一种促进紫杉醇分泌的红豆杉细胞培养基的制作方法
【技术领域】
[0001]本发明涉及细胞培养技术领域，具体涉及一种促进紫杉醇分泌的红豆杉细胞培养基。
【背景技术】
[0002]红豆杉又称紫杉，也称赤柏松，是中国国家一级珍稀保护树种，也是世界上公认的濒临灭绝的天然珍稀抗癌植物。
[0003]紫杉醇及其类似物迄今为止仅存在于裸子植物红豆杉科的红豆杉属和澳洲红豆杉属中，红豆杉属植物全世界共有11种，广泛分布于欧亚大陆和北美的寒带、温带及亚热带地区，但分布零散且生长缓慢。澳洲红豆杉属仅分布于南半球，数量稀少，紫杉醇在红豆杉植物中含量普遍很低，即使当前公认含量最高的短叶红豆杉树皮中也不到0.1%，但其需求量很大。
[0004]为了解决紫杉醇供需之间的尖锐矛盾，多年来相关研究者在寻找及扩大紫杉醇药源途径方面进行了大量研究。紫杉醇的化学全合成虽已取得成功，但因路线长、收率低等原因目前无法实现工业化。近年来，利用红豆杉细胞离体培养以制备紫杉醇得到了越来越多的关注，由于离体条件下细胞的培养方式可以得到更加多样的控制，因此其生产效率相对较高。然而，以制备紫杉醇为目的的细胞培养并不容易，首先需要筛选生产性能强的细胞株，同时还要匹配适宜的培养条件，此外在营养供给等方面需要针对细胞株特点及代谢特性进行设计，从而保证较高的培养密度和紫杉醇产率。现有技术的培养基在促进红豆杉细胞分泌紫杉醇方面仍不够理想。
【发明内容】
[0005]本发明旨在针对现有技术的技术缺陷，提供一种促进紫杉醇分泌的红豆杉细胞培养基，以解决现有技术中促进紫杉醇分泌的红豆杉细胞培养基对其分泌紫杉醇的促进作用较低的技术问题。
[0006]为实现以上技术目的，本发明采用以下技术方案:
[0007]—种促进紫杉醇分泌的红豆杉细胞培养基，包括以下重量份的成分:硝酸钠8?
10份，磷酸氢二钾4?6份，硫酸镁2?3份，氯化钙1?2份，蛋白胨1?2份，大发汗1?2份，巨胜子1?2份，宽筋藤1?2份，兰香草1?2份，菊三七1?2份，水50?60份。
[0008]作为优选，还包括1?2重量份的金不换。
[0009]作为优选，还包括1?2重量份的金丝草。
[0010]作为优选，还包括1?2重量份的藏红花。
[0011]作为优选，还包括1?2重量份的白茅花。
[0012]作为优选，所述培养基由以下重量份的成分组成:硝酸钠9份，磷酸氢二钾5份，硫酸镁2.5份，氯化钙1.5份，蛋白胨1.5份，大发汗1.5份，巨胜子1.5份，宽筋藤1.5份，兰香草1.5份，菊三七1.5份，水55份。
[0013]作为优选，所述培养基由以下重量份的成分组成:硝酸钠8.5份，磷酸氢二钾5.5份，硫酸镁2.1份，氯化钙1.3份，蛋白胨1.7份，大发汗1.6份，巨胜子1.2份，宽筋藤1.1份，兰香草1.4份，菊三七1.5份，金不换1.4份，金丝草1.1份，藏红花1.5份，白茅花1.8份，水57份。
[0014]在以上技术方案中，所述培养基是将配方量的各成分混合后粉碎、再与水混合得到的，所述粉碎可以利用本技术领域公知的各类物料粉碎手段实现。本发明所述的培养基尤其适用于红豆杉细胞的液体悬浮培养，当然也可制备成为固体培养基用于种子培养或传代培养。
[0015]本发明通过实验手段广泛筛选了作为红豆杉细胞生长的营养物质，依据红豆杉细胞自身代谢特性和实际使用效果确定了本发明配方。该配方以传统自养培养基提供氮源和磷源，并添加了一定的钙离子，在此基础上意外的发现通过添加特定种类及成分的中药材有助于促进紫杉醇的产率。基于以上有益的发现，本发明通过实验手段优选了大发汗、巨胜子、宽筋藤、兰香草等原本用于人类疾病治疗的中药材成分，所得培养基意外获得了突出的培养效果，使得红豆杉细胞的紫杉醇产率得到显著提升，同时其生产周期更短。本发明以创新性的技术手段获得优越的技术效果，同时成本较低、易于实现，因此具有良好的应用前景。
【具体实施方式】
[0016]以下将对本发明的【具体实施方式】进行详细描述。为了避免过多不必要的细节，在以下实施例中对属于公知的结构或功能将不进行详细描述。除有定义外，以下实施例中所用的技术和科学术语具有与本发明所属领域技术人员普遍理解的相同含义。
[0017]实施例1
[0018]—种促进紫杉醇分泌的红豆杉细胞培养基，由以下重量份的成分组成:硝酸钠8份，磷酸氢二钾4份，硫酸镁2份，氯化钙1份，蛋白胨1份，大发汗1份，巨胜子1份，宽筋藤1份，兰香草1份，菊二七1份，水50份。
[0019]实施例2
[0020]—种促进紫杉醇分泌的红豆杉细胞培养基，由以下重量份的成分组成:硝酸钠10份，磷酸氢二钾6份，硫酸镁3份，氯化钙2份，蛋白胨2份，大发汗2份，巨胜子2份，宽筋藤2份，兰香草2份，菊二七2份，水60份。
[0021]实施例3
[0022]—种促进紫杉醇分泌的红豆杉细胞培养基，由以下重量份的成分组成:硝酸钠9份，磷酸氢二钾5份，硫酸镁2.3份，氯化钙1.8份，蛋白胨1.5份，大发汗1.6份，巨胜子1.7份，宽筋藤1.8份，兰香草1.2份，菊三七1.8份，水55份。
[0023]实施例4
[0024]—种促进紫杉醇分泌的红豆杉细胞培养基，由以下重量份的成分组成:硝酸钠
8.8份，磷酸氢二钾5.4份，硫酸镁2.7份，氯化钙1.2份，蛋白胨1.2份，大发汗1.2份，巨胜子1.5份，宽筋藤1.6份，兰香草1.4份，菊三七1.7份，金不换1份，白茅花1.1份，水52份。
[0025]实施例5
[0026]—种促进紫杉醇分泌的红豆杉细胞培养基，由以下重量份的成分组成:硝酸钠
9.4份，磷酸氢二钾4.2份，硫酸镁2.1份，氯化钙1.3份，蛋白胨1.1份，大发汗1份，巨胜子2份，宽筋藤1.9份，兰香草1.2份，菊三七1.9份，金丝草1.3份，藏红花1.2份，白茅花1.6份，水58份。
[0027]实施例6
[0028]—种促进紫杉醇分泌的红豆杉细胞培养基，由以下重量份的成分组成:硝酸钠
8.8份，磷酸氢二钾5.4份，硫酸镁2.7份，氯化钙1.2份，蛋白胨1.2份，大发汗1.2份，巨胜子1.5份，宽筋藤1.6份，兰香草1.4份，菊三七1.7份，金不换1.5份，水55份。
[0029]实施例7
[0030]—种促进紫杉醇分泌的红豆杉细胞培养基，由以下重量份的成分组成:硝酸钠
9.2份，磷酸氢二钾5.7份，硫酸镁2.4份，氯化钙1.5份，蛋白胨1.5份，大发汗1.7份，巨胜子1.7份，宽筋藤1.2份，兰香草1.9份，菊三七2份，藏红花1.8份，水59份。
[0031]实施例8
[0032]—种促进紫杉醇分泌的红豆杉细胞培养基，由以下重量份的成分组成:硝酸钠
8.5份，磷酸氢二钾5.5份，硫酸镁2.1份，氯化钙1.3份，蛋白胨1.7份，大发汗1.6份，巨胜子1.2份，宽筋藤1.1份，兰香草1.4份，菊三七1.5份，金不换1.4份，金丝草1.1份，藏红花1.5份，白茅花1.8份，水57份。
[0033]以上对本发明的实施例进行了详细说明，但所述内容仅为本发明的较佳实施例，并不用以限制本发明。凡在本发明的申请范围内所做的任何修改、等同替换和改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。
【主权项】
1.一种促进紫杉醇分泌的红豆杉细胞培养基，其特征在于包括以下重量份的成分:硝酸钠8?10份，磷酸氢二钾4?6份，硫酸镁2?3份，氯化钙1?2份，蛋白胨1?2份，大发汗1?2份，巨胜子1?2份，宽筋藤1?2份，兰香草1?2份，菊三七1?2份，水50?60份。2.根据权利要求1所述的促进紫杉醇分泌的红豆杉细胞培养基，其特征在于还包括1?2重量份的金不换。3.根据权利要求1所述的促进紫杉醇分泌的红豆杉细胞培养基，其特征在于还包括1?2重量份的金丝草。4.根据权利要求1所述的促进紫杉醇分泌的红豆杉细胞培养基，其特征在于还包括1?2重量份的藏红花。5.根据权利要求1所述的促进紫杉醇分泌的红豆杉细胞培养基，其特征在于还包括1?2重量份的白茅花。6.根据权利要求1所述的促进紫杉醇分泌的红豆杉细胞培养基，其特征在于所述培养基由以下重量份的成分组成:硝酸钠9份，磷酸氢二钾5份，硫酸镁2.5份，氯化钙1.5份，蛋白胨1.5份，大发汗1.5份，巨胜子1.5份，宽筋藤1.5份，兰香草1.5份，菊三七1.5份，水55份。7.根据权利要求1所述的促进紫杉醇分泌的红豆杉细胞培养基，其特征在于所述培养基由以下重量份的成分组成:硝酸钠8.5份，磷酸氢二钾5.5份，硫酸镁2.1份，氯化钙1.3份，蛋白胨1.7份，大发汗1.6份，巨胜子1.2份，宽筋藤1.1份，兰香草1.4份，菊三七1.5份，金不换1.4份，金丝草1.1份，藏红花1.5份，白茅花1.8份，水57份。
【专利摘要】本发明提供了一种促进紫杉醇分泌的红豆杉细胞培养基，该培养基以传统自养培养基提供氮源和磷源，并添加了一定的钙离子，在此基础上意外的发现通过添加特定种类及成分的中药材有助于促进紫杉醇的产率。基于以上有益的发现，本发明通过实验手段优选了大发汗、巨胜子、宽筋藤、兰香草、菊三七、金不换、金丝草、藏红花、白茅花等原本用于人类疾病治疗的中药材成分，所得培养基意外获得了突出的培养效果，使得红豆杉细胞的紫杉醇产率得到显著提升，同时其生产周期更短。本发明以创新性的技术手段获得优越的技术效果，同时成本较低、易于实现，因此具有良好的应用前景。
【IPC分类】C12P17/02, C12N5/04
【公开号】CN105400731
【申请号】CN201510964059
【发明人】夏雪城, 夏新城
【申请人】天津市博爱生物药业有限公司
【公开日】2016年3月16日
【申请日】2015年12月18日