一种天然紫杉醇的提取方法与流程

本发明涉及一种天然抗肿瘤药物的提取工艺方法，具体涉及一种提取天然紫杉醇的制备方法。

背景技术：

紫杉醇，是从红豆杉植物中提取出的次生代谢产物，紫杉醇主要作用于微管蛋白系统，它可以促进微管蛋白装配成微管，抑制微管的解聚，从而导致维管束排列异常，形成星状体，使纺锤体失去正常功能，致使癌细胞死亡。临床上主要用于治疗卵巢癌、乳腺癌和非小细胞肺癌，其抗肿瘤活性高于噻唑呋啉、阿霉素和氟尿嘧啶等常用抗肿瘤药物。因此因为它的广谱性和极高的抗癌活性，目前紫杉醇已成为应用最广的抗癌药物。

1963年美国化学家瓦尼(M.C.Wani)和沃尔(Monre E.Wall)首次从一种生长在美国西部大森林中称谓太平洋杉(Pacific Yew)树皮和木材中分离到了紫杉醇的粗提物。在筛选实验中，Wani和Wall发现紫杉醇粗提物对离体培养的鼠肿瘤细胞有很高活性，并开始分离这种活性成份。由于该活性成份在植物中含量极低，直到1971年，他们才同杜克(Duke)大学的化学教授姆克法尔(Andre T.McPhail)合作，通过X‐射线分析确定了该活性成份的化学结构，一种三环二萜化合物，并把它命名为紫杉醇。

紫杉醇最早是从银杏树皮、树根中直接提取，然而紫杉醇在植物体中的含量相当低，大约13.6kg的树皮才能提出1g的紫杉醇，治疗一个卵巢癌患者需要3‐12棵百年以上的红豆杉树，加之紫杉本身资源很贫乏，而且红豆杉属植物生长缓慢，致使这种珍贵树种已濒临灭绝。而目前的生物发酵法和紫杉醇药源植物内生真菌培植法均限制较多，不够成熟，不适合大规模生产。

因此后来人们继续研究在红豆杉中寻找量较高的紫杉醇前体化合物，然后再通过化学方法将其转化为紫杉醇是非常有效的解决途径。通过多步化学反应得到紫杉醇。但是这种方法得到紫杉醇需要经过大量的有机合成，对资源和环境造成较大的破坏。

本发明则采用云南红豆杉枝叶，其天然紫杉醇含量高，从枝叶中提取不需要经过化学合成即可得到大量的高纯度天然紫杉醇，即可满足人民医疗健康的需要，同时本发明为了避免传统工艺的诸多缺点，减少了有机溶剂的使用，提高天然紫杉醇的提取效率和红豆杉枝叶的利用率，降低紫杉醇成品中杂质的含量，这样又避免了资源的浪费和环境的破坏，得到很好地综合循环利用。

技术实现要素：

本发明的目的在于，提供一种天然紫杉醇的提取方法，以克服现有技术所存在的上述缺点和不足。

我国分布的红豆杉分为4种1变种，即东北红豆杉，西藏红豆杉、云南红豆杉、中国红豆杉及中国红豆杉的变种南方红豆杉。

云南红豆杉(Taxus yunnanensis ChengetL.K.Fu)又名西南红豆杉，为红豆杉科红豆杉属的常绿乔木，是中国4种红豆杉之一。

后来中科院植物分类学家傅立国先生及其弟子将认为我国分布的红豆杉是3种2变种，名称也有所不同，分别为东北红豆杉(Taxus cuspidata)喜马拉雅密叶红豆杉(Taxus fuana)、喜马拉雅红豆杉(Taxus wallichiana)以及喜马拉雅红豆杉的两个变种中国红豆杉(Taxus wallichianavar.chinensis)南方红豆杉(Taxus wallichiana var.mairei)。

本发明的原理：

以粉碎的云南红豆杉枝叶(拉丁学名Taxus yunnanensis)为初始原料，经过水的混合溶液浸泡，将水溶性和脂溶性杂质去除，混合溶液再经回收循环使用，浸泡后的渣经醇类溶剂浸泡得到紫杉醇粗品，此粗品纯度较好，易于结晶精制得到高纯度的成品紫杉醇。

本发明所需要解决的技术问题，可以通过以下技术方案来实现：

一种天然紫杉醇的提取方法，其特征在于，包括：

(1)取云南红豆杉枝叶，经粉碎机粉碎；

(2)将粉碎后的云南红豆杉枝叶经0.1％～0.15％有机酸、1.0％～5.0％丙酮或醇的混合水溶液做提取剂，提取；

(3)经过第一次浸提后的渣，再经醇类有机溶剂的浸泡提取得到紫杉醇粗品；

(4)紫杉醇粗品经过AB-8型树脂做树脂柱纯化；

(5)再经过乙腈结晶，甲醇、二氯甲烷和正己烷的混合溶剂体系结晶，从而得到高纯度的紫杉醇产品。

其中，所述云南红豆杉枝叶粉粹为100～200目。

其中，所述提取剂为0.1％～0.15％有机酸、1.0％～5.0％丙酮或醇的混合水溶液，其体积比例为0.1％～0.15％：1.0％～5.0％：98.9％～94.85％。

其中，所述提取液经回收后再循环使用。

其中，所述醇类有机溶剂为甲醇或乙醇。

其中，所述混合溶剂为甲醇、二氯甲烷和正己烷，其体积比例为1：2：6。

其中，所述乙腈结晶为10～15℃放置6小时析晶，其作用为去除杂质，达到逐步提高天然紫杉醇纯度的。

其中，所述混合溶剂体系结晶为甲醇、二氯甲烷和正己烷的混合溶剂体系，其体积比例为1：2：6，搅拌4小时，控温10～15℃析晶，其作用为去除杂质，达到逐步提高天然紫杉醇纯度的。

所述AB-8型树脂做树脂柱纯化的特点为此型号的的树脂对天然紫杉醇的具有特征性，能更好的纯化天然紫杉醇。

其中步骤(2)中，采用折返式逆流提取方式进行。

本发明的有益效果：

本发明研发一种天然红豆杉提取纯化的工艺路线，并实现规模化生产，产品纯度达到98％以上，最大单杂小于0.1％。

创新点：

(1)自有的技术，以云南红豆杉枝叶为原料提取天然紫杉醇；

(2)采用水溶性的混合溶液将红豆杉枝叶中的大量杂质去除，在使用醇类有机溶剂将紫杉醇粗品提取出来；

(3)采用AB-8型树脂做树脂柱纯化，再经两次结晶精制即可得到高纯度的天然紫杉醇；

附图说明

图1为发明的工艺流程图。

图2为本发明制备的产品的高效液相色谱图。

具体实施方式

以下结合具体实施例，对本发明作进一步说明。应理解，以下实施例仅用于说明本发明而非用于限定本发明的范围。

实施例1

图1为本发明的工艺流程图，如图1所示，一种天然紫杉醇的提取方法，包括以下步骤：

10kg粉碎的云南红豆杉枝叶从萃取设备入口分10分钟均匀的连续投入，将配制好的200kg混合水溶液(醋酸0.1％，丙酮2.0％的水溶液)提取液同时匀速打入提取设备，浸泡液自流至1.0吨储罐，浸泡液经回收后再转入下批次提取程序，固体浸提渣经过压榨机压榨除去绝大部分的水后，再折返进入提取设备，打入60kg甲醇，均按照10分钟完成的速度进料，提取完成后，将提取液减压浓缩至无液滴滴出，10L丙酮溶清后与AB-8型树脂制样，树脂柱洗脱纯化，将洗脱液浓缩至干，2L乙腈加热至60℃溶清，真空减压除去1L乙腈，10～15℃放置6小时析晶，过滤后得到固体，使用2L的甲醇和二氯甲烷(甲醇：二氯甲烷＝0.66：1.34)的混合溶剂将固体溶清，搅拌下加入4L的正己烷，搅拌4小时，控温10～15℃析晶，过滤烘干后所得固体即为天然紫杉醇成品，包装送检。

实施例2

一种天然紫杉醇的提取方法，包括以下步骤：

100kg粉碎的云南红豆杉枝叶从萃取设备入口分80分钟均匀的连续投入，将配制好的2000kg混合水溶液(醋酸0.1％，丙酮2.0％的水溶液)提取液同时匀速打入提取设备，浸泡液自流至10吨储罐，浸泡液经回收后再转入下批次提取程序，固体浸提渣经过压榨机压榨除去绝大部分的水后，再折返进入提取设备，打入600kg甲醇，均按照80分钟完成的速度进料，提取完成后，将提取液减压浓缩至无液滴滴出，100L丙酮溶清后与AB-8型树脂制样，树脂柱洗脱纯化，将洗脱液浓缩至干，20L乙腈加热至60℃溶清，真空减压除去10L乙腈，10～15℃放置6小时析晶，过滤后得到固体，使用20L的甲醇和二氯甲烷(甲醇：二氯甲烷＝0.66：1.34)的混合溶剂将固体溶清，搅拌下加入40L的正己烷，搅拌4小时，控温10～15℃析晶，过滤烘干后所得固体即为天然紫杉醇成品，包装送检。

实施例3

一种天然紫杉醇的提取方法，包括以下步骤：

1.0吨粉碎的云南红豆杉枝叶从萃取设备入口分8小时均匀的连续投入，将配制好的20吨混合水溶液(醋酸0.1％，丙酮2.0％的水溶液)提取液同时匀速打入提取设备，浸泡液自流至50吨储罐，浸泡液经回收后再转入下批次提取程序，固体浸提渣经过压榨机压榨除去绝大部分的水后，再折返进入提取设备，打入6.0吨甲醇，均按照8小时完成的速度进料，提取完成后，将提取液减压浓缩至无液滴滴出，1000L丙酮溶清后与AB-8型树脂制样，树脂柱洗脱纯化，将洗脱液浓缩至干，200L乙腈加热至60℃溶清，真空减压除去100L乙腈，10～15℃放置6小时析晶，过滤后得到固体，使用200L的甲醇和二氯甲烷(甲醇：二氯甲烷＝0.66：1.34)的混合溶剂将固体溶清，搅拌下加入400L的正己烷，搅拌4小时，控温10～15℃析晶，过滤烘干后所得固体即为天然紫杉醇成品，包装送检。

图2为本发明制备的产品的高效液相色谱图，如图2所示。采用常规高效液相检测本发明制备的产品。

表1高效液相色谱检测

从表1看出，本发明研发一种天然紫杉醇的提取方法，并实现规模化生产，产品纯度达到98％以上，最大单杂小于0.1％。体现本发明的新颖性和创造性。

以上对本发明的具体实施方式进行了说明，但本发明并不以此为限，只要不脱离本发明的宗旨，本发明还可以有各种变化。