1.一种产生成熟肌管的方法,该方法包括:
a.提供一个或多个成肌细胞,其中所述成肌细胞来源于人;以及
b.在包含具有一种或多种为了促进成熟肌管产生而特别选择的化合物的培养基的培养物中体外培养所述一个或多个成肌细胞,从而产生表现出两种或更多种以下特征的成熟肌管:(i)每个肌管多于15个细胞核;(ii)长度大于0.5mm;(iii)直径大于6μm;并且(iv)肌管面积大于3,000μm2。
2.根据权利要求1所述的方法,其进一步包括将所述一个或多个成肌细胞在包含一种或多种为了促进成熟肌管产生而特别选择的化合物的培养基中孵育至少12小时。
3.根据权利要求1所述的方法,其进一步包括检测所述培养物中的成熟肌管。
4.根据权利要求1-3中任一项所述的方法,其中所述成熟肌管表现出每个细胞有超过30个细胞核。
5.根据权利要求1-4中任一项所述的方法,其中所述成熟肌管表现出大于4,000μm2的肌管面积。
6.根据权利要求1-5中任一项所述的方法,其中所述成熟肌管表现出大于5,000μm2的肌管面积。
7.根据权利要求1-6中任一项所述的方法,其中所述培养物含有平均肌管面积大于1,000μm2的肌管。
8.根据权利要求1-7中任一项所述的方法,其中所述培养物含有平均肌管面积大于2,000μm2的肌管。
9.根据权利要求1-8中任一项所述的方法,其中所述成熟肌管表现出大于6μm的直径。
10.根据权利要求1-8中任一项所述的方法,其中所述成熟肌管表现出大于10μm的直径。
11.根据权利要求1-8中任一项所述的方法,其中所述成熟肌管表现出大于12μm的直径。
12.根据权利要求1-11中任一项所述的方法,其中所述一种或多种为了促进成熟肌管产生而特别选择的化合物包括一种或多种针对一种或多种以下途径的化合物:细胞周期信号传导途径、dna修复途径、mapk信号传导途径、rtk/pi3k/akt信号传导途径、mtor信号传导途径、g蛋白偶联受体(gpcr)途径和毒蕈碱乙酰胆碱受体(machr)途径。
13.根据权利要求1-12中任一项所述的方法,其中所述一种或多种化合物包括式(i)的化合物:
或其盐,其中
r1选自甲基、氟代、氯代、三氟甲基和二氟甲基;
r2选自苯并咪唑基、苯并噁唑基、苯并噻唑基、3h-吲哚基、苯并呋喃基、苯并噻吩基和1h-茚基;且
r3选自奎宁环基和1,4-二氮杂双环[2.2.2]辛基。
14.根据权利要求1-12中任一项所述的方法,其中所述一种或多种化合物包括式(ii)的化合物:
或其盐,其中
r1选自甲基、卤素和卤代甲基;且
r2是包含0-4个独立地选自o、s或n的杂原子的5+6双环稠合环系。
15.根据权利要求1-12中任一项所述的方法,其中所述一种或多种化合物包括式(iii)的化合物:
或其盐。
16.根据权利要求1-15中任一项所述的方法,其中在没有针对成熟肌管进行纯化或选择的情况下,表现出所述两种或更多种特征的成熟肌管构成培养物的至少50%。
17.根据权利要求16所述的方法,其中在没有针对成熟肌管进行纯化或选择的情况下,表现出所述两种或更多种特征的成熟肌管构成培养物的至少70%。
18.根据权利要求1所述的方法,其中在没有针对成熟肌管进行纯化或选择的情况下,表现出所述两种或更多种特征的成熟肌管构成培养物的至少60%,并且表现出大于10μm的直径。
19.根据权利要求1所述的方法,其中在没有针对成熟肌管进行纯化或选择的情况下,表现出所述两种或更多种特征的成熟肌管构成培养物的至少60%,并且表现出大于12μm的直径。
20.根据权利要求1、18或19所述的方法,其中在没有针对成熟肌管进行纯化或选择的情况下,表现出所述两种或更多种特征的成熟肌管构成培养物的至少60%,并且每个肌管包含至少20个细胞核。
21.根据权利要求1-20中任一项所述的方法,其中所述一种或多种为了促进成熟肌管产生而特别选择的化合物包括一种或多种chk1抑制剂。
22.根据权利要求21所述的方法,其中所述一种或多种chk1抑制剂包括chir-124。
23.根据权利要求1-20中任一项所述的方法,其中所述一种或多种为了促进成熟肌管产生而特别选择的化合物选自:mtor抑制剂、mek抑制剂、raf抑制剂、gpr119激动剂、聚adp-核糖聚合酶(parp)抑制剂、s1p1激动剂和machr激动剂。
24.根据权利要求1-20中任一项所述的方法,其中所述一种或多种为了促进成熟肌管产生而特别选择的化合物选自:雷帕霉素、mek162、索拉非尼、gsk1292263、tc-g1006、匹鲁卡品、阿托品和talazoparib。
25.根据权利要求1-24中任一项所述的方法,其中所述一个或多个成肌细胞是原代成肌细胞。
26.根据权利要求1-25中任一项所述的方法,其中所述一个或多个成肌细胞是通过在体外分化卫星细胞而生成的。
27.根据权利要求1-26中任一项所述的方法,其中所述成熟肌管是成熟的肌管样细胞。
28.根据权利要求26所述的方法,其中所述卫星细胞是通过在体外分化多能干细胞而生成的。
29.根据权利要求1-28中任一项所述的方法,其进一步包括使卫星细胞与化合物接触以生成所述一个或多个成肌细胞。
30.根据权利要求29所述的方法,其进一步包括使多能干细胞与一种或多种化合物接触以生成所述卫星细胞。
31.根据权利要求30所述的方法,其中所述成熟肌管在使所述多能干细胞与所述一种或多种化合物接触以生成所述卫星细胞起不到30天生成。
32.根据权利要求30所述的方法,其中所述成熟肌管在使所述多能干细胞与所述一种或多种化合物接触以生成所述卫星细胞起25天内生成。
33.根据权利要求30所述的方法,其中所述成熟肌管在使所述多能干细胞与所述一种或多种化合物接触以生成所述卫星细胞起不到30天生成,并且其中所述成熟肌管以每个多能干细胞至少五个成熟肌管的速率生成。
34.根据权利要求30所述的方法,其中所述成熟肌管在使所述多能干细胞与所述一种或多种化合物接触以生成所述卫星细胞起不到30天生成,并且其中所述成熟肌管以每个多能干细胞至少50个成熟肌管的速率生成。
35.通过任一种前述方法产生的组合物。
36.一种包含一个或多个衍生自人细胞的成熟肌管样细胞的组合物,其中所述一个或多个成熟肌管样细胞表现出两种或更多种以下特征:(i)每个成熟肌管样细胞多于15个细胞核;(ii)长度大于0.5mm;(iii)直径大于6μm;并且(iv)肌管面积大于3,000μm2。
37.根据权利要求35或36所述的组合物,其中所述组合物包含平均肌管面积大于1,000μm2的肌管。
38.根据权利要求35、36或37所述的组合物,其中所述组合物包含平均肌管面积大于2,000μm2的肌管。
39.根据权利要求35-38中任一项所述的组合物,其中所述一个或多个成熟肌管样细胞表现出大于3,000μm2的肌管面积。
40.根据权利要求39所述的组合物,其中所述一个或多个成熟肌管样细胞表现出大于4,000μm2的肌管面积。
41.根据权利要求39所述的组合物,其中所述一个或多个成熟肌管样细胞表现出大于5,000μm2的肌管面积。
42.根据权利要求35-41中任一项所述的组合物,其中所述一个或多个成熟肌管样细胞表现出每个细胞有超过30个细胞核。
43.根据权利要求35-42中任一项所述的组合物,其中所述一个或多个成熟肌管样细胞表现出大于6μm的直径。
44.根据权利要求35-43中任一项所述的组合物,其中所述一个或多个成熟肌管样细胞表现出大于10μm的直径。
45.根据权利要求35-43中任一项所述的组合物,其中所述一个或多个成熟肌管样细胞表现出大于12μm的直径。
46.根据权利要求35-45中任一项所述的组合物,其中所述一个或多个成熟肌管样细胞是通过在体外分化一个或多个成肌细胞而生成的。
47.根据权利要求35-46中任一项所述的组合物,其中所述一个或多个成熟肌管样细胞是mychmyhc+、myog+或两者兼具。
48.根据权利要求35-46中任一项所述的组合物,其中所述一个或多个成熟肌管样细胞包含有纹纤维。
49.根据权利要求35-48中任一项所述的组合物,其中所述一个或多个成熟肌管样细胞能够自发颤搐。
50.一种治疗具有肌肉缺乏的受试者的方法,其包括:用一种或多种能够促进该受试者中成熟肌管生成的化合物治疗该受试者,从而治疗所述具有肌肉缺乏的受试者。
51.根据权利要求50所述的方法,其进一步包括向所述受试者施用多个细胞,所述细胞选自:多能干细胞、卫星细胞、成肌细胞、卫星样细胞、成肌细胞样细胞及其任意组合。
52.一种治疗具有肌肉缺乏的受试者的方法,其包括:
a)获得通过权利要求1-34的任何方法产生的成熟肌管;以及
b)将所述成熟肌管引入所述具有肌肉缺乏的受试者中。
53.根据权利要求52所述的方法,其进一步包括向所述受试者施用一种或多种化合物。
54.根据权利要求50-51或53中任一项所述的方法,其中所述一种或多种化合物包括检查点抑制剂。
55.根据权利要求54所述的方法,其中所述检查点抑制剂是检查点激酶1(chk1)抑制剂。
56.根据权利要求55所述的方法,其中所述chk1抑制剂是chir-124。
57.根据权利要求50-51或53中任一项所述的方法,其中所述一种或多种化合物包括式(i)的化合物:
或其盐,其中
r1选自甲基、氟代、氯代、三氟甲基和二氟甲基;
r2选自苯并咪唑基、苯并噁唑基、苯并噻唑基、3h-吲哚基、苯并呋喃基、苯并噻吩基和1h-茚基;且
r3选自奎宁环基和1,4-二氮杂双环[2.2.2]辛基。
58.根据权利要求50-51或53中任一项所述的方法,其中所述一种或多种化合物包括式(ii)的化合物:
或其盐,其中
r1选自甲基、卤素和卤代甲基;且
r2是包含0-4个独立地选自o、s或n的杂原子的5+6双环稠合环系。
59.根据权利要求50-51或53中任一项所述的方法,其中所述一种或多种化合物包括式(iii)的化合物:
或其盐。
60.根据权利要求50-59中任一项所述的方法,其中所述肌肉缺乏由肌营养不良引起。
61.根据权利要求60所述的方法,其中所述肌肉缺乏由杜氏肌营养不良引起。
62.根据权利要求50-59中任一项所述的方法,其中所述肌肉缺乏由恶病质或少肌症引起。
63.根据权利要求51-62中任一项所述的方法,其中在适当情况下,所述细胞或成熟肌管在被引入所述具有肌肉缺乏的受试者之前被移植在支架上。
64.根据权利要求51-63中任一项所述的方法,其中在将所述细胞或成熟肌管引入所述具有肌肉缺乏的受试者之后,所述具有肌肉缺乏的受试者不会对所述细胞产生显著的免疫应答。
65.根据权利要求51-64中任一项所述的方法,其中所述细胞或成熟肌管来源于所述具有肌肉缺乏的受试者。
66.根据权利要求50-64中任一项所述的方法,其中所述一种或多种化合物包括免疫抑制药物或抗生素。
67.根据权利要求53所述的方法,其中所述一种或多种化合物包括至少一种能够在体内将成肌细胞分化为成熟肌管的化合物。
68.根据前述权利要求中任一项所述的方法,其中所述一种或多种化合物是至少一种针对一种或多种以下途径的化合物:细胞周期信号传导途径、dna修复途径、mapk信号传导途径、pi3k/akt信号传导途径、mtor信号传导途径、g蛋白偶联受体(gpcr)途径和毒蕈碱乙酰胆碱受体(machr)途径。
69.根据前述权利要求中任一项所述的方法,其中所述一种或多种化合物选自:mtor抑制剂、mek抑制剂、raf抑制剂、gpr119激动剂、聚adp-核糖聚合酶(parp)抑制剂、s1p1激动剂和machr激动剂。
70.根据前述权利要求中任一项所述的方法,其中所述一种或多种化合物选自:雷帕霉素、mek162、索拉非尼、gsk1292263、tc-g1006、匹鲁卡品、阿托品和talazoparib。