本实用新型属于检测试剂盒技术领域，涉及一种藏系绵羊TMPRSS6基因多态性检测试剂盒。
背景技术：
血红蛋白是氧的载体，而铁在血红蛋白的合成和氧的输送中发挥重要生理作用。研究发现，缺氧、铁代谢调节与红细胞生成之间存在紧密联系。跨膜丝氨酸蛋白酶6(TMPRSS6) 通过控制体内铁调素(肝抗菌肽)的水平来调节体内铁的代谢平衡，对维持正常的红细胞生成和血红蛋白水平发挥重要作用。因此，TMPRSS6基因碱基序列的改变会影响到机体的铁稳态，进而影响到血红蛋白的合成和氧的运输。
藏系绵羊(Tibetan sheep)是我国三大原始绵羊品种之一，长期生活在青藏高原及其毗邻的高寒牧区，对高原低氧环境具有极好的适应性和抗逆性。由于自然和历史的原因，藏系绵羊保持了较为纯正的遗传特性，人工选择对其影响较小，从而使得自然条件下产生的基因突变能够在群体中保留并积累，是典型的低氧模式动物。
目前，现有技术中检测藏系绵羊TMPRSS6基因多态性的试剂原料需多方配备，实验过程分步进行，耗时长，容易污染，准确性不高，所以探索一种检测TMPRSS6基因多态性及测序快速可靠的方法，从分子生物学的角度探索藏系绵羊低氧适应的遗传机制，运用现代生物技术研究其低氧适应相关基因，将对高寒家畜遗传资源的保护、开发和利用提供非常重要的理论基础；也可为准确选育高产耐低氧的畜禽品种寻找低氧分子标记，对高原畜牧业的发展具有重要意义；还可为人类低氧损伤、低氧适应、烧伤、癌症等低氧相关疾病的研究提供基础资料。
技术实现要素：
为了克服现有技术中存在的缺陷，本实用新型提供一种藏系绵羊TMPRSS6基因多态性检测试剂盒，包括盒体1、盒盖2、固定座3、引物试剂瓶4、酶混合物试剂瓶5、去离子水试剂瓶6，固定座3上设置有PCR管7、加样器吸头8。
进一步，所述固定座3还设置有孔9和隔板10，孔9设置用来分别将PCR管7、加样器吸头8固定，以防止遗洒，孔9的形状依据不同PCR管7、加样器吸头8的形状和大小而设置，隔板10用来将引物试剂瓶4、酶混合物试剂瓶5、去离子水试剂瓶6隔开并同定。
所述引物的上游引物序列为：TGGTTCATCCTCCAAATCC，下游引物序列为： CAGCCAGCTTCCACTCG，引物浓度为：12.5pmol/μL。
所述酶混合物包括浓度为2.5mmol/L的dNTPs，10×Taq Buffer(含15mmol/L MgCl2)， 2.5U/μL TaqDNA聚合酶。
本实用新型与现有产品相比，具有如下积极有益的效果：
本试剂盒结构简单、设计合理、使用方便，制造容易、检测过程不易受污染；本试剂盒在检测一种藏系绵羊TMPRSS6基因多态性时具有准确性高，耗时短等优点。
附图说明
图1是一种检测藏系绵羊TMPRSS6基因多态性试剂盒的结构示意图。
具体实施方式
下面结合附图和具体实施方式对本实用新型的技术方案作进一步详细地说明。
如图1所示，本实用新型的一个实施例为一种藏系绵羊TMPRSS6基因多态性检测试剂盒，包括盒体1、盒盖2、固定座3、引物试剂瓶4、酶混合物试剂瓶5、去离子水试剂瓶6、固定座3上设置有PCR管7、加样器吸头8。固定座3还设置有孔9和隔板10。孔9设置用来分别将PCR管7、加样器吸头8固定，以防止遗洒。孔9的形状依据不同PCR管7、加样器吸头8的形状和大小而设置。隔板10用来将引物试剂瓶4、酶混合物试剂瓶5、去离子水试剂瓶6隔开并固定。
所述引物的上游引物序列为：TGGTTCATCCTCCAAATCC，下游引物序列为： CAGCCAGCTTCCACTCG，引物浓度为：12.5pmol/μL。所述酶混合物包括浓度为2.5mmol/L 的dNTPs，10×Taq Buffer(含15mmol/L MgCl2)，2.5U/μL TaqDNA聚合酶。
操作方法：
(1)取模板DNA
取藏系绵羊全血500uL，常规提取DNA，取2uL DNA作为模板。
(2)反应体系
将各反应物质按照如下反应体系进行配比：
(3)反应
将反应体系中各物质混合，按照如下程序反应：
94℃ 8min，1个循环，
94℃ 30sec→61℃ 38sec→72℃ 45sec，35个循环，
72℃ 10min，1个循环，
4℃保存。
1％琼脂糖凝胶电泳检测，EB染色分析，目的带为343bp
(4)TMPRSS6基因SSCP分析
采用30％丙烯酰胺(29∶1)配成10％的聚丙烯酰胺；
300V，预电泳5min(或4℃，30min)；
取3μL PCR产物，加7μL变性上样缓冲液，瞬时离心后，PCR仪中98℃变性10min；
立即取出后置于冰上，冰浴5min后全部上样，并作好点样顺序标志；
室温，170V，电泳3h(4℃，22h)。
将凝胶从玻璃板中取出放入装有蒸馏水的瓷盘中，用蒸馏水漂洗2次，倒去蒸馏水；
向盘中加入固定液(10％的乙醇)浸没凝胶，放在摇床上轻轻摇10～15min，倒去固定液，用蒸馏水漂洗2次，每次10秒钟，倒去蒸馏水；
加入0.1％的硝酸银染色液浸没凝胶，置于摇床轻摇10～15min，回收硝酸银，用蒸馏水漂洗2次，每次15s，倒去蒸馏水；
向瓷盘中加入2％的氢氧化钠(每500mL溶液加1000μL甲醛)显色液浸没凝胶，边摇边观察，直到凝胶上显现清晰的电泳条带；
(5)结果判断
根据SSCP分型结果，将PCR产物送交测序公司直接测序。
综上所述，本实用新型所述的实施方式仅提供一种最佳的方式，本实用新型的技术内容及技术特点已揭示如上，然而熟悉本项技术的人士仍可能基于本实用新型所揭示的内容而作各种不背离本发明创作精神的替换及修饰；因此，本实用新型的保护范围不限于实施例所揭示的技术内容，故凡依本实用新型的形状、构造及原理所做的等效变化，均涵盖在本实用新型的保护范围内。