肌肉谱系细胞的改善产生及其治疗用途的制作方法

相关申请本申请要求于2016年10月26日提交的第62/413,416号美国临时专利申请的权益，该美国临时申请通过引用整体并入本文。
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：在健康的肌肉发育过程中，成肌细胞(通常是原始肌细胞)可以增殖和/或分化，然后融合形成被称为肌管的多核纤维。成熟的或成体样肌管通常是高度多核的并且相对较厚且较长，特别与未成熟的肌管相比。成熟的肌管也可以形成分支结构，并且一般具有被细胞核和肌浆占据的中心核心，这可以使细胞具有管状外观。有趣的是，体内的成熟肌管往往在对生理需求变化的响应或对疾病的响应方面具有高度适应性，并且能够经历大小(肥大或萎缩)和代谢能力的表型变化(例如，从依赖于高度氧化途径到高度糖酵解途径)。体内的肌纤维也可以表现为慢颤搐或快颤搐形式。慢颤搐纤维往往依赖于有氧呼吸(糖酵解和krebs循环)来促进肌肉收缩，并且对于长期耐力(例如，长跑)和姿势支撑是理想的。慢颤搐纤维通常具有相对较高的氧需求，并且通常具有大量的线粒体和高浓度的肌红蛋白——在血液中发现的一种氧结合蛋白质，其使肌肉呈现微红色。相反，快颤搐纤维往往依赖于无氧呼吸(仅糖酵解)来促进肌肉收缩，并且对于短时间的快速收缩是理想的，并且对于快速的运动爆发是有用的。发育性和退行性的肌肉疾病和病症都可引起由于肌细胞减少或死亡而造成的肌肉功能的逐渐或突然丧失，以及由于发育性疾病造成的肌肉发育减少。先天性肌病是呈现这些特征的肌肉疾病的实例。肌肉损失还可由于衰老、疾病治疗或许多其它原因而发生。这些类型的肌肉损失的实例包括少肌症和恶病质。本领域需要针对各种类型肌肉损失的疗法。技术实现要素：在一些方面，本公开提供了一种生成成熟肌管的方法，该方法包括：(a)提供一个或多个成肌细胞，其中所述成肌细胞来源于人；以及(b)在包含具有一种或多种为了促进成熟肌管产生而特别选择的化合物的培养基的培养物中体外培养所述一个或多个成肌细胞，从而产生表现出两种或更多种以下特征的成熟肌管：(i)每个肌管多于15个细胞核；(ii)长度大于0.5mm；(iii)直径大于6μm；并且(iv)肌管面积大于3,000μm2。在一些实施方案中，该方法进一步包括将所述一个或多个成肌细胞在包含一种或多种为了促进成熟肌管产生而特别选择的化合物的培养基中孵育至少12小时。在一些实施方案中，该方法进一步包括检测所述培养物中的成熟肌管。在一些实施方案中，所述成熟肌管表现出每个细胞有多于15个细胞核。在一些实施方案中，所述成熟肌管表现出每个细胞有多于20个细胞核。在一些实施方案中，所述成熟肌管表现出每个细胞有多于30个细胞核。在一些实施方案中，所述成熟肌管表现出每个细胞有多于50个细胞核。在一些实施方案中，所述成熟肌管表现出大于4,000μm2的肌管面积。在一些实施方案中，所述成熟肌管表现出大于5,000μm2的肌管面积。在一些实施方案中，所述培养物含有平均肌管面积大于1,000μm2的肌管。在一些实施方案中，所述培养物含有平均肌管面积大于1,500μm2的肌管。在一些实施方案中，所述培养物含有平均肌管面积大于2,000μm2的肌管。在一些实施方案中，所述成熟肌管表现出大于6μm的直径。在一些实施方案中，所述成熟肌管表现出大于10μm的直径。在一些实施方案中，所述成熟肌管表现出大于12μm的直径。在一些实施方案中，所述成熟肌管表现出大于14μm的直径。在一些实施方案中，所述一种或多种为了促进成熟肌管产生而特别选择的化合物包括一种或多种针对一种或多种以下途径的化合物：细胞周期信号传导途径、dna修复途径、mapk信号传导途径、rtk/pi3k/akt信号传导途径、mtor信号传导途径、g蛋白偶联受体(gpcr)途径和毒蕈碱乙酰胆碱受体(machr)途径。在一些实施方案中，所述一种或多种化合物包括式(i)的化合物：或其盐，其中r1选自甲基、氟代、氯代、三氟甲基和二氟甲基；r2选自苯并咪唑基、苯并噁唑基、苯并噻唑基、3h-吲哚基、苯并呋喃基、苯并噻吩基和1h-茚基；且r3选自奎宁环基和1,4-二氮杂双环[2.2.2]辛基。在一些实施方案中，所述一种或多种化合物包括式(ii)的化合物：或其盐，其中r1选自甲基、卤素和卤代甲基；且r2是包含0-4个独立地选自o、s或n的杂原子的5+6双环稠合环系。在一些实施方案中，所述一种或多种化合物包括式(iii)的化合物：或其盐。在一些实施方案中，在没有针对成熟肌管进行纯化或选择的情况下，表现出所述两种或更多种特征的成熟肌管构成培养物的至少50％。在一些实施方案中，在没有针对成熟肌管进行纯化或选择的情况下，表现出所述两种或更多种特征的成熟肌管构成培养物的至少70％。在一些实施方案中，在没有针对成熟肌管进行纯化或选择的情况下，表现出所述两种或更多种特征的成熟肌管构成培养物的至少60％，并且表现出大于10μm的直径。在一些实施方案中，在没有针对成熟肌管进行纯化或选择的情况下，表现出所述两种或更多种特征的成熟肌管构成培养物的至少60％，并且表现出大于12μm的直径。在一些实施方案中，在没有针对成熟肌管进行纯化或选择的情况下，表现出所述两种或更多种特征的成熟肌管构成培养物的至少60％，并且每个肌管包含至少20个细胞核。在一些实施方案中，所述一种或多种为了促进成熟肌管产生而特别选择的化合物包括一种或多种chk1抑制剂。在一些实施方案中，所述一种或多种chk1抑制剂包括chir-124。在一些实施方案中，所述一种或多种为了促进成熟肌管产生而特别选择的化合物选自：mtor抑制剂、mek抑制剂、raf抑制剂、gpr119激动剂、聚adp-核糖聚合酶(parp)抑制剂、s1p1激动剂和machr激动剂。在一些实施方案中，所述一种或多种为了促进成熟肌管产生而特别选择的化合物选自：雷帕霉素、mek162、索拉非尼、gsk1292263、tc-g1006、匹鲁卡品、阿托品和talazoparib。在一些实施方案中，所述一个或多个成肌细胞是原代成肌细胞。在一些实施方案中，所述一种或多种化合物包括匹鲁卡品。在一些实施方案中，所述一个或多个成肌细胞是通过在体外分化卫星细胞而生成的。在一些实施方案中，所述成熟肌管是成熟的肌管样细胞。在一些实施方案中，所述卫星细胞是通过在体外分化多能干细胞而生成的。在一些实施方案中，所述方法进一步包括使卫星细胞与化合物接触以生成所述一个或多个成肌细胞。在一些实施方案中，所述方法进一步包括使多能干细胞与一种或多种化合物接触以生成所述卫星细胞。在一些实施方案中，所述成熟肌管在使所述多能干细胞与所述一种或多种化合物接触以生成所述卫星细胞起不到30天生成。在一些实施方案中，所述成熟肌管在使所述多能干细胞与所述一种或多种化合物接触以生成所述卫星细胞起25天内生成。在一些实施方案中，所述成熟肌管在使所述多能干细胞与所述一种或多种化合物接触以生成所述卫星细胞起不到30天生成，并且其中所述成熟肌管以每个多能干细胞至少五个成熟肌管的速率生成。在一些实施方案中，所述成熟肌管在使所述多能干细胞与所述一种或多种化合物接触以生成所述卫星细胞起不到30天生成，并且其中所述成熟肌管以每个多能干细胞至少50个成熟肌管的速率生成。在一些实施方案中，与在不存在一种或多种化合物的情况下生成的肌管细胞相比，所述成熟的肌管样细胞包含大于25％、50％或100％水平的快速mhc。在一些方面，本公开提供了通过任一前述方法产生的组合物。在一些实施方案中，该组合物是细胞培养物。在一些实施方案中，该组合物包含分离的或纯化的细胞。在一些方面，本公开提供了包含一个或多个衍生自人细胞的成熟肌管样细胞的组合物，其中所述一个或多个成熟肌管样细胞表现出两种或更多种以下特征：(i)每个成熟肌管样细胞多于15个细胞核；(ii)长度大于0.5mm；(iii)直径大于6μm；并且(iv)肌管面积大于3,000μm2。在一些实施方案中，所述组合物包含平均肌管面积大于1,000μm2的肌管。在一些实施方案中，所述组合物包含平均肌管面积大于2,000μm2的肌管。在一些实施方案中，所述一个或多个成熟肌管样细胞表现出大于3,000μm2的肌管面积。在另一实施方案中，所述一个或多个成熟肌管样细胞表现出大于4,000μm2的肌管面积。在一些实施方案中，所述一个或多个成熟肌管样细胞表现出大于5,000μm2的肌管面积。在一些实施方案中，所述一个或多个成熟肌管样细胞表现出每个细胞有多于30个细胞核。在一些实施方案中，所述一个或多个成熟肌管样细胞表现出大于6μm的直径。在一些实施方案中，所述一个或多个成熟肌管样细胞表现出大于10μm的直径。在一些实施方案中，所述一个或多个成熟肌管样细胞表现出大于12μm的直径。在一些实施方案中，所述一个或多个成熟肌管样细胞表现出大于14μm的直径。在一些实施方案中，所述一个或多个成熟肌管样细胞是通过在体外分化一个或多个成肌细胞而生成的。在一些实施方案中，所述一个或多个成熟肌管样细胞是myhc+、myog+或两者兼具。在一些实施方案中，所述一个或多个成熟肌管样细胞包含有纹纤维。在一些实施方案中，所述一个或多个成熟肌管样细胞能够自发颤搐。在另外的方面，本公开提供了一种治疗具有肌肉缺乏的受试者(或促进具有肌肉缺乏的受试者中的成熟肌管生成)的方法，其包括：用一种或多种能够促进该受试者中成熟肌管生成的化合物治疗该受试者，从而治疗所述具有肌肉缺乏的受试者。在一些实施方案中，该方法进一步包括向该受试者施用多个细胞，所述细胞选自：多能干细胞、卫星细胞、成肌细胞、卫星样细胞、成肌细胞样细胞及其任意组合。在一些方面，本公开提供了一种治疗具有肌肉缺乏的受试者的方法，其包括：(a)获得通过本文所述的任何方法产生的成熟肌管；以及(b)将所述成熟肌管引入所述具有肌肉缺乏的受试者中。在本文提供的任何治疗方法(或促进受试者中成熟肌管产生的方法)的一些实施方案中，该方法进一步包括向该受试者施用一种或多种化合物。在一些实施方案中，所述一种或多种化合物包括检查点抑制剂。在一些实施方案中，所述检查点抑制剂是检查点激酶1(chk1)抑制剂。在一些实施方案中，该chk1抑制剂是chir-124。在一些实施方案中，所述一种或多种化合物包括式(i)的化合物：或其盐，其中r1选自甲基、氟代、氯代、三氟甲基和二氟甲基；r2选自苯并咪唑基、苯并噁唑基、苯并噻唑基、3h-吲哚基、苯并呋喃基、苯并噻吩基和1h-茚基；且r3选自奎宁环基和1,4-二氮杂双环[2.2.2]辛基。在一些实施方案中，所述一种或多种化合物包括式(ii)的化合物：或其盐，其中r1选自甲基、卤素和卤代甲基；且r2是包含0-4个独立地选自o、s或n的杂原子的5+6双环稠合环系。在另一个实施方案中，所述一种或多种化合物包括式(iii)的化合物：或其盐。在一些实施方案中，所述肌肉缺乏由肌营养不良引起。在一些实施方案中，所述肌肉缺乏由杜氏肌营养不良引起。在一些实施方案中，所述肌肉缺乏由恶病质或少肌症引起。在一些实施方案中，在适当情况下，所述细胞或成熟肌管在被引入所述具有肌肉缺乏的受试者之前被移植在支架上。在一些实施方案中，在将所述细胞或成熟肌管引入所述具有肌肉缺乏的受试者之后，所述具有肌肉缺乏的受试者不会对所述细胞产生显著的免疫应答。在一些实施方案中，所述细胞或成熟肌管来源于所述具有肌肉缺乏的受试者。在一些实施方案中，所述一种或多种化合物包括免疫抑制药物或抗生素。在一些实施方案中，所述一种或多种化合物包括至少一种能够在体内将成肌细胞分化为成熟肌管的化合物。在一些实施方案中，所述一种或多种化合物是至少一种针对一种或多种以下途径的化合物：细胞周期信号传导途径、dna修复途径、mapk信号传导途径、pi3k/akt信号传导途径、mtor信号传导途径、g蛋白偶联受体(gpcr)途径和毒蕈碱乙酰胆碱受体(machr)途径。在一些实施方案中，所述一种或多种化合物选自：mtor抑制剂、mek抑制剂、raf抑制剂、gpr119激动剂、聚adp-核糖聚合酶(parp)抑制剂、s1p1激动剂和machr激动剂。在一些实施方案中，所述一种或多种化合物选自：雷帕霉素、mek162、索拉非尼、gsk1292263、tc-g1006、匹鲁卡品、阿托品和talazoparib。在本发明的一些方面，本公开提供了生成成熟肌管细胞的方法，其包括：(a)提供一个或多个成肌细胞，其中所述成肌细胞来源于人；(b)在包含一种或多种为了促进成熟肌管产生而特别选择的化合物的培养基中体外培养所述一个或多个成肌细胞；(c)将所述一个或多个成肌细胞在包含一种或多种为了促进成熟肌管产生而特别选择的化合物的培养基中孵育至少12小时；以及(d)检测培养物中的成熟肌管，其中所述成熟肌管表现出两种或多种以下特征：(i)多于15个细胞核；(ii)长度大于0.5mm；(iii)直径大于6μm；并且(iv)肌管面积大于3,000μm2。在本发明的一些方面，本公开提供了生成成熟肌管细胞的方法，其包括：(a)提供一个或多个成肌细胞，其中所述成肌细胞来源于人；以及(b)在包含一种或多种为了促进成熟肌管产生而特别选择的化合物的培养基中体外培养所述一个或多个成肌细胞，从而产生表现出两种或更多种以下特征的成熟肌管：(i)多于15个细胞核；(ii)长度大于0.5mm；(iii)直径大于6μm；并且(iv)肌管面积大于3,000μm2。在任何前述方法的一些情况下，所述一种或多种为了促进成熟肌管产生而特别选择的化合物包括一种或多种针对一种或多种以下途径的化合物：细胞周期信号传导途径、dna修复途径、mapk信号传导途径、rtk/pi3k/akt信号传导途径、mtor信号传导途径、g蛋白偶联受体(gpcr)途径和毒蕈碱乙酰胆碱受体(machr)途径。在任何前述方法的一些情况下，所述一种或多种为了促进成熟肌管产生而特别选择的化合物包括一种或多种chk1抑制剂。在任何前述方法的一些情况下，所述一种或多种chk1抑制剂包括chir-124。在任何前述方法的一些情况下，所述一种或多种为了促进成熟肌管产生而特别选择的化合物选自：mtor抑制剂、mek抑制剂、raf抑制剂、gpr119激动剂、聚adp-核糖聚合酶(parp)抑制剂、s1p1激动剂和machr激动剂。在任何前述方法的一些情况下，所述一个或多个成肌细胞是原代成肌细胞。在任何前述方法的一些情况下，所述一个或多个成肌细胞是通过在体外分化卫星细胞而生成的。在任何前述方法的一些情况下，所述成熟肌管是成熟的肌管样细胞。在任何前述方法的一些情况下，所述卫星细胞是通过在体外分化多能干细胞而生成的。在任何前述方法的一些情况下，所述方法进一步包括使卫星细胞与化合物接触以生成步骤a中提供的一个或多个成肌细胞。在任何前述方法的一些情况下，所述方法进一步包括使多能干细胞与一种或多种化合物接触以生成卫星细胞。在任何前述方法的一些情况下，所述成熟肌管在使所述多能干细胞与所述一种或多种化合物接触以生成所述卫星细胞起不到30天生成。在任何前述方法的一些情况下，所述成熟肌管在使所述多能干细胞与所述一种或多种化合物接触以生成所述卫星细胞起25天内生成。在任何前述方法的一些情况下，所述成熟肌管在使所述多能干细胞与所述一种或多种化合物接触以生成所述卫星细胞起不到30天生成，并且其中所述成熟肌管以每个多能干细胞至少五个成熟肌管的速率生成。在任何前述方法的一些情况下，所述成熟肌管在使所述多能干细胞与所述一种或多种化合物接触以生成所述卫星细胞起不到30天生成，并且其中所述成熟肌管以每个多能干细胞至少50个成熟肌管的速率生成。在本文提供的组合物的一些方面，本公开提供了包含一个或多个成熟肌管样细胞的组合物，其中所述一个或多个成熟肌管样细胞表现出两种或更多种以下特征：(i)多于15个细胞核；(ii)长度大于0.5mm；(iii)直径大于6μm；并且(iv)肌管面积大于3,000μm2。在任何前述组合物的一些情况下，所述一个或多个成熟肌管样细胞是mych+和/或myog+。在任何前述组合物的一些情况下，所述一个或多个成熟肌管样细胞包含有纹纤维。在任何前述组合物的一些情况下，所述一个或多个成熟肌管样细胞能够自发颤搐。在本文提供的方法的一些方面，本公开提供了治疗具有肌肉缺乏的受试者的方法，其包括：(a)获得通过权利要求1-15的任一方法产生的成熟肌管；以及(b)将细胞引入具有肌肉缺乏的受试者中。在任何前述方法的一些情况下，所述肌肉缺乏是由肌营养不良引起的。在任何前述方法的一些情况下，所述肌肉缺乏是由杜氏肌营养不良引起的。在任何前述方法的一些情况下，所述肌肉缺乏是由恶病质或少肌症引起的。在任何前述方法的一些情况下，所述成熟肌管在被引入所述具有肌肉缺乏的受试者之前被移植在支架上。在任何前述方法的一些情况下，在将所述成熟肌管引入所述具有肌肉缺乏的受试者之后，所述具有肌肉缺乏的受试者不会对所述细胞产生显著的免疫应答。在任何前述方法的一些情况下，所述成熟肌管来源于所述具有肌肉缺乏的受试者。在任何前述方法的一些情况下，所述方法进一步包括向所述受试者施用药物。在任何前述方法的一些情况下，所述药物是免疫抑制药物或抗生素。在任何前述方法的一些情况下，所述药物包括至少一种能够在体内将成肌细胞分化为成熟肌管的化合物。在任何前述方法的一些情况下，所述至少一种能够在体内将成肌细胞分化为成熟肌管的化合物是至少一种针对一种或多种以下途径的化合物：细胞周期信号传导途径、dna修复途径、mapk信号传导途径、pi3k/akt信号传导途径、mtor信号传导途径、g蛋白偶联受体(gpcr)途径和毒蕈碱乙酰胆碱受体(machr)途径。在任何前述方法的一些情况下，所述至少一种能够在体内将成肌细胞分化为成熟肌管的化合物包括一种或多种chk1抑制剂。在任何前述方法的一些情况下，所述chk1抑制剂是chir-124。在任何前述方法的一些情况下，所述至少一种能够在体内将成肌细胞分化为成熟肌管的化合物选自：mtor抑制剂、mek抑制剂、raf抑制剂、gpr119激动剂、聚adp-核糖聚合酶(parp)抑制剂、s1p1激动剂和machr激动剂。在任何前述方法的一些情况下，所述成熟肌管表现出的两种或更多种特征包括大于3,000μm2的肌管面积。在任何前述方法的一些情况下，所述成熟肌管表现出的两种或更多种特征包括大于4,000μm2的肌管面积。在任何前述方法的一些情况下，所述成熟肌管表现出的两种或更多种特征包括大于5,000μm2的肌管面积。在任何前述方法的一些情况下，在没有针对成熟肌管进行纯化或选择的情况下，表现出所述两种或更多种特征的成熟肌管构成培养物的至少50％。在任何前述方法的一些情况下，在没有针对成熟肌管进行纯化或选择的情况下，表现出所述两种或更多种特征的成熟肌管构成培养物的至少70％。援引并入本说明书中提及的所有出版物、专利和专利申请的全部内容通过引用整体并入本文，其程度如同具体且单独指出每个单独的出版物、专利或专利申请均通过引用而并入。附图说明本发明的新特征在随附的权利要求中具体阐述。通过参考以下对在其中利用到本发明原理的示例说明性实施方案加以阐述的详细描述和附图，将会获得对本发明的特征和优点更好的理解，在附图中：图1是描述在体外产生成熟肌管的方法及其用途的概述。图2是用改善肌肉缺乏的化合物治疗具有肌肉缺乏的受试者的方法的概述。图3是根据本公开内容的实施方案，从多能干细胞向肌管分化的四个阶段的图示。图4a、4b、4c、4d、4e和4f显示了在肌管形成试验中使用的代表性激酶抑制剂分子，它们针对参与细胞周期信号传导和dna修复途径的激酶。图5a和5b显示了在肌管形成试验中使用的代表性聚adp-核糖聚合酶(parp)抑制剂分子。图6a和6b显示了在肌管形成试验中使用的代表性小分子，它们针对参与pi3k/akt、mtor和mapk信号传导途径的分子。图7a和7b显示了在肌管形成试验中使用的代表性小分子，它们是g蛋白偶联受体信号传导的调节剂。图8a和8b显示了在肌管形成试验中使用的代表性小分子，它们是毒蕈碱乙酰胆碱受体的调节剂。图9a、9b和9c显示了代表性细胞周期信号传导级联9a，gpcr信号传导途径9b；以及pi3k/akt、mtor和mapk信号传导途径9c。图10a、10b、10c和10d是用肌管培养基中以不同剂量测试的chlr-124(chk1抑制剂)处理5天后，分化为肌管的干细胞衍生的成肌细胞的性质的免疫荧光图像和伴随的图形描绘。将细胞固定并用肌球蛋白重链特异性抗体染色；并用hoechst对细胞核进行复染。细胞以20x放大倍数显示，10a。经染色的细胞还通过图像分析进行定量；条形图中描绘的性质是肌管直径10b(上图)，具有多个细胞核的细胞的数目10b(下图)，具有多个细胞核的细胞的分解10c(上图)，图像中总细胞的总肌管面积10c(下图)，各个细胞的肌管面积10d(上图)，以及各个细胞的平均面积或归一化面积10d(下图)。图11描绘了用肌管培养基中以不同剂量测试的雷帕霉素(mtor抑制剂)处理5天后，分化为肌管的干细胞衍生的成肌细胞的免疫荧光图像。将细胞固定并用肌球蛋白重链特异性抗体染色；并用hoechst对细胞核进行复染。这些细胞以20x放大倍数显示(上图)。在存在或不存在雷帕霉素的情况下分化的肌管的直径还通过图像定量来确定，并在条形图(下图)中表示。图12描绘了用肌管培养基中以不同剂量测试的mek-162(mek抑制剂)处理5天后，分化为肌管的干细胞衍生的成肌细胞的免疫荧光图像。将细胞固定并用肌球蛋白重链特异性抗体染色，并用hoechst对细胞核进行复染。这些细胞以20x放大倍数显示。图13描绘了用肌管培养基中以不同剂量测试的索拉非尼(raf抑制剂)处理5天后，分化为肌管的干细胞衍生的成肌细胞的免疫荧光图像，以及经处理和未处理的细胞的肌管直径的图形描绘。将细胞固定并用肌球蛋白重链特异性抗体染色，并用hoechst对细胞核进行复染。这些细胞以20x放大倍数显示(上图)。在存在或不存在索拉非尼的情况下分化的肌管的直径还通过图像定量来确定，并且显示为条形图(下图)。图14描绘了用肌管培养基中以不同剂量测试的gsk1292263(gpr119激动剂)处理5天后，分化为肌管的干细胞衍生的成肌细胞的免疫荧光图像。将细胞固定并用肌球蛋白重链特异性抗体染色，并用hoechst对细胞核进行复染。这些细胞以20x放大倍数显示。图15描绘了用肌管培养基中以不同剂量测试的tc-g1006(s1p1激动剂)处理5天后，分化为肌管的干细胞衍生的成肌细胞的免疫荧光图像(上图)，以及具有多于一个细胞核的细胞的数目的图形描绘(下图)。将细胞固定并用肌球蛋白重链特异性抗体染色，并用hoechst对细胞核进行复染。细胞以20x放大倍数显示。图16描绘了用肌管培养基中以不同剂量测试的匹鲁卡品(非特异性machr激动剂)处理5天后，分化为肌管的干细胞衍生的成肌细胞的免疫荧光图像(上图)，以及用三种不同浓度的匹鲁卡品处理的细胞的肌管面积的图形描绘(下图)。将细胞固定并用肌球蛋白重链特异性抗体染色，并用hoechst对细胞核进行复染。这些细胞以20x放大倍数显示。图17描绘了用肌管培养基中以不同剂量测试的阿托品(machr拮抗剂)处理5天后，分化为肌管的干细胞衍生的成肌细胞的免疫荧光图像(上图)，以及图像中细胞的总肌管面积的图形描绘(左下图)，以及经处理和未处理的细胞的肌管直径的图形描绘(右下图)。将细胞固定并用肌球蛋白重链特异性抗体染色，并用hoechst对细胞核进行复染。这些细胞以20x放大倍数显示。图18描绘了用肌管培养基中以不同剂量测试的talazoparib(parp抑制剂)处理5天后，分化为肌管的干细胞衍生的成肌细胞的免疫荧光图像(上图)，以及图像中细胞的总肌管面积的图形描绘(右下图)，以及经处理和未处理的细胞的肌管直径的图形描绘(左下图)。将细胞固定并用肌球蛋白重链特异性抗体染色，并用hoechst对细胞核进行复染。这些细胞以20x放大倍数显示。图19是条形图，其显示由与chir-124一起培养(sii/siii+chir)或不与chir-124一起培养(sii/siii)的各种疾病影响干细胞系形成肌管。示出了mhc面积与细胞核之比(um2)，其通过测量每个视野的面积除以该视野内的细胞核数来计算。所有测试的细胞系在使用chir124时均显示出更高的mhc面积/细胞核比率。图20是条形图，其描绘了在与chir-124一起培养(sii/siii+chir)或不与chir-124一起培养(sii/siii)的肌管中表达的不同肌球蛋白重链类型的基于western印迹的表达分析。emhc，胚胎肌球蛋白重链(myh3)；fmhc，胎儿肌球蛋白重链(myh7)；pmhc，围产期肌球蛋白重链(pmhc)；快速mhc，快肌球蛋白重链，其为肌管的最成熟的mhc。具体实施方式i.概述本公开提供了用于产生成熟肌管的独特方法，所述成熟肌管一般是细长的、厚的、多核的细胞，也被称为骨骼肌细胞或肌纤维。所述方法通常包括使成肌细胞与一种或多种化合物接触，所述化合物通常通过成肌细胞的分化和/或增殖使成肌细胞形成成熟肌管。所述方法通常涉及一步过程，因此往往是高效的。在一些情况下，所述方法可包括使成肌细胞或成肌细胞样细胞(例如，体内生成的成肌细胞)与包含一种或多种分化化合物(例如，chk1抑制剂)的分化介质接触。通常，所述一种或多种分化化合物是信号传导网络或途径中已知的信号传导分子——或靶向信号传导网络或途径中已知的信号传导分子，所述网络或途径例如是细胞周期信号传导途径、dna修复途径、受体酪氨酸激酶介导的信号传导途径和/或g蛋白偶联受体介导的信号传导途径或其组合。本文提供的方法倾向于提供产生成熟肌管的高效方法。在一些情况下，本文提供的方法不需要劳动密集型操作，如遗传工程或细胞分选。所述方法也可以是高效的，因为它们可能涉及使用成肌细胞或成肌细胞样细胞，这些细胞一般是高度增殖性的并且可以通过常用的传代方法大规模扩充。因此，可以相对容易地生成大量肌管。所述方法可以进一步是高效的，因为生成肌管或肌管样细胞的总时间通常相对较短。在临床上，本文所述的化合物以及通过本文方法生成的成熟肌管或肌管样细胞在许多情况下可能非常有用，这些情况包括治疗患者，如患有由多种原因导致的肌肉退行性疾病或肌肉病症的患者，这些原因包括但不限于遗传疾病、散发性疾病、恶病质、肌肉劳损、肌肉损伤、肌肉萎缩和/或肌肉耗损，例如不同形式的恶病质，以及少肌症和一般老化过程。肌管前体细胞或本文提供的成熟肌管或肌管样细胞可用于针对这类患者的细胞疗法，特别是用于补偿或补充患者天然存在的骨骼肌细胞的疗法。在一些情况下，所述疗法可包括作为独立疗法施用本文提供的化合物，以促进肌肉缺乏的治疗。在一些情况下，本文的方法涉及将细胞疗法与药物疗法进行组合。例如，可将肌管前体细胞(例如，多能细胞、卫星细胞、成肌细胞)或成熟肌管移植到受试者中；并且可以向该受试者施用本文提供的化合物(例如，检查点抑制剂、chk1抑制剂、chir-124)，以促进所移植的细胞向肌管的分化。在一些情况下，可将成熟肌管或其前体移植到或注射到患者的部位，如肌肉部位，并且它们可以促进患者的肌生成和/或肌肉再生。在一些情况下，所移植的细胞是遗传上未修饰的细胞，包括但不限于：原代卫星细胞、原代成肌细胞、胚胎干细胞、诱导多能干细胞、在体外从干细胞分化的卫星细胞，或在体外从卫星细胞分化的成肌细胞，或其它细胞类型。在一些情况下，肌管或肌管样细胞或肌管前体细胞可以在被引入患者之前进行遗传修饰。例如，细胞(例如，多能干细胞、卫星细胞、成肌细胞、肌管)可以被遗传修饰，以纠正与遗传性肌病相关的表型。作为本文提供的细胞疗法的结果，患者可经历肌肉张力或功能的改善，包括肌力改善。在一些情况下，出于美容、运动或其它目的而试图加强肌肉张力或功能的受试者可从本公开内容提供的方法和组合物受益。本文提供的方法可以包括用肌管前体细胞、衍生自遗传修饰细胞的成熟肌管或肌管样细胞治疗受试者。经遗传修饰的细胞可以是参与肌生成的任何细胞(例如，多能干细胞、卫星细胞、卫星样细胞、成肌细胞、成肌细胞样细胞、未成熟的肌管或肌管样细胞，或其它肌肉-前体细胞)。例如，可从患有遗传疾病(例如，亨廷顿病、脊髓性肌萎缩、杜氏肌营养不良等)的受试者中分离分化的细胞(例如，皮肤细胞、成纤维细胞、血细胞)。然后，可使该分化的细胞经受成为多能干细胞(例如，成为诱导多能干细胞)的条件。为了拯救或改善疾病状况，可对该多能干细胞进行遗传修饰或改变。这些遗传修饰的多能细胞然后可以根据本文所述的方法，分化为卫星细胞或卫星样细胞，再然后分化为成肌细胞和成肌细胞样细胞，这些细胞可以分化为成熟的肌管。这些遗传修饰的细胞(例如，遗传修饰的多能干细胞、遗传修饰的卫星细胞、遗传修饰的成肌细胞、遗传修饰的成熟肌管)可以被移植到受试者中以减轻疾病或病症的影响。与来源于不同受试者的肌管相比，所移植的细胞或由其分化的肌管也许不太可能在受试者中引起免疫应答。在一些情况下，本文公开的细胞和/或化合物(例如，检查点抑制剂、chk1抑制剂、chir-124)可用来治疗患有由多种原因导致的肌肉退行性疾病或肌肉病症的患者，这些原因包括但不限于遗传疾病、散发性疾病、恶病质、肌肉劳损、肌肉损伤、肌肉萎缩，以及少肌症和一般老化过程。所公开的化合物(例如，检查点抑制剂、chk1抑制剂、chir-124)可以通过多种途径施用于患者，包括但不限于口服、静脉内、肌肉内、皮下和经皮。这些化合物可以促进患者中的肌生成和/或肌肉再生。因此，该患者可经历肌肉张力或功能的改善，包括肌力改善。在一些情况下，出于美容、运动或其它目的而试图加强肌肉张力或功能的受试者可从本公开内容提供的方法和组合物受益。在一些实施方案中，本文提供的成熟肌管或肌管样细胞(包括衍生自经遗传修饰或未修饰的多能干细胞的肌管)可用于药物筛选试验，特别是用来鉴定用于改善肌肉缺乏的药剂的试验。成熟的肌管或肌管样细胞还可用于疾病建模和其它类型的疾病研究。在一些情况下，成熟的肌管或肌管样细胞可从被遗传修饰成具有导致人类遗传疾病的相同或基本相似的突变的人多能干细胞分化而来。然后，这类成熟的肌管或肌管样细胞可针对逆转或减轻该突变的影响的药剂进行筛选。ii.一般方法本公开提供了用于产生和培养具有成体样形态学的成熟肌管或肌管样细胞的方法和组合物。本公开进一步描述了在体外(例如在药物筛选试验中)和在体内(通过使用成熟肌管作为治疗剂来治疗具有肌肉缺乏的受试者)使用所述成熟肌管的方法。本公开还提供了筛选和鉴定调节肌肉发育的化合物的方法。本公开还提供了向受试者(例如，人类患者)施用本文提供的化合物以促进体内肌肉分化或成熟成肌细胞形成的方法。在一些情况下，该化合物与肌管前体细胞(例如成肌细胞、成肌细胞样细胞、卫星细胞、多能干细胞等)一起施用。产生成熟肌管或肌管样细胞的分化过程的一般概述在图1中示出。成熟肌管的产生或形成可包括肌管的成熟或从头生成新的肌管。所述方法可涉及获得或提供多能干细胞(例如，胚胎干细胞或诱导多能干细胞)(100)。诱导多能干细胞可以从来自人类受试者的分化细胞获得。多能干细胞(例如，胚胎干细胞或诱导多能干细胞)可以被遗传修饰。所述方法还可以包括使所述多能干细胞与培养基中的一种或多种化合物接触，以使所述多能干细胞(例如，通过化学分化)分化成卫星细胞或卫星样细胞(110)，或以其它方式获得卫星样细胞。所述方法还可以包括进一步使所述卫星细胞或卫星样细胞分化为成肌细胞(或成肌细胞样细胞)，这是通过在培养基中孵育所述卫星细胞或卫星样细胞以使该卫星细胞或卫星样细胞分化为成肌细胞或成肌细胞样细胞(120)，或以其它方式获得成肌细胞或成肌细胞样细胞。本文提供的方法通常涉及从成肌细胞或成肌细胞样细胞生成肌管或肌管样细胞，并且常常涉及产生成熟肌管或成熟肌管样细胞。用来产生肌管的成肌细胞或成肌细胞样细胞可以通过本领域已知的任何方法获得。例如，该成肌细胞可以是原代成肌细胞或衍生自原代成肌细胞。该原代成肌细胞可以直接从受试者获得，例如通过从受试者或从尸体手术切下成肌细胞。在一些情况下，该成肌细胞或成肌细胞样细胞在体外生成，例如由卫星细胞或卫星样细胞生成(例如，通过在体外分化这类卫星细胞)(120)。在优选的实施方案中，通过本文提供的方法生成的这类肌管或肌管样细胞类似于成熟的肌管并且具有成熟的形态学。在一些情况下，成肌细胞或成肌细胞样细胞可以在能够从成肌细胞或成肌细胞样细胞产生成熟肌管或肌管样细胞的培养基中孵育(140)。在一些情况下，所述培养基是补充有本文提供的化合物的培养基。在一些情况下，所述培养基可以是肌管培养基(130)，其本身可以使成肌细胞或成肌细胞样细胞形成未成熟的肌管或未成熟的肌管样细胞(150)。一些情况下，所述肌管培养基(例如，geneabiocellsmyotubemedium)中补充有一种或多种能够使成肌细胞或成肌细胞样细胞形成具有成体样形态学的成熟肌管或成熟肌管样细胞(160)的化合物。所述方法的上述步骤可以以任何顺序和任何组合发生。在这些步骤之间可穿插有用来维持细胞的步骤，包括培养或扩充细胞。另外，可以在所述方法中的任何步骤之后存储细胞。本文提供的成熟肌管、肌管样细胞或化合物与肌管前体细胞的组合可用于许多情况，包括作为细胞疗法(170)。在细胞疗法的一些实例中，肌管前体细胞、肌管或肌管样细胞可以被移植到受试者(例如，患者)中，并影响肌肉形态学或功能，例如通过增加肌肉质量、促进肌生成和/或促进体内肌肉再生。在一些情况下，所移植的细胞或其分泌的因子可通过减轻炎症反应来保护肌肉。在一些情况下，所移植的细胞是由从不同受试者获得的细胞产生的细胞。在一些情况下，受试者接受来源于最初从受试者获得的细胞样品的移植细胞。在一些情况下，从受试者获得的细胞样品包含被诱导形成诱导多能干细胞的分化细胞(例如，成纤维细胞，血细胞)。该诱导多能干细胞可被遗传修饰，例如，以纠正表型。在一些情况下，成熟的肌管或肌管样细胞可用于药物筛选(180)。例如，成熟的肌管或肌管样细胞可能表现出与肌肉疾病相关的表型。然后可以使用这类细胞来鉴定逆转这类肌肉疾病相关表型的候选药物。图2说明了一种用化合物(例如，chk1抑制剂，如chir-124)(220)治疗患有肌肉疾病或其它肌肉缺乏的受试者(210)的方法，该化合物至少部分地改善、治疗或减少受试者的肌肉缺乏症状(240)。不希望受理论束缚，该化合物可以导致在体内从某些细胞(例如，成肌细胞、卫星细胞、成肌细胞样细胞、卫星样细胞)生成肌管或肌管样细胞(230)。生成肌管或肌管样细胞的细胞可以是受试者的内源细胞，如成肌细胞或卫星细胞。在一些情况下，生成肌管的细胞是已经移植到受试者中的细胞，例如来自受试者的原代成肌细胞或卫星细胞，或由受试者细胞产生的成肌细胞样或卫星样细胞(例如，通过分化来源于受试者的多能干细胞)。在一些情况下，生成肌管的细胞是由受试者的细胞产生的诱导多能干细胞，或者是另一种类型的多能干细胞，如胚胎干细胞(es细胞)。该化合物可通过各种方法施用于受试者，包括但不限于口服、静脉内、颊部、肌肉内、局部、皮下和经皮。通过经历肌肉张力或功能的改善，包括肌力的改善，受试者可能经历肌肉缺乏症状改善。在一些情况下，出于美容、运动或其它目的而试图加强肌肉张力或功能的受试者可从本公开内容提供的方法和组合物受益。图3说明了从多能干细胞(310)到肌管(340)的四个分化阶段。根据本公开的实施方案，多能干细胞可以分化成卫星细胞(320)、成肌细胞(330)和肌管(340)。图4a-4f、5a-5b、6a-6b、7a-7b和8a-8b描绘了化合物的示例性化学结构，这些化合物当作为单一疗法或作为与本文所述细胞移植一起应用的辅助剂而施用时可用来增强受试者中成熟肌管的形成或发育。图4a、4b、4c、4d、4e和4f描绘了针对细胞信号传导和dna修复途径中的酶的化合物，如帕博西尼(palbociclib)、sns-032、dinaciclib、k03861、jnj-7706621、azd5438、mk-8776、pha-793887、bs-181、a-674563、阿贝西尼(abemaciclib)、pha-767491、milciclib、瑞博西尼(ribociclib)、r547、p276-00、tg003、ml167。ldc000067、xl413、ro-3306、alisertib、barasertib、zm447439、mln8054、达鲁舍替(danusertib)、auroraa-in-1、sns-314、mk-5108、pha-680632、cyc116、pf-03814735、amg-906、gsk1070916、azd7762、ly2603618、chir-124和pf-477736。图5a和5b描绘了抑制parp(聚adp核糖聚合酶)的化合物，如奥拉帕尼(olaparib)、维利帕尼(veliparib)、卢卡帕尼(rucaparib)、iniparib、talazoparib、ag14361、ino-1001、a996492、pj34、upf1069、azd2461、me0328和nu1025。图6a和6b描绘了针对pi3k/akt、mtor或mapk途径的化合物，如bez235、omipalsib、ly2228820、azd8055、bi-d1879、达鲁舍替、bms754807、mk2206和refametinib。图7a和7b描绘了针对gpcr信号传导的化合物，如apd597、apd668、psn632408、mbx2982、gsk1292263、org27569、win55,212-2、am251、cid16020046、abn-cbd、o-1602和noladin醚。图8a和8b描绘了调节machr(毒蕈碱乙酰胆碱受体)gpcr类的化合物，如mk7622、匹鲁卡品、醋甲胆碱、西维美林(cerimeline)、槟榔碱(arecholine)、呫诺美林(xanomeline)、氯贝胆碱(bethanechol)、后马托品(homatropine)、苄替米特(benzetimide)、卡米罗芬(camylofin)、阿托品(atropine)、丙胺太林(propantheline)、环奎二苯酯(clidinium)、哌羟苯酯(pipenzolate)和东莨菪碱(scopolamine)。图9a、9b和9c描绘了途径和其中的蛋白质靶标，它们可以被上述(图4a-4f、5a-5b、6a-6b、7a-7b和8a-8b中的)化合物调节，以在作为单一疗法或作为与本文所述细胞移植一起应用的辅助剂而施用时增强受试者中成熟肌管的产生。图9a描绘了在涉及诸如p53、atm/atr、chk蛋白(chk1/chk2)、cdc25磷酸酶和e3连接酶mdm2等蛋白质的细胞周期进展(如g2期至m期转变)中涉及的信号传导关系。图9b描绘了胞吐作用和肌肉收缩/松弛中涉及的gpcr信号传导关系，其涉及诸如machr受体(图中的m3)pkcα、pkcβ和pkcγ的蛋白质。图9c描绘了pi3k/akt、mtor和mapk蛋白的信号传导关系，这些蛋白质影响诸如细胞存活、细胞增殖和蛋白质合成等细胞过程。图10a、10b、10c、10d、11、12、13、14、15、16、17和18显示了特定类别的靶抑制剂用于增强成肌细胞向肌管分化的有用性。图10a、10b、10c和10d显示细胞周期或chk1抑制(使用chir-124)可以产生具有成熟特征的肌管。图11显示mtor抑制(使用雷帕霉素)可以产生具有成熟特征的肌管。图12显示mek抑制(使用mek162)可以产生具有成熟特征的肌管。图13显示raf抑制(使用索拉非尼)可以产生具有成熟特征的肌管。图14显示gpr119gpcr活化(经由应用激动剂gsk1292263)产生具有成熟特征的肌管。图15显示s1p1gpcr活化(经由应用激动剂tc-g1006)可以产生具有成熟特征的肌管。图16显示machrgpcr活化(经由激动剂匹鲁卡品)产生具有成熟特征的肌管。图17显示machrgpcr抑制(经由拮抗剂阿托品)产生具有成熟特征的肌管。图18显示parp抑制(使用talazoparib)可以产生具有成熟特征的肌管。图19描述了本文所述化合物(此处为chir-124，一种chk1抑制剂)用于增强由疾病影响的成肌细胞形成肌管——特别是形成成熟肌管的有用性。图19显示，当用chir-124处理时，受亨廷顿病、ii型肌强直性营养不良、脊髓性肌萎缩、i型肌强直性营养不良、fsh肌肉萎缩和杜氏肌营养不良影响的成肌细胞均显示出分化改善。图20显示在chir-124的存在下最成熟形式的mhc的表达增加。在一些情况下，所述化合物(例如，检查点抑制剂，chir-124)与细胞疗法的施用联合施用于受试者。在一些情况下，所述化合物(或化合物的协同混合物)可以与引入肌管的前体(例如，成肌细胞、成肌细胞样细胞、未成熟的肌管、卫星细胞、卫星样细胞、干细胞或其它肌细胞前体)联合施用。在一些情况下，可以与施用本文提供的成熟或未成熟的肌管或肌管样细胞联合地将所述化合物引入受试者。在其它实例中，成熟肌管可以由卫星细胞或卫星样细胞形成，该卫星细胞或卫星样细胞由疾病特异性多能干细胞分化而成，该多能干细胞例如是被鉴定为携带与遗传疾病或病症相关的突变的胚胎干细胞，或这样的诱导多能干细胞：其(a)从具有遗传突变的受试者获得，或(b)被遗传改变以携带遗传突变。这些疾病特异性干细胞然后可以分化成疾病特异性卫星细胞或卫星样细胞，并进一步分化成疾病特异性成肌细胞或成肌细胞样细胞和成熟肌管。疾病特异性肌管可用于药物筛选和其它临床应用。iii.待治疗的受试者所述肌管、肌管样细胞、用于形成成熟肌管的化合物，或移植的肌管前体细胞与本文提供的化合物的组合可用来治疗或改善众多受试者的症状。通常可从本文提供的细胞和方法受益的受试者是患有影响肌肉功能、张力或生理学的肌肉疾病或病症的受试者。在一些情况下，受试者可患有遗传疾病(例如，亨廷顿病、肌营养不良)；在一些情况下，受试者可患有获得性病症(例如，由不活动导致的肌肉萎缩)。另外，患有肌营养不良的受试者可患有多系统病症，在包括心脏、胃肠系统、神经系统、内分泌腺、眼睛和大脑在内的身体系统中具有表现。需要治疗的受试者可包括已经经历肌肉劳损或损伤的受试者。肌肉损伤可由创伤性事件如在活动如锻炼期间滑倒或摔倒导致。使用本文公开的方法治疗的受试者所表现出的示例性疾病或病症包括：肌营养不良、亨廷顿病、1a型分区蛋白缺乏、线状体肌病和脊髓性肌萎缩(sma)。可用所公开的细胞治疗或改善的肌营养不良的实例包括becker型、先天性、面肩胛肱型(fsh)、肌强直性(i型和ii型)、眼咽型、远端型、杜氏肌营养不良，以及emery-dreifuss型肌营养不良。杜氏和becker型肌营养不良由位于x染色体上的基因的突变引起，并且主要影响雄性(男性)，尽管雌性(女性)有时也可能有严重症状。需要治疗的受试者还可包括经历肌肉萎缩或耗损(包括可由于恶病质或消耗综合征而发生的肌肉萎缩)的受试者。恶病质可伴随有肌肉萎缩、体重减轻、疲劳、虚弱和体重明显减轻。本文提供的治疗方法可帮助逆转这些症状中的一些，特别是肌肉萎缩和虚弱。患有恶病质的受试者可包括患有癌症、获得性免疫缺陷综合征(aids)、慢性阻塞性肺病、多发性硬化、充血性心力衰竭、结核、家族性淀粉样多神经病、钆中毒、汞中毒(肢痛症)和激素缺乏的患者。在一些情况下，需要治疗的受试者是患有少肌症的患者，或具有与衰老过程相关的肌肉质量或功能丧失的患者。本文提供的治疗可帮助逆转或改善少肌症，或肌肉质量或功能的丧失；在一些情况下，本文所提供的治疗有助于防止少肌症或肌肉质量或功能丧失随时间恶化。可从所公开的组合物和方法受益的受试者包括希望预防性治疗的受试者，如存在肌肉质量丧失风险的受试者。这样的受试者可包括即将经历可减少肌肉质量的治疗方案如化疗的受试者。这样的受试者还可包括例如由于无意识或穿戴固定铸件而已被固定或部分固定足以减少肌肉质量的一段时间的受试者。受试者的实例可包括最近经历了损伤或重新连接肌肉组织的手术的受试者。受试者的实例还可包括出生时即没有特定肌肉或需要肌肉移植的受试者。受试者还可以是出于美容原因或为了改善运动能力而寻求改善肌肉质量或功能的受试者。需要肌管或肌管样细胞移植或用刺激成熟肌管形成的化合物治疗的受试者可包括雄性(男性)或雌性(女性)。这样的受试者可具有一定的年龄范围，该年龄范围可包括>10分钟、>1小时、>1日、>1个月、>2个月、>6个月、>1岁、>2岁、>5岁、>10岁、>15岁、>18岁、>25岁、>35岁、>45岁、>55岁、>65岁、>80岁、<80岁、<70岁、<60岁、<50岁、<40岁、<30岁、<20岁或<10岁。受试者可以是新生儿。在一些情况下，受试者为儿童或成年者。在一些实例中，组织来自2小时、5小时、10小时或20小时大的人。在其它实例中，组织来自1个月、2个月、3个月、4个月、5个月、6个月、9个月或12个月大的人。在一些情况下，组织来自1岁、2岁、3岁、4岁、5岁、18岁、20岁、21岁、23岁、24岁、25岁、28岁、29岁、31岁、33岁、34岁、35岁、37岁、38岁、40岁、41岁、42岁、43岁、44岁、47岁、51岁、55岁、61岁、63岁、65岁、70岁、77岁或85岁的人。受试者可具有不同的遗传背景，包括不同的种族或遗传混合群体。iv.生成肌管或肌管样细胞本文提供的方法通常涉及从成肌细胞或成肌细胞样细胞产生成熟肌管或成熟肌管样细胞，通常是通过使成肌细胞或成肌细胞样细胞与一种或多种化合物接触以促进成熟肌管或成熟肌管样细胞的生成。所述方法还可包括从卫星细胞或卫星样细胞产生成肌细胞或成肌细胞样细胞的方法，以及产生卫星细胞或卫星样细胞的方法。本公开还提供了组合物，包括包含一个或多个肌管或肌管样细胞的组合物。a.能够分化为成熟肌管或肌管样细胞的成肌细胞或成肌细胞样细胞用来生成本文提供的肌管或肌管样细胞的成肌细胞或成肌细胞样细胞可以通过本领域已知的任何方法获得。在一些情况下，成肌细胞或成肌细胞样细胞可以根据本文进一步描述的方法或通过另一种方法在体外产生。在一些情况下，原代成肌细胞在本文提供的方法中使用。在一些情况下，由原代成肌细胞衍生的成肌细胞在本文提供的方法中使用。原代成肌细胞一般可以直接从哺乳动物受试者或尸体获得，例如通过从受试者或尸体手术切下成肌细胞。在生成或获得成肌细胞或成肌细胞样细胞后，它们可以扩充。成肌细胞或成肌细胞样细胞可以如下扩充：以一系列密度接种所述细胞，使得所述细胞大约25-80％汇合。例如，成肌细胞或成肌细胞样细胞可以以这样的密度接种，使得所述细胞约25％汇合，约30％汇合，约35％汇合，约40％汇合，约45％汇合，约50％汇合，约55％汇合，约60％汇合，约65％汇合，约70％汇合，约75％汇合，或约80％汇合。在一些实例中，所述细胞可以以如下密度接种：约1.5x103个细胞/cm2至约104个细胞/cm2；约2x103个细胞/cm2至约104个细胞/cm2；约3x103个细胞/cm2至104个细胞/cm2；约4x103个细胞/cm2至约104个细胞/cm2；或约103个细胞/cm2至约9x103个细胞/cm2。在一些实施方案中，所述细胞可以以大于104个细胞/cm2，例如约1.25x104个细胞/cm2至约3x104个细胞/cm2的密度接种。在一些优选实施方案中，成肌细胞或成肌细胞样细胞以单层培养。成肌细胞或成肌细胞样细胞可以直接在作为基底的组织培养级塑料上培养。或者，成肌细胞或成肌细胞样细胞可以在包被的基底(例如，用纤连蛋白、细胞外基质、胶原、明胶、基质胶、geltrex或层粘连蛋白及其组合包被的基底)上培养。用来包被基底的物质的浓度可以是约5μg/ml、10μg/ml、20μg/ml、40μg/ml、60μg/ml、80μg/ml、100μg/ml或200μg/ml，或1mg/ml，或其它适当的浓度。在一些情况下，成肌细胞或成肌细胞样细胞可以在用i型胶原包被的基底上培养。成肌细胞或成肌细胞样细胞可以在37℃、5％co2培养箱中在等于大气的氧气水平下培养生长。在一些情况下，成肌细胞或成肌细胞样细胞可以在37℃、5％co2/5％o2培养箱中培养生长(例如，在低氧条件下)。成肌细胞或成肌细胞样细胞可以在培养中生长至少约1天、2天、3天、4天、5天、6天、7天、8天、9天、10天、11天、12天、13天、14天、3周、4周、5周，甚至更长时间。成肌细胞或成肌细胞样细胞可以在肌管培养基(例如，geneabiocellsmyotubemedium)中生长。在一些情况下，肌管培养基可以是无血清的。例如，肌管培养基可含有dmem、mcdb或rpmi1640培养基。在一些情况下，肌管培养基可以包含血清。例如，该血清可以是马血清、牛血清、小牛血清或本领域已知的其它血清。在一些情况下，肌管培养基可含有至少0.5％、1％、2％、3％、5％、7％、10％、15％或20％的血清(例如马血清)。在一些情况下，肌管培养基可含有少于0.5％、1％、2％、3％、5％、7％、10％、15％或20％的血清，例如肌管培养基可含有0.5％-8％的血清(例如马血清)。在一些特定情况下，肌管培养基可含有5％的马血清(thermofisherscientificlifesciences)。在一些情况下，肌管培养基可以补充有其它因子，包括但不限于胰岛素、制瘤素、necrosulfonamide和/或抗坏血酸。在一些情况下，肌管培养基可以含有以下浓度的胰岛素：至少约1μg/ml、2μg/ml、3μg/ml、4μg/ml、5μg/ml、6μg/ml、7μg/ml、8μg/ml、9μg/ml、10μg/ml、11μg/ml、12μg/ml、13μg/ml、14μg/ml、15μg/ml、16μg/ml、12μg/ml、18μg/ml、19μg/ml或20μg/ml。在一些情况下，肌管培养基可以含有以下浓度的制瘤素：至少约5μg/ml、6μg/ml、7μg/ml、8μg/ml、9μg/ml、10μg/ml、11μg/ml、12μg/ml、13μg/ml、14μg/ml、15μg/ml、16μg/ml、17μg/ml、18μg/ml、19μg/ml、20μg/ml、21μg/ml、22μg/ml、23μg/ml、24μg/ml、25μg/ml、26μg/ml、27μg/ml、28μg/ml、29μg/ml或30μg/ml。在一些情况下，肌管培养基可以含有以下浓度的necrosulfonamide：至少约5nm、10nm、15nm、20nm、25nm、30nm、35nm、40nm、45nm、50nm、55nm、60nm、65nm、70nm、75nm、80nm、85nm、90nm、95nm或100nm。在一些情况下，肌管培养基可以含有以下浓度的抗坏血酸：至少约10μm、25μm、50μm、75μm、100μm、125μm、150μm、175μm、200μm、225μm、250μm、275μm、300μm、325μm、350μm、375μm或400μm。成肌细胞可以随时间在相同的肌管培养基中培养，通常进行培养基更换。在一些情况下，肌管培养基可以每天更换或添加。在一些情况下，肌管培养基可以每隔一天、每周两次、每周一次、每两周、每三周或更长时间更换或添加。b.成肌细胞与化合物接触本文提供的方法包括通过在补充有一种或多种化合物的肌管培养基中培养成肌细胞和成肌细胞样细胞，使所述细胞与所述一种或多种化合物接触。在一些情况下，本文提供的方法包括向受试者施用一种或多种化合物以促进肌管产生，特别是在受试者中产生成熟肌管。在这类情况下，受试者的细胞可以在体内与一种或多种本文所述的化合物接触。成肌细胞和成肌细胞样细胞可以与包括但不限于小分子、肽、拟肽、反义寡核苷酸、rna和适体的化合物接触。成肌细胞和成肌细胞样细胞可以与一种或多种已知或怀疑针对各种信号传导途径中的分子的化合物接触，这些途径包括但不限于细胞周期信号传导途径、dna修复途径、mapk信号传导途径、pi3k/akt信号传导途径、mtor信号传导途径、g蛋白偶联受体(gpcr)途径和毒蕈碱乙酰胆碱受体(machr)途径。在一些情况下，与成肌细胞或成肌细胞样细胞接触的一种或多种化合物可包括针对参与细胞周期信号传导和dna修复途径的激酶的激酶抑制剂。所述一种或多种化合物可包括细胞周期蛋白依赖性激酶(cdk)的抑制剂。所述一种或多种化合物可包括但不限于cdk抑制帕博西尼、sns-032、dinaciclib、k03861、jnj-7706621、azd5438、pha-793887、bs-181、阿贝西尼、bms-265246、pha-767491、milciclib、r547、瑞博西尼(lee011)、p276-00、ldc000067和/或ro-3306。所述一种或多种化合物可包括检查点激酶1(chk1)的抑制剂，包括但不限于mk-8776、azd7762、ly2603618、chir-124和/或pf-477736。所述一种或多种化合物可包括激酶akt1的抑制剂，包括但不限于a-674563。所述一种或多种化合物可包括细胞分裂周期(cdc)激酶或cdc样(clk)激酶的抑制剂，包括但不限于：tg003、ml167和/或xl413。所述一种或多种化合物可包括aurora细胞周期激酶的抑制剂，包括但不限于：alisertib、barasertib、zm447439、mln8054、达鲁舍替，aurora-a抑制剂i、sns-314、mk-5108、pha-680632、cyc116、pf-03814735、amg-900和/或gsk1070916。在一些情况下，与成肌细胞或成肌细胞样细胞接触的一种或多种化合物可包括聚adp-核糖聚合酶(parp)抑制剂。所述一种或多种化合物可包括但不限于parp抑制剂奥拉帕尼、维利帕尼、卢卡帕尼、iniparib、talazoparib、ag14361、ino-1001、a966492、pj34、upf1069、azd2461、me0328和/或nu1025。在一些情况下，与成肌细胞或成肌细胞样细胞接触的一种或多种化合物可包括针对参与pi3k/akt、mtor和mapk信号传导途径的激酶或受体的激酶抑制剂。所述一种或多种化合物可包括但不限于激酶抑制剂bez23s(dactolisib)、omipalsib、ly2228820、azd8055、bi-d1879、达鲁舍替、mk2206和/或refametinib。所述一种或多种化合物可包括但不限于igf-1受体抑制剂bms754807。在一些情况下，与成肌细胞或成肌细胞样细胞接触的一种或多种化合物可包括gpcr信号传导的调节剂。该化合物可包括gpr119的调节剂。该化合物可包括但不限于gpr119激动剂apd597、apd668、psn632408、mbx-2982和gsk1292263。该化合物可包括大麻素受体cb1、cb2和/或gpr55的调节剂，包括但不限于org27569、win55,212-2、am251、cid16020046、abn-cbd、o-1602和/或noladin醚。该化合物可包括任何gpcr或gpcr介导的信号传导分子的调节剂。在一些情况下，与成肌细胞或成肌细胞样细胞接触的一种或多种化合物可包括毒蕈碱乙酰胆碱受体(machr)的调节剂。该化合物可包括machr激动剂和machr拮抗剂，包括但不限于：mk7622、匹鲁卡品、醋甲胆碱、西维美林(cevimeline)、槟榔碱(arecholine)、氯贝胆碱(bethanechol)、呫诺美林(xanomeline)、后马托品(homatropine)、苄替米特(benzetimide)、卡米罗芬(camylofin)、阿托品(atropine)、丙胺太林(propantheline)、环奎二苯酯(clidinium)、哌羟苯酯(pipenzolate)和/或东莨菪碱(scopolamine)。该化合物可包括任何machr或machr介导的信号传导分子的调节剂。在一些情况下，与成肌细胞或成肌细胞样细胞接触的一种或多种化合物可调节参与多种信号传导途径的一种或多种分子的活性。所述一种或多种化合物可以调节参与但不限于wnt/fzd/β-连环蛋白信号传导途径、端粒结构和端粒酶活性途径、细胞骨架结构信号传导途径、jak/stat信号传导途径、凋亡信号传导途径、代谢信号传导途径和遍在蛋白信号传导途径的一种或多种分子的活性。在一些情况下，与成肌细胞或成肌细胞样细胞接触的一种或多种化合物可以激活或抑制酶。所述一种或多种化合物可以激活或抑制酶，该酶包括但不限于激酶、磷酸酶、脂肪酶、连接酶、糖基化酶、水解酶、羧化酶、转移酶和氧化还原酶。根据本文提供的方法，所述一种或多种化合物可以以各种浓度与成肌细胞或成肌细胞样细胞接触。在一些实例中，与成肌细胞或成肌细胞样细胞接触的一种或多种化合物可以以约10pm、约50pm、约100pm、约500pm、约1nm、约5nm、约10nm、约20nm、约30nm、约40nm、约50nm、约60nm、约70nm、约80nm、约90nm、约100nm、约200nm、约300nm、约400nm、约500nm、约600nm、约700nm、约800nm、约900nm、约1μm、约2μm、约3μm、约4μm、约5μm、约10μm、约20μm、约30μm、约40μm、约50μm、约60μm、约70μm、约80μm、约90μm、约100μm或高于100μm的浓度存在于肌管培养基中。在一些实例中，与成肌细胞或成肌细胞样细胞接触的一种或多种化合物可以以低于约10pm、低于约50pm、低于约100pm、低于约500pm、低于约1nm、低于约5nm、低于约10nm、低于约20nm、低于约30nm、低于约40nm、低于约50nm、低于约60nm、低于约70nm、低于约80nm、低于约90nm、低于约100nm、低于约200nm、低于约300nm、低于约400nm、低于约500nm、低于约600nm、低于约700nm、低于约800nm、低于约900nm、低于约1μm、低于约2μm、低于约3μm、低于约4μm、低于约5μm、低于约10μm、低于约20μm、低于约30μm、低于约40μm、低于约50μm、低于约60μm、低于约70μm、低于约80μm、低于约90μm或低于约100μm的浓度存在于肌管培养基中。在一些实例中，与成肌细胞或成肌细胞样细胞接触的一种或多种化合物可以以至少60nm到至多5μm、至少10nm到至多50μm、至少60pm到至多90μm或其它浓度范围的浓度存在于肌管培养基中。根据本文提供的方法，所述一种或多种化合物可以与成肌细胞或成肌细胞样细胞接触不同的时间段。在一些实例中，所述一种或多种化合物可以与成肌细胞或成肌细胞样细胞接触约1天、约1.5天、约2天、约2.5天、约3天、约3.5天、约4天、约4.5天、约5天、约5.5天、约6天、约6.5天、约7天、约7.5天、约8天、约8.5天、约9天、约9.5天、约10天或超过5天、超过7天、超过10天、超过14天、超过20天、超过25天、超过30天、超过35天或更长。在一些实例中，所述一种或多种化合物可以与成肌细胞或成肌细胞样细胞接触少于约1天、少于约1.5天、少于约2天、少于约2.5天、少于约3天、少于约3.5天、少于约4天、少于约4.5天、少于约5天、少于约5.5天、少于约6天、少于约6.5天、少于约7天、少于约7.5天、少于约8天、少于约8.5天、少于约9天、少于约9.5天、少于约10天、少于约2周、少于约2.5周、少于约3周、少于约4周，或其它时间长度。根据本文提供的方法，所述一种或多种化合物可具有小于50μm的半数最大有效浓度(ec50)。在一些实例中，所述一种或多种化合物可具有小于约50μm、小于约40μm、小于约30μm、小于约20μm、小于约15μm、小于约10μm、小于约5μm或小于约1μm的ec50。在优选的实施方案中，所述一种或多种化合物具有小于约5μm的ec50。根据本文提供的方法生成的肌管或肌管样细胞可以通过本领域已知的任何方法来检测。例如，可以通过使用免疫荧光测定肌管蛋白质标志物的表达来检测肌管或肌管样细胞。可以通过孵育与一种或多种肌管蛋白质标志物结合的固定细胞抗体来检测肌管或肌管样细胞，所述肌管蛋白质标志物包括但不限于肌细胞生成蛋白、α-肌营养不良蛋白、mf20和skmhc。可以通过将固定细胞与鉴定细胞器或其它细胞组分的染色剂(例如，用来鉴定细胞核的hoechst染色剂)一起孵育来检测肌管或肌管样细胞。已经固定并染色的肌管或肌管样细胞可以通过根据本领域已知的任何方法进行成像来检测。在一些情况下，已经固定并染色的肌管或肌管样细胞可以通过用高含量分析系统(例如，incellanalyzer6000成像仪和developertoolbox软件)进行成像来检测。根据本文提供的方法产生的肌管或肌管样细胞可以通过测定编码肌管蛋白质标志物的基因的mrna转录物来进一步检测。可以通过使用包括但不限于rt-pcr、rna测序、cdna测序和原位杂交的方法测定mrna转录物来检测肌管或肌管样细胞。可以选择通过本文提供的方法生成的成熟肌管或肌管样细胞以用于本文进一步提供的细胞治疗和药物筛选方法。根据成熟成肌细胞的形态学特征(例如，具有许多细胞核和大直径的长、分支肌管)、基因表达数据或本领域已知的其它方法，可以选择成熟的肌管或肌管样细胞以用于细胞治疗和/或药物筛选。i)chk1抑制剂在一些情况下，检查点抑制剂，特别是chk1抑制剂，用来增强或促进如本文所述的(体外或体内)成熟肌管的产生。在一些情况下，将chk1抑制剂添加至培养基中以促进体外成熟肌管形成。在一些情况下，将chk1抑制剂施用于受试者以促进体内成熟肌管形成。chk1抑制剂可具有不同的化学结构或不同的支架。在一些实施方案中，本文所述的chk1抑制剂是喹啉酮chk1抑制剂，如chir-124。在一些实施方案中，通过合适的方法施用chir-124以达到约0.10μm至约1μm(例如，0.25μm、0.50um)的局部浓度，以增强或促进在体外或体内的成熟肌管产生。在一些实施方案中，chir-124每日一次以100mg的剂量施用于人，以增强或促进成熟肌管的产生。在一些实施方案中，chir-124每日两次以50-75mg的剂量施用于人，以增强或促进成熟肌管的产生。喹啉酮chk1抑制剂的合成已在别处描述，例如，li等人.bioorgmedchemlett.2006年6月15日；16(12):3121-4和us7825132b2、us7838527b2、us7470709b2和us20050256157a1。在一些实施方案中，本文所述的chk1抑制剂是根据式(i)的喹啉酮chk1抑制剂：或其盐，其中r1选自甲基、氟代、氯代、三氟甲基和二氟甲基；r2选自苯并咪唑基、苯并噁唑基、苯并噻唑基、3h-吲哚基、苯并呋喃基、苯并噻吩基和1h-茚基；且r3选自奎宁环基和1,4-二氮杂双环[2.2.2]辛基。在一些实施方案中，本文所述的chk1抑制剂是根据式(ii)的喹啉酮chk1抑制剂：或其盐，其中r1选自甲基、卤素和卤代甲基；且r2是包含0-4个独立地选自o、s或n的杂原子的5+6双环稠合环系。在一些实施方案中，本文所述的chk1抑制剂是根据式(iii)的喹啉酮chk1抑制剂：或其盐(chir-124)。在一些实施方案中，chk1抑制剂不是喹啉酮。抑制chk1的支架或示例性分子的其它实例包括吡唑并[1,5-a]嘧啶(例如mk-8776/sch900776)、噻吩甲酰胺脲(例如azd7762)、吡嗪基脲(例如ly2603618)和pf477736。ii)mtor抑制剂在一些情况下，mtor抑制剂，特别是大环内酯mtor抑制剂(例如雷帕霉素)，用来增强或促进如本文所述的成熟肌管的产生(体外或体内)。在一些情况下，将mtor抑制剂添加至培养基中以促进体外成熟肌管形成或生成。在一些情况下，将mtor抑制剂施用于受试者以促进体内成熟肌管形成。在一些实施方案中，本文所述的mtor抑制剂是根据式(iv)的大环内酯mtor抑制剂(例如雷帕霉素)：iii)raf抑制剂在一些情况下，raf抑制剂，特别是苄基脲raf抑制剂(例如索拉非尼)，用来增强或促进如本文所述的成熟肌管的产生(体外或体内)。在一些情况下，将raf抑制剂添加至培养基中以促进体外成熟肌管形成。在一些情况下，将raf抑制剂施用于受试者以促进体内成熟肌管形成。在一些实施方案中，本文所述的raf抑制剂是根据式(v)的苄基脲raf抑制剂(例如索拉非尼)：或其盐。iv)gpcr激动剂在一些情况下，gpcr激动剂，特别是gpr119、s1p1或machr的激动剂(例如gsk1292263、tc-g1006或匹鲁卡品)，用来增强或促进如本文所述的成熟肌管的产生(体外或体内)。在一些情况下，将gpr119、s1p1或machr的激动剂添加至培养基中以促进体外成熟肌管形成。在一些情况下，将gpr119、s1p1或machr的激动剂施用于受试者以促进体内成熟肌管形成。在一些实施方案中，本文所述的gpcr激动剂是根据式(vi)的gpr119激动剂(例如gsk1292263)：或其盐。在一些实施方案中，本文所述的gpcr激动剂是根据式(vii)的s1p1激动剂(例如tc-g1006)：或其盐。在一些实施方案中，本文所述的gpcr激动剂是根据式(viii)的machr激动剂(例如匹鲁卡品)：或其盐。v)gpcr拮抗剂在一些情况下，gpcr抑制剂，特别是machr的激动剂(例如阿托品)，用来增强或促进如本文所述的成熟肌管的产生(体外或体内)。在一些情况下，将gpcr拮抗剂(例如阿托品)添加至培养基中以促进体外成熟肌管形成。在一些情况下，将gpcr拮抗剂(例如阿托品)施用于受试者以促进体内成熟肌管形成。在一些实施方案中，本文所述的gpcr拮抗剂是根据式(ix)的machr拮抗剂(例如阿托品)：或其盐。vi)parp抑制剂在一些情况下，parp抑制剂用来增强或促进如本文所述的成熟肌管的产生(体外或体内)。在一些情况下，将parp抑制剂添加至培养基中以促进体外成熟肌管形成。在一些情况下，将parp抑制剂施用于受试者以促进体内成熟肌管形成。在一些实施方案中，本文所述的parp抑制剂是talazoparib——一种根据式(x)的化合物：或其盐。vii)mek抑制剂在一些情况下，mek抑制剂用来增强或促进如本文所述的成熟肌管的产生(体外或体内)。在一些情况下，将mek抑制剂添加至培养基中以促进体外成熟肌管形成。在一些情况下，将mek抑制剂施用于受试者以促进体内成熟肌管形成。在一些实施方案中，本文所述的mek抑制剂是mek162(binimetinib)——一种根据式(x)的化合物：或其盐。c.通过本文提供的方法生成的肌管或肌管样细胞的特征如本文所用的，术语“肌管样细胞”是指具有与天然存在的肌管(例如，生物体如人体内的肌管)相关的结构或功能特征，但还具有至少一种将肌管样细胞与天然存在的肌管区分开的结构或功能特征的任何细胞。在优选的实施方案中，肌管样细胞是这样的细胞，其(a)在体外由成肌细胞产生，或(b)衍生自肌管样细胞，如由肌管样细胞增殖产生的细胞。如本文所用的，术语“肌管”是指具有由天然存在的肌管表现出的结构和功能特征，并且可具有或不具有将其区分开的至少一种结构或功能特征的细胞。天然存在的成熟肌管通常是大且分支的，并且具有多个细胞核。通常，通过本文提供的方法产生的肌管和肌管样细胞是具有各种特征的纤维。所述纤维通常具有条纹。它们通常具有功能性肌节组织结构。例如，它们可能具有肌节蛋白的周期性分布(例如，肌联蛋白(titin)，快速myhc)并且可能自发地颤搐。在某些情况下，它们可能表现出快颤搐。在某些情况下，它们可能表现出慢颤搐。本文提供的方法包括生成具有成体样形态学的成熟肌管或肌管样细胞，通常通过具有一种或多种以下特征(或两种或更多种，或三种或更多种，等等)来指示：细长形态学，大直径，高度的多核化和/或分支状特征。在一些情况下，成体样形态学至少部分地由肌管或肌管样细胞的长度来指示，相对伸长是成熟或成体样形态学的指示。在一些情况下，具有成熟或成体样形态学的肌管或肌管样细胞可具有至少约200μm、250μm、300μm、350μm、400μm、450μm、500μm、550μm、600μm、650μm、700μm、1mm、1.25mm、1.5mm、1.75mm、2mm或更长的长度。在一些情况下，成体样形态学至少部分地由具有大直径的肌管或肌管样细胞来指示。在一些情况下，成熟肌管或肌管样细胞可具有至少约2μm、至少约3μm、至少约3.5μm、至少约4μm、至少约4.5μm、至少约5μm、至少约5.5μm、至少约5.6μm、至少约5.7μm、至少约5.8μm、至少约5.9μm、至少约6.0μm、至少约6.1μm、至少约6.2μm、至少约6.3μm、至少约6.4μm、至少约6.5μm、至少约6.6μm、至少约6.7μm、至少约6.8μm、至少约6.9μm、至少约7.0μm、至少约12.0μm、至少约12.5μm、至少约13.0μm、至少约13.5μm、至少约14μm、至少约14.5μm、至少约15μm、至少约16μm、至少约17μm或更大的直径(或最大直径)。在优选的实施方案中，成熟肌管具有至少约6.0μm、至少10μm或至少12μm的直径。在一些情况下，在没有针对成熟肌管进行纯化或选择的情况下，培养物中的肌管或肌管样细胞可以主要由具有相对较大的直径的细胞组成(例如，培养物中总细胞的超过50％、75％、80％、90％或95％)。例如，这类培养物中的肌管或肌管样细胞可以主要由至少约6.0μm、6.1μm、6.2μm、6.3μm、6.4μm、6.5μm、6.6μm、6.7μm、6.8μm、6.9μm、7.0μm、12.0μm、12.5μm、13.0μm、13.5μm、14μm、14.5μm、15μm或更大的细胞组成(例如，培养物中总细胞的超过50％、75％、80％、90％或95％)。在一些情况下，培养物中成熟肌管的百分比无需预先纯化即可达到。在一些情况下，成体样形态学至少部分地由高度多核的肌管或肌管样细胞来指示。通常，高度成核的肌管或肌管样细胞可含有每个肌管或肌管样细胞中至少约12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40个或甚至更多的细胞核。在一些情况下，本文提供的成熟肌管或肌管样细胞可包含具有多个不同数目的细胞核的细胞。例如，培养物中的许多细胞每个细胞可具有12个或更多的细胞核，而少数细胞具有12个或更少的细胞核。在一些情况下，培养物中至少50％、75％、80％、90％或95％的细胞具有12个或更多的细胞核。在一些情况下，在没有针对成熟肌管进行纯化或选择的情况下，培养物中的肌管或肌管样细胞可以主要由具有相对较大数目的细胞核的细胞组成(例如，培养物中总细胞的超过50％、75％、80％、90％或95％)。在一些情况下，成体样形态学至少部分地由具有分支的细胞来指示。例如，肌管或肌管样细胞可具有至少1、2、3、4、5、6、7、8、9或10个分支点。在一些情况下，在没有针对成熟肌管进行纯化或选择的情况下，培养物中的肌管或肌管样细胞可以主要由具有相对较高数目的分支点的细胞组成(例如，培养物中总细胞的超过50％、75％、80％、90％或95％)。在一些情况下，本文提供的方法可包括生成未成熟的肌管或肌管样细胞。通常，如果细胞长度不超过约100μm，平均直径不超过约6μm，并且每个肌管有不超过约5个细胞核，则该肌管或肌管样细胞可被认为是未成熟的。根据本文提供的方法生成的肌管或肌管样细胞可具有各种大小。可以使用计算机检测来自单个细胞的总信号来测量面积。在一些情况下，通过将细胞长度乘以细胞直径来测量面积。在一些情况下，通过将单个视野中发射的信号总量除以该视野中的细胞数来测量面积。各个肌管或肌管样细胞可具有至少约1000μm2、1200μm2、1400μm2、1500μm2、1600μm2、1700μm2、1800μm2、1900μm2、2000μm2、2200μm2、2300μm2、2400μm2、2500μm2、2600μm2、2700μm2、2800μm2、2900μm2、3000μm2、3100μm2、3200μm2、3300μm2、3400μm2、3500μm2、3600μm2、3700μm2、3800μm2、3900μm2、4000μm2、4500μm2、5000μm2、5500μm2、6000μm2、6500μm2、6700μm2、7000μm2、8000μm2、9000μm2、10000μm2、15000μm2、20000μm2或甚至更大的面积(或平均面积)。在一些情况下，在没有针对成熟肌管进行纯化或选择的情况下，培养物中的肌管或肌管样细胞可以主要由具有相对较大面积的细胞组成(例如，培养物中总细胞的超过50％、75％、80％、90％或95％)。在一些情况下，这类培养物可以主要由面积至少约为1000μm2、1200μm2、1400μm2、1500μm2、1600μm2、1700μm2、1800μm2、1900μm2、2000μm2、2200μm2、2300μm2、2400μm2、2500μm2、2600μm2、2700μm2、2800μm2、2900μm2、3000μm2、3100μm2、3200μm2、3300μm2、3400μm2、3500μm2、3600μm2、3700μm2、3800μm2、3900μm2、4000μm2、4500μm2、5000μm2、5500μm2、6000μm2、6500μm2、6700μm2、7000μm2、8000μm2、9000μm2、10000μm2、15000μm2、20000μm2或甚至更大的细胞组成(例如，培养物中总细胞的超过50％、75％、80％、90％或95％)。本文提供的方法包括生成具有成体样功能的肌管或肌管样细胞。肌管或肌管样细胞如果具有高水平的骨骼收缩基因表达，则可具有成体样功能，所述基因包括但不限于：neb(编码伴肌动蛋白(nebulin))、ttnn2a(编码肌联蛋白)、tnnt(编码肌钙蛋白t)、tnni(编码肌钙蛋白i)、tnnc(编码肌钙蛋白c)和myom1(编码肌中线蛋白)。如果肌管和肌管样细胞具有编码骨骼肌特异性酶的基因的高水平表达，则可具有成体样功能，所述基因包括但不限于ckm(编码肌肉特异性肌酸激酶)。如果肌管或肌管样细胞中基因的表达水平高于多能干细胞或非肌肉谱系细胞(例如成纤维细胞)中该基因的表达水平，则肌管或肌管样细胞可能具有高水平的基因表达。d.生成肌管或肌管样细胞的方法的效率和产率本文提供的用于从成肌细胞或成肌细胞样细胞生成肌管或肌管样细胞的方法可以在数天内发生。在某些情况下，从成肌细胞或成肌细胞样细胞生成肌管或肌管样细胞的时间段可以是约1天、2天、3天、4天、5天、6天、7天、8天、9天或10天。本文提供的方法可导致肌管或肌管样细胞的高产率，并且/或者可具有高效率。在一些情况下，通过进行本文提供的方法从多个多能干细胞生成肌管或肌管样细胞的时间(或持续时间)可以在数天至数周的量级上。在一些情况下，从多能干细胞到肌管或肌管样细胞的持续时间可以是约1天、约2天、约3天、约4天、约5天、约6天、约7天、约8天、约9天、约10天、约11天、约12天、约13天、约14天、约15天、约16天、约17天、约18天、约19天或约20天。持续时间可计算为从分化开始(例如，将多能干细胞接种在分化培养基中)到大多数多能干细胞已分化为肌管或肌管样细胞(例如当培养物中至少约50％、55％、60％、65％、70％、75％、80％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％的多能干细胞已分化为肌管或肌管样细胞)时的时间。在一些情况下，通过进行本文提供的方法使多能干细胞分化为成肌细胞的持续时间可以在数天至数周的量级上。例如，多能干细胞分化为成肌细胞的持续时间可以是约10天、约11天、约12天、约13天、约14天、约15天、约16天、约17天、约18天、约19天、约20天、约21天、约22天、约23天、约24天、约25天、约26天、约27天、约28天、约29天或约30天。持续时间可计算为从分化开始(例如，将多能干细胞接种在分化培养基中)到大多数多能干细胞已分化为成肌细胞(例如，当培养物中至少约50％、55％、60％、65％、70％、75％、80％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％的多能干细胞已分化为成肌细胞)时的时间。所述方法还可提供与用来产生肌管或肌管样细胞(例如，成熟肌管或肌管样细胞)的多能干细胞起始群体相比的高产率。在一些情况下，多能干细胞在培养物中作为群体生长；该培养物可以经历肌生成阶段，以便产生5:1的肌管或肌管样细胞与多能干细胞初始数目之比。在一些情况下，该比率至少为2:1、3:1、4:1、5:1、6:1、7:1、8:1、9:1、10:1、11:1、12:1、13:1、14:1、15:1、20:1、50:1、100:1、200:1、500:1、750:1、1000:1、1500:1、2000:1或更高。在一些情况下，该比率在2、3、4、5、6、7、8、9、10、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、30、35、40、45、50、70或100天内达到。本文提供的方法可以生成具有高纯度的成熟肌管或肌管样细胞。纯度可指相对于培养物中作为肌管或肌管样细胞的总细胞的百分比(％)或分数。在一些情况下，在进行如本文提供的分化方法之后，培养物中的肌管或肌管样细胞(例如成熟肌管或肌管样细胞)的纯度至少为约50％、55％、60％、65％、70％、75％、80％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％。在一些情况下，在未首先进行一个或多个纯化或富集步骤，如一个或多个分选步骤(例如，流式细胞术)的情况下获得纯度。在一些情况下，在未进行一个或多个纯化或富集步骤，如一个或多个分选步骤(例如，流式细胞术)的情况下，肌管或肌管样细胞(例如成熟肌管或肌管样细胞)的纯度至少为90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％。在一些情况下，在进行本公开的分化方法之后，细胞群体基本上不含神经细胞或神经祖细胞。例如，在进行本文提供的分化方法之后，细胞群体含有不超过约0.1％、0.2％、0.3％、0.4％、0.5％、0.6％、0.7％、0.8％、0.9％、1％、2％、3％、4％、5％、6％、7％、8％、9％、10％、15％、20％、25％、30％、35％或40％的神经细胞或神经祖细胞。v.通过肌细胞前体的分化产生成肌细胞本文提供的肌管或肌管样细胞通常由成肌细胞或成肌细胞样细胞产生。肌管或肌管样细胞可以从成肌细胞或成肌细胞样细胞生成，该成肌细胞或成肌细胞样细胞由卫星或卫星样细胞和多能干细胞在体外分化而来。如本文所用的，术语“成肌细胞样细胞”是指具有与天然存在的成肌细胞(例如，生物体如人体内的成肌细胞)相关的结构或功能特征，但还具有至少一种将成肌细胞样细胞与天然存在的成肌细胞区分开来的结构或功能特征的任何细胞。在优选的实施方案中，成肌细胞样细胞是这样的细胞，其(a)在体外由卫星细胞或卫星样细胞产生，该卫星细胞或卫星样细胞可以在体外从分化程度较低的细胞如干细胞(优选多能干细胞)产生或者可以并非如此产生，或者(b)衍生自成肌细胞样细胞，如由成肌细胞样细胞增殖产生的细胞。如本文所用的，术语“成肌细胞”是指具有由天然存在的成肌细胞表现出的结构和功能特征，并且可具有或不具有将其区分开的至少一种结构或功能特征的细胞。a.卫星细胞或卫星样细胞向成肌细胞的分化卫星细胞和卫星样细胞是成肌细胞前体。卫星细胞或卫星样细胞可以通过本领域已知的任何方法获得。在一些情况下，卫星细胞或卫星样细胞可以通过分化多能干细胞在体外产生。在一些情况下，卫星细胞或卫星样细胞可以是直接从哺乳动物受试者或尸体获得的原代细胞。如本文所用的，术语“卫星样细胞”是指具有与天然存在的卫星细胞(例如，生物体如人体内的卫星细胞)相关的结构或功能特征，但还具有至少一种将卫星样细胞与天然存在的卫星细胞区分开来的结构或功能特征的任何细胞。在优选的实施方案中，卫星样细胞是这样的细胞，其(a)在体外由多能干细胞(例如胚胎干细胞(es细胞)或诱导多能干细胞(ips细胞))产生，或(b)衍生自卫星样细胞，如由卫星样细胞增殖产生的细胞。如本文所用的，术语“卫星细胞”是指具有由天然存在的卫星细胞表现出的结构和功能特征，并且可具有或不具有将其区分开的至少一种结构或功能特征的细胞。在一些实施方案中，卫星样细胞是pax3-和pax7-阳性。在一些实施方案中，卫星样细胞是n-cam/cd56/leu-19阳性。在生产或获得卫星细胞或卫星样细胞后，可以将它们接种以供体外培养。卫星或卫星样细胞可以以约5x103个细胞/cm2的密度接种。在一些实例中，所述细胞可以以如下密度接种：约1.5x103个细胞/cm2至约104个细胞/cm2；约2x103个细胞/cm2至约104个细胞/cm2；约3x103个细胞/cm2至104个细胞/cm2；约4x103个细胞/cm2至约104个细胞/cm2；或约103个细胞/cm2至约9x103个细胞/cm2。卫星细胞或卫星样细胞可以直接在作为基底的组织培养级塑料上培养。在一些情况下，卫星细胞或卫星样细胞可以在包被的基底(例如，用纤连蛋白、细胞外基质、胶原、层粘连蛋白、明胶、基质胶、geltrex或其组合包被的基底)上培养。在一些情况下，卫星细胞或卫星样细胞可以在用i型胶原包被的基底上培养。卫星细胞或卫星样细胞可以在37℃、5％co2培养箱中在等于大气的氧气水平下培养生长。在一些情况下，卫星细胞或卫星样细胞可以在37℃、5％co2/5％o2培养箱中培养生长(例如，在低氧条件下)。卫星细胞或卫星样细胞可在培养中生长至少约1天、2天、3天、4天、5天、6天、7天、8天、9天、10天、11天、12天、13天或14天。在优选实施方案中，卫星细胞或卫星样细胞在培养中生长到所述细胞大约80％汇合。在一些情况下，卫星细胞或卫星样细胞可以生长到所述细胞大约60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、95％或超过95％汇合。卫星细胞或卫星样细胞可以在成肌细胞分化培养基(例如，geneabiocellsmyoblastmedium)中生长。成肌细胞培养基可含有无血清m2培养基(geneabiocells)。成肌细胞培养基可含有5％马血清。在一些情况下，肌管培养基可以补充有其它因子，包括但不限于：胰岛素、人重组表皮生长因子(hr-egf)、人重组肝细胞生长因子(hr-hgf)(peprotech)、人重组血小板衍生生长因子(hr-pdgf)(peprotech)、人重组碱性成纤维细胞生长因子(hr-bfgf)(miltenyibiotec)、制瘤素(miltenyibiotec)、胰岛素样生长因子1(miltenyibiotec)、sb431s42(miltenyibiotec)和抗坏血酸。在优选的实施方案中，成肌细胞培养基可含有无血清m2培养基，其含有5％马血清、10μg/ml胰岛素、10ng/mlhr-egf、20ng/mlhr-hgf、10ng/mlhr-pdgf、20ng/mlhr-bfgf、20μg/ml制瘤素、10ng/ml胰岛素样生长因子1、2μmsb431542和200μm抗坏血酸。b.多能干细胞向卫星细胞或卫星样细胞的分化多能干细胞可以在体外分化成卫星细胞或卫星样细胞。多能干细胞可以通过本领域已知的任何方法获得。在一些情况下，多能干细胞可以衍生自胚胎干细胞。在一些情况下，多能干细胞可以衍生自诱导多能干细胞。在一些情况下，多能干细胞可以获自哺乳动物受试者或尸体，包括但不限于患有遗传疾病的人类受试者。多能干细胞可以在诱导细胞分化成卫星细胞或卫星样细胞的化学化合物的存在下在基础培养基中培养。通常，含有一种或多种诱导多能干细胞分化成卫星细胞或卫星样细胞的化合物的基础培养基是生肌诱导培养基。在一些情况下，生肌诱导培养基可以含有无血清m2培养基和5％马血清，并且可以补充有化合物，包括但不限于wnt途径活化剂chir99021(lclaboratories)、alk5抑制剂(tgf-β受体抑制剂)(sapphirebioscience)、hr-egf、胰岛素、地塞米松(sigma-aldrich)、y27632(一种rho相关激酶抑制剂)和抗坏血酸。在优选的实施方案中，生肌诱导培养基可含有3μmchir99021、2μmalk5抑制剂、10ng/mlhr-egfhr-egf、10μg/ml胰岛素、0.4μg/ml地塞米松、10μmy27632和200μm抗坏血酸。根据本文提供的方法，卫星细胞或卫星样细胞可在体外由在生肌诱导培养基中孵育的多能干细胞分化而来。可以通过在37℃、5％co2培养箱中在生肌诱导培养基中孵育多能干细胞至少约7天、8天、9天或10天来分化卫星或卫星样细胞。在向卫星细胞或卫星样细胞分化期间，可以每天或每隔一天对多能干细胞更换生肌诱导培养基。根据本文提供的方法，可以通过强制表达与卫星或卫星样细胞相关的遗传标志物来产生卫星细胞或卫星样细胞。可以通过使用本领域已知的任何方法强制表达来产生卫星细胞或卫星样细胞，这些方法包括但不限于：将编码所需蛋白质标志物的表达载体导入细胞中，用重组病毒转导细胞，将外源纯化的多肽导入细胞中，并将外源纯化的编码目的多肽的mrna引入细胞中。卫星细胞产生的概述在分化过程期间，特化程度较低的细胞变成特化程度更高的细胞类型。分化可影响细胞的一些方面，如细胞大小、形状和/或功能性能。这些变化主要是由于基因表达的受控修饰而引起的。在分化的一个实例中，多能干细胞分化为卫星细胞或卫星样细胞。然后，针对表征卫星细胞或卫星样细胞的一些性质(例如，形态学、基因表达)对分化的卫星细胞或卫星样细胞进行筛选。然后可将满足这些筛选标准的分化的卫星细胞或卫星样细胞亚克隆并扩充。图3是根据本公开内容的实施方案，从多能干细胞分化为肌管的四个阶段的图示。图3中的图310示出通过免疫荧光染色检测到的表达多能性标志物nanog的多能干细胞。此外，图3中的图320示出分化的第一阶段，其中多能干细胞已经化学分化为表达pax3/pax7的卫星细胞或卫星样细胞。图3中的图330示出分化的第二阶段，其中卫星细胞或卫星样细胞已分化为针对成肌细胞标志物myod被免疫荧光染色的成肌细胞。此外，图3中的图340示出分化的第三阶段，其中成肌细胞连接在一起以形成肌管，该过程通过肌管形成的标志物——肌营养不良蛋白的免疫荧光染色来检测。1.多能干细胞向卫星细胞或卫星样细胞的化学分化为了使多能干细胞分化为卫星细胞或卫星样细胞，可从冷冻储液或生长中的培养物获得多能干细胞。这些多能干细胞可在化学化合物的存在下在基础培养基中培养，该化学化合物诱导在一步过程中分化为卫星细胞或卫星样细胞，该一步过程可涉及或不涉及多种培养基变化。在一些情况下，在化学化合物的存在下在基础培养基中培养多能干细胞，该化学化合物诱导在多步过程，如涉及连续添加不同化学化合物的过程中分化为卫星细胞或卫星样细胞。通常，添加有一种或多种化合物以诱导分化的基础培养基可被称为“分化培养基”。a.分化培养基组分可在化学分化过程中用来产生卫星细胞或卫星样细胞的分化培养基的实例可包括包含以下组分的培养基：基础培养基，wnt活化剂和tgf-β受体抑制剂。在一些情况下，分化培养基可包含rock抑制剂、血清组分或其组合。在一些情况下，分化培养基可包含lrrk2抑制剂。通常，本文提供的分化培养基不含生长因子。在分化培养基的实例中使用的基础培养基可以改变，但其通常包含充满营养物的培养基。可使用的基础培养基的实例为mcdb120、骨骼肌细胞基础培养基(由promocell制造)、skbm基础培养基(由lonza制造)、skbm-2基础培养基(由lonza制造)、stemcelltechnologies“apel培养基”(由stemcelltechnologies制造)或dmem/f12。此外，rock抑制剂可存在于分化培养基中。rock抑制剂可减少低细胞密度下的凋亡。在一些情况下，rock抑制剂如gsk429286a、y-27632、lx7101、sar407899、at13148、gsk269962a、sr3677、rki—1447、ttp22、slx-2119、chroman1、y-33075或法舒地尔的浓度为约100nm、500nm、1μm、2.5μm、5μm、10μm、15μm、20μm、40μm、50μm、60μm或更高。在一些情况下，rock抑制剂在从多能干细胞到卫星样细胞的分化过程期间持续存在。在一些情况下，rock抑制剂在从起始多能干细胞到卫星样细胞的分化过程的大部分期间(例如，多于1天、多于2天、多于3天、多于4天、多于5天、多于10天或多于15天)存在。基础培养基可另外包括所描述的培养基，或具有额外血清样组分的类似于上文所述培养基的培养基。这样的血清样组分可包括bsa、成纤维细胞生长因子(fgf)、胰岛素、胎球蛋白、表皮生长因子(egf)、马血清、敲除型替代血清、地塞米松或其组合。在一些实例中，bsa可以以至少约0.1％、0.5％、1％、2％、3％、4％、5％、6％、7％、8％、9％或10％，或至多约0.1％、0.5％、1％、2％、3％、4％、5％、6％、7％、8％、9％或10％的最终浓度存在。在一些情况下，细胞可与bsa接触超过1天、超过2天、超过3天、超过4天、超过5天、超过6天、超过7天、超过8天或超过9天。在一些实例中，fgf(或其它生长因子)可以以至少约0.5ng/ml、1ng/ml、1.5ng/ml、2ng/ml、2.5ng/ml、3ng/ml、3.5ng/ml、4ng/ml、4.5ng/ml、5ng/ml、6ng/ml、7ng/ml、8ng/ml、9ng/ml、10ng/ml、15ng/ml、20ng/ml或25ng/ml的最终浓度存在。在一些情况下，fgf以至多约0.5ng/ml、1ng/ml、1.5ng/ml、2ng/ml、2.5ng/ml、3ng/ml、3.5ng/ml、4ng/ml、4.5ng/ml、5ng/ml、6ng/ml、7ng/ml、8ng/ml、9ng/ml、10ng/ml、15ng/ml、20ng/ml或25ng/ml的浓度存在。在一些情况下，细胞可与fgf接触超过1天、超过2天、超过3天、超过4天、超过5天、超过6天、超过7天、超过8天或超过9天。在一些实例中，胰岛素可以以至少约2μg/ml、3μg/ml、4μg/ml、5μg/ml、6μg/ml、7μg/ml、8μg/ml、9μg/ml或10μg/ml的浓度存在。在一些情况下，细胞可与胰岛素接触超过1天、超过2天、超过3天、超过4天、超过5天、超过6天、超过7天、超过8天或超过9天。在一些情况下，分化培养基基本不含生长因子或不存在任何生长因子(例如，没有egf、fgf、fgf2、胰岛素等)。在一些情况下，分化培养基基本不含异种物质(“无异种物质(xeno)”)或基本不存在来源于非人类生物体的组分。在一些情况下，分化培养基既不含生长因子也不含异种物质。在一些实例中，胎球蛋白可以以10μg/ml、20μg/ml、30μg/ml、40μg/ml、50μg/ml、60μg/ml、70μg/ml、80μg/ml、90μg/ml或100μg/ml的最终浓度存在。可添加egf至5ng/ml、10ng/ml、15ng/ml和20ng/ml的最终浓度。在一些情况下，细胞可与胎球蛋白接触超过1天、超过2天、超过3天、超过4天、超过5天、超过6天、超过7天、超过8天或超过9天。在一些实例中，马血清可以以0.1％、0.5％、1％、2％、3％、4％、5％、6％、7％、8％、9％或10％的最终浓度存在。在一些情况下，细胞可与马血清接触超过1天、超过2天、超过3天、超过4天、超过5天、超过6天、超过7天、超过8天或超过9天。在一些实例中，敲除型替代血清可以以0.1％、0.5％、1％、2％、3％、4％、5％、6％、7％、8％、9％或10％的最终浓度存在。在一些情况下，细胞可与敲除型替代血清接触超过1天、超过2天、超过3天、超过4天、超过5天、超过6天、超过7天、超过8天或超过9天。在一些实例中，地塞米松可以以约0.1μg/ml至1μg/ml，如0.1μg/ml、0.2μg/ml、0.3μg/ml、0.4μg/ml、0.5μg/ml、0.6μg/ml、0.7μg/ml、0.8μg/ml、0.9μg/ml或1μg/ml的最终浓度存在。在一些情况下，细胞可与地塞米松接触超过1天、超过2天、超过3天、超过4天、超过5天、超过6天、超过7天、超过8天或超过9天。除了基础培养基和可选的rock抑制剂和/或血清组分之外，分化培养基还可包含有助于多能干细胞(或其它类型的干细胞如多潜能干细胞)分化为卫星细胞或卫星样细胞的化合物。特别地，暴露于wnt途径活化剂以及tgf-β受体抑制剂(单独地或组合地)的多能干细胞(或其它类型的干细胞)可分化为卫星细胞或卫星样细胞。此外，使用这种方法产生的卫星细胞或卫星样细胞可能能够形成成肌细胞。在一些情况下，在用于将多能干细胞分化为卫星细胞或卫星样细胞的分化培养基中存在的化合物为wnt途径活化剂。此类活化剂可包括chir99021、ar-a014418、azd-1080、chir-98014、im-12、kenpaullone、1-azakenpaullone、ly2090314、sb216763、sb415286、tdzd-8、tideglusib、tws119、azd-2858、way-316606、bml-284、qs11、iq1、enzastaurin、sotrastaurin、星形孢菌素(staurosporin)、go6983、go6976、ro31-8220、米哚妥林(midostaurin)、丙戊酸(vpa)或脱氧胆酸(dca)。特别地，wnt途径活化剂的使用可用作gsk抑制剂(例如，gsk3-β抑制剂)。在一些实例中，wnt途径活化剂chir99021可以以约0.01μm、0.05μm、0.1μm、0.2μm、0.5μm、0.7μm、1μm、1.5μm、2μm、2.5μm、3μm、4μm、5μm、6μm、7μm、8μm、9μm、10μm、11μm、12μm、12.5μm、13μm、14μm、15μm、16μm、17μm、18μm、19μm、20μm、25μm、30μm、35μm、40μm或50μm或更高的浓度存在于分化培养基中。在一些情况下，细胞可与wnt途径活化剂chir99021接触超过1天、超过2天、超过3天、超过4天、超过5天、超过6天、超过7天、超过8天或超过9天。在一些实例中，wnt途径活化剂azd1080可以以约0.01μm、0.05μm、0.1μm、0.2μm、0.5μm、0.7μm、1μm、1.5μm、2μm、2.5μm、3μm、4μm、5μm、6μm、7μm、8μm、9μm、10μm、11μm、12μm、12.5μm、13μm、14μm、15μm、16μm、17μm、18μm、19μm、20μm、25μm、30μm、35μm、40μm或50μm或更高的浓度存在于分化培养基中。在一些情况下，细胞可与azd1080接触超过1天、超过2天、超过3天、超过4天、超过5天、超过6天、超过7天、超过8天或超过9天。在一些实例中，wnt途径活化剂qs11可以以约0.01μm、0.05μm、0.1μm、0.2μm、0.5μm、0.7μm、1μm、1.5μm、2μm、2.5μm、3μm、4μm、5μm、6μm、7μm、8μm、9μm、10μm、11μm、12μm、12.5μm、13μm、14μm、15μm、16μm、17μm、18μm、19μm、20μm、25μm、30μm、35μm、40μm或50μm或更高的浓度存在于分化培养基中。在一些情况下，细胞可与qs11接触超过1天、超过2天、超过3天、超过4天、超过5天、超过6天、超过7天、超过8天或超过9天。在一些实例中，wnt途径活化剂iq1可以以约1μg/ml、2μg/ml、3μg/ml、4μg/ml、5μg/ml、6μg/ml、7μg/ml、8μg/ml、9μg/ml、10μg/ml、11μg/ml、12μg/ml、13μg/ml、14μg/ml、15μg/ml、16μg/ml、17μg/ml、18μg/ml、19μg/ml或20μg/ml或更高的浓度存在于分化培养基中。在一些情况下，细胞可与iq1接触超过1天、超过2天、超过3天、超过4天、超过5天、超过6天、超过7天、超过8天或超过9天。在一些实例中，vpa可以以0.005μm、0.01μm、0.05μm、0.1μm、0.5μm、1μm、2μm、2.5μm、3μm、4μm、5μm、6μm、7μm、8μm、9μm、10μm、11μm、12μm、12.5μm、13μm、14μm、15μm、16μm、17μm、18μm、19μm、20μm或更高的浓度存在于分化培养基中。在一些情况下，细胞可与vpa接触超过1天、超过2天、超过3天、超过4天、超过5天、超过6天、超过7天、超过8天或超过9天。在一些实例中，wnt途径活化剂dca可以以约0.1μm、0.5μm、1μm、5μm、10μm、15μm、20μm、25μm、30μm、35μm、40μm、45μm、50μm、55μm、60μm、65μm、70μm、75μm、80μm、85μm、90μm、95μm或100μm或更高的浓度存在于分化培养基中。在一些情况下，细胞可与dca接触超过1天、超过2天、超过3天、超过4天、超过5天、超过6天、超过7天、超过8天或超过9天。在一些情况下，tgf-β受体抑制剂单独地或与另一种化学剂如wnt途径活化剂组合地存在于分化培养基中。tgf-β受体抑制剂通常能够抑制tgf-β受体信号传导途径的至少一部分。在一些情况下，tgf-β受体抑制剂可抑制i型tgf-β受体信号传导途径的至少一部分；在一些情况下，tgf-β受体抑制剂可抑制ii型tgf-β受体信号传导途径。tgf-β受体抑制剂的实例可包括alk5抑制剂、sb431542和a83-01。具体而言，tgf-β受体抑制剂的使用可用作alk抑制剂，如alk5抑制剂。在一些实例中，tgf-β受体抑制剂(例如，alk5抑制剂)可以以约0.01μm、0.05μm、0.1μm、0.2μm、0.5μm、0.7μm、1μm、1.5μm、2μm、2.5μm、3μm、4μm、5μm、6μm、7μm、8μm、9μm、10μm、11μm、12μm、12.5μm、13μm、14μm、15μm、16μm、17μm、18μm、19μm、20μm、25μm、30μm、35μm、40μm或50μm或更高的浓度存在于分化培养基中。在一些情况下，细胞可与tgf-β受体抑制剂(例如，alk5抑制剂)接触超过1天、超过2天、超过3天、超过4天、超过5天、超过6天、超过7天、超过8天或超过9天。在一些实例中，sb431542可以以约0.01μm、0.05μm、0.1μm、0.2μm、0.5μm、0.7μm、1μm、1.5μm、2μm、2.5μm、3μm、4μm、5μm、6μm、7μm、8μm、9μm、10μm、11μm、12μm、12.5μm、13μm、14μm、15μm、16μm、17μm、18μm、19μm、20μm、25μm、30μm、35μm、40μm或50μm或更高的浓度存在于分化培养基中。在一些情况下，细胞可与sb431542接触超过1天、超过2天、超过3天、超过4天、超过5天、超过6天、超过7天、超过8天或超过9天。在一些实例中，a83-01可以以约0.01μm、0.05μm、0.1μm、0.2μm、0.5μm、0.7μm、1μm、1.5μm、2μm、2.5μm、3μm、4μm、5μm、6μm、7μm、8μm、9μm、10μm、11μm、12μm、12.5μm、13μm、14μm、15μm、16μm、17μm、18μm、19μm、20μm、25μm、30μm、35μm、40μm或50μm或更高的浓度存在于分化培养基中。在一些情况下，细胞可与a83-01接触超过1天、超过2天、超过3天、超过4天、超过5天、超过6天、超过7天、超过8天或超过9天。除了存在wnt途径活化剂和tgf-β受体抑制剂之外，还可存在另外的信号传导分子。这样的信号传导分子可包括运铁蛋白、抗坏血酸、xav939、vegf、fgf、bix01294、igf-1、头蛋白、肌酸、pd169316、smo拮抗剂、马血清或丁酸钠。在一些实例中，运铁蛋白可以以约10μg/ml、30μg/ml、50μg/ml、70μg/ml、90μg/ml、110μg/ml、130μg/ml、150μg/ml、170μg/ml、190μg/ml、210μg/ml、230μg/ml、250μg/ml、270μg/ml或300μg/ml或更高的浓度存在于细胞培养物中。在一些情况下，细胞可与运铁蛋白接触超过1天、超过2天、超过3天、超过4天、超过5天、超过6天、超过7天、超过8天或超过9天。在一些实例中，抗坏血酸可以以约10μm、30μm、50μm、70μm、90μm、110μm、130μm、150μm、170μm、190μm、210μm、230μm、250μm、270μm，或290μm、310μm、330μm、350μm、370μm或400μm或更高的浓度存在于分化培养基中。在一些情况下，细胞可与抗坏血酸接触超过1天、超过2天、超过3天、超过4天、超过5天、超过6天、超过7天、超过8天或超过9天。在一些实例中，xav939可以以约0.01μm、0.05μm、0.1μm、0.2μm、0.5μm、0.7μm、1μm、1.5μm、2μm、2.5μm、3μm、4μm、5μm、6μm、7μm、8μm、9μm、10μm、11μm、12μm、12.5μm、13μm、14μm、15μm、16μm、17μm、18μm、19μm、20μm、25μm、30μm、35μm、40μm或50μm或更高的浓度存在于分化培养基中。在一些情况下，细胞可与xav939接触超过1天、超过2天、超过3天、超过4天、超过5天、超过6天、超过7天、超过8天或超过9天。在一些实例中，vegf可以以5ng/ml、10ng/ml、15ng/ml、20ng/ml、25ng/ml、30ng/ml、35ng/ml、40ng/ml、45ng/ml或50ng/ml的浓度存在于分化培养基中。在一些情况下，细胞可与vegf接触超过1天、超过2天、超过3天、超过4天、超过5天、超过6天、超过7天、超过8天或超过9天。在一些实例中，成纤维细胞生长因子(fgf)家族成员(例如，fgf、fgf1、fgf2、fgf3等)可以以约1ng/ml、5ng/ml、10ng/ml、15ng/ml、20ng/ml、25ng/ml、30ng/ml、35ng/ml、40ng/ml、45ng/ml、50ng/ml、100ng/ml、250ng/ml或500ng/ml或更高的浓度存在于分化培养基中。在一些情况下，细胞可与fgf接触超过1天、超过2天、超过3天、超过4天、超过5天、超过6天、超过7天、超过8天或超过9天。在一些实例中，组蛋白甲基转移酶抑制剂(例如，bix01294)可以以约0.01μm、0.05μm、0.1μm、0.2μm、0.5μm、0.7μm、1μm、1.5μm、2μm、2.5μm、3μm、4μm、5μm、6μm、7μm、8μm、9μm、10μm、11μm、12μm、12.5μm、13μm、14μm、15μm、16μm、17μm、18μm、19μm、20μm、25μm、30μm、35μm、40μm或50μm或更高的浓度存在于分化培养基中。在一些实例中，细胞可与bix01294接触超过1天、超过2天、超过3天、超过4天、超过5天、超过6天、超过7天、超过8天或超过9天。在一些实例中，igf-1可以以0.5ng/ml、1ng/ml、5ng/ml、10ng/ml、15ng/ml、20ng/ml、25ng/ml、30ng/ml、35ng/ml、40ng/ml、45ng/ml或50ng/ml的浓度存在于分化培养基中。在一些实例中，细胞可与fgf接触超过1天、超过2天、超过3天、超过4天、超过5天、超过6天、超过7天、超过8天或超过9天。在一些实例中，头蛋白可以以10ng/ml、30ng/ml、50ng/ml、70ng/ml、90ng/ml、110ng/ml、130ng/ml、150ng/ml、170ng/ml，或190ng/ml、210ng/ml、230ng/ml或250ng/ml的浓度存在于分化培养基中。在一些实例中，细胞可与头蛋白接触超过1天、超过2天、超过3天、超过4天、超过5天、超过6天、超过7天、超过8天或超过9天。在一些实例中，肌酸可以以约0.1mm、0.5mm、1mm、2mm、5mm、10mm、20mm、50mm或更高的浓度存在于分化培养基中。在一些情况下，细胞可与肌酸接触超过1天、超过2天、超过3天、超过4天、超过5天、超过6天、超过7天、超过8天或超过9天。在一些实例中，pd169316可以以约0.001μm、0.005μm、0.01μm、0.05μm、0.1μm、0.2μm、0.5μm、0.7μm、1μm、1.5μm、2μm、2.5μm、3μm、4μm、5μm、6μm、7μm、8μm、9μm、10μm、11μm、12μm、12.5μm、13μm、14μm、15μm、16μm、17μm、18μm、19μm、20μm、25μm、30μm、35μm、40μm或50μm的浓度存在于分化培养基中。在一些情况下，细胞可与pd169316接触超过1天、超过2天、超过3天、超过4天、超过5天、超过6天、超过7天、超过8天或超过9天。在一些实例中，smo拮抗剂可以以约0.001μm、0.005μm、0.01μm、0.05μm、0.1μm、0.2μm、0.5μm、0.7μm、1μm、1.5μm、2μm、2.5μm、3μm、4μm、5μm、6μm、7μm、8μm、9μm、10μm、11μm、12μm、12.5μm、13μm、14μm、15μm、16μm、17μm、18μm、19μm、20μm、25μm、30μm、35μm、40μm或50μm或更高的浓度存在于分化培养基中。在一些情况下，细胞可与smo拮抗剂接触超过1天、超过2天、超过3天、超过4天、超过5天、超过6天、超过7天、超过8天或超过9天。在一些实例中，马血清可以以约0.1％、0.5％、1％、2％、3％、4％、5％、6％、7％、8％、9％或10％或更高的浓度存在于分化培养基中。在一些情况下，细胞可与马血清接触超过1天、超过2天、超过3天、超过4天、超过5天、超过6天、超过7天、超过8天或超过9天。在一些实例中，丁酸钠可以以约0.1μm、0.5μm、1μm、2μm、5μm、10μm、30μm、50μm、70μm、90μm、110μm、130μm、150μm、170μm、190μm、210μm、230μm、250μm、270μm，或290μm、310μm、330μm、350μm、370μm或400μm或更高的浓度存在于分化培养基。在一些情况下，细胞可与丁酸钠接触超过1天、超过2天、超过3天、超过4天、超过5天、超过6天、超过7天、超过8天或超过9天。在一些情况下，alk5抑制剂可包括2-(3-(6-甲基吡啶-2-基)-1h-吡唑-4-基)-1,5-萘啶，在一些实例中，该化合物可以以0.01μm、0.05μm、0.1μm、0.5μm、1μm、2μm、2.5μm、3μm、4μm、5μm、6μm、7μm、8μm、9μm、10μm、11μm、12μm、12.5μm、13μm、14μm、15μm、16μm、17μm、18μm、19μm、20μm、25μm、30μm、35μm、40μm或50μm或更高的浓度存在。在一个具体的实施方案中，alk5抑制剂2-(3-(6-甲基吡啶-2-基)-1h-吡唑-4-基)-1,5-萘啶的浓度为2μm或约2μm。在一些情况下，在用于使多能干细胞分化为卫星细胞或卫星样细胞的分化培养基中存在的化合物为富亮氨酸重复序列激酶2(lrrk2)抑制剂。这样的抑制剂可包括但不限于lrrk2-in-1、czc54252、gsk2578215a、gne-0877、gne-7915、gne-9605和pf06447475。在一些实例中，lrrk2抑制剂为lrrk2-in-1。lrrk2-in-1可以以约1nm、5nm、10nm、20nm、30nm、40nm、50nm、60nm、70nm、80nm、90nm、100nm、200nm、300nm、400nm、500nm、600nm、700nm、800nm、900nm、1μm、2μm、3μm、4μm、5μm、10μm、20μm、30μm、40μm、50μm、60μm、70μm、80μm、90μm、100μm或大于100μm的浓度存在于分化培养基中。在一些情况下，细胞可与lrrk2-in-1接触超过1天、超过2天、超过3天、超过4天、超过5天、超过6天、超过7天、超过8天或超过9天。b.将多能干细胞暴露于分化培养基通过将多能干细胞(或其它类型的干细胞)与一种或多种分化培养基接触，可使多能干细胞(或其它类型的干细胞)分化为卫星细胞或卫星样细胞。本文提供的方法包括使多能干细胞(或其它干细胞)分化的一步法，其中单个药剂或同时提供的药剂的单个组合触发该分化途径。在一些情况下，该方法可包括将核酸引入多能干细胞中(例如，经由转染、转导、病毒转导、电穿孔等)，使得多能干细胞表达该核酸。在一些情况下，该方法不包括将核酸引入多能干细胞中，或不包括将核酸转染到多能干细胞中，或不包括将核酸电穿孔到多能干细胞中，或不包括将核酸(例如，经由病毒载体)转导到多能干细胞中，使得该核酸由细胞表达并且引起或有助于多能干细胞分化为卫星细胞或卫星样细胞。在一些情况下，该方法包括将生肌蛋白引入多能干细胞。在一些情况下，该方法不包括将生肌蛋白引入多能干细胞。在一些实例中，可如本文所述或通过本领域已知的任何方法对多能干细胞进行接种和培养，例如通过在合适的培养基中作为单细胞进行平板接种。在一些情况下，多能干细胞与分化培养基在单个步骤中接触，从而导致多能干细胞分化为卫星细胞或卫星样细胞或以其它方式生成卫星细胞或卫星样细胞。通常，一步接触可包括将多能干细胞与一次性或随时间连续提供给细胞的单个分化培养基接触(例如，经由培养基更换)。在一些情况下，一步接触可包括将多能干细胞与随时间以不同浓度提供给细胞的单个分化培养基接触(例如，涉及改变分化培养基浓度的培养基更换)。在一些实施方案中，单个分化培养基中存在的组分足以导致多能干细胞分化为卫星细胞或卫星样细胞(例如，具有与那些天然存在的卫星细胞类似的功能、结构、形态或表达标志物特征的细胞)。在一些实施方案中，单个分化培养基中存在的组分足以导致从多能干细胞生成卫星细胞或卫星样细胞。在一些情况下，当细胞连续暴露于该组分时(例如，经由一种或多种培养基更换)，单个分化培养基中存在的组分足以导致多能干细胞分化为卫星细胞或卫星样细胞。在一些情况下，将多能干细胞与单个分化培养基接触包括将细胞与分化培养基连续接触。在其它情况下，将多能干细胞与单个分化培养基接触包括将细胞与分化培养基间歇或连续接触。在一些情况下，本文提供的培养基内的一种组分或一系列组分可以能够直接导致从一个或多个多能干细胞生成卫星细胞或卫星样细胞。例如，在一些情况下，wnt途径活化剂和tgf-β受体抑制剂一起可以能够在不添加额外分化剂的情况下导致从多能干细胞生成卫星细胞或卫星样细胞。在一些情况下，所述接触包括将多能干细胞与两种或更多种不同的分化培养基接触。所述两种或更多种不同的分化培养基可包含不同的组分。在一些情况下，所述两种或更多种不同的分化培养基为2种或更多种、3种或更多种、4种或更多种、5种或更多种、6种或更多种、7种或更多种、8种或更多种、9种或更多种、或10种或更多种不同的分化培养基。在一些情况下，多能干细胞可接触或暴露于一种或多种分化培养基(在进行或不进行培养基更换的情况下)至少1天、至少2天、至少3天、至少4天、至少5天、至少6天、至少7天、至少8天、至少9天、至少10天、至少11天、至少12天、至少13天、至少14天、至少21天或至少28天。在一些情况下，多能干细胞可与一种或多种分化培养基接触(在进行或不进行培养基更换的情况下)至多1天、至多2天、至多3天、至多4天、至多5天、至多6天、至多7天、至多8天、至多9天、至多10天、至多11天、至多12天、至多13天、至多14天、至多21天或至多28天。在一些情况下，多能干细胞接触或暴露于分化培养基约12小时、1天、2天、3天、4天、5天、6天、7天、8天、9天、10天、11天、12天、13天、14天、21天、28天、30天、35天、40天、45天、50天、55天、60天、65天或70天。所述一种或多种多能干细胞可与分化培养基的化合物同时接触，例如，将两种或更多种化合物在重叠的时间范围内施用于多能干细胞。例如，多能干细胞可在第1-3天与一种化合物接触，并在第2-5天与第二种化合物接触。在一些情况下，所述一种或多种多能干细胞可与分化培养基的化合物同时接触。例如，多能干细胞可在相同的时间范围内与两种化合物接触(例如，在第1-3天与两种化合物接触)。在一些情况下，多能干细胞与分化培养基的两种或更多种化合物连续或顺序接触。例如，多能干细胞可在第1-3天与一种化合物接触，并在第4-6天与第二种化合物接触。可在单个步骤中添加分化培养基的组分。可顺序添加培养基的组分。此外，可同时添加分化培养基的组分。还可通过在施加第二组分之前将细胞与一种组分接触一段时间，以重叠的方式添加分化培养基的组分。还可单独或混合地向细胞添加培养基的组分。这些添加可在整个过程中不改变培养基组分的情况下进行，使得分化因暴露于单个培养基组合物而发生。如本文所述，可随时间改变或更换分化培养基。在一些情况下，改变、添加或替换分化培养基。通常，在整个这些培养基更换中，分化培养基的组成在多能干细胞向卫星细胞或卫星样细胞的整个分化中保持稳定。在一些情况下，分化培养基的组分是变化的。可定期，如每六小时、每12小时、每一天、每隔一天、每三天、每四天或每五天进行培养基更换。在一些情况下，在使多能干细胞分化为卫星细胞或卫星样细胞的过程期间，分化培养基更换了至少1、2、3、4、5、6、7、8、9、10或15次。还可如在恒化培养中，连续添加和去除培养基。多能干细胞可连续暴露于分化培养基。可在将多能干细胞返回维持培养基之前，暴露于分化培养基一段时间。此外，分化可持续特定的时间量(例如，三天、五天、七天、十天或十五天)或直至检测到给定基因或形态学标志物。c.产生卫星细胞和卫星样细胞的方法的产率、效率和其它有益特征本文提供的方法可导致卫星细胞或卫星样细胞的高产率，并且/或者可具有高效率。例如，当使用如本文所述的分化培养基使体外培养物中的多个多能干细胞分化时，从所述多个多能干细胞分化的细胞中超过40％可表达pax3、pax7和/或cd56。在一些情况下，从所述多个多能干细胞分化的细胞中超过20％、30％、40％、45％、50％、55％、60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％可表达pax3、pax7和/或cd56。在一些情况下，从所述多个多能干细胞分化的细胞中超过20％、30％、40％、45％、50％、55％、60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％能够分化为成肌细胞。在一些情况下，从所述多个多能干细胞分化的细胞中超过20％、30％、40％、45％、50％、55％、60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％能够分化为功能性成肌细胞。在一些情况下，通过进行本文提供的方法从多个多能干细胞生成卫星细胞或卫星样细胞的时间(或持续时间)可以在数天至数周的量级上。在一些情况下，从多能干细胞到卫星细胞或卫星样细胞的持续时间可以是约1天、约2天、约3天、约4天、约5天、约6天、约7天、约8天、约9天、约10天、约11天、约12天、约13天、约14天、约15天、约16天、约17天、约18天、约19天或约20天。持续时间可计算为从分化开始(例如，将多能干细胞接种在分化培养基中)到大多数多能干细胞已分化为卫星细胞或卫星样细胞(例如当培养物中至少约50％、55％、60％、65％、70％、75％、80％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％的多能干细胞已分化为卫星细胞或卫星样细胞)时的时间。在一些情况下，通过进行本文提供的方法使多能干细胞分化为成肌细胞的持续时间可以在数天至数周的量级上。例如，多能干细胞分化为成肌细胞的持续时间可以是约10天、约11天、约12天、约13天、约14天、约15天、约16天、约17天、约18天、约19天、约20天、约21天、约22天、约23天、约24天、约25天、约26天、约27天、约28天、约29天或约30天。持续时间可计算为从分化开始(例如，将多能干细胞接种在分化培养基中)到大多数多能干细胞已分化为成肌细胞(例如，当培养物中至少约50％、55％、60％、65％、70％、75％、80％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％的多能干细胞已分化为成肌细胞)时的时间。在体外培养物中提供的多能干细胞可与一种化合物接触，或与两种或更多种化合物同时接触，从而使所述人多能干细胞分化为表达pax3、pax7和/或cd56(例如pax3/cd56、pax7/cd56、pax3/pax7/cd56)的细胞。特别地，表达pax3、pax7和/或cd56的细胞可具有形成成肌细胞的潜力，其产率使得在一定的时间内(例如，九天的时间)从所述多能干细胞生成多于5个表达pax3、pax7和/或cd56的细胞。因此，当多能干细胞作为培养物中的群体生长时，该培养物可以以与多能干细胞的初始数目相比至少为5:1的比率产生表达pax3、pax7和/或cd56的细胞。在一些情况下，该比率至少为2:1、3:1、4:1、5:1、6:1、7:1、8:1、9:1、10:1、11:1、12:1、13:1、14:1、15:1、20:1、50:1或100:1。在一些情况下，该比率在2、3、4、5、6、7、8、9、10、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、30、35、40,45、50、70或100天内达到。vi.遗传修饰根据本文提供的方法将遗传修饰引入成熟肌管或肌管样细胞可以产生用于开发细胞和药物疗法以治疗具有肌肉缺乏的受试者的有用工具。例如，可以对成熟肌管或肌管样细胞进行遗传修饰以纠正与遗传性肌肉疾病或病症相关的突变，然后移植到患有疾病或病症的受试者中以改善该受试者的症状。在一些情况下，可以对成熟肌管或肌管样细胞进行遗传修饰以具有已知或怀疑引起遗传性肌病的突变。这类遗传修饰的肌管或肌管样细胞可以作为筛选可以逆转或减轻疾病症状的药物的平台。可以通过本领域已知的任何方法引入遗传修饰，例如转染、转导、crispr介导的方法。在一些情况下，该遗传修饰可涉及将突变基因的野生型引入到肌管或肌管样细胞中。在一些情况下，该遗传修饰可涉及将突变基因的野生型删除或突变到肌管或肌管样细胞中。可将已知可导致遗传疾病的一个或多个突变引入健康的干细胞系中，该干细胞系随后分化成卫星细胞或卫星样细胞，其最终用来使用所提供的方法产生成熟的肌管或肌管样细胞。例如，可删除肌营养不良蛋白基因或肌营养不良蛋白基因的一部分，或一个或多个外显子，以便引起移码突变或以其它方式使该基因变得无功能。在雄性(男性)或雌性(女性)干细胞系中，突变可以是杂合的或纯合的。所得的经修饰干细胞系可分化为卫星细胞或卫星样细胞，并进一步分化为成肌细胞和肌管。这些卫星细胞、卫星样细胞、成肌细胞和肌管可显示出由引入的突变引起的疾病相关表型。未遗传修饰的干细胞系可用作同基因对照，该同基因对照可用于药物筛选、疾病建模和疾病研究。成肌细胞或成肌细胞样细胞、卫星或卫星样细胞以及多能干细胞可以进行遗传修饰，然后在本文提供的方法中使用。可对携带导致疾病或病症的一个或多个遗传突变的成肌细胞进行遗传修饰，以纠正该突变并由此减轻受试者所经历的疾病或病症。在一些情况下，可对携带导致疾病或病症的一个或多个遗传突变的干细胞如干细胞系进行遗传修饰，以纠正该突变并由此减轻受试者所经历的疾病或病症。该遗传修饰可通过本领域已知的任何方法实现。本文描述的方法可以包括直接从患有影响受试者肌肉组织的遗传疾病或病症的受试者获得成肌细胞。可以对所述成肌细胞进行遗传修饰以纠正突变。遗传修饰的成肌细胞可以在体外分化为成熟的肌管。在一些情况下，可以将遗传修饰的成肌细胞引入受试者中，并且其可以在体内分化为成熟的肌管。在一些情况下，用遗传修饰的成肌细胞或肌管治疗的受试者可经历与该遗传疾病或病症相关的症状的减轻。在一些情况下，用遗传修饰的成肌细胞或肌管治疗的受试者可能不再经历与该遗传疾病或病症相关的症状。在一些情况下，用遗传修饰的成肌细胞或肌管治疗的受试者可经历与该遗传疾病或病症相关的症状的暂时减轻。成肌细胞以外的细胞(例如，血细胞、皮肤细胞)可以从具有遗传疾病或病症的受试者获得，并且可以经受使其成为多能干细胞或多潜能干细胞的条件。在一些情况下，可从患有影响受试者肌肉组织的遗传疾病或病症(例如，肌营养不良、杜氏肌营养不良、脊髓性肌萎缩等)的受试者获得细胞。然后，可使所述细胞经受使其能够变成多能干细胞或多潜能干细胞的条件。例如，所述细胞可经历去分化并变成诱导多能干细胞，特别是诱导多能干细胞系。可对所述多能干细胞(或细胞系)进行遗传修饰以纠正突变。例如，受试者可在肌营养不良蛋白(dmd)基因中具有一个或多个突变，并且可对来源于该受试者的干细胞进行遗传修饰以纠正这类突变或这类突变的一部分。可采用本文所述的方法使所述修饰的多能干细胞分化为卫星细胞或卫星样细胞。然后，可将所述修饰的卫星细胞或卫星样细胞引入患有遗传疾病或病症的受试者中，以便治疗或改善该病症的一个或多个方面。在一些情况下，根据本文所述的方法，所述修饰的卫星或卫星样细胞可以分化为成肌细胞和成熟肌管。可将所得到的经修饰的成肌细胞和/或经修饰的成熟肌管引入患有遗传疾病或病症的受试者中，以便治疗或改善该病症的一个或多个方面。vii.应用本文提供的化合物(例如，检查点抑制剂、chk1抑制剂、chir-124)、根据本文提供的方法生成的成熟肌管或肌管样细胞(或其前体，如胚胎干细胞、诱导多能干细胞(ipsc)、卫星细胞、成肌细胞或成肌细胞样细胞)可用于多种临床和研究应用。在一些情况下，可将在体外生成的成熟肌管或肌管样细胞(或其前体)移植到具有肌肉缺乏的受试者中。在一些情况下，根据本文提供的方法生成的成熟肌管或肌管样细胞可用来筛选可抵消肌肉缺乏表型的药物。本公开还提供了许多化合物(例如，chk1抑制剂)，其可用来在体外生成肌管或肌管样细胞，或与体内细胞疗法的施用联合使用。本公开还提供了包含本文提供的任何化合物(例如，chk1抑制剂)的药物。所述药物可以单独施用，或者在一些情况下，所述药物与另一种疗法(例如，协同混合物、药物疗法和细胞疗法)联合施用。a.细胞疗法胚胎干细胞、ipsc、卫星细胞、卫星样细胞、成肌细胞、肌管或肌管样细胞可根据本文的方法用作治疗患有疾病或病症(例如，遗传缺陷)，特别是影响肌肉功能的疾病或病症的受试者的疗法。该疗法可涉及治疗疾病的病因并且/或者治疗疾病或病症的影响。可将肌管或肌管样细胞转移至或靠近受试者的受伤部位；或者可以以允许细胞以迁移或归巢至受伤部位的方式将细胞引入受试者。例如，可将细胞包封在设计为将细胞运送至感兴趣部位的材料如微胶囊中。在一些实例中，所转移的细胞可有利地代替受损、病变或受伤的细胞，并且使得受试者的整体状况得到改善。在一些情况下，所转移的细胞可刺激组织生成或修复。在代表性实例中，患有肌肉退行性疾病或其它肌肉疾病(例如，肌肉损伤)的受试者用胚胎干细胞、ipsc、卫星细胞、卫星样细胞、成肌细胞、根据本文所述方法从成肌细胞衍生的肌管或根据本文所述方法从成肌细胞衍生的肌管样细胞治疗。在一些实施方案中，可通过使成肌细胞与根据本文公开内容的一种或多种药剂(例如，chir-124或其它chk1抑制剂，尤其是其它喹啉酮chk-1抑制剂)接触来分化成肌细胞，以在体外将所述细胞分化为成熟肌管或肌管样细胞，继而将其移植或植入到受试者体内。在优选的实施方案中，可将肌管前体细胞、肌管或肌管样细胞引入受试者的肌肉内，特别是患有肌肉退行性疾病或病症的受试者的肌肉内。在一些实施方案中，肌管前体细胞(例如，胚胎干细胞、ipsc、卫星细胞、卫星样细胞、成肌细胞、成肌细胞样细胞或其它肌肉前体细胞)在移植或植入受试者后通过使所述细胞与一种或多种化合物接触来分化，以将所述肌管前体细胞分化为肌管或肌管样细胞。该接触可以直接进行，例如通过在移植前将所述细胞与所述化合物混合；或者通过向受试者施用所述一种或多种化合物来间接进行。在一些实例中，将经遗传修饰或衍生自遗传改变的细胞(如遗传修饰的成肌细胞或多能干细胞)的肌管或肌管前体细胞(例如，胚胎干细胞、ipsc、卫星细胞、卫星样细胞、成肌细胞或成肌细胞样细胞)引入受试者中。在一些实例中，可由患有由遗传突变引起的肌肉缺乏疾病或病症如肌营养不良的患者生成诱导多能干细胞系。可在诱导多能干细胞中纠正突变，然后可根据本公开内容使该诱导多能干细胞分化为卫星细胞、卫星样细胞、成肌细胞、成肌细胞样细胞、肌管或肌管样细胞。然后可将具有纠正的突变的卫星细胞、卫星样细胞、成肌细胞、成肌细胞样细胞、肌管或肌管样细胞移植至患者中，以便恢复、改善或增强肌肉功能。然后可将具有纠正的突变的卫星细胞、卫星样细胞、成肌细胞、成肌细胞样细胞、肌管或肌管样细胞移植至患者中，随后恢复、改善或增强肌肉功能。在一些具体的实例中，诱导多能干细胞(或诱导多能干细胞系)可由具有导致肌营养不良(例如，杜氏肌营养不良)的突变的患者生成。可使用本领域已知的遗传修饰技术在诱导多能干细胞中纠正突变。可根据本公开内容使遗传修饰的诱导多能干细胞分化为肌管或肌管样细胞。在一些实施方案中，将肌管或肌管样细胞移植至患者中，在其中它们可产生功能性的非突变蛋白质，从而恢复或增强肌肉功能。在其它实施方案中，经遗传修饰的诱导多能干细胞分化成卫星细胞、卫星样细胞、成肌细胞或成肌细胞样细胞，然后将其移植到患者中，随后用根据本文公开内容可促进成熟肌管产生的一种或多种药剂(例如cher-124或其它chk1抑制剂，尤其是其它喹啉酮chk1抑制剂)治疗。可通过将具有恢复肌肉损失的能力的成熟肌管或肌管样细胞注射到病变或损伤的肌肉中来实现肌肉退行性疾病如肌营养不良(例如，杜氏肌营养不良)的治疗。肌管或肌管样细胞可与现有的肌管融合。受试者中肌肉退行性疾病如肌营养不良(例如杜氏肌营养不良)的治疗也可以如下实现：移植肌管前体细胞(例如，胚胎干细胞、ipsc、卫星细胞、卫星样细胞、成肌细胞、成肌细胞样细胞)，随后用根据本文公开内容的一种或多种药剂(例如，chir-124或其它chk1抑制剂，尤其是其它喹啉酮chk1抑制剂)治疗，以将肌管前体细胞分化成可与现有肌管融合的肌管或肌管样细胞。在一些实施方案中，通过经由合适的方法施用chir-124以在受试者中达到约0.1μm至约1μm的局部浓度来实现对受试者的治疗。可将肌管、肌管样细胞或肌管前体细胞(例如，胚胎干细胞、ipsc、卫星细胞、卫星样细胞、成肌细胞或成肌细胞样细胞)转移到罹患多种疾病和病症的受试者中。罹患神经性疾病或病症和/或神经肌肉疾病或病症的受试者可特别受益于卫星细胞疗法。在一些方法中，可将肌管、肌管样细胞或肌管前体细胞(例如，胚胎干细胞、ipsc、卫星细胞、卫星样细胞、成肌细胞或成肌细胞样细胞)移植到肌肉部位以治疗神经肌肉病况，例如肌营养不良、杜氏肌营养不良等。可以用所公开的肌管前体细胞(胚胎干细胞、ipsc、卫星细胞、卫星样细胞、成肌细胞或成肌细胞样细胞)、肌管和肌管样细胞治疗或改善的肌肉疾病或病症可以是遗传性疾病或病症，或者可能具有非遗传的病因。在一些情况下，该疾病或病症是慢性的；在其它情况下，该疾病或病症是急性的或亚急性的；在其它情况，该疾病或病症是复发性疾病或病症。可用所公开的肌管治疗或改善的示例性疾病或病症可包括遗传疾病以及非遗传疾病。示例性的疾病或病症可包括：肌营养不良、亨廷顿病、1a型分区蛋白缺乏、线状体肌病和脊髓性肌萎缩(sma)。可用所公开的细胞治疗或改善的肌营养不良的实例包括becker型、先天性、面肩胛肱型(fsh)、肌强直性(i型和ii型)、眼咽型、远端型、杜氏肌营养不良，以及emery-dreifuss型肌营养不良。杜氏和becker型肌营养不良由位于x染色体上的基因的突变引起，并且主要影响雄性(男性)，尽管雌性(女性)有时也可能有严重症状。可通过所公开的方法和组合物治疗或改善的其它疾病或病症可包括：恶病质、散发性疾病、少肌症、肌肉耗损、肌肉萎缩、肌肉劳损、肌肉损伤、多发性硬化、帕金森病或与衰老相关的肌肉耗损。另外或备选地，可以使用支架、使用无支架的方法或使用其它移植装置，将肌管前体细胞(例如，胚胎干细胞、ipsc、卫星细胞、卫星样细胞、成肌细胞、成肌细胞样细胞或其它肌肉前体细胞)、肌管或肌管样细胞移植到受试者中。该支架可由本领域已知的任何材料制成。在一些情况下，该支架为可生物降解的支架、可再吸收的支架或其它类型的支架。在一些情况下，该支架可包含基质(例如，可生物降解的基质，可再吸收的基质)。在一些情况下，在移植之前，肌管或肌管样细胞或由它们衍生出的细胞被封装在微胶囊中。在一些情况下，该微胶囊可具有归巢特征，使得细胞能够被引导至目的位置。在一些情况下，支架与肌管前体细胞(例如，胚胎干细胞、ipsc、卫星细胞、卫星样细胞、成肌细胞、成肌细胞样细胞)的移植一起使用，随后用根据本文公开内容一种或多种试剂(例如，chir-124或其它chk1抑制剂，尤其是其它喹啉酮chk1抑制剂)治疗，以将肌管前体细胞分化为肌管或肌管样细胞。在一些实施方案中，相对于单独使用移植支架，用一种或多种药剂(例如，chir-124或其它chk1抑制剂，尤其是其它喹啉酮chk1抑制剂)治疗加速分化或改善肌管前体细胞向肌管或肌管样细胞的分化产率。骨骼肌细胞如肌管和肌管样细胞可在受试者身体上的多个位置注射。例如，可在接近肌肉形成的位置，例如手臂肌肉如喙肱肌、肱二头肌和肱肌，腿部肌肉如胫骨前肌、长伸肌、指伸肌和第三腓骨肌(fibularistertius)或其它肌肉位置处注射肌管或肌管样细胞。肌管前体细胞(胚胎干细胞、ipsc、卫星细胞、卫星样细胞、成肌细胞或成肌细胞样细胞)也可以在受试者身体上的多个位置注射。例如，可在接近肌肉形成的位置，例如手臂肌肉如喙肱肌、肱二头肌和肱肌，腿部肌肉如胫骨前肌、长伸肌、指伸肌和第三腓骨肌(fibularistertius)或其它肌肉位置处注射肌管前体细胞、肌管或肌管样细胞。向受试者施用治疗的次数可以不同。将肌管前体细胞或分化细胞(例如肌管、肌管样细胞)引入受试者中可以是一次性事件；但在某些情况下，这样的治疗可在有限的一段时间内引起改善，并且需要持续的一系列重复治疗。在其它情况下，在观察到效果之前可能需要多次施用细胞。确切的方案取决于疾病或病况、疾病的阶段和正在治疗的个体受试者的参数。在一些实例中，可经由以下任一种途径将细胞引入受试者：肠胃外、静脉内、动脉内、肌肉内、皮下、经皮、腹膜内或脊髓液中。特别地，可经由细胞向受试者骨骼肌中的直接注射而将细胞引入受试者。在肌管前体细胞(例如，胚胎干细胞、ipsc、卫星细胞、卫星样细胞、成肌细胞或成肌细胞样细胞)、肌管或肌管样细胞的移植过程中，药物(例如，检查点抑制剂、chkl抑制剂)可以在同一时间段内给予该受试者。例如，可在肌管或肌管样细胞移植之前、期间或之后或以其组合的方式施用药物。可施用于受试者的药物的实例包括但不限于：用来治疗疾病或对受试者的损伤的药物，免疫抑制药物，或本文所述的一种或多种促进成肌细胞分化为成熟肌管的化合物(例如，chtr-124或其它chk1抑制剂，尤其是其它喹啉酮chk1抑制剂)。在一些实施方案中，通过合适的方法将our-124施用于受试者，以在该受试者中达到约0.1μm至约1μm的局部浓度。示例性免疫抑制药物包括钙依赖磷酸酶抑制剂，如环孢菌素或他克莫司，mtor抑制剂，如西罗莫司或依维莫司，嘌呤合成抑制剂或嘌呤类似物如吗替麦考酚酯或硫唑嘌呤，或类固醇如泼尼松。在一些情况下，施用于受试者的药物不包括免疫抑制药物，特别是当受试者不太可能排斥细胞治疗时(例如，当细胞衍生自受试者自身的细胞时)。肌管前体细胞(例如，胚胎干细胞、ipsc、卫星细胞、卫星细胞、成肌细胞或成肌细胞样细胞)、肌管或肌管样细胞可以使用各种仪器如注射器来施用。肌管前体细胞(例如，胚胎干细胞、ipsc、卫星细胞、卫星样细胞、成肌细胞)、肌管和肌管样细胞也可以与缓冲液如盐水、磷酸盐缓冲盐水或血清一起注射。肌管前体细胞(例如，胚胎干细胞、ipsc、卫星细胞、卫星样细胞、成肌细胞或成肌细胞样细胞)、肌管或肌管样细胞可以与抗生素如万古霉素或左氧氟沙星一起施用。可移植至受试者中的肌管前体细胞(例如胚胎干细胞、ipsc、卫星细胞、卫星样细胞、成肌细胞或成肌细胞样细胞)、肌管或肌管样细胞的剂量可根据受试者的疾病或损伤、受试者疾病或损伤的进展以及受试者疾病或损伤的严重程度而不同。此外，提供给受试者的治疗次数可以不同。可向受试者施用单次治疗，或者可向受试者给予多次治疗。在一些情况下，可用本文提供的细胞治疗受试者约1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、20、25次或更多次。在一些情况下，受试者可在一年期内治疗少于1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、15或20次。治疗本身在提供有肌管或肌管样细胞的部位数目上也可以变化。在实例中，肌管或肌管样细胞移植的单次治疗可包括1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、20、50或100个或更多个用于向骨骼肌直接注射肌管或肌管样细胞的注射部位。在一些情况下，单剂量的细胞包含约101、约50、约102、约5x102、约103、约5x103、约104、约5x104、105、约5x105、约106、约5x106、约107、约5x107、约108、约5x108、约109、约5x109、约1010、约5x1010、约1011、约5x1011个或更多个细胞。在一些情况下，单剂量的细胞包含至多102、至多5x102、至多103、至多5x103、至多104、至多5x104、至多105、至多5x105、至多106、至多5x106、至多107、至多5x107、至多108、至多5x108、至多109、至多5x109、至多1010、至多5x1010、至多1011或至多5x1011个细胞。在一些实施方案中，一旦将肌管或肌管样细胞提供给患者，该肌管或肌管样细胞可与受试者的成肌细胞或肌管融合，并且可形成融合的肌细胞组分。在其它实施方案中，用根据本文公开内容的促进肌管分化的一种或多种药剂处理的肌管前体细胞(例如，胚胎干细胞、ipsc、卫星细胞、卫星样细胞、成肌细胞、成肌细胞样细胞)可与受试者的成肌细胞或肌管融合，并且可能形成融合的肌细胞组分。治疗的结果可包括肌肉恢复；肌肉退化停止；肌肉退化减缓；与受试者的疾病或损伤相关的因素改善，如肌营养不良蛋白的产生；或其组合。与受试者的疾病或损伤相关的因素的改善可与肌肉恢复或肌肉功能的测试有关。肌肉恢复的程度可通过对某些肌肉属性的一种或多种测试来评估，这些肌肉属性例如有肌肉质量、如通过对力的抵抗测量的肌肉力量、响应于刺激的收缩量，以及响应于刺激如电击的收缩强度、给定任务的时间表现，或基于肌肉的测试的其它实例。可根据某些肌肉属性改善的量或程度来评估肌肉的恢复。特别是，肌肉属性(例如，肌肉质量、力量等)可改善约1倍、2倍、3倍、4倍、5倍、6倍、7倍、8倍、9倍、10倍、20倍、30倍、50倍、60倍、70倍、80倍、100倍、150倍、200倍、250倍或300倍或更多。在一些情况下，肌肉属性可改善>1％、>5％、>10％、>15％、>20％、>25％、>50％、>60％、>70％、>75％、>80％、>90％、>95％、>99％、>100％或更多。在一些更具体的情况下，肌肉力量改善>1％、>5％、>10％、>15％、>20％、>25％、>50％、>60％、>70％、>75％、>80％、>90％、>95％、>99％、>100％、>200％或更多。肌肉属性的改善可在某个时间段内发生，如从引入卫星样细胞或卫星细胞的时间起约1天、2天、3天、4天、5天、7天、10天、2周、3周、4周、1个月、6周、2个月、10周、3个月、3.5个月、4个月、4.5个月、5个月、5.5个月、6个月、6.5个月、7个月、7.5个月、8个月、8.5个月、9个月、9.5个月、10个月、10.5个月、11个月、11.5个月、12个月、1.5年或2年或更长时间内发生。例如，在一些情况下，肌肉属性(例如，力量、质量等)的改善可以是一个月内>1％、一个月内>5％、一个月内>10％、一个月内>15％、一个月内>20％、一个月内>25％、一个月内>50％、一个月内>60％、一个月内>70％、一个月内>75％、一个月内>80％月、>一个月内>90％、一个月内>95％、一个月内>99％、一个月内>100％、一个月内>200％、一个月内>250％、一个月内>300％、一个月内>400％、一个月内>500％，或一个月内甚至更高的百分比。在一些情况下，用肌管前体细胞(例如，胚胎干细胞、ipsc、卫星细胞、卫星样细胞、成肌细胞或成肌细胞样细胞)、肌管或肌管样细胞治疗受试者可导致肌肉退化在某个时间段内停止或减缓。在一些情况下，肌肉退化的速度可在用细胞治疗的一个月内减缓>1％、一个月内减缓>5％、一个月内减缓>10％、一个月内减缓>15％、一个月内减缓>20％、一个月内减缓>25％、一个月内减缓>50％、一个月内减缓>60％、一个月内减缓>70％、一个月内减缓>75％、一个月内减缓>80％、一个月内减缓>90％、一个月内减缓>95％、一个月内减缓>99％、一个月内减缓>100％、一个月内减缓>200％、一个月内减缓>250％、一个月内减缓>300％、一个月内减缓>400％、一个月内减缓>500％或在一个月内减缓甚至更高的百分比。另外，基于使用肌管或肌管样细胞的细胞疗法，肌肉退化可完全停止。肌肉退化可在某个时间段内，如从引入卫星样细胞或卫星细胞的时间起约1天、2天、3天、4天、5天、7天、10天、2周、3周、4周、1个月、6周、2个月、10周、3个月、3.5个月、4个月、4.5个月、5个月、5.5个月、6个月、6.5个月、7个月、7.5个月、8个月、8.5个月、9个月、9.5个月、10个月、10.5个月、11个月、11.5个月、12个月、1.5年或2年或更长的时间内完全停止。b.药物筛选除了用于细胞疗法之外，肌管或肌管样细胞还可用于充当药物筛选的平台。特别是，可测定药物以测试对肌管或肌管样细胞的表型，如细胞形态、标志物表达、增殖或分化的影响。在一些情况下，表型与肌肉功能(例如，肌营养不良)相关。本文提供的细胞因此还可用于针对这类遗传疾病或病症的疾病建模和疾病研究。在一个实例中，所测试的细胞是由健康成肌细胞化学分化的健康的肌管或肌管样细胞。在另一个实例中，所测试的细胞是由病变成肌细胞分化的病变肌管或肌管样细胞。病变成肌细胞可包括，具有与遗传疾病如神经肌肉遗传疾病(如肌营养不良)相关的特定遗传突变的成肌细胞。在一些情况下，病变成肌细胞来源于携带与肌肉退行性疾病相关的遗传突变的受试者。在一些情况下，病变成肌细胞被遗传工程化以携带引起或关联于肌肉遗传疾病的突变。该突变可与受试者(例如，人类受试者)携带的突变相同，或可与该突变基本相似。可以测试病变肌管或肌管样细胞的疾病表型。疾病的影响可以在细胞和组织水平上表征，并且可以对病变肌管或肌管样细胞进行其它评估。对疾病影响的表征可包括评估肌管的功能和形态学、肌管的标志物表达、肌管的增殖和分化、肌管长度、肌管直径、肌管分支化、融合指数或每个肌管的细胞核数。根据本文提供的方法，可以在成肌细胞或成肌细胞样细胞上测定药物，以鉴定导致成肌细胞或成肌细胞样细胞分化为成熟肌管或肌管样细胞的药物。可以通过本领域已知的任何方法测量成肌细胞或成肌细胞样细胞向成熟肌管或肌管样细胞的分化，包括但不限于测量肌管长度、肌管直径和每个肌管的细胞核数。所鉴定的药物可用于促进内源性骨骼肌细胞的发育，因而促进肌肉缺乏患者的肌肉质量和功能的增强。采用所公开的成肌细胞和成肌细胞样细胞以及肌管和肌管样细胞的药物筛选试验和疾病建模试验可被设计用于多种疾病和病症，特别是遗传疾病或病症。示例性的疾病或病症包括但不限于：亨廷顿病、1a型分区蛋白缺乏、线状体肌病和脊髓性肌萎缩(sma)以及肌营养不良。肌营养不良的实例包括becker型、先天性、面肩胛肱型(fsh)、肌强直性(i型和ii型)、眼咽型、远端型、杜氏肌营养不良以及emery-dreifuss型肌营养不良。杜氏和becker型肌营养不良由位于x染色体上的基因的突变引起，并且主要影响雄性(男性)，尽管雌性(女性)有时也可能有严重症状。此外，大多数类型的肌营养不良是在包括心脏、胃肠系统、神经系统、内分泌腺、眼睛和大脑在内的身体系统中有表现的多系统疾病。根据本文提供的方法，已知或怀疑针对与肌肉发育有关的网络和途径的小分子可用于药物筛选试验。所述小分子可具有参与激酶组信号传导的已知或疑似靶标，包括但不限于激酶和磷酸酶：aak1、abl1、abl2、acvr1、acvr1b、acvr2a、acvr2b、acvrl1、adck3、akt1、akt2、akt3、alk、ampk、ankk1、nuak1、m3k5、m3k6、aurka、aurkb、aurkc、axl、bike、blk、bmpr1a、bmpr1b、bmpr2、bmx、braf、ptk6、brsk1、brsk2、btk、bub1、camk1、camk1d、camk1g、camk2a、camk2b、kcc2d、camk2g、kcc4、kkcc1、camkk2、cask、cdcl1、cdcl2、cdcl5、cdk11、cdk2、cdk3、cdk4-细胞周期蛋白d1/3、cdk5、cdk7、cdk8、cdk9、cdkl1、cdkl2、cdkl3、cdkl5、chek1、chk2、cit、clk1、clk2、clk3、clk4、csf1r、csk、csnk1a1、csnk1a1l、csnk1d、csnk1e、kc1g1、kc1g2、csnk1g3、csnk2a1、csnk2a2、ctk、dapk1、dapk2、dapk3、dclk1、dcamkl2、dcamkl3、ddr1、ddr2、m3k12、dmpk、dmpk2、drak1、drak2、dyrk1a、dyrk1b、dyrk2、egfr、eif2ak1、epha1、epha2、epha3、epha4、epha5、epha6、epha7、epha8、ephb1、ephb2、ephb3、ephb4、ephb6、erbb2、erbb3、erbb4、mk03、mk01、erk3、erk5、erk8、ern1、fak1、fer、fes、fgfr1、fgfr2、fgfr3、fgfr4、fgr、flt3、flt4、frk、fyn、gak、gsn、grk1、grk4、grk7、gsk3a、gsk3b、hasp、hck、hipk1、hipk2、hipk3、hipk4、m4k1、hunk、ick、igf1r、ikka、ikkb、ikke、insr、insrr、irak1、irak3、itk、jak1、jak2、jak3、jank1、mk09、kgp1、kgp2、kit、kpcd、kpcd1、kpcd2、kpcd3、kpce、kpci、kpcl、kpct、lats1、lats2、lck、limk1、limk2、lkb1、lok、lrrk、ltk、lyn、m3k13、m3k2、m4k3、mak、map3k1、map3k15、map3k3、map3k4、map4k2、map4k4、map4k5、mapkapk2、mapkapk5、mapk1、mark2、mark3、mark4、mast1、mp2k1、mp2k2、mp2k3、mp2k4、mp2k5、mp2k6、melk、mertk、met、mink、mp2k7、mp2k7、mknk1、mknk2、mlck、mlk1、mlk2、mlk3、mltk、mrcka、mrckb、mst1、mst1r、mst2、mst3、mtor、musk、mylk、mylk2、mylk4、myo3a、myo3b、ndr1,ndr2、nek1、nek10、nek11、nek2、nek3、nek4、nek5、nek6、nek7、nek9、nim1、nlk、osr1、mk14、mk11、mk13、mk12、pak1、pak2、pak3、pak4、pak6、pak7、cdk16.pcth2、pctk3、pdpk1、cdk15、cdk14、pgfra、pgfrb、phkg1、phkg2、pik3c2b、pik3c2g、pik3ca、pik3cb、pik3cd、pik3cg、pik4cb、pim1、pim2、pim3、pip5k1a、pip5k1c、pip5k2b、pi42c、pkac-alpha、pkac-beta、pkmyt1、pkn1、pkn2、plk1、plk2、plk3、plk4、prkr、prkx、prp4、fak2、sik3、raf1、ret、riok1、riok2、riok3、ripk1、ripk2、ripk4、ripk5、rock1、rock2、ros1、rsk1、rps6ka4、rps6ka5、s6k1、cbk1、sgk1、sgk2、sgk3、sik1、sik2、slk、snark、snrk、src、srms、srpk1、srpk2、srpk3、stk16、stk33、stk35、stk36、stk39、syk、tak1、taok1、taok2、taok3、tbk1、tec、tesk1、tgfbr1、tgfbr2、tie1、tie2、tlk1、tlk2、tnik、tnk1、tnk2、tnii3k、trka、trkb、trkc、trpm6、tssk1、ttk、txk、tyk2、tyro3、ulk1、ulk2、ulk3、vgfr1、vgfr2、vrk2、wee1、wee2、wnk1、wnk3、yank1、yank2、yank3、yes、ysk1、ysk4、zap70。根据本文提供的方法，已知或怀疑针对与肌肉发育有关的网络和途径的小分子可用于药物筛选试验。所述小分子可具有作为a类g蛋白偶联受体的已知或疑似靶标，包括但不限于：5-ht1a、5-ht1b、5-ht1d、5-ht1e、5-ht1f、5-ht2a、5-ht2b、5-ht2c、5-ht4、5-ht5a、5-ht5b、5-ht6、5-ht7、m1、m2、m3、m4、m5、a1、a2a、a2b、a3、α1a、α1b、α1d、α2a、α2b、α2c、β1、β2、β3、at1、2、apelin受体、gpba受体、bb1、bb2、bb3、b1、b2、cb1、cb2、ccr1、ccr2、ccr3、ccr4、ccr5、ccr6、ccr7、ccr8、ccr9、ccr10、cxcr1、cxcr2、cxcr3、cxcr4、cxcr5、cxcr6、cx3cr1、xcr1、ackr1、ackr2、ackr3、ackr4、ccrl2、cck1、cck2、gpr1、gpr3、gpr4、gpr42、gpr6、gpr12、gpr15、gpr17、gpr18、gpr19、gpr20、gpr21、gpr22、gpr25、gpr26、gpr27、gpr31、gpr32、gpr33、gpr34、gpr35、gpr37、gpr37l1、gpr39、gpr45、gpr50、gpr52、gpr55、gpr61、gpr62、gpr53、gpr65、gpr68、gpr75、gpr79、gpr82、gpr83、gpr6、gpr84、gpr15、gpr85、gpr87、gpr88、gpr101、gpr119、gp132、gpr139、gpr141、gpr142、gpr146、gpr148、gpr149、gpr150、gpr151、gpr152、gpr153、gp160、gpr161、gpr162、gpr171、gpr173、gpr174、gpr176、gpr182、gpr183、lgr4、lgr5、lgr6、mas1、mas1l、mrgprd、mrgpre、mrgprf、mrgprg、mrgprx1、mrgprx2、mrgprx3、mrgprx4、opn3、opn4、opn5、p2ry8、p2ry10、taar2、taar3、taar4p、taar5、taar6、taar8、taar9、c3a、c5a1、c5a2、d1、d2、d3、d4、d5、eta、etb、fpr1、fpr2/alx、fpr3、ffa1、ffa2、ffa3、gal1、gal2、gal3、生长素释放肽(ghrelin)受体、fshr、lhr、tshr、gnrh1、gnrh2、gper、h1、h2、h3、h4、kisspeptin受体、blt1、blt2、cyslt1、cyslt2、oxer、lpa1、lpa2、lpa3、lpa4、lpa5、lpa6、s1p1、s1p2、s1p3、s1p4、s1p5、mch1、mch2、mc1、mc2、mc3、mc4、mc5、mt1、mt2、促胃动素(motilin)受体、nmu1、nmu2、npff1、npff2、npbw1、npbw2、y1受体、y2受体、y3受体、y4受体、y5受体、y6受体、nts1、nts2、δ阿片样物质受体、κ阿片样物质受体、μ阿片样物质受体、nop受体、ox1受体、ox2受体、氧化戊二酸受体、p2y1、p2y2、p2y4、p2y6、p2y11、p2y12、p2y13、p2y14、pkr1、pkr2、prrp、dp1、dp2、ep1、ep2、ep3、ep4、fp、ip、tp、par1、par2、par3、par4、qrfp受体、rxfp1、rxfp2、rxfp3、rxfp4、sst1受体、sst2受体、sst3受体、sst4受体、sst5受体、nk1受体、nk2受体、nk3受体、trh1受体、trh2受体、ta1受体、ut受体、v1a受体、v1b受体、v2受体或ot受体。所述小分子可具有作为b类g蛋白偶联受体的已知或疑似靶标，包括但不限于：ct受体、amy1受体、amy2受体、amy3受体、cgrp受体、am1受体、am2受体、crf1受体、crf2受体、ghrh、gip、glp-1受体、glp-2受体、胰高血糖素受体、促胰液素受体、pth1受体、pth2受体、pac1受体、vpac1受体或vpac2受体。所述小分子可具有作为c类g蛋白偶联受体的已知或疑似靶标，包括但不限于：cas受体、gprc6受体、gababb1受体、gababb2受体、gababb受体、mglu1受体、mglu2受体、mglu3受体、mglu4受体、mglu5受体、mglu6受体、mglu7受体或mglu8受体。所述小分子可具有作为卷曲(frizzled)类g蛋白偶联受体的已知或疑似靶标，包括但不限于：fzd1、fzd2、fzd3、fzd4、fzd5、fzd6、fzd7、fzd8、fzd9、fzd10或smo。所述小分子可具有作为粘附类g蛋白偶联受体的已知或疑似靶标，包括但不限于：adgra1、adgra2、adgra3、adgrb1、adgrb2、adgrb3、celsr1、celsr2、celsr3、adgrd1、adgrd2、adgre1、adgre2、adgre3、adgre4p、adgre5、adgrf1、adgrf2、adgrf3、adgrf4、adgrf5、adgrtg1、adgrg2、adgrg3、adgrg4、adgrg5、adgrg6、adgrg7、adgrl1、adgrl2、adgrl3、adgrl4或adgrv1。据本文提供的方法，已知或怀疑针对与肌肉发育有关的网络和途径的小分子可用于药物筛选试验。所述小分子可具有包括但不限于parp1和parp2的已知或疑似靶标。据本文提供的方法，已知或怀疑针对与肌肉发育有关的网络和途径的小分子可用于药物筛选试验。所述小分子可具有wnt/frizzled/β-连环蛋白信号传导途径中的已知或疑似靶标，包括但不限于wnt配体的多种同种型，包括但不限于wnt3a、wnt5a、wnt9、wif、sfrp、kremens、n-钙粘着蛋白、lrp5/6/frizzled、ryk/rorα/β/γ、dkk、ck1的多种同种型、gsk3α/β、pkc的多种同种型、plc的多种同种型、rhoa、rac1、rock1/2、pde的多种同种型、src、camki/ii、β-连环蛋白或β-连环蛋白/转录因子界面，例如但不限于apc、tcf-1、tcf-4、bcl-9、tank1/2、tak-1、nlk、jnk的多种同种型、p38的多种同种型、mkk3/6、ppar的多种同种型。据本文提供的方法，已知或怀疑针对与肌肉发育有关的网络和途径的小分子可用于药物筛选试验。所述小分子可具有参与端粒结构和端粒酶活性的已知或疑似靶标。据本文提供的方法，已知或怀疑针对与肌肉发育有关的网络和途径的小分子可用于药物筛选试验。所述小分子可具有参与细胞骨架结构和/或jak/stat信号传导的已知或疑似靶标，包括但不限于：igf1r/inr、pi3k、akt、mtor、pkcs、srk、fak、raf、mek、erk、rock激酶、层粘连蛋白、聚集蛋白、营养不良聚糖、轴突蛋白、肌聚糖蛋白、整联蛋白、互生蛋白、小肌营养蛋白(dystrobrevin)、肌营养不良蛋白、肌动蛋白、nmda/ca2+、tyk、jak、p38、pim1、bcl-2、c-myc和cdks。据本文提供的方法，已知或怀疑针对与肌肉发育有关的网络和途径的小分子可用于药物筛选试验。所述小分子可具有参与凋亡的已知或疑似靶标，包括但不限于：tnf-a、ikka/b、nfkb、存活蛋白、ciap、胱天蛋白酶3/8/9、p53/mdm2、jak/stat、pkc、ras、raf、erk1/2、jnk、bcl-2、bcl-xlpi3k、akt、dna-pk、mtor、p70s6k和atm据本文提供的方法，已知或怀疑针对与肌肉发育有关的网络和途径的小分子可用于药物筛选试验。所述小分子可具有参与遍在蛋白信号传导的已知或疑似靶标，包括但不限于：蛋白酶体、dub、e1活化酶、e2缀合酶和e3-连接酶。c.药物疗法在一些情况下，本文公开的化合物可以作为药物疗法用来治疗具有肌肉缺乏的受试者。这些化合物可以促进体内的肌生成和/或肌肉再生。本文公开的化合物可以与非药物疗法(例如作为辅助剂)一起使用，作为单一疗法使用，或作为联合疗法的一部分使用。在一些情况下，本文公开的化合物(例如，chk1抑制剂、mtor抑制剂、raf抑制剂、mek抑制剂、machr激动剂、machr拮抗剂)与细胞疗法(例如移植的多能干细胞、卫星、卫星样、成肌细胞、成肌细胞样、肌管或肌管样细胞)一起施用。在一些情况下，所述化合物可以增强细胞向移植到受试者中的成肌细胞的分化产率或速率。在一些情况下，所述化合物可以增强移植细胞的植入或移植细胞与受试者中的天然肌管的融合。在其它情况下，本文公开的化合物(例如，chk1抑制剂、mtor抑制剂、raf抑制剂、mek抑制剂、machr激动剂、machr拮抗剂)作为单一疗法施用而不将细胞移植到受试者中。在一些情况下，所述化合物可以增强天然卫星细胞或成肌细胞向肌管的分化。受试者(例如患有影响肌肉功能的遗传疾病的患者，或罹患非遗传性肌肉功能障碍的受试者)可以用任何本文所述的化合物治疗，以增强肌管结构或功能或改善肌肉功能。在一些实施方案中，受试者用chk1抑制剂(例如，chir-124)治疗。在其它实施方案中，受试者用mtor抑制剂(例如雷帕霉素)治疗。在其它实施方案中，受试者用raf抑制剂(例如索拉非尼)治疗。在其它实施方案中，受试者用mek抑制剂(例如，mek162)治疗。在其它实施方案中，受试者用gpr119激动剂(例如，gsk1292263)治疗。在其它实施方案中，受试者用s1p1激动剂(例如，tc-g1006)治疗。在其它实施方案中，受试者用machr激动剂(例如匹鲁卡品)治疗。在其它实施方案中，受试者用machr拮抗剂(例如阿托品)治疗。在其它实施方案中，受试者用parp抑制剂(例如talazoparib)治疗。在一些情况下，检查点抑制剂，特别是chk1抑制剂(例如，chir-124)，用来增强或促进如本文所述的成熟肌管在受试者中的产生。在一些情况下，将chk1抑制剂(例如，chir-124)施用于受试者以促进体内成熟肌管形成。在一些情况下，将chk1抑制剂(例如，chir-124)施用于受试者以促进体内成熟的肌管形成。在一些实施方案中，通过合适的方法施用chk1抑制剂(例如，chir-124)以达到约0.10μm至约1μm(例如，0.25μm，0.50μm)的局部浓度，以增强或促进体内成熟肌管的产生。该局部浓度可以是，例如，该化合物在意图通过该疗法治疗的部位(例如，肌肉组织)处或附近的浓度。在一些具体实施方案中，chk1抑制剂(例如，chir-124)每日一次以100mg的剂量施用于受试者(例如，人类受试者)，以增强或促进受试者中成熟肌管的产生。在一些实施方案中，chk1抑制剂(例如，chir-124)以100mg的剂量施用于受试者，但是以不同的频率施用，例如每隔一天施用一次。在一些实施方案中，chk1抑制剂(例如，chir-124)以50-75mg的剂量施用。在一些情况下，这样的剂量每天两次施用于受试者(例如，人类受试者)，以增强或促进受试者中成熟肌管的产生。本文中用于药物疗法的chk1抑制剂可具有不同的化学结构或不同的支架。在一些实施方案中，本文所述的chk1抑制剂是喹啉酮chk1抑制剂，如chir-124。喹啉酮chk1抑制剂的合成已在别处描述，例如，li等人.bioorgmedchemlett.2006年6月15日；16(12):3121-4和us7825132b2、us7838527b2、us7470709b2和us20050256157a1。在一些实施方案中，本文所述的chk1抑制剂是根据式(i)的喹啉酮chk1抑制剂：或其盐，其中r1选自甲基、氟代、氯代、三氟甲基和二氟甲基；r2选自苯并咪唑基、苯并噁唑基、苯并噻唑基、3h-吲哚基、苯并呋喃基、苯并噻吩基和1h-茚基；且r3选自奎宁环基和1,4-二氮杂双环[2.2.2]辛基。在一些实施方案中，本文所述的chk1抑制剂是根据式(ii)的喹啉酮chk1抑制剂：或其盐，其中r1选自甲基、卤素和卤代甲基；且r2是包含0-4个独立地选自o、s或n的杂原子的5+6双环稠合环系。在一些实施方案中，本文所述的chk1抑制剂是根据式(iii)的喹啉酮chk1抑制剂：或其盐(chir-124)。在一些实施方案中，chk1抑制剂不是喹啉酮。抑制chk1的支架或示例性分子的其它实例包括吡唑并[1,5-a]嘧啶(例如mk-8776/sch900776)、噻吩甲酰胺脲(例如，azd7762)、吡嗪基脲(例如ly2603618)和pf477736。本文提供的任何化合物(包括检查点抑制剂和本文所述的其它化合物)可以与细胞疗法联合施用于受试者。该联合的效果可能是累加的；在一些情况下，该联合的效果是协同的。所述化合物可以在细胞疗法施用之前、期间或之后施用。在一些情况下，所述化合物与细胞疗法分开施用。在一些情况下，细胞疗法与一种或多种化合物混合。在一些特定的实例中，细胞疗法可以包括将肌管前体细胞(例如，胚胎干细胞、ipsc、卫星细胞、卫星样细胞、成肌细胞或成肌细胞样细胞)、成熟肌管或肌管样细胞引入受试者中，并且所述化合物可以有助于所述细胞的移植，或者有助于成肌细胞的分化。在其它实例中，细胞疗法可以包括将成肌细胞或成肌细胞样细胞引入受试者中，并且还将本文提供的化合物(例如，检查点抑制剂、chk1抑制剂、chir-124)施用于受试者中，以促进在体内由引入的成肌细胞或成肌细胞样细胞生成肌管或肌管样细胞。本公开的化合物可以通过具有类似应用的药剂的任何可接受的给药方式施用，例如通过皮肤、口服、局部、皮内、鞘内、静脉内、皮下、肌肉内、关节内、脊柱内或脊柱、经鼻、硬膜外、直肠、阴道或经皮/透粘膜途径。最合适的途径取决于所治疗的病况的性质和严重程度。皮下、皮内和经皮注射可以是用于本公开的化合物的途径。舌下施用可以是本公开的化合物的给药途径。静脉内施用可以是本公开的化合物的给药途径。在一个具体实例中，本文提供的药物组合物可以口服施用于患者。药物组合物(例如，用于口服施用或用于注射、输注、颊部递送、皮下递送、肌肉内递送、腹膜内递送、舌下递送或其它方法)可以是液体的形式。例如，液体药物组合物可包含以下一种或多种：无菌稀释剂如水、盐水溶液(优选生理盐水)、林格氏溶液、等渗氯化钠、可作为溶剂或悬浮介质的不挥发性油、聚乙二醇、甘油、丙二醇或其它溶剂；抗菌剂；抗氧化剂；螯合剂；用于调节张力的缓冲液和试剂如氯化钠或右旋糖。可将肠胃外组合物包封在由玻璃或塑料制成的安瓿、一次性注射器或多剂量小瓶中。生理盐水的使用是优选的，并且可注射的药物组合物优选是无菌的。在另一实施方案中，为治疗眼科病况或疾病，可将液体药物组合物以滴眼剂的形式施用于眼睛。液体药物组合物可以口服递送。对于口服制剂，至少一种本文所述的化合物或药剂可单独使用或与合适的添加剂组合使用以制备片剂、粉末、颗粒或胶囊，并且如果期望，与稀释剂、缓冲剂、润湿剂、防腐剂、着色剂和调味剂组合使用。可以用缓冲液配制该化合物，以保护该化合物免受胃环境的低ph的影响，和/或与肠溶衣一起配制。包含在药物组合物中的化合物可以与例如液体、固体或半固体制剂中的调味剂配制，和/或与肠溶衣配制，以供口服递送。在一些情况下，本公开的化合物可以溶解和包封(例如，在脂质体或可生物降解的聚合物中)，或以涂有适当的无毒脂质的微晶形式使用。可将包含任一种本文所述化合物或药剂的药物组合物配制用于持续释放或缓慢释放(也称为延时释放或控制释放)。这样的组合物通常可使用公知的技术制备，并通过例如口服、直肠、皮内或皮下植入施用，或通过在期望的目标部位处的植入而施用。持续释放制剂可含有分散在载体基体中和/或包含在被速率控制膜包围的储室内的化合物。此类制剂内使用的赋形剂是生物相容的，并且还可以是生物可降解的；优选地，该制剂提供相对恒定的活性组分释放水平。赋形剂的非限制性实例包括水、醇、甘油、壳聚糖、藻酸盐、软骨素、维生素e、矿物油和二甲基亚砜(dmso)。包含在持续释放制剂内的化合物的量取决于植入部位、释放的速率和预期持续时间，以及待治疗或预防的病况、疾病或病症的性质。在一些情况下，将本文的化合物施用于患者可包括向受试者施用大于0mg/m2、1mg/m2、2mg/m2、3mg/m2、4mg/m2、5mg/m2、6mg/m2、7mg/m2、8mg/m2、9mg/m2、10mg/m2、11mg/m2、12mg/m2、13mg/m2、14mg/m2、15mg/m2、16mg/m2、17mg/m2、18mg/m2、19mg/m2、20mg/m2、21mg/m2、22mg/m2、23mg/m2、24mg/m2、25mg/m2、26mg/m2、27mg/m2、28mg/m2、29mg/m2、30mg/m2、31mg/m2、32mg/m2、33mg/m2、34mg/m2、35mg/m2、36mg/m2、37mg/m2、38mg/m2、39mg/m2、40mg/m2、41mg/m2、42mg/m2、43mg/m2、44mg/m2、45mg/m2、46mg/m2、47mg/m2、48mg/m2、49mg/m2、50mg/m2、100mg/m2、150mg/m2、200mg/m2、300mg/m2、350mg/m2、400mg/m2、450mg/m2、500mg/m2、750mg/m2、1000mg/m2、1250mg/m2、1500mg/m2、1750mg/m2或2000mg/m2化合物的日剂量。在一些情况下，将本文的化合物施用于患者可包括施用0.1mg/m2、0.2mg/m2、0.3mg/m2、0.4mg/m2、0.5mg/m2、0.6mg/m2、0.7mg/m2、0.8mg/m2、0.9mg/m2、1mg/m2、1.1mg/m2、1.2mg/m2、1.3mg/m2、1.4mg/m2、1.5mg/m2、1.6mg/m2、1.7mg/m2、1.8mg/m2、1.9mg/m2、2mg/m2、2.1mg/m2、2.2mg/m2、2.3mg/m2、2.4mg/m2、2.5mg/m2、2.6mg/m2、2.7mg/m2、2.8mg/m2、2.9mg/m2、3mg/m2、3.1mg/m2、3.2mg/m2、3.3mg/m2、3.4mg/m2、3.5mg/m2、3.6mg/m2、3.7mg/m2、3.8mg/m2、3.9mg/m2、4mg/m2、4.1mg/m2、4.2mg/m2、4.3mg/m2、4.4mg/m2、4.5mg/m2、4.6mg/m2、4.7mg/m2、4.8mg/m2、4.9mg/m2、5mg/m2、5.1mg/m2、5.2mg/m2、5.3mg/m2、5.4mg/m2、5.5mg/m2、5.6mg/m2、5.7mg/m2、5.8mg/m2、5.9mg/m2、6mg/m2、6.1mg/m2、6.2mg/m2、6.3mg/m2、6.4mg/m2、6.5mg/m2、6.6mg/m2、6.7mg/m2、6.8mg/m2、6.9mg/m2、7mg/m2、7.1mg/m2、7.2mg/m2、7.3mg/m2、7.4mg/m2、7.5mg/m2、7.6mg/m2、7.7mg/m2、7.8mg/m2、7.9mg/m2、8mg/m2、8.1mg/m2、8.2mg/m2、8.3mg/m2、8.4mg/m2、8.5mg/m2、8.6mg/m2、8.7mg/m2、8.8mg/m2、8.9mg/m2、9mg/m2、9.1mg/m2、9.2mg/m2、9.3mg/m2、9.4mg/m2、9.5mg/m2、9.6mg/m2、9.7mg/m2、9.8mg/m2、9.9mg/m2、10mg/m2、11mg/m2、12mg/m2、13mg/m2、14mg/m2、15mg/m2、16mg/m2、17mg/m2、18mg/m2、19mg/m2、20mg/m2、21mg/m2、22mg/m2、23mg/m2、24mg/m2、25mg/m2、26mg/m2、27mg/m2、28mg/m2、29mg/m2、30mg/m2、31mg/m2、32mg/m2、33mg/m2、34mg/m2、35mg/m2、36mg/m2、37mg/m2、38mg/m2、39mg/m2、40mg/m2、41mg/m2、42mg/m2、43mg/m2、44mg/m2、45mg/m2、46mg/m2、47mg/m2、48mg/m2、49mg/m2、50mg/m2、51mg/m2、52mg/m2、53mg/m2、54mg/m2、55mg/m2、56mg/m2、57mg/m2、58mg/m2、59mg/m2、60mg/m2、61mg/m2、62mg/m2、63mg/m2、64mg/m2、65mg/m2、66mg/m2、67mg/m2、68mg/m2、69mg/m2、70mg/m2、71mg/m2、72mg/m2、73mg/m2、74mg/m2、75mg/m2、76mg/m2、77mg/m2、78mg/m2、79mg/m2、80mg/m2、81mg/m2、82mg/m2、83mg/m2、84mg/m2、85mg/m2、86mg/m2、87mg/m2、88mg/m2、89mg/m2、90mg/m2、91mg/m2、92mg/m2、93mg/m2、94mg/m2、95mg/m2、96mg/m2、97mg/m2、98mg/m2、99mg/m2或100mg/m2化合物的日剂量。日剂量可大于0mg、1mg、2mg、3mg、4mg、5mg、6mg、7mg、8mg、9mg、10mg、11mg、12mg、13mg、14mg、15mg、16mg、17mg、18mg、19mg、20mg、21mg、22mg、23mg、24mg、25mg、26mg、27mg、28mg、29mg、30mg、31mg、32mg、33mg、34mg、35mg、36mg、37mg、38mg、39mg、40mg、41mg、42mg、43mg、44mg、45mg、46mg、47mg、48mg、49mg、50mg、100mg、150mg、200mg、300mg、350mg、400mg、450mg、500mg、750mg、1g、5g、10g或更高。在一些情况下，日剂量可以在单剂量中施用。在一些情况下，日剂量可以分为每日1、2、3、4、5、6、7、8、9或10个剂量。例如，日剂量可以分为每日3个剂量。在一些情况下，化疗药物的日剂量可以分为每小时至少1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、15、20、25、30、35、40、45、50、55或60次输注。在一些情况下，每次输注包含化疗药物的组合物可持续至少5分钟、10分钟、15分钟、20分钟、25分钟、30分钟、35分钟、40分钟、45分钟、50分钟、55分钟、1小时、1.5小时、2小时、2.5小时、3小时、3.5小时、4小时、4.5小时、5小时、5.5小时或6小时。本文所述的化合物可以每天一次或多次施用于患者。在一些情况下，所述化合物可以每天一次施用于患者。在一些情况下，所述化合物可以每天至少2次、3次、4次、5次、6次、7次、8次、9次、10次、11次、12次、13次、14次、15次、16次、17次、18次、19次、20次、21次、22次、23次或24次施用于患者。例如，化合物可以每天3次施用于患者。本文所述的化合物可以向患者施用一天或多天。在一些情况下，该化合物可以向患者施用一天。在一些情况下，所述药物组合物可以向患者施用至少2天、3天、4天、5天、6天、1周、2周、3周、1个月、2个月、3个月、4月、5个月、6个月、7个月、8个月、9个月、10个月、11个月、1年、2年、3年、4年、5年、6年、7年、8年、9年、10年、20年、30年、40年或50年。本文所述的化合物可以随时间是有效的。在一些情况下，所述化合物可以有效一天或多天。在一些情况下，所述化合物的功效持续时间很长。在一些情况下，所述化合物的功效可以长于2天、3天、4天、5天、6天、1周、2周、3周或1个月。本公开的化合物或其药学上可接受的盐可包含一个或多个非对称中心，因而可以产生对映异构体、非对映异构体和其它立体异构体形式，其根据绝对立体化学被定义为(r)-或(s)-，或者对于氨基酸被定义为(d)-或(l)-。本发明旨在包括所有这些可能的异构体，以及它们的外消旋和光学纯形式。“立体异构体”是指由通过相同的键键合的相同原子组成但具有不同的三维结构的化合物，它们是不可互换的。本公开考虑到各种立体异构体及其混合物并且包括“对映异构体”，对映异构体是指其分子互为不可重叠(nonsuperimposeable)的镜像的两种立体异构体。旋光性(+)和(-)、(r)-和(s)-或者(d)-和(l)-异构体可以使用手性合成子或手性试剂制备，或使用常规技术例如色谱法和分级结晶来拆分。用于制备/分离单个对映异构体的常规技术包括从合适的光学纯前体手性合成或使用例如手性高压液相色谱法(hplc)拆分外消旋物(或盐或衍生物的外消旋物)。当本文描述的化合物包含烯烃双键或其它几何非对称中心时，并且除非另有另有说明，化合物意欲包括e和z几何异构体。需要时，本发明化合物的(r)-和(s)-异构体，如果存在，可以通过本领域技术人员已知的方法拆分，例如通过形成非对映异构体盐或络合物，其可以通过例如结晶来分离；通过形成非对映异构体衍生物，其可以通过例如结晶、气液或液相色谱法分离；一种对映异构体与对映异构体特异性试剂的选择性反应，例如酶促氧化或还原，随后分离修饰的和未修饰的对映异构体；或者在手性环境中的气-液或液相色谱法，例如在手性支持体上，例如具有结合的手性配体的二氧化硅，或在手性溶剂的存在下。或者，可以通过使用旋光性试剂、底物、催化剂或溶剂的不对称合成，或通过不对称转化将一种对映异构体转化为另一种对映异构体，来合成特定的对映异构体。化合物可以以其对映异构体纯的形式给药。在一些实例中，该化合物具有大于约50％、60％、70％、80％、90％、95％、96％、97％、98％或99％的对映异构体过量。化合物可以以其非对映异构体纯的形式给药。在一些实例中，该化合物具有大于约50％、60％、70％、80％、90％、95％、96％、97％、98％或99％的非对映异构体过量。立构中心可以使用cahn-ingold-prelog优先级规则来定义。化合物可具有r-构型的立构中心。化合物可具有s-构型的立构中心。一些化合物可表现出多态性。应当理解，本公开内容涵盖本发明化合物的任何外消旋、旋光性、多晶型或立体异构形式，或其混合物，其具有本文所述的有用性质，本领域中公知其如何制备旋光性形式(例如，通过重结晶技术拆分外消旋形式，通过由旋光性原料合成，通过手性合成，或通过使用手性固定相的色谱分离)。在某些特定的实施方案中，多于一种本发明化合物可以一次性施用于受试者。在一些实施方案中，两种本发明化合物组合起到协同或累加作用，因此每种化合物可以以比单独施用时更低的量使用。在某些实施方案中，本文公开的化合物和/或其药物组合物可以与其它治疗剂在联合疗法中使用。本文公开的化合物和/或其药物组合物和治疗剂可以累加地起作用，或者更优选地，协同起作用。在一些实施方案中，本文公开的化合物和/或其药物组合物与另一种治疗剂的施用同时施用。例如，本文公开的化合物和/或其药物组合物可以与另一种治疗剂一起施用。在其它实施方案中，本文公开的化合物和/或其药物组合物在施用其它治疗剂之前或之后施用。本公开的化合物或其药学上可接受的盐通常以治疗有效量施用。实际施用的化合物的量可以由医生或照护者根据相关情况来确定，这些情况包括待治疗的病况，所选择的给药途径，所施用的化合物及其相对活性，个体患者的年龄、体重、反应，患者症状的严重程度，等等。本公开进一步提供了任何本文所述化合物的盐。术语“盐”是指由本领域公知的多种有机和无机的抗衡离子衍生的盐。盐包括，例如，酸加成盐和碱加成盐。被加入到化合物以形成酸加成盐的酸可以是有机酸或无机酸。可衍生出盐的无机酸包括，例如，盐酸、氢溴酸、硫酸、硝酸、磷酸等。可衍生出盐的有机酸包括，例如，乙酸、丙酸、乙醇酸、丙酮酸、草酸、马来酸、丙二酸、琥珀酸、富马酸、酒石酸、柠檬酸、苯甲酸、肉桂酸、扁桃酸、甲磺酸、乙磺酸、对甲苯磺酸、水杨酸等。被加入到化合物以形成碱加成盐的碱可以是有机碱或无机碱。在一些情况下，盐可以是金属盐。在一些情况下，盐可以是铵盐。可衍生出盐的无机碱包括，例如，钠、钾、锂、铵、钙、镁、铁、锌、铜、锰、铝等。可衍生出盐的有机碱包括，例如，伯胺、仲胺和叔胺、包括天然存在的取代胺在内的取代胺、环胺、碱性离子交换树脂等。可以通过向本文所述的化合物添加酸来产生酸加成盐。在一些情况下，该酸可以是有机酸。在一些情况下，该酸可以是无机酸。合适的酸的非限制性实例包括盐酸、氢溴酸、氢碘酸、硝酸、亚硝酸、硫酸、亚硫酸、磷酸、烟酸、异烟酸、乳酸、水杨酸、4-氨基水杨酸、酒石酸、抗坏血酸、龙胆酸、葡糖酸、葡糖醛酸(glucaronicacid)、糖二酸(saccaricacid)、甲酸、苯甲酸、谷氨酸、泛酸、乙酸、丙酸、丁酸、富马酸、琥珀酸、柠檬酸、草酸、马来酸、羟基马来酸、甲基马来酸、羟基乙酸、苹果酸、肉桂酸、扁桃酸、2-苯氧基苯甲酸、2-乙酰氧基苯甲酸、双羟萘酸、苯乙酸、n-环己基氨基磺酸、甲磺酸、乙磺酸、苯磺酸、对甲苯磺酸、2-羟基乙磺酸、乙烷-1,2-二磺酸、4-甲基苯磺酸、萘-2-磺酸、萘-1,5-二磺酸、2-磷酸甘油酸、3-磷酸甘油酸、葡萄糖-6-磷酸和氨基酸。合适的酸加成盐的非限制性实例包括盐酸盐、氢溴酸盐、氢碘酸盐、硝酸盐、亚硝酸盐、硫酸盐、亚硫酸盐、磷酸盐、磷酸氢盐、磷酸二氢盐、碳酸盐、碳酸氢盐、烟酸盐、异烟酸盐、乳酸盐、水杨酸盐、4-氨基水杨酸盐、酒石酸盐、抗坏血酸盐、龙胆酸盐、葡糖酸盐、葡糖醛酸盐、糖二酸盐、甲酸盐、苯甲酸盐、谷氨酸盐、泛酸盐、乙酸盐、丙酸盐、丁酸盐、富马酸盐、琥珀酸盐、柠檬酸盐、草酸盐、马来酸盐、羟基马来酸盐、甲基马来酸盐、羟乙酸盐、苹果酸盐、肉桂酸盐、扁桃酸盐、2-苯氧基苯甲酸盐、2-乙酰氧基苯甲酸盐、双羟萘酸盐、苯乙酸盐、n-环己基氨基磺酸盐、甲磺酸盐、乙磺酸盐、苯磺酸盐、对甲苯磺酸盐、2-羟基乙磺酸盐、乙烷-1,2-二磺酸盐、4-甲基苯磺酸盐、萘-2-磺酸盐、萘-1,5-二磺酸盐、2-磷酸甘油酸盐、3-磷酸甘油酸盐、葡萄糖-6-磷酸盐和氨基酸盐。可以通过向本文所述的化合物添加无机碱来产生金属盐。无机碱由与碱性抗衡离子配对的金属阳离子组成，该碱性抗衡离子例如是氢氧根、碳酸根、碳酸氢根或磷酸根。该金属可以是碱金属、碱土金属、过渡金属或主族金属。合适的金属的非限制性实例包括锂、钠、钾、铯、铈、镁、锰、铁、钙、锶、钴、钛、铝、铜、镉和锌。合适的金属盐的非限制性实例包括锂盐、钠盐、钾盐、铯盐、铈盐、镁盐、锰盐、铁盐、钙盐、锶盐、钴盐、钛盐、铝盐、铜盐、镉盐和锌盐。可以通过向本文所述的化合物添加氨或有机胺来产生铵盐。合适的有机胺的非限制性实例包括三乙胺、二异丙胺、乙醇胺、二乙醇胺、三乙醇胺、吗啉、n-甲基吗啉、哌啶、n-甲基哌啶、n-乙基哌啶、二苄胺、哌嗪、吡啶、吡唑、哌唑(pipyrrazole)、咪唑、吡嗪、哌唑嗪(pipyrazine)、乙二胺、n,n'-二苄基乙二胺、普鲁卡因、氯普鲁卡因、胆碱、二环己胺和n-甲基葡糖胺。合适的铵盐的非限制性实例可以是三乙胺盐、二异丙胺盐、乙醇胺盐、二乙醇胺盐、三乙醇胺盐、吗啉盐、n-甲基吗啉盐、哌啶盐、n-甲基哌啶盐、n-乙基哌啶盐、二苄胺盐、哌嗪盐、吡啶盐、吡唑盐、哌唑(pipyrrazole)盐、咪唑盐、吡嗪盐、哌唑嗪(pipyrazine)盐、乙二胺盐、n,n'-二苄基乙二胺盐、普鲁卡因盐、氯普鲁卡因盐、胆碱盐、二环己胺盐和n-甲基葡糖胺盐。术语“药学上可接受的载体”或“药学上可接受的赋形剂”包括任何及所有溶剂、分散介质、涂料、抗细菌剂和抗真菌剂、等渗和吸收延迟剂等。这类介质和药剂在药学活性物质中的应用在本领域中是众所周知的。除了任何常规介质或试剂与活性成分不相容的情况以外，考虑将其用于本公开的治疗组合物中。补充的活性成分也可引入组合物中。术语“药学上可接受的赋形剂”旨在包括能够与化合物共同施用以促进其预期功能的表现的媒介物和载体。这类介质在药学活性物质中的应用在本领域中是众所周知的。这类媒介物和载体的实例包括溶液、溶剂、分散介质、延迟剂、乳液等。适用于多结合化合物的任何其它常规载体也落入本公开的范围内。在制备本发明的组合物中，活性成分可以用赋形剂稀释。合适的赋形剂的一些实例包括乳糖、右旋糖、蔗糖、山梨糖醇、甘露醇、淀粉、阿拉伯胶、磷酸钙、藻酸盐、黄蓍胶、明胶、硅酸钙、微晶纤维素、peg、聚乙烯吡咯烷酮、纤维素、水、无菌盐水、糖浆和甲基纤维素。制剂可另外包含：润滑剂，如滑石、硬脂酸镁和矿物油；润湿剂；乳化剂和悬浮剂；防腐剂，如羟基苯甲酸甲酯和羟基苯甲酸丙酯；甜味剂；和调味剂。可以配制本公开的组合物，以便在通过采用本领域已知的程序施用于患者后提供活性成分的快速、持续或延迟释放。在一些情况下，本文所述的药物组合物可包含赋形剂，该赋形剂可提供长期保存，增大含有有效活性成分的制剂，促进药物吸收，降低粘度，添加调味剂，或增强药物组合物的溶解度。赋形剂的非限制性实例可包括抗粘附剂、粘合剂(例如，蔗糖、乳糖、淀粉、纤维素、明胶或聚乙二醇)、涂料(例如，羟丙基甲基纤维素或明胶)、崩解剂、染料、调味剂(例如，薄荷、桃、覆盆子或香草)、助流剂、润滑剂、防腐剂(例如酸、酯、酚、汞化合物或铵化合物)、吸附剂或媒介物(例如石油或矿物油)。术语“治疗有效量”通常可指化合物或其它疗法的量(或剂量)，当施用于需要这类化合物或其它疗法的受试者时，该量最小程度上足以预防、减少、治疗或消除病况或其风险。在一些情况下，术语“治疗有效量”可以指当施用于受试者时足以具有预防效果的化合物或其它疗法的量。治疗有效量可以变化；例如，它可以根据受试者的状况、受试者的体重和年龄、疾病状况的严重程度、给药方式等而变化，所有这些可以由本领域普通技术人员确定。本文公开的药物组合物可以是任何类型的制剂，包括固体制剂。在一些情况下，固体制剂(或其它类型的制剂)包含至少0.01mg、0.1mg、1mg、2mg、3mg、4mg、5mg、6mg、7mg、8mg、9mg、10mg、20mg、30mg、40mg、50mg、60mg、70mg、80mg、90mg、100mg、150mg、200mg、250mg、300mg、350mg、400mg、450mg、500mg、550mg、600mg、650mg、700mg、750mg、800mg、850mg、900mg、950mg或1000mg的在一些情况下，液体制剂可包含至少0.1mg/ml、1mg/ml、2mg/ml、3mg/ml、4mg/ml、5mg/ml、6mg/ml、7mg/ml、8mg/ml、9mg/ml、10mg/ml、20mg/ml、30mg/ml、40mg/ml、50mg/ml、60mg/ml、70mg/ml、80mg/ml、90mg/ml、100mg/ml、150mg/ml、200mg/ml、250mg/ml、300mg/ml、350mg/ml、400mg/ml、450mg/ml、500mg/ml、550mg/ml、600mg/ml、650mg/ml、700mg/ml、750mg/ml、800mg/ml、850mg/ml、900mg/ml、950mg/ml或1000mg/ml在一些情况下，本文所述的药物组合物或制剂可包含不同药剂的组合。在一些情况下，本文所述的药物组合物可包含至少2种药剂。一种药剂与至少一种其它保护剂的摩尔比可以是约1:1、约1:2、约1:3、约1:4、约1:5、约1:6、约1:7、约1:8、约1:9、约1:10、约1:20、约1:30、约1:40、约1:50、约1:60、约1:70、约1:80、约1:90、约1:100、约1:1,000、约1:10,000或约1:>10,000。在一些情况下，本文公开的药物组合物可以组装成试剂盒。在一些情况下，该试剂盒可包含一种或多种本文提供的化合物。在一些情况下，该试剂盒还可包含使用说明书。该试剂盒还可包含小瓶、管、针、包装或其它材料。提供了具有一种或多种本文所述化合物的单位剂量(通常为口服或可注射剂量)的试剂盒。此类试剂盒包含含有该单位剂量的容器、描述该药物在治疗疾病时的使用和伴随益处的信息包装插页，并任选地包含用于递送该组合物的器具或装置。所述试剂盒可以进一步包含适合于施用所述组合物的任何装置。例如，包含药物组合物的可注射制剂的试剂盒可包含适于皮下施用的针和用于注射部位灭菌的酒精擦拭物。在一些情况下，试剂盒可以具有说明书。说明书可以在试剂盒中提供，或者可以以电子方式访问(例如，在万维网上)。说明书可提供关于如何使用本公开的组合物的信息。说明书还可以提供关于如何使用本公开的装置的信息。说明书可以提供关于如何执行本公开的方法的信息。在一些情况下，说明书可以提供给药信息。说明书可以提供药物信息，如作用机理、药物配方、不良风险、禁忌症等。在一些情况下，试剂盒由医生或医疗保健提供者购买，以供在诊所或医院施用。在一些情况下，试剂盒由实验室购买并用于筛选候选化合物。viii.一些定义如本文所用的，术语“或”用于指非排他性的“或”，例如“a或b”包括“a而不是b”、“b而不是a”和“a和b”，除非另有说明。如本文所用的，当提及数字或数字范围时，术语“约”是指所提及的数字或数字范围是在实验可变性内(或在统计学实验误差内)的近似值，并且因此该数字或数字范围可例如在所述数字或数字范围的1％至15％之间变化。在实例中，术语“约”是指所述数字或数值的±10％。如本文所用的，术语“治疗”、“处理”和“改善”可互换使用。这些术语是指用于获得有益的或期望的结果的方法，该结果包括但不限于治疗性益处和/或预防性益处。“治疗益处”意指正在治疗的潜在病症的消除或改善。治疗性益处也可如下实现：根除或改善与潜在病症相关的一种或多种生理症状，使得在患者中观察到改善，尽管该患者可能仍然患有该潜在病症。对于预防性益处，可将本文提供的化合物和/或细胞(例如，肌管前体细胞、成肌细胞、成肌细胞样细胞、卫星细胞、卫星样细胞、肌管或肌管样细胞)施用至存在发展出特定疾病的风险的患者，或者报告有疾病的一种或多种生理症状的患者，即使可能尚未对该疾病作出诊断。ix.实施例虽然本文已经显示出和描述了本发明的优选实施方案，但对于本领域技术人员而言显而易见的是，这些实施方案仅通过示例的方式提供。在不脱离本发明的情况下，本领域技术人员现将想到许多变化、改变和替代。应理解，在本发明的实践中可采用本文所述的本发明实施方案的各种替代方案。意在用以下权利要求限定本发明的范围，并由此涵盖在这些权利要求的范围内的方法和结构及其等同物。实施例1：针对生肌诱导条件的筛选。使用可商购的m2培养基(由geneabiocells制造)和以下标准方案，将人多能干细胞(hpsc)在i型胶原蛋白涂覆的表面上无饲养细胞地扩充。该方法在每次传代时将培养物解离为单细胞。按照标准方案将每个细胞系的批次在加有10％dmso的m2培养基中冷冻。对每个批次的活力、形态、无菌性、核型、dna指纹、多能性标志物表达(oct4、nanog、ssea-4、tra1-60)和多能测试(pluritest)(müller等人，2011)进行质量控制测试。使用可商购的hesc细胞系genea017和genea020来筛选生肌诱导培养条件。基础培养基如下制备：根据制造商的说明将骨骼肌细胞生长培养基补充剂混合物(由promocell制造)添加至骨骼肌细胞基础培养基(由promocell制造)以产生类似于mcdb120(美国专利号5,143,842)的培养基，还向该培养基中添加rho相关激酶抑制剂y27632(10μm)。在涂覆有i型胶原蛋白(100μg/ml)、h纤连蛋白(10μg/ml)、m层粘连蛋白(5μg/ml)或具有鼠层粘连蛋白(5μg/ml)的人纤连蛋白(10μg/ml)的384孔光学底部微量滴定板中培养细胞。为了筛选生肌诱导培养条件，将细胞系解离成单细胞，并在384孔板中以8x103个细胞/cm2的密度接种于20μl基础培养基中。以两两组合的方式(总共378种组合)将来自表1的化合物以2x最终浓度添加至在384深孔板中的基础培养基中。向培养的细胞添加20μl补充有这种化合物的培养基，以便将细胞在40μl含有最终浓度的化合物的培养基中培养。该细胞在37℃、5％co2和5％o2下培养9天。培养基每隔一天更换一次，同时将待筛选化合物的浓度维持在其最终浓度。在培养期结束时，将细胞用4％福尔马林溶液固定，针对卫星细胞标志物pax3、pax7和cd56进行免疫荧光染色，并通过高含量成像进行分析。仅在基础培养基中生长的细胞都未表现出针对卫星细胞标志物的染色。在筛选的378个条件中，34个对细胞具有高度毒性。四个条件产生cd56阳性但pax3和pax7均为阴性的细胞。所测试的条件中有十五个导致超过50％的细胞表现出卫星细胞特征，以及对cd56、pax3和pax7的阳性染色。针对成肌细胞标志物myod将细胞进一步染色，但未观察到阳性细胞，表明卫星细胞未进一步分化为成肌细胞。表1.筛选中使用的化合物。实施例2：生肌条件并不严格依赖于血清、生长因子或特定的基础培养基。使用实施例1中确定的chir99021和alk5抑制剂的组合，如实施例1所述从genea002、genea019和genea020制备卫星细胞，同时改变基础培养基的组成。将骨骼肌细胞生长培养基补充剂的组分保持在其最终浓度(例如，50μg/ml牛胎球蛋白、10ng/mlegf、1ng/mlbfgf、10μg/ml胰岛素和0.4μg/ml地塞米松)，并将表2中列出的基础培养基和血清以两两组合的方式混合。在所有条件下都获得pax3、pax7和cd56阳性的卫星样细胞。然而，在缺乏血清或白蛋白的情况下，细胞活力较差。细胞密度取决于所使用的培养基和血清组分，这表明不同条件下的分化都是稳健的，并且培养基的影响主要在细胞活力上。所有细胞系中阳性细胞的比例、细胞扩充和稳健性都不同。promocell和lonza1基础培养基表现得非常相似；这两种培养基都基于mcdb120。马血清似乎最一致地支持所有细胞系的分化。表2.所测试的基础培养基和血清组分。接下来，通过使genea019在补充有chir99021和alk5抑制剂的mcdb120样基础培养基中进行分化，测试了对骨骼肌细胞生长培养基补充物的组分的依赖性，但其中骨骼肌细胞生长培养基补充剂(50μg/ml牛胎球蛋白、10ng/mlegf、1ng/mlbfgf、10μg/ml胰岛素和0.4μg/ml地塞米松)中的一种组分已经被省去，或者在5％马血清的情况下已被1.5％albumax(由lifetechnologies制造的牛血清白蛋白)替代。在每种条件下均获得了pax3、pax7和cd56阳性的卫星样细胞，证明没有一种生长因子是生肌诱导所必需的。分化在所有条件下都大致相似，表明没有一种血清组分对于分化是关键的。实施例3：使用chir99021(3μm)和alk5抑制剂(2μm)作为贡献组分从多能干细胞制备卫星细胞。如实施例1所述使hpsc培养物在补充有chir99021(3μm)和alk5抑制剂(2μm)的基础培养基中生长以诱导分化。将已分化的细胞固定并针对卫星细胞标志物pax3、pax7和cd56进行免疫染色。仅在基础培养基中培养的细胞中没有观察到阳性细胞，而在补充有chir99021(3μm)和alk5抑制剂(2μm)的基础培养基中培养的那些细胞中>50％的细胞对所述标志物呈阳性染色。在所有测试的细胞外基质中都产生了这些卫星样细胞，但h纤连蛋白产生了最高水平的卫星样细胞。将细胞进一步针对成肌细胞标志物myod进行染色，但未鉴别出阳性细胞，表明细胞未进一步分化为成肌细胞。实施例4：干细胞培养和骨骼肌分化在该实施例中，表3中列出的人胚胎干细胞系分化成卫星样细胞、成肌细胞和肌管。干细胞系在市售培养基mtesr(stemcelltechnologies)或m2(geneabiocells)中培养，并使用传代溶液(geneabiocells)解离成单细胞。将细胞接种于生肌诱导培养基(mcdb120基础培养基，5％马血清，50pg/ml胎球蛋白(牛)，10ng/mlhr-egf，10μg/ml胰岛素(人)，0.4μg/ml地塞米松，10μmrock抑制剂(y-27632-二盐酸盐)，50μg/ml抗坏血酸(维生素c)，2μmsb431542，20ng/mlhgf，1ng/mlhr-bfgf，10ng/mligf1，10ng/ml制瘤素m，10ng/mlpdgf)中以诱导生肌分化，并在37℃和5％co2下孵育7至10天，同时每隔一天进行培养基更换。汇合后，使用传代溶液将细胞解离成单细胞。这些卫星样细胞在补充有10％dmso的生肌诱导培养基中以每个冷冻小管每毫升300万个细胞冷冻。将小瓶缓慢冷却至-80℃，然后转移至液氮中长期储存。或者，代替冷冻，将卫星样细胞置于胶原蛋白i包被的培养瓶或平板中的成肌细胞培养基(geneabiocells)中，并在37℃和5％co2下培养7-10天，每隔一天进行培养基更换直至达到汇合。在该阶段，将所得细胞(成肌细胞培养物)切换至肌管培养基(geneabiocells)以供进一步分化，或者使用传代溶液解离成单细胞，以便在补充有10％dmso的成肌细胞培养基中以每个冷冻小管每毫升3百万个细胞冷冻。将小瓶缓慢冷却至-80℃，然后转移至液氮中长期储存。表3.人胚胎干细胞系。细胞系核型genea01946,xxgenea00246,xy实施例5：化学化合物文库的组装将针对已知/疑似表观遗传修饰酶以及许多其它靶标、途径和网络(包括但不限于激酶组、wnt/fzd/b-连环蛋白、凋亡、细胞骨架信号传导、细胞周期、dna修复和g蛋白偶联受体)的化合物组装成文库。先导样化合物从几个商业供应商获得，包括medchemexpress、tocris和selleckchemicals。它们共同代表了已知和疑似蛋白质以及与肌管维持和/或神经肌肉生物学相关的其它靶标的约5,000种调节剂。表4.所测试的代表性生物多样化学系列实施例6：化合物筛选和肌管形成试验为了筛选，将如实施例1所述制备的冷冻卫星样细胞在37℃的水浴中解冻，重悬于3ml的温的成肌细胞培养基(geneabiocells)中，并以400×g离心4min。除去上清液，将细胞沉淀物重悬于1ml培养基中进行细胞计数。将细胞以5,000个细胞/cm2的密度接种在胶原蛋白i包被的塑料烧瓶(biocoat，bdbioscience)中，并在5％co2、37℃下孵育。每隔一天更换培养基，直至细胞达到80％汇合，然后用胰蛋白酶消化细胞，计数，并使用自动化液体处理系统(fluent，tecantradingag，switzerland)以在成肌细胞培养基中30,000个细胞/cm2的密度接种在胶原包被的96孔板(biocoat)中。将细胞在5％co2、37℃下孵育，每隔一天更换培养基，直至细胞达到80％汇合。将培养基更换为含有测试化合物的肌管培养基(geneabiocells)。没有进行进一步的媒介物更换。通常，测试3至6个浓度，范围为3μm至1nm；每次稀释使用一个板。培养基和dmso对照孔随机放置。此阶段未进行任何媒介物更换。在化合物的存在下进行肌管分化5天后，将细胞用10％福尔马林(sigma)在室温下固定15分钟，并用磷酸盐缓冲盐水(pbs)洗涤一次。接下来，在含有5％牛血清白蛋白(bsa，sigma)和0.3％triton-x(sigma)的pbs溶液中用肌球蛋白重链特异性抗体(developmentalstudiesofhybridomabank,universityofiowa,iowacity；抗小鼠a4.1519；稀释度1:1000)对细胞进行染色，并在室温下孵育1小时。用pbs洗涤细胞一次，然后与第二抗体——alexafluor488-缀合的山羊抗小鼠igg(invitrogen，1:1000)一起孵育1小时，并在含有5％bsa和0.3％triton-x的pbs溶液中用hoechst33342(molecularprobes1:5000)对细胞核进行复染。在显微镜分析之前用pbs洗涤细胞。使用incellanalyzer6000(ge-healthcare)高含量分析系统对细胞进行成像。利用developertoolboxv1.9.3进行图像分析，以确定细胞核数和mhc阳性肌管内的细胞核数。为了评价化合物在降低或增加这些测量值中的作用，将未处理的对照设定为基线。实施例7：通过细胞周期抑制改善的肌管形成如实施例4所述制备成肌细胞或解冻被冷冻的成肌细胞。一旦培养物达到汇合，将培养基更换为补充有0.2、0.5或1μmchir-124(chk1抑制剂)的肌管培养基。将培养物置于37℃和5％co2的培养箱中5天。在此期间，成肌细胞分化为肌管。将细胞用10％福尔马林(sigma)在室温下固定15分钟，并用磷酸盐缓冲盐水(pbs)洗涤一次。接下来，在含有5％牛血清白蛋白(bsa，sigma)和0.3％triton-x(sigma)的pbs溶液中用肌球蛋白重链特异性抗体(developmentalstudiesofhybridomabank,universityofiowa,iowacity；抗小鼠a4.1519；稀释度1:1000)和myog(santacruz，抗兔；稀释度1:500)对细胞进行染色，并在室温下孵育1小时。将细胞用pbs洗涤一次，然后与第二抗体——alexafluor488-缀合的山羊抗小鼠igg和alexafluor647-缀合的抗兔(均为invitrogen，1:1000)一起孵育1小时，并在含有5％bsa和0.3％triton-x的pbs溶液中用hoechst33342(molecularprobes1:5000)对细胞核进行复染。在进行显微镜分析之前，用pbs洗涤细胞。使用incellanalyzer6000(ge-healthcare)高含量分析系统对细胞进行成像。使用developertoolboxv1.9.3进行图像分析以确定细胞核数、myog阳性细胞核、mhc阳性肌管内的细胞核、每个肌管的细胞核和平均肌管直径。经目测，暴露于0.2μm、0.5μm或1μmchir-124的许多细胞形成厚的大肌管，其在形态学上类似于由来自活检材料的人原代成肌细胞形成的肌管(图10a)。在1μm浓度下，chir-124表现出一定的毒性，并且观察到整体较少的肌管。定量分析图像，揭示在0.2μm或0.5μmchir-124的存在下生成的肌管显示出>80％的较大平均直径(图10b，上图)，与在不存在chir-124的情况下形成的肌管相比，每个肌管的平均细胞核数为两倍以上，从2个到约4个。此外，暴露于chir-124的许多肌管含有超过30个细胞核(图10c，上图)，而未处理的对照含有很少的每个肌管超过10-12个细胞核的多核细胞。也观察到以下指标的增加：肌管面积(图10c，下图)、具有较大肌管面积的细胞的数目(图10d，上图)、肌管的平均面积(图10d，下图)以及具有多于一个细胞核的细胞的数目(图10b，下图)。实施例8：通过mek/raf/mtor抑制对肌管形成的调节如实施例4所述制备成肌细胞或解冻被冷冻的成肌细胞。一旦培养物达到汇合，将培养基更换为补充有0.1、0.3或1μm雷帕霉素(mtor抑制剂)或mek162(binimetinib，mek抑制剂)或索拉非尼(raf抑制剂)的肌管培养基。将培养物置于37℃和5％co2的培养箱中5天。在此期间，成肌细胞分化为肌管。将细胞用10％福尔马林(sigma)在室温下固定15分钟，并用磷酸盐缓冲盐水(pbs)洗涤一次。接下来，在含有5％牛血清白蛋白(bsa，sigma)和0.3％triton-x(sigma)的pbs溶液中用肌球蛋白重链特异性抗体(developmentalstudiesofhybridomabank,universityofiowa,iowacity；抗小鼠a4.1519；稀释度1:1000)和myog(santacruz，抗兔；稀释度1:500)对细胞进行染色，并在室温下孵育1小时。将细胞用pbs洗涤一次，然后用第二抗体——alexafluor488-缀合的山羊抗小鼠igg和alexafluor647-缀合的抗兔(均为invitrogen，1:1000)一起孵育1小时，并在含有5％bsa和0.3％triton-x的pbs溶液中用hoechst33342(molecularprobes1:5000)对细胞核进行复染。在进行显微镜分析之前，用pbs洗涤细胞。使用incellanalyzer6000(ge-healthcare)高含量分析系统对细胞进行成像。使用developertoolboxv1.9.3进行图像分析以确定细胞核数、myog阳性细胞核、mhc阳性肌管内的细胞核、每个肌管的细胞核和平均肌管直径。经目测，相比于对照培养物，暴露于所述抑制剂的细胞形成更多、更长且更厚的肌管(图11-13)。实施例9：通过g蛋白偶联受体脂质信号传导对肌管形成的调节如实施例4所述制备成肌细胞或解冻被冷冻的成肌细胞。一旦培养物达到汇合，将培养基更换为补充有0.1、0.3或1μmgsk1292263(gpr119抑制剂)或tc-g1006(s1p1激动剂)的肌管培养基。将培养物置于37℃和5％co2的培养箱中5天。在此期间，成肌细胞分化为肌管。将细胞用10％福尔马林(sigma)在室温下固定15分钟，并用磷酸盐缓冲盐水(pbs)洗涤一次。接下来，在含有5％牛血清白蛋白(bsa，sigma)和0.3％triton-x(sigma)的pbs溶液中用肌球蛋白重链特异性抗体(developmentalstudiesofhybridomabank,universityofiowa,iowacity；抗小鼠a4.1519；稀释度1:1000)和myog(santacruz，抗兔；稀释度1:500)对细胞进行染色，并在室温下孵育1小时。将细胞用pbs洗涤一次，然后与第二抗体——alexafluor488-缀合的山羊抗小鼠igg和alexafluor647-缀合的抗兔(均为invitrogen，1:1000)一起孵育1小时，并在含有5％bsa和0.3％triton-x的pbs溶液中用hoechst33342(molecularprobes1:5000)对细胞核进行复染。在进行显微镜分析之前，用pbs洗涤细胞。使用incellanalyzer6000(ge-healthcare)高含量分析系统对细胞进行成像。使用developertoolboxv1.9.3进行图像分析以确定细胞核数、myog阳性细胞核、mhc阳性肌管内的细胞核、每个肌管的细胞核和平均肌管直径。经目测，相比于对照培养物，暴露于所述激动剂的细胞形成更长且更厚的肌管(图14-15)。实施例10：通过调节machr信号传导对肌管形成的调节如实施例4所述制备成肌细胞或解冻被冷冻的成肌细胞。一旦培养物达到汇合，将培养基更换为补充有0.1、0.3或1μm匹鲁卡品(machr激动剂)或0.2、0.5或1μm阿托品(machr拮抗剂)的肌管培养基。将培养物置于37℃和5％co2的培养箱中5天。在此期间，成肌细胞分化为肌管。将细胞用10％福尔马林(sigma)在室温下固定15分钟，并用磷酸盐缓冲盐水(pbs)洗涤一次。接下来，在含有5％牛血清白蛋白(bsa，sigma)和0.3％triton-x(sigma)的pbs溶液中用肌球蛋白重链特异性抗体(developmentalstudiesofhybridomabank,universityofiowa,iowacity；抗小鼠a4.1519；稀释度1:1000)和myog(santacruz，抗兔；稀释度1:500)对细胞进行染色，并在室温下孵育1小时。将细胞用pbs洗涤一次，然后与第二抗体——alexafluor488-缀合的山羊抗小鼠igg和alexafluor647-缀合的抗兔(均为invitrogen，1:1000)一起孵育1小时，并在含有5％bsa和0.3％triton-x的pbs溶液中用hoechst33342(molecularprobes1:5000)对细胞核进行复染。在进行显微镜分析之前，用pbs洗涤细胞。使用incellanalyzer6000(ge-healthcare)高含量分析系统对细胞进行成像。使用developertoolboxv1.9.3进行图像分析以确定细胞核数、myog阳性细胞核、mhc阳性肌管内的细胞核、每个肌管的细胞核和平均肌管直径。经目测，相比于对照培养物，暴露于所述machr调节剂的细胞形成更长且更厚的肌管(图16-17)。1μm的阿托品是有毒性的，并且在与阿托品一起孵育的培养物中观察到总体上更少的肌管。实施例11：通过parp抑制对肌管形成的调节如实施例4所述制备成肌细胞或解冻被冷冻的成肌细胞。一旦培养物达到汇合，将培养基更换为补充有0.1、0.3或1μmtalazoparib(parp抑制剂)的肌管培养基。将培养物置于37℃和5％co2的培养箱中5天。在此期间，成肌细胞分化为肌管。将细胞用10％福尔马林(sigma)在室温下固定15分钟，并用磷酸盐缓冲盐水(pbs)洗涤一次。接下来，在含有5％牛血清白蛋白(bsa，sigma)和0.3％triton-x(sigma)的pbs溶液中用肌球蛋白重链特异性抗体(developmentalstudiesofhybridomabank,universityofiowa,iowacity；抗小鼠a4.1519；稀释度1:1000)和myog(santacruz，抗兔；稀释度1:500)对细胞进行染色，并在室温下孵育1小时。将细胞用pbs洗涤一次，然后与第二抗体——alexafluor488-缀合的山羊抗小鼠igg和alexafluor647-缀合的抗兔(均为invitrogen，1:1000)一起孵育1小时，并在含有5％bsa和0.3％triton-x的pbs溶液中用hoechst33342(molecularprobes1:5000)对细胞核进行复染。在进行显微镜分析之前，用pbs洗涤细胞。使用incellanalyzer6000(ge-healthcare)高含量分析系统对细胞进行成像。使用developertoolboxv1.9.3进行图像分析以确定细胞核数、myog阳性细胞核、mhc阳性肌管内的细胞核、每个肌管的细胞核和平均肌管直径。经目测，相比于对照培养物，暴露于talazoparib的细胞形成更多且更长的肌管(图18)。实施例12：通过靶向生物标志物rnasea的化合物筛选设置细胞以用于筛选根据实施例4的化合物。将细胞在胶原蛋白i包被的96孔板中培养。在培养期结束时，从每个孔中提取总rna。通过测量260nm和280nm处的吸光度以及毛细管电泳(bioanalyzer，agilenttechnologies)来确认每种rna样品的浓度和完整性。然后使用truseq系统(illumina)通过靶向rnaseq针对定制的一组基因(表5)分析rna样品。将结果对管家基因(表5)进行归一化，并计算相对基因表达水平和统计学显著性。“命中”被定义为不改变肌肉和肌生成相关基因的表达模式的化合物。表5.可选择用于通过靶向rnaseq进行筛选的肌原性和肌营养不良相关生物标志物基因的示例性组实施例13：细胞周期抑制剂对疾病特异性细胞系分化的影响通过实施例4的方法从两种未受影响的hesc细胞系(genea002和genes019)和六种经验证的遗传疾病影响的细胞系(genea020、genea066、gen103、gen158、gen049和gen159，如以下表6中所述)制备的成肌细胞在geneabiocells成肌细胞培养基中以3.0×104个细胞/cm2在96孔微量滴定板中解冻，并在10％co2、37℃下孵育。genea020来源于受亨廷顿病影响的胚胎(在亨廷顿蛋白(huntingtin)基因中有48cag重复序列扩充)。genea066来源于受ii型肌强直性营养不良影响的胚胎。genea103来源于受脊髓性肌萎缩影响的胚胎。genea158来源于受i型肌强直性营养不良影响的胚胎。genea049来源于受fsh肌营养不良影响的胚胎。genea159来源于受杜氏肌营养不良影响的胚胎。所有hesc细胞系均按照经批准的伦理方案由捐献的胚胎得到。一旦细胞(成肌细胞)汇合(大约在第3天)，就将培养基更换为单独的或含有0.5μmchir-124(chir)的geneabiocells肌管培养基。在更换至肌管培养基后三天固定细胞培养物，并用肌球蛋白重链特异性抗体(mhc，a4.1025，dshb，1:1,000)进行染色，并用hoechst进行复染以供细胞核可视化。使用incellanalyzer6000(gehealthcare)高含量分析仪，用10x物镜对培养物进行成像。用incelldevelopertoolbox软件(gehealthcare)分析图像。如通过对细胞数(细胞核)归一化的mhc染色面积所测量的，所有细胞系在chir-124的存在下均显示出改善的肌管形成，所述归一化的mhc染色面积在肌管培养基+chir124(sii/siii+chir)的条件下比在仅有肌管培养基(sii/siii)的条件下增加(见图19)。通过测量每个视野的面积除以该视野内的细胞核数计算得到mhc面积与细胞核之比(um2)。chir-124在疾病影响(genea020、genea066、gen103、gen158、gen049和gen159)和疾病未影响的细胞系(genea002和genes019)中影响肌管形成的能力提示了chk1抑制在增强患者肌肉中的肌管形成方面的有用性，所述患者患有诸如亨廷顿病、ii型肌强直性营养不良、脊髓性肌萎缩、1型肌强直性营养不良、fsh肌营养不良和杜氏肌营养不良等病症。表6：本研究中使用的疾病影响和未影响的hesc系实施例14：用chir-124处理的细胞中的肌球蛋白重链分析将通过实施例4的方法制备的genea015(疾病未影响的hesc细胞系)成肌细胞解冻，并以30,000个细胞/cm2接种于geneabiocells成肌细胞培养基中，并在37℃、5％co2下孵育，直到汇合(约2天)。然后将培养基更换为单独的或含有0.5μmchir-124的geneabiocells肌管培养基。在用chir-124处理后5天收集用于蛋白质分析的细胞裂解物，并通过bca测定(thermofisher)进行定量。进行western印迹分析(wes，proteinsimple)，以分析在肌管发育和成熟过程中表达的肌球蛋白重链(mhc)的表达(总mhc，或总肌球蛋白重链；emhc，或胚胎肌球蛋白重链；fmhc，或胎儿肌球蛋白重链；pmhc，或围产期肌球蛋白重链；和快速mhc，或快肌球蛋白重链，肌管中发现的最成熟的mhc)。将mhc表达相对于粘着斑蛋白(vinculin)进行归一化以供定量。在存在geneabiocells肌管培养基(siii，见图20)相比于geneabiocells肌管加chir-124(siii-chir，见图20)时的不同mhc形式的图形表明，chir-124的存在增加了5天治疗期间总mhc的表达。总mhc的这种增加涉及最成熟形式的mhc的表达增加(pmhc和快速mhc，它们均显示出在加入chir-124后表达增加，见图20)。总而言之，数据提示chir-124通过驱动更成熟的mhc同种型的表达来加速肌管发育。实施例15：用检查点抑制剂对杜氏肌营养不良(dmd)的治疗一名被诊断出患有杜氏肌营养不良(dmd)的5岁男孩因其小腿和大腿无力而在诊所就诊。为了治疗肌肉无力，向该患者施用每日一次100mgchir-124或每日两次50-75mgchir-124两个月，此时肌肉无力症状得到改善。实施例16：用检查点抑制剂联合细胞疗法对杜氏肌营养不良(dmd)的治疗一名被诊断出患有杜氏肌营养不良(dmd)的5岁男孩因其小腿和大腿无力在诊所就诊。为了治疗肌肉无力，向该患者施用每日一次100mgchir-124或每日两次50-75mgchir-124两个月。在初次预约时，从该患者获得皮肤成纤维细胞。随后使用所述成纤维细胞产生诱导多能干细胞(ipsc)，然后对所述ipsc进行遗传修饰以去除与dmd相关的突变。然后使所述ipsc在体外分化为卫星细胞；继而，使所述卫星细胞在体外分化为成肌细胞。然后在两个月期间每周一次以5m剂量向患者的大腿和小腿施用所分化的成肌细胞。作为该治疗的结果，患者的肌肉张力得到改善。当前第1页1 2 3