并分别成盐结晶，得到具有不同杂质b含量的硫氰酸红霉素成品，将这种不同质量的成品应用于不同用途（如对杂质b含量高的产品用于低质量要求的产品合成或重结晶工艺。），从而满足不同市场需求。具体实施方式下面用实例予以说明本发明，应该理解的是，实例是用于说明本发明而不是对本发明的限制。本发明的范围与核心内容依据权利要求书加以确定。下述实施例中，红霉素发酵液采用以红色链霉菌微生物的7天培养发酵液，发酵液ph=6.0～7.0,温度为32～36℃,发酵单位一般为6000～9000μ/ml。下述实施例中，陶瓷微滤膜的滤径为1～10μｍ；洗脱过程为碱性有机溶剂，包括：丙酮、醋酸丁酯、乙醇等有机溶剂或者以上有机溶剂不同比例的混合物；脱色树脂为市售江苏苏青大孔吸附树脂doc2001。下述实施例中，树脂采用漂莱特pad550型，将树脂装柱，玻璃柱高径比为60:9，树脂装柱高度25cm，共1000ml。下述实施例中，树脂柱用乙醇浸泡12h以上，并循环清洗30min以活化。活化结束，排出乙醇，用纯水将树脂中的乙醇压出至无乙醇残留，待用。树脂吸附期间控制流速在1-5bv/h。实施例1取陶瓷微滤膜分离出的红霉素过滤液10000ml，红霉素化学单位6500u/ml，先后经过两道脱色树脂脱色，脱色后透光率44.2%。然后纳滤浓缩2倍或以上，红霉素浓度5000～30000u/ml。用蠕动泵将浓缩液打入吸附树脂，过柱速度为3bv/h，循环吸附，直至树脂出水红霉素浓度小于200u/ml时吸附结束。待树脂柱中的水溶液完全走空后，用0.5bv、浓度为0.5%的氨水过柱，用空气将树脂柱中的残水顶出（*bv单位均以树脂体积计）。用2200ml醋酸丁酯做洗脱剂，用蠕动泵打入吸附树脂柱，洗脱速率0.5bv/h。洗脱液流出1800ml时，将余下的洗脱液单独接出。用分液漏斗将醋酸丁酯中的残水分出。醋酸丁酯洗脱液分别检测红霉素浓度。根据醋酸丁酯洗脱液体积和红霉素浓度，计算洗脱收率。将上述两段收集的醋酸丁酯洗脱液分别成盐结晶：在搅拌下按醋酸丁酯洗脱液中红霉素总量（以百万为单位）的1.0分别加入50%硫氰酸钠水溶液，搅拌均匀后，滴加20%的冰醋酸水溶液，控制终点ph4.0-5.0。结晶结束，用抽滤分离，用湿品2倍体积纯水洗涤湿盐两次，抽干，湿品用烘箱干燥。干品用液相检测组份含量。实验结果见下表：批号洗脱部分洗脱收率%红a红b红c杂a杂b杂c杂d杂e杂f收率%emt-1一步洗脱液82.381.40.160.690.50.303.410.20.470.1769.3emt-3二步洗脱液15.679.40.270.920.962.801.530.21.210.467.2实施例2取陶瓷膜分离出的红霉素过滤液10000ml，红霉素化学单位6023u/ml，先后经过两道脱色树脂脱色，脱色后透光率37.8%，脱色液用纳滤浓缩2倍或以上，红霉素浓度5000～30000u/ml。用蠕动泵将脱色液打入活化好的吸附树脂，过柱速度为1.5bv/h，循环吸附，直至吸附后水溶液中的红霉素浓度小于200u/ml时吸附结束。待树脂柱中的水溶液完全走空后，用0.5bv、浓度为1.0%的氨水过柱，用空气将树脂柱中的残水顶出。用1500ml醋酸丁酯做洗脱剂，用蠕动泵打入吸附树脂，洗脱速率0.5bv/h。洗脱液每流出500ml时，与后面的洗脱液分开。用分液漏斗将醋酸丁酯中的残水分出。醋酸丁酯洗脱液分别检测红霉素浓度。根据醋酸丁酯洗脱液体积和红霉素浓度，计算洗脱收率。将上述三段收集的醋酸丁酯洗脱液分别成盐结晶：在搅拌下按醋酸丁酯洗脱液红霉素总量（以百万为单位）的1.0加入50%硫氰酸钠水溶液，搅拌均匀后，滴加20%的冰醋酸水溶液，控制终点ph4.0-5.0。结晶结束，用抽滤分离，用湿品2倍体积纯水洗涤湿盐两次，抽干后，烘箱干燥，干品用液相检测组份含量。实验结果见下表：批号洗脱部分洗脱收率%红a红b红c杂a杂b杂c杂d杂e杂f收率%emt-1一步洗脱液68.383.80.270.080.140.224.390.082.160.5369.8emt-2二步洗脱液22.481.40.310.220.380.443.820.240.990.3666.7emt-3三步洗脱液7.663.40.150.20.252.071.410.040.630.4337.5实施例3取陶瓷膜分离出的红霉素过滤液17000ml，红霉素化学单位3825u/ml，先后经过两道脱色树脂脱色，脱色后透光率42.3%。然后纳滤浓缩2倍或以上，红霉素浓度5000～30000u/ml。用蠕动泵将脱色液打入活化好的吸附树脂，过柱速度为1.5bv/h，循环吸附，直至吸附后水溶液中的红霉素浓度小于200u/ml时吸附结束。待树脂柱中的水溶液完全走空后，用0.5bv、浓度为0.5%的氨水过柱，用空气将树脂柱中的残水顶出。用2000ml醋酸丁酯做洗脱剂，用蠕动泵打入吸附树脂，洗脱速率0.5bv/h。洗脱液每流出500ml时，与后面的洗脱液分开。用分液漏斗将醋酸丁酯中的残水分出。醋酸丁酯洗脱液分别检测红霉素浓度。根据醋酸丁酯洗脱液体积和红霉素浓度，计算洗脱收率。将上述四段收集的醋酸丁酯洗脱液分别成盐结晶：在搅拌下按醋酸丁酯洗脱液红霉素总量（以百万为单位）的1.0加入50%硫氰酸钠水溶液，搅拌均匀后，滴加20%的冰醋酸水溶液，控制终点ph4.0-5.0。结晶结束，用抽滤分离，用湿品2倍体积纯水洗涤湿盐两次，抽干后，烘箱干燥，干品用液相检测组份含量。实验结果见下表：批号洗脱部分洗脱收率%红a红b红c杂a杂b杂c杂d杂e杂f收率%emt-1一步洗脱液58.384.40.270.080.140.130.390.082.160.5366.8emt-2二步洗脱液23.281.70.310.220.380.641.440.240.990.3667.7emt-3三步洗脱液11.567.40.150.20.252.362.360.040.630.4365.6emt-4四步洗脱液5.647.10.311.281.224.173.750.51.040.2722.7当前第1页12